急性毒性试验设计

以20只动物的完全随机分配为例
动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 随即数字 54 83 80 53 90 75 53 78 93 47 72 09 54 66 95 44 68 67 67 86 除4后余数 2 3 0 1 2 3 1 2 1 3 0 1 2 2 3 0 0 3 3 2
二1 三2
5 8 13 14 6 10 15 18
四 3 11 16 17 20
受试物的配制方法
（1）受试化学物的量取： 固体受试物用称量法，液体受试物用称量法或吸量法。 称量法：取一定量的受试物放入已知重量的容器内，称
重，定容，计算浓度mg/ml，备用。 吸量法：依设计剂量计算出应吸取液态受试物的容积，
所属组别 二 三 四 一 二 三 一 二 一 三 四 一 二 二 三 四 四 三 三 二
完全随机分配后各组所属动物号
组别
动物编号
一4 7 二1 5
来自百度文库
9 12 8 13 20 14
三 2 6 10 15 18 19
四 3 11 16 17
20只动物完全随机分配的结果
组别
动物编号
一 4 7 9 12 19
通过预试，找出受试化学物引起动物死亡 的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和 分组。
按下式设计剂量组：
r n 1 b a
式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～1.5， b—最低全致死剂量量， a—最高不致死剂量， n—设计的组数。 分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组 动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出LD50。
加入容量瓶中，用溶剂加至刻度。
吸量法，计算公式为：X＝ A ·V
式中：
d×1000
X——应吸取受试物的容积；
A——设计要求的受试物浓度 （ mg/ml ）；
V——容量瓶容积（ml）；
d——受试化学物比重；
受试物的配制方法 （2）受试化学物的稀释 等浓度稀释法： 等容量稀释法：
等浓度稀释法
将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单 位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受 试物的试验剂量分别为100、200、400和 800mg/kg，受试物配制成10 mg/ml，每组动物 每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8 ml。
等容量稀释法
将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位 体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物 配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、 10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。
染毒途径的选择
经消化道染毒：经口灌胃法
如：丙烯腈，过氧化二碳酸二环己酯
丙烯腈经口急性毒性试验设计
实验目的
评价丙烯腈的毒性作用，求出半数致死 量LD50，并根据LD50进行急性毒性分 级，
掌握实验动物随机分组的方法和经口灌 胃的技术。
观察丙烯腈急性中毒症状；为后续试验 提供依据；为毒理学机制研究提供线索。
器材与试剂
1、实验动物 ICR小鼠（健康成年小鼠） 2、实验器材 灌胃针、注射器、吸管、容
根据公比(r)计算各组剂量 各组剂量分别为
第一组：a 第二组：a r 第三组：a r2 第四组：a r3 第五组：a r4 第六组：a r5
随机化分组
将实验动物编号，从随机数字表上任意横 行或纵行的任意数字开始，顺序取下数字， 标于每个动物号下，然后用计划组数去除 随机数字，所得余数即为所属组别。
染色法
优点： 简单方便，不痛苦，无损伤。
缺点： 时间较长时，染色剂易褪色； 标记容易模糊不清。
剂量选择及分组
剂量选择 广泛查阅文献资料，估计毒性中值 预试，求出待测化学物0 %~100 %或 10 %~90 %的大致致死剂量范围 设计正式试验的剂量和分组
预实验：
总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距 染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试 动物全部致死的最小剂量（b）和全部不致死的 最大剂量（a），即求出待测化学物0 %~100 %的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围 内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂 量呈等比级数（r），其比值为1.2~1.5。进行正 式实验。
实验动物的预检
实验动物的给药 前禁食处理。
健康动物标志
发育正常、体态丰满、外观无畸形； 被毛浓密、贴顺有光泽、不蓬乱； 胸阔宽阔、脊柱不弓不弯； 眼睛明亮； 表皮无溃疡、无结痂（注意尾巴）； 各天然孔干净、无分泌物； 行动灵活、反应敏捷。
实验动物的标记
染色法 编号方法：小鼠头部为1号， 顺时针编号，用苦味酸编个位 数，用伊红编十位数。
2、 实验动物的年龄与体重
动物
大鼠
犬猫
成年年龄（周） 3
3~4 3~4
体重（克） 150
7~15kg 1kg
小鼠 2 15
豚鼠 兔 2 3~4 250 1.5kg
3、实验动物的一般要求
动物数量：动 物6组，1-5组 为实验组，6组 为蒸馏水对照 组
性别：雌雄各 半
年龄：成年动
生理与健康状况： 未产未孕者、健 康动物
量瓶、烧杯、滴管、电子天平、动物体重 秤、外科剪刀、镊子 3、实验试剂 丙烯腈、苦味酸酒精饱和液、 伊红染液
实验方法
1、实验动物的选择 2、剂量设计及随机化分组 3、受试物的配制 4、染毒途径的选择 5、毒性反应的观察与LD50的计算 6、急性毒性的评价
一、 实验动物选择
1、物种和品系 对外源化学物毒性反应与人近似易于饲养管 理 方便实验 操作易于获得 繁殖生育力强 数量较大能够保障 品系纯化，价格低廉。
急性毒性试验设计
组员：
一、急性毒性
急性毒性指人或动物一次或24 h之内多 次接触外源化学物后，在短期内所发生 的毒性效应，包括致死效应。
一次：指瞬间给实验动物染毒，如经 口、经静脉注射染毒。
24 h之内多次：指外源化学物毒性过 低，需给予动物较大剂量。
急性毒性效应出现的快慢和毒性反应的强 度与外源化学物的性质和染毒剂量的大小 有关。