自身免疫病与自身抗体的检测
自身免疫病和自身抗体检测详解演示文稿
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IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型
细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期
均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗原
发生免疫应答，产生自身抗体和（或）致 敏淋巴细胞的现象。
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与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病：
是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
的人群中发生强直性脊柱炎的可能仅为
2%，而第一级HLA--B27阳性的亲属
中，发生强直性脊柱炎的危险性达
20%。
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自身免疫病的基本特征
系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率也 较高，在SLE第一代亲属中发病率达3%-5%，同胞姐妹发病率更高，特别是单卵 双胎更为常见 。在1980年的调查中35组 单卵双胎的患者中，有22组患SLE，共患 病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1组患 病，为12.5%。
免疫印迹法(IB）：
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自身免疫病常规实验室检查
• 血常规：
• RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
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自身免疫病常规实验室检查
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自身抗体的检测方法
金标免疫斑点法
自身免疫性疾病及其免疫检测
对于临床表现相似的疾病，免疫检测 可以帮助区分不同的自身免疫性疾病 ，如类风湿性关节炎与骨关节炎等。
病情监测与疗效评估
病情监测
定期进行免疫检测可以监测疾病的进展 情况，及时调整治疗方案，有助于控制 病情。
VS
疗效评估
通过比较治疗前后免疫检测结果的变化， 可以评估治疗的有效性，为调整治疗方案 提供依据。
度。
分子免疫检测
单克隆抗体技术
利用单克隆抗体特异性识别抗原的特性， 检测细胞表面抗原的表达情况。
蛋白质组学技术
利用蛋白质组学技术分析蛋白质的表 达和功能，了解疾病状态下蛋白质的
改变。
基因芯片技术
通过检测基因表达谱的变化，了解疾 病状态下免疫细胞的基因表达特征。
表观遗传学技术
研究基因表达的表观遗传学调控机制， 了解疾病状态下基因表达的调控特征。
比较其优缺点和应用范围。
免疫检测在临床实践中的应用研究
诊断价值
01病的早
期诊断和鉴别诊断。
监测病情
02
通过定期检测自身抗体水平，评估疾病的活动度和治疗效果，
指导临床治疗方案的调整。
预后判断
03
某些自身抗体与疾病的发展和预后相关，通过免疫检测可预测
疾病的发展趋势和预后情况。
常见症状与诊断
常见症状
自身免疫性疾病的症状因疾病类型而异，但常见的症状包括关节疼痛、肿胀、僵硬、发热、皮疹、疲 劳等。
诊断
自身免疫性疾病的诊断依赖于详细的病史、体格检查和实验室检查。实验室检查包括全血细胞计数、 血沉、C反应蛋白、自身抗体检测等。通过这些检查，医生可以评估患者的免疫系统状态和是否存在 自身抗体，从而做出诊断。
02 自身免疫性疾病的免疫检 测方法
自身免疫病与自身抗体检测及应用
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（三）发病机制
隐蔽抗原释放 ✓自身抗原出现 自身抗原成分改变
共同抗原的诱导
淋巴细胞旁路活化 ✓免疫调节异常 多克隆刺激剂旁路活化
辅助刺激因子表达异常
✓遗传因素 多表现在HLA-B、DR抗原 上
2021/1/12
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常见自身免疫病
SLE:累及多器官多系统 炎症性结缔组织病，多 发于青年女性，临床症 状复杂，可出现发热， 皮疹，蝶形红斑，盘状 红斑，光敏现象，口腔 溃疡，关节痛，肾损伤， 心血管病变，胃肠症状， 贫血等。抗ds-DNA,抗 Sm抗体是特征标志。
IgM：伴严重关节功能障碍，预后不良
IgG：与患者滑膜炎、血管炎和关节症状密切相 关
IgA：RA临床活动指标，与骨质破坏和关节炎症
20状21/1/严12 重程度有关。
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抗核抗体（ANA）
ANA是以自身真核细胞成分为靶抗原的一组自 身抗体的总称，泛指各种核成分的抗体。 ANA在不同的疾病中呈现出不同的组合，不同 疾病有自己的抗核抗体谱。 按理化特性和抗原部位分类： 1.抗DNA抗体 2.抗组蛋白抗体 3.抗非组蛋白抗体 4.抗核仁抗体
2. 一般原则 有的项目敏感性高，特异性低，有筛选意义，有 的敏感性低，特异性强，可以先做ANA筛查， 再做其他检测。
3. 质量控制 每次试验同时设置阴、阳对照，以监测结果的准 确性。
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谢谢观赏
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检测方法
1.ANA检测常用间接免疫荧光法，ELISA等方法， 常用间接免疫荧光法作总ANA的筛选试验。用 Hep2细胞和猴肝细胞做基质， Hep2细胞特点： 人源性、细胞核大、分裂期细胞多、可大批培养。
2.常见ANA荧光图形及意义
自身免疫性疾病的临床检测
自身免疫性疾病的临床检测摘要】目的讨论自身免疫性疾病检测。
方法对采集到的样本进行检测。
结论某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系统就会对自身组织或成分产生免疫应答，这被称为自身免疫。
由于自身免疫而产生的疾病被称为自身免疫病。
诊断自身免疫病的重要方法是做自身免疫检测。
【关键词】自身免疫性疾病检测某些原因削弱或破坏健康人的自身免疫耐受，免疫系统就会对自身组织或成分产生免疫应答，这被称为自身免疫。
由于自身免疫而产生的疾病被称为自身免疫病。
诊断自身免疫病的重要方法是做自身免疫检测。
一、类风湿因子(RF)测定【参考值】<30U／ml【临床意义】1．RF对类风湿关节炎的诊断及预后判断具有一定的临床意义，RF转阴或含量降低，可作为评价药物治疗及病情缓解的一个指标。
70％～90％的类风湿关节炎(RA)患者RF阳性，但RF阴性不能排除RA诊断。
2．RF可作为自身免疫性疾病的辅助诊断，如RF阳性率SLE为53％，皮肌炎、硬皮病及恶性贫血均为80％，自身免疫性溶血型贫血为75％，慢性活动性肝炎为60％，舍格伦(干燥综合征)可达90％～100％。
3．慢性感染性疾病RF也可呈阳性，如亚急性细菌性心内膜炎、结核、梅毒、及某些高球蛋白血症等。
4．各种不同类型RF的检出具有不同的临床意义。
IgG类RF与RA患者的滑膜炎、血管炎症状密切相关；IgA类 RF与RA患者关节外症状有关；IgM类RF的含量与RA的活动性无密切关系；IgE类RF见于RA和青年型RA，在关节液和胸腔积液中IgE类RF高于同一患者的血清水平。
【注意事项】1．不抗凝静脉血标本检测。
2．标本避免脂血、溶血。
3．健康人有5％的人RF阳性，70岁以上的人阳性率甚至高达10％～25％，但临床意义不明。
二、自身抗体测定(一)抗核抗体(ANA)【参考值】阴性(ANA滴度≤1：100) (间接免疫荧光法)【临床意义】1．用于临床自身免疫性疾病的辅助诊断，在不同疾病中，特别是风湿性疾病有诊断价值。
医学课件自身免疫病及其自身抗体的检测
表3.系统性红斑狼疮的自身抗体
_____________________________________________________________________
抗体反响性
阳性率(%)
抗原性质
_____________________________________________________________________
核糖体型 主要见于SLE. 5) 着丝点型 主要见于硬皮病及CREST综合征.
3.ID或CIE 主要用于检测抗ENA抗体.所用抗原:兔胸腺;小
牛胸腺;人脾;猪脾;组织培养细 胞等提取物.
4.同位素(Farr氏法)检测
主要用于检测抗dsDNA抗体. 5.ELISA:可用于抗dsDNA;抗ssDNA;抗组蛋白抗体;
变性IgG,RANA
干躁综合征(SS)
SSA,SSB,唾液腺管
系统性红斑狼疮(SLE)
胞核成分
(DNA,DNP,RNP,SM)
酸性糖蛋白，是SLE的标记抗体。
抗Sm抗体是
胞浆成分(线粒体,微粒体)
RBC,血小板
混合结缔组织病(MCTD)
细胞核(RNP)
抗n RNP抗体
__________________________________________________
• 可存在于多种AID 中.SLE;MCTD;SS;RA;PSS;DM/PM;药物性 狼疮等疾病.缺乏特异性.
• 检测方法:ELISA;血凝等.
4.抗组蛋白抗体
• 主要的组蛋白有H1;H2A;H2B;H3和H4. • 主要见于药物性狼疮,阳性率95%以上.也
可见于SLE(70%),幼年类风湿性关节炎(30%) 等. • 检测方法:ELISA;IF;血凝法等.
自身免疫病中多种自身抗体的检测及分析
自身免疫病中多种自身抗体的检测及分析【摘要】目的：通过对自身免疫病患者常用自身抗体的综合检测、分析，评价其在自身免疫病中的意义及价值。
方法：选取临床上已确诊为自身免疫病患者216例作为疾病组（其中SLE患者102例，RA患者54例，MCTD患者18例，SS患者16例，PSS患者16，PM/DM患者10例），健康体检者30例作为对照组，抽取血液，分离血清，分别采用间接免疫荧光法、欧蒙免疫印迹法和ELISA法检测ANA、抗ds DNA、ENA多肽谱、RF。
结果：6种自身免疫性疾病中，RF的阳性检出率以类风湿性关节炎（RA）患者为最高（74.2%），干燥综合症（SS）患者次之（62.5%），而多发性皮肌炎（PM/DM）患者中未检出；ANA在6种自身免疫病患者中均有较高的阳性检出率，以系统性红斑狼疮（SLE）患者为最高（94.1%），混合性结缔组织病（MCTD）患者次之（88.9%），RA患者最低（33.3%）；抗ds DNA则只在2种自身免疫病患者中检出，其中SLE患者阳性检出率最高（80.4%），而RA患者较低（3.7%）；6种自身免疫病患者中，ENA多肽谱的各种抗体的检出率差别较大，其中，抗SSA/R0均有检出，但阳性率不高（均低于40.0%），而抗Histones只在SLE患者中有检出，抗Scl70只在系统性硬皮病（PSS）患者中有检出，抗J01则只在PM/DM患者中有检出，但抗U1snRNP 则在MCTD患者中检出率较高（88.9%），抗Centromere均无检出。
结论：自身免疫病患者同时检测多种自身抗体有助于疾病的特异性诊断和筛查。
【关键词】 RF； ANA；抗ds DNA； ENA多肽谱；自身免疫病［ABSTRACT］Objective: To evaluate the significance of multiple autoantibody detection and analysis in the process of diagnosing and screening autoimmune diseases. Methods: 216 cases of autoimmune diseases were compared with 30 health volunteers. 102 out of these cases are SLE, 54 are RA, 18 are MCTD, 16 are SS, 16 are PSS and 10 are PM/DM, Autoantibody including ANA, anti ds DNA, ENA antibodies and RF were detected. Results: Among six kinds of autoimmune diseases mentioned above, RA has the highest positive rate of RF (74.2%) followed by SS (62.5%). On the contrary, in PM/DM, RF was detected as negative. SLE has the highest positive rate of ANA (94.1%) followed by MCTD (88.9%) and RA (33.3%). Anti ds DNA was only detected in SLE and RA with a positive rate of 80.4% and 3.7%, respectively. The positive rates of ENA antibodies in autoimmune diseases are obvious different among each other. Conclusion: Detection of multiple autoantibodies is a useful way of diagnosis and screening autoimmune diseases.［KEY WORDS］ RF； ANA； Anti ds DNA； ENA antibodies；Autoimmune diseases自身免疫病是一类原因复杂、临床表现多样、严重危害人类健康的疾病，多为慢性病，任何年龄、性别均可发病，以女性为多见；常累及多器官、多系统，反复发作、慢性迁延［1,2］。
自身免疫性疾病及其免疫检测
均质型
抗dsDNA抗体 抗ssDNA抗体
抗组蛋白抗体(histone) 抗核小体抗体(nucleosome)
周边型
可见于胶原病、PBC、CAH等患者
核点型（DOTS）
抗着丝点型
见于SLE、SS、PBC、风湿病
PSS局限型标志抗体
抗原纤维蛋白型
抗RNA多聚酶Ⅰ型抗体
仅见于5%～10%的PSS，男性高于女性
1987年DNA基因重组技术开始应用自身抗体研究
近十年应用分子生物学技术
常检测的自身抗体
• • • • • • • 抗核抗体（ANA） 抗可提取性核抗原抗体（ENA） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA） 类风湿因子（RF） 抗角蛋白抗体（AKA） 抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体） 抗心磷脂抗体（ACLA）
仅见于硬皮病患者，阳性率为4%
抗PM-Scl（PM-1）抗体
见于重叠综合征（多发性肌炎PM /皮肌炎 DM / 弥漫性PSS ）
抗Scl-70型
PSS 弥漫型的标志抗体
增殖细胞核抗原Ⅰ型
（PCNA）
SLE特异性抗体，与发生弥漫性增殖性肾小球肾炎相关
抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体
抗线粒体抗体（AMA）
酶免疫斑点法
ELISA
（Western-blot）
免疫印迹法
间接免疫荧光法示意图
荧光标记抗体
病人血清（待检抗体） HEp-2细胞 肝组织切片
IIF检测ANA荧光染色模型
细胞核
均质型 斑点型
细胞浆
核糖体型 线粒体型
细胞骨架
肌蛋白型 波形纤维蛋白型
细胞周期
中心体型 纺缍体型
核仁型
着丝点型 周边型
高尔基体型
自身免疫性疾病及其免疫检测
临床免疫学检验技术自身免疫性疾病及其免疫检测CONTENTS第一节第二节第三节第四节常见自身免疫性疾病简介常用自身抗体检验项目及临床意义自身抗体检测的常用方法及检测流程自身免疫性疾病相关的其它检验项目及其临床意义常见自身免疫性疾病简介自身免疫与自身免疫性疾病自身免疫耐受遭到削弱或破坏时，机体免疫系统对自身成分产生了自身抗体或自身反应性T 淋巴细胞，这种反应称为自身免疫（autoimmunity)。
自身免疫自身免疫性疾病当某种原因使自身免疫应答超过一定强度，导致机体发生病理改变或机能障碍，这种因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而引起的疾病称为自身免疫性疾病。
（Autoimmune Disease ，AID ）。
autoimmunity≠autoimmunedisease根据组织器官损伤情况可分为：器官特异性AID和非器官特异性AID。
自身免疫性疾病的分类器官特异性类别病名自身抗原慢性甲状腺炎Grave 病Addison 病青少年型胰岛素依赖型糖尿病萎缩性胃炎溃疡性结肠炎原发性胆汁性肝硬化重症肌无力多发性硬化症自身免疫性溶血性贫血特发性白细胞减少症特发性血小板减少性紫瘢甲状腺球蛋白、微粒体甲状腺细胞表面TSH 受体肾上腺皮质细胞胰岛细胞胃壁细胞结肠上皮细胞胆小管细胞、线粒体乙酰胆碱受体髓鞘碱性蛋白红细胞白细胞血小板自身免疫性疾病的分类非器官特异性根据组织器官损伤情况可分为：器官特异性AID 和非器官特异性AID类别病名自身抗原类风湿性关节炎干燥综合征系统性红斑狼疮系统性硬化症混合性结缔组织病变性IgG 、类风湿相关的核抗原干燥综合征A 、B 抗原（SS-A 、SS-B ）、唾液腺管、胞质成分（线粒体、微粒体）、红细胞、血小板胞核成份（DNA 、DNP 、SNP 、Sm ）胞核成份（拓扑异构酶Ⅰ、着丝粒蛋白B ）胞浆成份（线粒体、微粒体）、红细胞、血小板、细胞核（RNP ）01030402多数病因不详，诱因可有可无有一定的遗传倾向女性患者多见，发病率随年龄增长而增加患者血清中可检出高效价的自身抗体和（或）自身致敏T 淋巴细胞。
自身抗体的检测方法
自身抗体的检测方法引言：自身抗体的检测是一种关键的实验技术，广泛应用于医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
本文将介绍几种常见的自身抗体检测方法，包括免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹法（Western blot）。
一、免疫荧光法免疫荧光法是一种基于荧光标记的自身抗体检测方法。
首先，将待测样品涂在载玻片上，然后加入特异性荧光标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体。
通过荧光显微镜观察，如果样品中存在自身抗体，荧光信号将在细胞或组织中显示出来。
这种方法对于检测自身抗体具有高度特异性和灵敏度，可以用于早期疾病的诊断和监测治疗效果。
二、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法基于酶标记的二抗与自身抗体的特异性结合。
首先，在固相载体上吸附抗原，然后加入待测样品。
如果样品中存在特异性的自身抗体，它们将与固相载体上的抗原结合。
随后，加入酶标记的二抗，该二抗能够与自身抗体结合。
通过加入底物，酶催化底物发生显色反应，可通过光密度测定来定量分析自身抗体的含量。
ELISA方法操作简单，结果可靠，被广泛应用于自身抗体的检测和定量。
三、免疫印迹法（Western blot）免疫印迹法是一种用于检测自身抗体的高灵敏度分析方法。
该方法通过将待测蛋白样品经电泳分离后转移到膜上，并与特异性的一抗和二抗反应，来检测目标蛋白的存在。
首先，将蛋白样品经SDS-PAGE电泳分离，然后将蛋白转移到膜上。
随后，将膜与特异性的一抗反应，一抗与目标蛋白结合。
最后，加入酶标记的二抗，二抗与一抗结合形成复合物，并通过酶催化底物发生显色反应，从而显示目标蛋白的存在。
免疫印迹法具有高度特异性和灵敏度，可用于检测自身抗体的存在以及研究蛋白的表达和修饰等。
四、其他自身抗体检测方法除了上述常见的自身抗体检测方法外，还有许多其他方法可供选择。
例如，荧光素酶免疫吸附试验（LIA）、放射免疫沉淀法（RIA）和流式细胞术等。
自身抗体与自身免疫疾病的关系
自身抗体与自身免疫疾病的关系引言自身免疫疾病是一类由于机体免疫系统异常攻击自己正常组织和器官而引起的疾病。
在这类疾病中，自身抗体起着关键作用。
他们不仅可以作为诊断标志物，还可以通过参与免疫反应导致组织损害。
本文将探讨自身抗体与自身免疫疾病之间的关系以及可能的发展方向。
一、自身抗体的产生和功能1. 自身抗体产生机制：自身抗体通常由B淋巴细胞产生，其生成分两步：第一步是B细胞通过表达随机再组合的重链和轻链基因来产生大量具有不同特异性的B细胞受体（BCR）。
第二步是这些B细胞受体遇到其共刺激分子后，经过选择性扩增并进一步成熟生成抗体，并释放到血液循环中。
2. 自身抗体功能：正常情况下，抗体起着保卫机体免受感染侵袭的作用。
它们通过中和病原体、激活免疫系统和调控细胞活动等方式来实现免疫保护。
二、自身抗体与自身免疫疾病之间的关系1. 自身抗体的诊断指标：自身免疫疾病的诊断通常依赖于检测患者血液中存在的特定自身抗体。
例如，在类风湿性关节炎中，类风湿因子（RF）是一个重要的诊断标志物。
2. 自身抗体与组织损伤：在某些情况下，自身抗体可以攻击正常组织并造成组织损伤。
例如，在系统性红斑狼疮（SLE）中，自身抗体反对自己的核分子，导致多种器官受损。
3. 遗传和环境因素：遗传和环境因素都可以影响自身抗体的生成和功能。
基因突变可能会导致B细胞受体结构异常，从而增加产生自身抗体的风险。
此外，环境因素如感染、药物等也可能引发或加剧自身免疫反应。
三、可能的发展方向1. 治疗策略的创新：当前，治疗自身免疫疾病的方法主要包括抑制免疫反应、减轻组织损伤和控制疾病进展。
未来的发展方向可能包括使用基因编辑技术调节自身抗体生成，或开发针对特定自身抗体的新型药物。
2. 基因和蛋白质水平的调查：现在，科学家们已经发现许多自身免疫疾病与特定基因突变相关。
通过进一步了解这些基因及其与自身抗体之间的关系，我们可以揭示自身免疫过程中更深层次的机制，并为新药物设计提供依据。
自身抗体临床用及检测技术概述
自身抗体临床应用及检测技术概述一、自身免疫与自身免疫性疾病（一）基本概念自身免疫（autoimmunity）：机体对自身成分发生免疫应答的现象，如衰老细胞或组织成分的清除等。
自身免疫病（autoimmune disease）：机体在某些诱因作用下对自身成分发生免疫应答发生紊乱而导致的疾病状态。
自身免疫性疾病的基本特征：血液中可测到高效价的自身抗体和/或自身应答性T淋巴细胞；自身抗体或自身应答性T淋巴细胞造成相应的组织细胞损伤或功能障碍；病情的转归与自身免疫应答的强度密切相关；多脏器或系统受累、病情反复发作和慢性迁延（疑难杂症）。
自身免疫性疾病临床诊断整合效应：患者自述+临床表征+检测结果(实验室\影像学检查等)。
自身抗体检测已成为自身免疫性疾病临床诊断不可或缺的指标。
表1.自身免疫性疾病AID（美国数据）表2.自身免疫性疾病中国患者统计（协和）发病率(%) 患病人数(万)RA 800SLE 200SS 820AS 500其他CTD(PM/DM/Scl)合计患病人数>5000万（二）自身抗体临床检测常见项目1、抗核抗体（ANA）检测2、自身免疫性肝病相关抗体检测（三）自身抗体项目：ANA检测1、ANA基本概念传统定义是针对细胞核成分的自身抗体的总称。
广义定义是针对细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。
对ANA的理解不再局限于核成分，而是指核酸和核蛋白抗体的总称。
靶抗原存在于包括细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂结构等部位。
3、ANA检测的临床意义ANA可见于多种疾病，特别是结缔组织疾病，常作为结缔组织病的诊断、病情判断和疗效观察的指标。
在非结缔组织病（感染和肿瘤）中也可出现阳性。
正常人中（特别是老年人）也可出现阳性，但滴度低，且常表现为IgM型，高滴度ANA则高度提示自身免疫性疾病。
目前，ANA检测已成为临床上的一个极重要的自身免疫病的筛查实验。
表检测的临床意义（四）抗核抗体基本检测策略1、初筛实验2、确认/分型实验：多特异性检测，如：间接免疫荧光法单特异性检测，如：ELISA, Immunoblot结果3、ANA荧光筛查实验ANA荧光法筛查试验时的几个重点临界值（起始稀释度）:用于初步甄别阴阳性结果荧光核型：用于缩小靶抗原确认实验范围并提示部分疾病抗体滴度：用于判断病情进展、预后等考虑到荧光法筛查试验存在主观性强的特点，因此应以一种客观和现实的态度去面对筛查试验结果。
自身抗体的检测及其临床意义
自身抗体的检测及其临床意义自身抗体检测是一种用于检测人体自身产生的抗体的方法，可以用于诊断和监测自身免疫性疾病、感染病、肿瘤和器官移植等疾病的发展和治疗效果。
自身抗体是人体免疫系统产生的一种免疫蛋白，它可以识别和攻击体内异常细胞或物质，以维持人体的正常状态。
在自身免疫性疾病中，人体的免疫系统错误地攻击自身的组织和细胞，导致炎症和组织损伤。
自身抗体检测可以帮助医生诊断和监测这些疾病的发展和治疗效果。
例如，类风湿因子（RF）和抗核抗体（ANA）是类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等疾病的典型自身抗体，它们的检测结果可以是诊断这些疾病的依据。
另外，自身抗体检测也在感染病的诊断和监测中起到重要作用。
例如，针对新型冠状病毒的抗体检测可以用于判断一个人是否感染过该病毒，或者一些疫苗是否起到了保护作用。
此外，在器官移植中，自身抗体检测可以用于评估患者的免疫状态和预测移植排斥反应的风险。
自身抗体检测的临床意义主要包括以下几个方面：1.早期诊断：自身抗体检测可以帮助医生早期发现疾病的存在，尤其是自身免疫性疾病，使得患者可以及早获得相应的治疗。
2.疾病分类：不同类型的自身抗体与不同类型的疾病相关联，通过检测特定的自身抗体，可以帮助医生明确疾病的类型和特征，从而制定更准确的治疗方案。
3.预测疾病进展：自身抗体的水平与疾病活动的程度和预后有关。
通过定期检测自身抗体的水平，可以监测疾病的进展和治疗效果，以便及时调整治疗方案。
4.指导药物治疗：一些自身抗体的检测结果可以用于指导药物治疗的选择和调整。
例如，在类风湿性关节炎患者中，抗环瓜氨酸肽抗体（ACPAs）的存在可以预测疾病的进展和对一些药物的反应，从而指导临床治疗。
总之，自身抗体检测在临床中具有重要的意义。
它可以帮助医生早期诊断、分类和预测疾病，指导药物治疗，并监测治疗效果。
随着科学技术的不断进步，自身抗体检测将会在个体化医疗中发挥越来越重要的作用，为患者提供更精准和有效的诊断和治疗方案。
自身免疫性疾病及自身抗体检测的应用
八、由Ⅲ 型超敏反应引起的 自身免疫性疾病
3、干燥综合征（SS）
SS中国的患病率为0.3%,女；男=9:1 SS发病高峰；20-30岁，50岁绝经后 分泌腺体功能异常导致皮肤和黏膜的干燥， 泪腺与唾液腺最常被侵犯，出现眼干与口干。 女性病人出现阴道黏膜干燥萎缩，有瘙痒感。 治疗：人工泪液、硼酸软膏
五、目前检测自身抗体常用的方法
间接免疫荧光法（IIF） 酶联免疫吸附实验（ELISA） 免疫印迹法（Western-blot） 酶免疫斑点法
六、常见自身免疫性疾病的标志抗体
标志抗体 dsDNA 、Sm
相关疾病
系统性红斑狼疮SLE
SSB 着丝点抗体 Scl-70 抗体 AKA、抗CCP 抗体 Jo-1 抗体 高滴度RNP 抗体 肝肾微粒体抗体（LKM-1）
ANCA荧光染色型与靶抗原
荧光染色型
胞浆型 (cANCA)
靶抗原
蛋白酶3（PR3） 阳性：韦格纳肉牙肿
核周型 (pANCA)
髓过氧化物酶（MPO 阳性：原发性பைடு நூலகம்管炎
非典型型 (aANCA) 兼有两种特性
胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体
(cANCA)
主要见于Wegener’s 肉芽肿及微小多动脉炎
7.自身免疫性肝病
病例2
• 张某：男，42岁，私企老总，2009年2月感 觉下蹲、上楼困难，手无力，低烧。单项 CK2999U/L,先怀疑心肌问题，一个月后查 抗Jo-1 抗体阳性，肌活检示肌纤维变性， 诊断：早期多发性肌炎，后碾转北京、上 海、广州半年治疗，未有好转。
病例3
• 黄某：女，39岁，16岁起经常腹泻，有脓 血，人消瘦，多次大便细菌培养，均无致 病菌生长，用抗生素治疗，症状缓解，停 药就发，数年不能诊断。后经结肠镜确认 为溃疡性结肠炎。至今未治愈。
中枢神经系统的自身免疫性疾病和相关抗体检测
› 2015年国际NMO诊断小组确定应用NMOSD这一术语代替过 去的NMO。
› NMOSD的病理基础以星形胶质细胞自身免疫性损伤为主，继 发脱髓鞘改变。主要病理改变为脊髓白质与灰质的脱髓鞘及硬 化斑块，局部坏死和空洞形成，AQP4缺失，急性轴突损伤， 伴血管周围炎症如中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润，IgG、 IgM沉积和补体激活。
› 脑脊液中的GFAP抗体是自身免疫性GFAP星形细胞病的生 物标志物。
› 患者血清中GFAP抗体阳性率为1.5%左右，脑脊液中GFAP 抗体阳性率为0.9%左右。
› 需要指出的是，GFAP抗体阳性患者亦可同时合并其他 CNS自身免疫性抗体，如NMDAR抗体、AQP4抗体等， 且有时可满足AE或NMOSD目前的诊断标准。需要结合临 床确定具体的致病抗体。
› 在急性期使用免疫治疗后其滴度可能会降低，可作为治疗疗效的评价指标。如果 发现患者临床症状符合NMOSD，但AQP4抗体阴性，则需要注意疾病的复杂性 以及检测方法的局限性等因素影响。
› 首先需要联系实验室进行复测，如果结果仍为阴性，则可能有以下3种原因：
—（1）血清中AQP4抗体水平过低而无法被检测到（如血浆吸附后）；
› 抗IgLON5抗体相关脑病的患者表现为独特的非快速眼球运动 期和快速眼球运动期睡眠障碍，伴有阻塞性睡眠呼吸暂停、间 歇性中枢性低通气、痴呆、步态不稳、舞蹈病、构音障碍、吞 咽困难、自主神经功能障碍和核上性凝视麻痹。目前已发现的 抗IgLON5抗体相关脑病患者均存在HLA- DQB1*0501和HLADRB1*1001等位基因，表明对这种疾病的遗传易感性
1.3.MOGAD
› 在CNS炎性脱髓鞘疾病患者血清中发现了MOG抗体。
自身抗体的检测在自身免疫疾病中的临床诊断及意义
断具 有 重 要 临床 意 义 。
关键 词： 自身抗体 ； 自身免疫・ 眭疾病； 临床诊 断
中图 分 类号 ：３ ２ Ｒ９ 文 献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：６ １ ７ ２ （０ ８ ０ － ０ ５ ０ １ ７－ ５ Ｘ ２０ ）２－ ５ － １ ０
自身 免疫病是指机体 的免疫效应 或免疫效应分子 ，针对 自身组织或 细胞产生 的一 系列病理性 免疫应答反应 ，导致 自 身组 织器 官损伤 的一大类疾病 ， 其发病机理 十分 复杂 ， 临床表 现多变 ， 累及皮肤、 往往 浆膜 、 关节 、 肾及 中枢神经系统等［ 患 １ 】 。
准。类 风湿（Ａ 患者 ７ Ｒ） ２例 ， ２ 男 ７例 ， ４ 女 ５例 ， 年龄 ２ — ５岁 。 ０７
其它 自身免疫性疾病组 ５ ， ２ ９例 男 ２例 ， ３ 例 ， 女 ７ 年龄 １ － ６ ９６ 岁。 照组 ２ 名 ， 对 ５ 为无 自身免疫性疾病健康体检者 ， １ 名 ， 男 １ 女１ ， ４名 年龄 ２ － ０岁。 ０ ６ 采集清晨空腹静脉血 ３ ｌ分离血清 。 ｍ，
１ ． ｄ Ｄ Ａ的检测 ．２ ｓ Ｎ ２ —
间接免疫荧光法（ｒ 测 ｉ￣ ｉ
补体 的变化。由于 自身免疫病早期症状不明显 ， 而造成临床对 自身免疫病 的诊断 困难 。近年来 ， 通过免疫检测技术 的发展 ， 对 自身免疫病患者进行 自身抗体检测 ，有 助于临床早期 诊断 和治疗。 本文对抗核抗体（ Ｎ ）可提取性 核抗 原 Ｅ Ａ￣ Ｅ Ａ Ａ Ａ、 Ｎ （ Ｎ
检验科常见自身免疫疾病检测方法
检验科常见自身免疫疾病检测方法自身免疫疾病是一类由免疫系统异常引起的疾病，包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病等多种疾病。
这些疾病的早期诊断对于及时采取治疗措施具有重要意义。
为了确定自身免疫疾病的诊断，医生通常会使用一系列的检测方法。
本文将介绍检验科常见的自身免疫疾病检测方法。
一、免疫荧光法免疫荧光法是一种常见的用于自身免疫疾病检测的方法，它是基于抗体与抗原的特异性结合原理。
通过给患者的血液标本添加适当的荧光标记抗体，然后观察标本中是否存在荧光染色的细胞或组织，以确定是否存在自身抗体的产生。
这种方法可以检测多种自身抗体，常用于类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮等疾病的早期筛查。
二、酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种利用酶标记的二抗体检测特定抗原或抗体的方法。
在自身免疫疾病的检测中，ELISA常用来测定患者血清中的自身抗体水平。
通过将待测血清与特定的抗原结合，然后加入酶标记的二抗体，再加入底物反应产生颜色，可以测定反应的光密度来判断抗体的存在与否以及水平的高低。
这种方法方便、灵敏度高，常用于硬皮病等自身免疫疾病的诊断。
三、免疫透析法免疫透析法是一种常用的半定量检测方法，它的原理是通过酸化或热变性改变标本中的抗体结构，使其无法与特定抗原结合。
通过将患者血清与已知抗原结合后，加入过量的未标记抗原和少量的标记抗原，观察标本中是否有特定结合的免疫复合物的形成。
这种方法具有操作简单、成本低廉的优点，适用于多种自身免疫疾病的检测。
四、流式细胞术流式细胞术是一种通过测定单个细胞表面或内部标记物来分析、计数和鉴定细胞群体的方法。
在自身免疫疾病的检测中，流式细胞术可用于检测特定自身抗体和免疫细胞亚群。
它通过将标本中的细胞与特定的荧光标记抗体结合，再通过仪器的光学装置分析细胞的特性。
流式细胞术具有高效、快速、灵敏度高的优势，被广泛应用于自身免疫疾病的诊断与监测。
五、免疫电泳法免疫电泳法是一种利用电场将蛋白质分离并测定其免疫特性的方法。
自身免疫病的检验新.
检测抗ENA抗体的最常用方法是免疫印迹技术 （IBT）和斑点酶免疫（dot-ELISA）技术
免疫印迹技术（Immunoblotting,IBT）检测 ENA抗体的原理和流程 ENA经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，各种抗原多 肽按分子量大小分离，电转移至硝酸纤维膜固 定后，患者血清中的自身抗体即可通过酶联免 疫反应与相应的蛋白多肽结合，在硝酸纤维膜 上呈现特异性显色条带，参照各种已知阳性血 清在膜上留下的显色区带的位置特征及显色区 带对应的蛋白多肽抗原的分子特征，即可检测 和识别多种自身抗体。
类风湿因子（RF）
是抗变性IgG的自身抗体，主要为IgM，也可见 IgG,IgA。 考点 检测方法： 考点
胶乳颗粒凝集实验：只能定性或半定量，灵敏度和 特异性不高，只能检出IgM类RF 速率散射比浊法：快速、准确、能定量分析，但仍 然只能测出IgM类RF ELISA法：根据酶标记抗体的特异性不同可以测定 不同Ig类型的RF。 IgM、 IgG、 IgA均可测出
ITP（免疫性血小板减少性紫癜）：
多发生于儿童和青少年，女性较多。 血中存在抗血小板抗体。 根据病因和临床表现分为特发性和继发性。 前者无明显诱因，后者有明显诱因，或在一 些原发病基础上发生血小板减少。 选择题
Ⅲ型超敏反应引起的自身免疫性疾病
系统性红斑狼疮（SLE） 是一种累及多器官、多系统的小血管及结缔组 织疾病，好发女性，疾病呈渐进性，缓解与复 发交替，体内存在多种自身抗体。 类风湿关节炎（RA） 本病特征以手脚小关节发病，向心对称性发展， 血清和关节滑膜液中出现抗变性IgG抗体，即 类风湿因子（rheumatoid factor，RF） 以上两种疾病发病机制属III型超敏反应。
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自身抗体的检测方法
ELISA法与IIF法比较，有操作 简便，结果判断较客观，无需荧光 显微镜等优点，现在一些医院用 ELISA法来作检测ANA的筛选方法。
自身抗体的检测方法
颗粒凝集法(PA） [原理]：以检测抗脱氧核糖核蛋白体（抗 DNP抗体）为例。从小牛胸腺中提取脱 氧核糖核蛋白(DNP）抗原，致敏聚苯乙 烯乳胶，制成抗DNP抗体乳胶凝集试剂， 当血清中存在抗DNP抗体时，便与乳胶 颗粒上的DNP抗原结合，使乳胶颗粒相 互凝集出现肉眼可见的凝集颗粒。
自身抗体的检测方法
免疫印迹法(IB）：
自身免疫病常规实验室检查
• 血常规： • RA：80%贫血，活动期PLT升高。 SLE：WBC，PLT，Hb均可能降底。 免疫血管炎：WBC增高。 对药物引起的骨髓抑制的监测。
自身免疫病常规实验室检查
尿常规：
SLE：尿蛋白及RBC的出现表明肾脏损伤。
自身免疫病常规实验室检查
• 自身抗体：是指抗自身细胞内，细胞表 面和细胞外抗原的免疫球蛋白。
自身抗体的检测
• 自身抗体是自身免疫病的重要标记， • 每种自身免疫病都伴有特征性的自身抗体， • 某些自身抗体因对疾病的诊断具有高度的特异性， 已成为诊断某些疾病的血清标记性抗体或特异性 抗体， • 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，个别的 自身抗体被证实参与了组织的免疫病理损伤。
系统性红斑狼疮 干燥综合征 类风湿关节炎 硬皮病 多发性肌炎/皮肌 混合性结缔组织 系统性血管炎 抗磷脂综合征 药物性狼疮
自身免疫性溶血性贫血 交感性眼炎 特发性血小板减少性紫癜 晶ຫໍສະໝຸດ 体源性葡萄膜炎 特发性粒细胞减少症
自身免疫性疾病有一百多种，发病率占世界人口的10% 自身免疫性疾病几乎遍布临床各科（非手术科） 疑难 病症？
肝功能：如有异常，应鉴别是何种性质
（自身免疫肝病？） 病原感染常规检查 肝炎病毒：HAV、HBV、HCV、HDV、 HEV、HGV…… EBV,TB……
自身免疫病常规实验室检查
肾功能：免疫肾病（SLE？血管炎？） 肌酶：多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM） 尿酸：痛风？
自身免疫病常规实验室检查
免疫血清学检查
抗心磷脂抗体（ACL）
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
类风湿因子（Rheumatoid Factor RF）是 IgGFc端的自身抗体，因为它是抗体（即 IgG）的对应抗体，故也称为抗抗体。 RF可以是IgG、IgA、IgM型，现在一般 说的RF是指IgM类风湿因子。
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
抗心磷脂抗体（ACL）
• 抗心磷脂抗体（Anti-Cardiolipin Antibodies ACL）是抗磷脂抗体中的一 个重要组成部分，可在多种结缔组织病 中出现，抗心磷脂抗体可分为IgA、 IgM、 IgG。
抗心磷脂抗体（ACL）
• 研究表明ACL在SLE中阳性率为30%， 其次在RA中阳性率为23%，都以IgG型 为主。在SLE病人当中ACL阳性者狼疮 脑病的发病率明显高于ACL阴性患者， 另外，血小板减少，血管栓塞和习惯性 流产也与ACL抗体密切相关。
自身免疫病的基本特征
遗传因素： 强直性脊柱炎（AS）患者90% 为HLA--B27阳性，然而在HLA-B27阳性的人群中发生强直性脊柱炎 的可能仅为2%，而第一级HLA-B27阳性的亲属中，发生强直性脊柱 炎的危险性达20%。
自身免疫病的基本特征 系统性红斑狼疮（SLE）的家族发病率 也较高，在SLE第一代亲属中发病率达 3%--5%，同胞姐妹发病率更高，特别是 单卵双胎更为常见 。在1980年的调查中 35组单卵双胎的患者中，有22组患SLE， 共患病率达62.9%，而双卵双胎8组中仅1 组患病，为12.5%。
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 系统性红斑狼疮（SLE）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 类风湿性关节炎（RA）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 系统性硬化症（PSS）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 干燥综合症（SS）
常见的自身免疫性疾病图片资料
• 皮肌炎/多发性肌炎（DM/PM）
自身抗体的检测
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体(ANA）是自身抗体中 的一组抗体。ANA的研究，从发现 狼疮(LE）细胞算起，迄今40多年来， 人们对ANA的认识不断加深，已衍 生出具有不同临床意义的二十余种 ANA，形成了抗核抗体谱(ANAS）。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体：
传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗 原成分的自身抗体的总称。 现代定义：是指抗细胞内所有抗原成 分的自身抗体的总称。
免疫球蛋白、血清蛋白电泳（高球蛋的血 症）。 ESR、CRP（急性期蛋白）：对病情活动 性的判断。 CH50、C3、C4：SLE活动期均降底。 ASO：链球菌感染，风湿热。
自身免疫病常规实验室检查
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抗核抗体谱（ANAs） 抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCAs） 类风湿关节炎相关抗体 自身免疫性肝病相关抗体 抗磷脂抗体 其它……
IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型 斑点型 高尔基体 中间体型 核仁型 溶酶体型 着丝点 颗粒型（粗、细） PCNA型 核（多、少）点型
抗核抗体谱(ANAS）的检测
在实际工作中，不管用何种方 法来检测ANA，实际上都是指总抗 核抗体检测。若检测结果为阳性， 则需进行分型。
自身免疫病与自身抗体的检测
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 免疫 机体识别和排除抗原性异物的功能， 也就是机体免疫系统对抗原刺激所产生 的以排除抗原为目的的生理过程。
体液免疫--- 产生抗体
细胞免疫---致敏淋巴细胞
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 隐蔽抗原：机体有些组织成分由于解剖 位置的特殊性，正常情况下终生不与免 疫系统接触，称为隐蔽抗原。 眼晶状体、葡萄膜---交感性眼炎； 精子—男性不育。
自身抗体的检测方法
• 核均质型：ds-DNA或抗组蛋白？
自身抗体的检测方法
• 斑点型（S）：抗SSA、抗SSB？
自身抗体的检测方法
• 着丝点型（ACA）：抗着丝点抗体。
自身抗体的检测方法
• 抗纺锤体抗体
自身抗体的检测方法
ELISA法检测ANA [原理]：利用ELISA法，搜集细胞核 和细胞浆抗原，如ds-DNA、 Histones、Sm、RNP、SSA、SSB、 Scl-70、centromere、Jo-1等混合液 包被微孔板，检测抗核抗体。
自身抗体的检测
自身抗体检测的临床意义 • 有助于自身免疫病的早期诊断； • 有助于判断疾病的活动性和预后， 观察治疗反应，指导临床用药； • 有助于进一步研究和阐明自身免疫 性疾病的发病机制。
自身抗体的检测方法
• 间接荧光染色技术（IIF）实验原理
• 细胞、组织切片或纯化的、生化性质明确的物质 均可作为检测自身抗体或病原体抗体的抗原基质。 • 如标本为阳性，已稀释血清中的特异性抗体将与 包被在固相上的抗原结合。 • 第二步，已结合的抗体与荧光素标记的抗人抗体 结合，然后在荧光显微镜下观察结果。
自身免疫性疾病发生的原因
机体抗原特异性淋巴细胞发生异常，对正 常组织发生免疫应答状态； 机体自身组织成分发生改变从而引起的免 疫应答状态。
自身免疫病的基本特征
• 多数自身免疫病的病因不清，有些 自身免疫病的发生和复发似乎与某 些外因有关，但大多数自身免疫病 是“自发”地发生的，目前未找到 肯定的外因。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
抗核抗体(ANA)的阳性率
SLE PSS MCTD SS PM/DM RA 自身免疫性肝炎 正常人 >95% 70-80% >95% 60-70% 50-60% 20-30% 80-90% 5-20%
IIF法检测ANA阳性常见荧光染色模型 细胞核 细胞浆 细胞骨架 细胞周期 均质型 核糖体型 肌动蛋白型 中心体型 核膜型 线粒体型 波形蛋白型 纺锤体型 斑点型 高尔基体 中间体型 核仁型 溶酶体型 着丝点 颗粒型（粗、细） PCNA型 核（多、少）点型
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫：是指机体免疫系统对自身抗 原发生免疫应答，产生自身抗体和（或） 致敏淋巴细胞的现象。
与自身免疫性疾病相关的基本概念
• 自身免疫病： 是指在各种内外因素的作用下， 自身免疫反应过强，超过了生理性自 身免疫反应的强度且持续相当长时间， 造成对正常细胞、器官的功能与结构 的破坏，呈现与此损伤相关的临床表 现及免疫学异常。
自身免疫病的基本特征
• 血液中可检出高滴度的自身抗体和 （或）与自身组织成分起反应的致 敏淋巴细胞。
自身免疫病的基本特征
• 组织器官损伤和功能障碍的范围取决于 自身抗原分布: 器官特异性自身免疫病：桥本氏甲状腺炎， 非器官特异性自身免疫病：如系统性红斑 狼疮（SLE）。
自身免疫病的基本特征
• 自身免疫病的发生与多因素相关， 包括遗传因素、性别差异、年龄大 小、气候环境及地理位置等。
抗核抗体谱(ANAS）的检测
ANA检测—IIF法(金标准) 1、90%以上实验室使用Hep-2细胞为底物; 2、为人来源培养细胞（人喉癌细胞），据有 核大、细胞结构清晰特点； 3、便于结构观察及荧光染色核型分析； 4、 核抗原丰富、特异性强、有完整的ANA抗 原谱(细胞核、浆、骨架、周期）； 5、可预测分析ANA靶抗原范围； 6、 经验性强。
• RF出现于的RA病人血清中，约30%的 SLE、约50%的SS，部分MCTD和少数 PSS病人也可呈阳性，在某些病毒、原虫、 细菌感染和肿瘤等非自身免疫病患者也 可以出现。
类风湿性关节炎（RA）的早期诊断
• RA是一种最常见的自身免疫性疾病，在全 世界大约有1%的人患有此病。是以关节滑 膜炎症的慢性自身免疫性疾病，其预后变 异大，轻者发生轻度关节畸形，重者则发 生严重致死性病变。RA诊断和治疗晚，则 疗效不满意。早期诊断和治疗，炎症有可 能发生可逆性改变，这就显得RA的早期诊 断极为重要。