组织蛋白提取

1. 提取蛋白裂解液配方：

25 mM HEPEs PH:7.4

5 mM EDTA

5 mM EGTA

50 mM NaCl

1 mM Na3VO3(矾酸钠)

1 mM sodium phosphophate

0.05% SDS

0.05% sodium deoxycholate (脱氧胆酸盐)

1% Triton-X 100

5 mM NaF

0.1% 2-mercaptoethanol

1 mM PMSF (1ul 100mmol/L+纯水99ul)

1uM Microcysin-LR

40ug/ml pepstatin A

40ug/ml aprotinin

40ug/ml leupeptin

2..组织蛋白提取及定量：

称量组织重量置小烧杯

用PBS清洗1-2次

加入组织裂解液【悬浮buffer储存液500ml+苯甲基磺酰氟（PMSF，有毒物）30+leapeptin （蛋白抑制酶）0.5ul于EP管混合，倒入盛组织的烧杯】

置冰上5min

用眼科剪剪碎

倒入5ml匀浆器（反复抽吸匀浆组织）

倒入或吸入EP管

离心（4°C 1000g 10min）取上清

用于蛋白定量或储存于-80°C

蛋白定量

取5ul蛋白样本+15ul去离子水（DW）+200ulBCA（A:B为50:1即196:4），分别混合样本与DW和BCA的A液与B液置于干净的96孔板上37°C，30min

酶联免疫测OD值（570nm，ELX-800型酶标仪）

由OD值计算蛋白浓度（用excel表或用下列公式计算）

（OD值×987.7108－198.342）×103ng/ul；OD=样本OD值－空白对照OD值）