经口急性毒性实验

改进寇氏法：利用剂量对数与死亡率呈S型曲线而设 计的方法。要求如下：
每个染毒剂量组动物数相同， 各剂量组组距呈等比级数， 死亡率呈正态分布， 最低剂量组死亡率<20％， 最高剂量组死亡率>80%。
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三、材料和试剂
1.实验动物：健康成年小鼠，昆明种，普通级，雌 雄各60只
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剂量源自文库计
预实验得出LD100、 LD0 ，各设置五个剂量组，n=5 i= ( lg LD100 - lg LD0)/ (n-1)， k=10i
雌性： LD100= 240mg/kg LD0= 90mg/kg
雄性： LD100= 250mg/kg LD0= 100mg/kg
经口染毒
1. 称重并标记:(每组10只） 头，背，尾，右前，右中，右后，左后， 左中，左前，全白 2.灌胃：0.1ml/10g 3.中毒体征和动物死亡情况观察（中毒表现参照教材《毒理
学基础》P123）
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中毒体征和动物死亡情况观察
1、中毒过程：潜伏期、中毒期、恢复期或死亡时间（只需记录中 毒出现的时间＆死亡时间）
实验动物的随机分组 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
雌雄分开分组，每种性别分6组，每组10只
1.动物称重：按体重分在不同笼中待分组 <16g, 16g~, 18g~, 20g~, 22g~, >24g
2.随机分组方法 每种性别随机分为6组：A、B、C、D、E，F,每轮分别从笼中取一只动 物按如下顺序到各组，直到动物取完。(雌雄分别分组）
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急性毒性作用：
指机体一次接触或24小时内多次接触化学物后 在短期（最长到14天）内所发生的毒性效应，包 括一般行为、外观改变、大体形态变化以及死亡 效应。
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LD50：半数致死剂量
指引起一组受试实验动物半数死亡的剂量。常 用以表示急性毒性的大小。
2、中毒症状：参照《毒理学基础》P123，表6-1 3、死亡的判断：呼吸、心跳停止，瞳孔扩散 4、尸体的解剖：目的判断发生毒作用的靶器官，排除动物的意外
第一轮：A、B、C、D、E、F 第二轮：B、C、D、E、F、A 第三轮：C、D、E、F、A、B 第四轮：D、E、F、A、B、C 第五轮：E、F、A、B、C、D 第六轮：F、A、B、C、D、E
...... 雌雄各5组为剂量组，各剩一组作为溶剂对照（只灌植物油）和备用。 分完组后在笼子上做好标记，动物暂不标记，下午灌胃前再标记。
9mg/ml
100mg/kg
10mg/ml
各组浓度＝各组剂量/灌胃容量
例 雌性最高剂量组浓度＝最高剂量/ 灌胃容量 ＝240mg/kg/0.1ml/10g＝24mg/ml
2、每组实际需要量V＝最终体积＋损耗量
＝动物数×平均体重×灌胃容量＋损耗量
＝10×25g×0.1ml/10g+2.5ml
＝5ml
3、 雌性最高剂量组溶液(即母液)：
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急性毒性试验
• 实验动物的选择（物种和品系，年龄和体 重，性别，分组，预检，禁食）(who?)
• 受试物（what?) • 染毒方法(how?) • 剂量选择（how?) • 毒性作用观察(ending)
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一 、实验目的
• 1.学习急性毒性试验的实验设计原则 • 2.掌握灌胃技术，随机分组方法 • 3.掌握LD50的计算方法 • 4.观察和描述受试物的中毒特征 • 5.掌握急性毒性分级标准
• 改进寇氏法 1、 剂量设置：雌雄，等比数级，灌胃容量：0资.料1仅m供l参/1考0,不g当之处，请联系改正。
雌LD100=240mg/kg,LD0=90mg/kg,k=1.28
雄LD100=250mg/kg,LD0=100mg/kg,k=1.26
㈠雌性5个剂量组
各组浓度
㈡雄性5个剂量组
各组浓度
240mg/Kg
24mg/ml
250mg/kg
25mg/ml
187.5mg/Kg
18.8mg/ml
198.4mg/kg
19.8mg/ml
146.5mg/Kg
14.7mg/ml
157.4mg/kg
15.7mg/ml
114.4mg/Kg
11.4mg/ml
125.0mg/kg
12.55mg/ml
90mg/Kg
2.器材：灌胃针，注射器，吸管，容量瓶，滴管， 动物体重秤等
3.试剂： 受试物为1.3g/ml敌敌畏油溶液（湖北荆 州），植物油，苦味酸（染色标记）。
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四、操作步骤
1.实验动物选择：昆明种小鼠，雌雄各60（上午） 2.实验动物的随机分组和标记（上午） 3.剂量设计及受试物配制（上午） 4.经口染毒（下午） 5.中毒体征和动物死亡情况观察记录（下午） 6.LD50的计算（次日下午） 7.结果评价、完成实习报告（次日下午）
雌性=A×（1/k）=22.9 ×(1/1.28)=17.9ml
雄性=A×（1/k）=24.2 ×(1/1.26)=19.2ml
从最高剂量组溶液A ml中取出5ml,作为高剂量组。剩余(A-5)ml,加油5ml，混匀后，
再从中取出5ml作为下一个剂量组，依次类推，完成时，最低剂量组体积为A，
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其值越小，表示外源化学物的毒性越强；反之， 毒性越低。
LD50是经过统计学计算得到的毒性参数，是一 个统计量，受实验动物个体易感性差异的影响较 小，因此是最重要的急性毒性参数。
二 、实验原理 资料仅供参考,不当之处，请联系改正。
选择健康的实验动物，根据体重按随机分组的方法， 依予据受L试D物50后计，算了的解设动计物原所则产将生动的物急分性成毒数性个反染应毒及组其。严给 重程度，中毒死亡的特征以及可能的死亡原因，观察 受试物毒性反应与剂量的关系，求出半数致死剂量 （本L次D实50验）采，用并改根进据寇LD氏50法值。将受试物进行急性毒性分级。
雄性最高剂量组溶液（母液）：
24mg/ml配置22.9ml
25mg/ml配制24.2ml
雌A＝V * K / (K-1)
雄A= V * K / (K-1)
＝5*1.28/ ( 1.28－1)
=5*1.26/(1.26-1)
＝22.9ml
=24.2ml
4、下一组溶液的配置： 等比稀释法 A*（1/K）