PCR实验室操作流程
临床检验中心PCR实验室标准操作程序

临床检验中心PCR实验室标准操作程序****医院临床检验中心临床基因扩增实验室管理程序标准操作程序(SOP)起草人:批准人:生效日期:年月日目录样本编号的标准操作程序(SOP-15) (94)PCR标本管理标准操作程序(SOP-16) (97)标本前处理标准操作程序(SOP-17) (99)核酸扩增及产物分析检测标准操作程序(SOP-18) (101)乙型肝炎病毒基因扩增检测标准操作程序(SOP-19) (103)基因扩增检测实验结果分析标准操作程序(SOP-20) (111)实验结果有效性判断标准操作程序(SOP-21) (115)室内质量控制标准操作程序(SOP-22) (117)实验室试剂耗材购买、验收和贮存的标准操作程序(SOP-23) (126)试剂质检标准操作程序(SOP-24) (136)实验室耗材质检标准操作程序(SOP-25) (140)手套使用及左右手分开的原则(SOP-26) (144)实验室化学试剂贮存使用、废弃物处理及生物防护(SOP-27) (146)抱怨的处理程序(SOP-28) (149)实验室记录管理规章标准操作程序(SOP-29) (156)检验报告单管理标准操作程序(SOP-30) (160)实验室台面摆放顺序程序(SOP-31) (165)实验室常用溶液配置标准操作程序(SOP-32) (167)临床基因扩增实验室的设置1目的:依照实验室设置规范实现核酸扩增荧光检测实验室配置合理,以保证实验工作健康有序及实验结果的可靠性2 范围:临床基因扩增实验室及相关工作人员,并明确各项规章制度3 操作人:** **4 实验室设置规章:4.1 依据:本实验室按《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号)中临床基因扩增检验实验室基本设置标准结合本实验室的条件进行设置,并严格按照《临床基因扩增检验实验室工作规范》(卫检字2002第8号)的要求开展临床基因扩增工作(拟开展基因扩增检验项目见附表1)4.2 实验室设置:实验室主要由试剂储存和准备区(PCR-Ⅰ)、标本制备区(PCR-Ⅱ)、PCR扩增及产物分析区(PCR-Ⅲ)三个工作室组成。
PCR实验室标准操作规程SOP
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一、基因扩增检验实验室基本情况 (一) 实验室所属法人单位名称:________________________________________________
地址:__________________________________________________________________ 邮编:_____________________________________ 法定代表人:_____________________实验室负责人:_________________________ 联系人:_________________________email:_________________________________ 电话:___________________________传真:__________________________________ (二) 实验室总人数:__________________名 (其中初级职称人数人员___名,占____;中级职称人数人员_____名,占______。)
质量手册
一、 管理性程序: 程序文件的管理和维护 ……………………………………………………………………… 1 PCR 实验室管理制度 …………………………………………………………………………… 2 生物安全准则 ………………………………………………………………………………… 4 实验室生物防护措施 …………………………………………………………………………… 7 实验室传染性废弃物管理制度 ………………………………………………………………… 9 PCR 实验室的人员配置及管理制度 …………………………………………………… 12 PCR 实验室的人员培训计划及措施 …………………………………………………………… 14 PCR 实验记录管理制度 ………………………………………………………………………… 15 惠安县医院 PCR 检验报告单保密制度 ……………………………………………………… 17 检验结果的传送管理制度 ……………………………………………………………………… 19 实验室的清洁制度 ……………………………………………………………………………… 20 化学试剂的管理程序 …………………………………………………………………………… 22 实验室消耗品购买、验收和贮存程序 ………………………………………………………… 23 新项目审批程序 …………………………………………………………………………………… 25 仪器设备的管理制度 …………………………………………………………………………… 26 仪器设备的使用制度 …………………………………………………………………………… 28 仪器设备的标准操作制度 ……………………………………………………………………… 29 仪器设备的维护保养程序和制度 ……………………………………………………………… 31 仪器设备的校准制度 …………………………………………………………………………… 34 仪器设备发生故障的应急处理制度 ………………………………………………………… 35 PCR 检测的标本管理制度 …………………………………………………………………… 36
PCR实验室试剂的质检标准操作程序
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PCR实验室试剂的质检标准操作程序1.目的:保证每批用于临床实验的试剂的质量良好,符合要求。
2.适用范围:各种用于临床实验的核酸扩增荧光检测试剂(HBV、HCV、HPV、CT)。
3.负责人:操作人:4.程序:4. 1收到试剂后,目测试剂是否处在冻存状态。
4. 2核对试剂品种和数量并检查包装:外包装(厂名厂址、、批准文号、批号和有效期等);内包装(试剂瓶完整性、试剂配备品种完整性、使用说明书有否等)。
4. 3及时将试剂转入-20.。
冰箱保存。
将上述检测核对情况在记录本上登记。
4. 4最迟在前批次试剂存量尚可维持常规实验一周时,按如下要求对新批号试剂进行效验实验。
4. 5效验实验:4. 5. 1要求设置:空白对照、阴性对照、阳性对照、室内质控各一,阳性标准品梯度(104、105、106、108)。
4. 5. 2出现如下情况中任何一种的,判断为试剂不合格,不能用于临床检测:a)空白对照出现扩增。
如扩增曲线CT值大于25,需重复实验确证试剂污染。
b)阳性对照和阳性标准品均未检出,或阳性对照未检出而阳性标准品检出率大幅下降,表示试剂失效或检测灵敏度大幅下降。
4. 5. 3阳性对照未检出,阳性标准品检测正常,提示样品提取液可能存在问题。
重复新旧提取液阳性对照实验,确定提取液失效问题。
更换提取液后该批试剂方可使用。
4. 5. 4空白对照无扩增,阴性对照有扩增,排除其他污染可能性后,提取液存在污染可能。
单独用提取液点样上机,出现扩增,需更换提取液后方可使用该批试剂。
4. 5. 5阳性对照检出,阳性标准品未检出或扩增曲线明显系统性CT值偏大5个循环以上。
提示阳性标准品存在问题。
更换阳性标准品后该批试剂方可投入使用。
4. 5. 6空白对照、阴性对照无扩增,阳性对照正常检出,阳性标准品导出的标准曲线之斜率(-2.9〜-3.9)、截距(26〜34)、相关性(-0.99)均在使用范围内,表明该批试剂良好,可以投入临床使用。
pcr 操作流程

pcr 操作流程PCR(Polymerase Chain Reaction)是一种用于复制DNA片段的技术,它可以在短时间内扩增出数百万份特定DNA序列。
PCR技术在分子生物学、医学诊断、法医学等领域有着广泛的应用。
下面将介绍PCR的操作流程。
首先,准备PCR反应体系。
PCR反应需要的基本组成包括DNA模板、引物、dNTPs(四种脱氧核苷酸)、DNA聚合酶、缓冲液和水。
引物是PCR反应的关键,它们是用来识别目标DNA序列并引导DNA聚合酶合成新链的短链DNA片段。
其次,进行PCR反应。
PCR反应通常分为三个步骤:变性、退火和延伸。
在变性步骤中,将PCR管中的混合物加热至95°C,使DNA双链解旋成两条单链。
在退火步骤中,将反应温度降至50-60°C,引物与目标DNA序列结合。
在延伸步骤中,将反应温度升至72°C,DNA聚合酶在引物的引导下合成新链。
最后,进行PCR产物的分析。
PCR反应结束后,可以通过凝胶电泳、实时荧光定量PCR等方法对PCR产物进行分析。
凝胶电泳可以用来检测PCR产物的大小和纯度,实时荧光定量PCR可以用来定量PCR产物的数量。
在PCR反应中,需要注意一些常见的问题,如引物的设计、反应条件的优化、污染的防止等。
此外,PCR反应的结果也需要谨慎解读,避免误判。
总的来说,PCR技术是一种简单、快速、高效的DNA复制技术,广泛应用于科研和临床实验中。
熟练掌握PCR的操作流程和技巧,可以提高实验效率和准确性,为科研工作提供有力支持。
PCR实验室操作流程
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乙型肝炎病毒(HBV DNA PCR ABI7300)检侧标准操作程序飞INFORMATIONFORTE检测信息二、ANALYTICALPRINCTP检测原理聚台酶链式反应(PCR可对特定核苷酸片段进行指数级的扩增,而实时荧光定量PCF技术,是指在PCF反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学物质,荧光物质有两种:荧光探针和荧光染料。
我们目前是使用TaqMan荧光探针的检测原理:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCRT增时,Taq 酶的5' —3'外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,荧光信号强度也等比例增加(图一)。
这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图3■- atwnch-ftr三、操作步骤(一)试剂配制1、进入试剂准备区,开启冰箱冷冻层取出 HBV-DNA 佥测试剂盒。
查 看外包装盒(包括生产批号、有效期),无误后拆开试剂盒,取出核酸 提取液、反应液及Taq 酶(核对核酸提取液、HBVPC 反应液及Taq 酶 管上批号与试剂外包装盒批号是否一致)(图1),不一致则不可使用, 需更换新的试剂。
室温平衡20min ,完全融化后2000rpm 离心备用。
2、核酸提取液的分装 (1)取0.5ml 离心管架置于超净工作台内(开机前用紫外线消毒30 分钟),用右手拿起镊子逐个将离心管放入离心管架(注意应夹住离 心管外壁,不能碰到管内壁),摆放顺序为横列从左往右摆,竖列为 从上往下隔行排,离心管个数为n (n 二样本数+对照品+质控品)。
PCR实验室标准操作规程SOP

目录申报文件一、临床基因扩增检验实验室技术验收申请表二、《医疗机构执业许可证复印件》三、拟设置基因扩增检验实验室医院的医疗卫生资源状况对临床基因扩增检验的需求情况以及实验室运行的预测分析四、拟设基因扩增检验实验室的设置平面图五、实验室主要负责人简历表六、实验室工作人员一览表七、主要仪器设备表八、拟开展的临床基因诊断项目九、几点说明质量手册一、管理性程序:程序文件的管理和维护 (1)PCR实验室管理制度 (2)生物安全准则 (4)实验室生物防护措施 (7)实验室传染性废弃物管理制度 (9)PCR实验室的人员配置及管理制度 (12)PCR实验室的人员培训计划及措施 (14)PCR实验记录管理制度 (15)惠安县医院PCR检验报告单保密制度 (17)检验结果的传送管理制度 (19)实验室的清洁制度 (20)化学试剂的管理程序 (22)实验室消耗品购买、验收和贮存程序 (23)新项目审批程序 (25)仪器设备的管理制度 (26)仪器设备的使用制度 (28)仪器设备的标准操作制度 (29)仪器设备的维护保养程序和制度 (31)仪器设备的校准制度 (34)仪器设备发生故障的应急处理制度 (35)PCR检测的标本管理制度 (36)二、检测项目操作程序:标本、样本编号唯一性程序 (38)临床标本的采集、运送和接收程序 (39)临床标本的保存程序 (41)临床标本的处理(核酸纯化)程序 (42)核酸扩增及产物分析检测的标准操作程序 (43)I消毒液的配制程序 (45)室内质量控制操作程序 (46)实验室室间质量评价的操作程序 (49)试剂的质检操作程序 (50)带滤塞吸头的质检操作程序 (52)人员流动程序 (53)抱怨处理程序 (54)应急处理程序 (55)生物污染废弃物处理标准操作程序 (57)乙型肝炎病毒DNA-荧光定量PCR测定 (59)沙眼衣原体DNA-荧光PCR测定 (61)结核菌DNA-荧光定量PCR测定 (63)三、仪器设备标准操作程序:GeneLight 9800实时跟踪荧光PCR仪操作程序 (66)Reactor4800加热仪标准操作程序 (67)FX 1200-Ⅱ- B2型生物安全柜操作程序 (68)SpanStar2418台式高速离心机标准操作程序 (70)加样器的操作程序 (71)医用低温冷冻冰箱标准操作程序 (73)移动紫外灯操作程序 (74)四、仪器设备维护保养程序GeneLight 9800实时跟踪荧光PCR仪维护保养程序 (75)Reactor4800器加热仪维护保养程序 (76)FX 1200-Ⅱ- B2型生物安全柜维护保养程序 (77)SpanStar2418台式高速离心机的维护保养程序 (78)医用低温冷冻冰箱保养程序 (79)XW-80A型旋涡混合器的保养程序 (80)移动紫外灯维护保养程序 (81)五、仪器设备校准程序:GeneLight 9800实时跟踪荧光PCR仪校准程序 (82)Reactor4800器加热仪校准程序 (83)FX 1200-Ⅱ- B2型生物安全柜校准操作程序 (84)加样器的校准程序 (85)SpanStar2418台式高速离心机的校准程序 (87)温湿度表的校准程序 (88)六、附相关图表附表001 送检标本接收记录表附表002 送检标本拒收记录表附表003 标本超低温保存及处置记录表附表004 室内质量控制登记表附表005 试剂验收记录表附表006 试剂质检记录表附表007 紫外灯强度监测表附表008 消耗品验收记录表附表009 消耗品质检记录表II附表010 冰箱温度记录表附表011 PCR日常工作核查表附表012 PCR检验结果记录本附表013 移动紫外灯消毒记录表附表014 实验室清洁消毒记录表附表015 实验室紫外灯消毒记录表附表016 垃圾处理记录表附表017 应急处理记录表附表018 PCR室间质量控制登记表附表019 PCR室内质量控制失控及纠正措施记录表附表020 PCR实验室人员培训计划及培训表附表021 仪器故障处理登记表附表022 抱怨记录表附表023 仪器设备维护记录表附表024 实验室工作人员一览表七、附相关复印件:厦门市安普利生物工程有限公司企业法人营业执照复印件;《药品生产企业许可证》、《药品GMP证书》复印件;乙肝病毒核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒新药证书复印件;沙眼衣原体核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒新药证书复印件;结核杆菌核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒新药证书复印件;乙肝病毒核酸扩增荧光检测试剂盒新药证书及生产批件复印件;沙眼衣原体核酸扩增荧光检测试剂盒新药证书及生产批件复印件;结核杆菌核酸扩增荧光检测试剂盒新药证书及生产批件复印件;检验结果报告样单复印件;《临床基因扩增实验室技术人员培训证书》复印件;III临床基因扩增检验实验室技术验收申请表一、基因扩增检验实验室基本情况(一)实验室所属法人单位名称:________________________________________________ 地址:__________________________________________________________________邮编:_____________________________________法定代表人:_____________________实验室负责人:_________________________联系人:_________________________email:_________________________________电话:___________________________传真:__________________________________(二)实验室总人数:__________________名(其中初级职称人数人员___名,占____;中级职称人数人员_____名,占______。
PCR实验室室间质量控制操作程序
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PCR实验室室间质量控制操作程序
1.目的:室间质评(EQA)是实验室质量控制体系中重要部分,是保证患者检验结果和其报告的准确性和可靠性,以及各实验室
间结果的可比性的重要手段。
2.适用范围:卫生部或省临检中心下发的PCR室间质控血清检测。
3.负责人:操作人:
4.程序:
4.1质控标本的接收和验收:收到质控血清后由相关人员登记、签字,
根据质控标本的有关说明对血清的数量、批号、包装进行验收并将质控标本按要求置-20℃保存于标本制备区。
4.2 质控标本的检测按常规临床标本对待,若需要,检测前先根据说明对质控物进行复溶。
4.3室间质评样本必须按实验室常规工作进行,由进行常规工作的人
员测试,工作人员必须使用实验室的常规检测方法和试剂,不得特殊对待。
检测结果须在截止日期前上报。
4.4实验室检测EQA样本的次数必须与常规检测病人样本的次数一样(即1次)。
4.5 EQA样本的检测在部或省临检中心规定的时间内进行,检测
结果的上报也必须在截止日期前,通过E-mail或挂号信寄出。
4.6室间质评的检测结果和反馈结果均记录于室间质评记录表,根据
反馈结果分析室间质评的状态,如有出控应查找原因,并采取相应的措施。
4.7 严禁与其它实验室交流室间质评的检测结果。
PCR实验室操作流程
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PCR实验室操作流程⼀、INFORMATIONFORTEST检测信息⼆、ANALYTICALPRINCTPLE检测原理聚台酶链式反应(PCR〕可对特定核苷酸⽚段进⾏指数级的扩增,⽽实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加⼊荧光基团,利⽤荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进⾏定量分析的⽅法。
在实时荧光定量PCR 反应中,引⼊了⼀种荧光化学物质,荧光物质有两种:荧光探针和荧光染料。
我们⽬前是使⽤TaqMan荧光探针的检测原理:PCR扩增时在加⼊⼀对引物的同时加⼊⼀个特异性的荧光探针,该探针为⼀寡核苷酸,两端分别标记⼀个报告荧光基团和⼀个淬灭荧光基团。
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’⼀3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从⽽荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增⼀条DNA链,就有⼀个荧光分⼦形成,荧光信号强度也等⽐例增加(图⼀)。
这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从⽽得到⼀条荧光扩增曲线图。
三、操作步骤(⼀)试剂配制1、进⼊试剂准备区,开启冰箱冷冻层取出HBV-DNA检测试剂盒。
查看外包装盒(包括⽣产批号、有效期),⽆误后拆开试剂盒,取出核酸提取液、反应液及Taq酶(核对核酸提取液、HBVPCR反应液及Taq酶管上批号与试剂外包装盒批号是否⼀致)(图1),不⼀致则不可使⽤,需更换新的试剂。
室温平衡20min,完全融化后2000rpm离⼼备⽤。
2、核酸提取液的分装(1)取离⼼管架置于超净⼯作台内(开机前⽤紫外线消毒30分钟),⽤右⼿拿起镊⼦逐个将离⼼管放⼊离⼼管架(注意应夹住离⼼管外壁,不能碰到管内壁),摆放顺序为横列从左往右摆,竖列为从上往下隔⾏排,离⼼管个数为n(n=样本数+对照品+质控品)。
完成后将镊⼦放回原位(图2)。
(2)⽤移液器准确吸取核酸提取液50ul分装⾄离⼼管中(左上⾓第⼀排开始,从左住右依次加⼊)。
PCR实验室标准操作规程
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PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响得、来自实验室内部或外部得不正当得商业、财务与其她方面得压力与影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性得信任得活动。
2、严格遵循实验室认可依据得国际标准,严格按标准得管理要素与技术要素得要求建立自我完善得管理体系与控制检测全过程各环节得机制,所有与检测有关得人员熟悉与之相关得质量文件,并在工作中执行这些政策与程序,真正把标准作为科学管理检测实验室得先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果与技术判断正确有效。
3、坚持以“客户为中心、质量第一”得服务宗旨,严格保护客户得机密与所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意得服务标准。
4、主动开展实验室得比对实验与其她有效地检测质量监控方案,并通过日常检测得监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性与有效性、修订页目录前言 ............................................................................................................................................ 错误!未定义书签。
质量方针ﻩ错误!未定义书签。
质量管理体系组织结构图ﻩ错误!未定义书签。
一、工作制度............................................................................................................................. 错误!未定义书签。
PCR实验室得设置及管理规程ﻩ错误!未定义书签。
pcr实验室操作流程

pcr实验室操作流程
1.样品制备:将样品按需要提取DNA或RNA,片段化处理,使其适合PCR实验。
2.PCR反应液配制:PCR反应液,含有特定的DNA聚合酶、DNA模板、水、dNTP(核苷酸)和引物,按照需要的比例,进行配制。
3.PCR反应:将PCR反应液加入PCR管中,放入PCR热循环仪中,用
不同温度对样品进行反应,循环多次,以获得期望的扩增结果。
4.模板产物检测:将反应产物加入凝胶电泳中,检测DNA模板产物,
可以检测出被扩增片段的种类和量。
5.结果分析:将凝胶电泳的结果与含有标准核酸的样品进行对比,表
明扩增的项目,对结果进行分析,以获得正确的结论。
PCR实验室标准操作规程

PCR实验室作业指导书文件编号:第1版编制:审核:批准:生效日期:2015年*月*日质管部PCR实验室公正性声明1、坚持公正立场认真对待每一例检测,不受任何对检测工作质量有不良影响的、来自实验室内部或外部的不正当的商业、财务和其他方面的压力和影响。
避免卷入任何可能会降低技术能力、公正性、判断或运作诚实性的信任的活动.2、严格遵循实验室认可依据的国际标准,严格按标准的管理要素和技术要素的要求建立自我完善的管理体系和控制检测全过程各环节的机制,所有与检测有关的人员熟悉与之相关的质量文件,并在工作中执行这些政策和程序,真正把标准作为科学管理检测实验室的先进管理模式,尽可能把差错降到最低限度,确保检测数据准确可靠,检测结果和技术判断正确有效.3、坚持以“客户为中心、质量第一”的服务宗旨,严格保护客户的机密和所有权,热忱提供优质服务,努力实现让上级放心、客户满意的服务标准。
4、主动开展实验室的比对实验和其他有效地检测质量监控方案,并通过日常检测的监督机制,持续改进、不断完善管理体系,从而保证其充分性和有效性.修订页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期1234567891011121314151617181920目录前言 (1)质量方针 (2)质量管理体系组织结构图 (3)一、工作制度 (4)PCR实验室的设置及管理规程 (4)PCR实验室内务管理规程 (5)PCR实验室人员的配置及管理规程 (6)PCR实验室管理规程 (8)PCR实验室生物安全防护措施 (11)PCR实验室废弃物的处理管理规程 (12)PCR实验室清洁消毒管理规程 (13)PCR实验室仪器设备的管理规程 (14)试剂管理规程 (15)清洁剂、消毒剂管理规程 (16)异常情况应急处理管理规程 (17)采购管理规程 (20)仓库管理制度 (22)临床标本的管理规程 (26)PCR实验室记录管理规程 (26)检验报告单发放、保密管理规程 (27)PCR实验室岗位责任制 (28)二、操作指导书 (29)PCR实验室的清洁消毒操作规程 (30)冰箱、冷藏柜的使用操作程序 (30)冰箱、冷藏柜的维护保养操作程序 (31)洁净工作台使用操作规程 (33)洁净工作台维护、清洁操作规程 (34)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪使用操作规程 (36)ABI 7500实时跟踪荧光PCR仪维护保养操作规程 (38)高速冷冻离心机使用标准操作规程 (39)高速冷冻离心机维护保养操作规程 (40)生物安全柜使用操作规程 (41)生物安全柜的维护保养操作规程 (42)加样器的使用操作规程 (43)加样器的维护保养操作规程 (44)干式恒温箱的使用操作规程 (45)干式恒温箱的维护保养操作规程 (46)紫外灯的使用操作规程 (47)紫外灯的维护保养操作规程 (47)温湿度计自行检定操作规程 (48)PCR实验室试剂的质检标准操作规程 (49)PCR实验室标本唯一标识编号编制操作规程 (50)临床标本的采集、运送、接收操作规程 (51)临床标本的保存操作规程 (53)清洁剂、消毒剂配制操作规程 (54)乙肝病毒核酸扩增荧光检测操作规程 (55)室内质量控制标准操作程序 (57)室间质评操作规程 (60)三、引用图表 (61)实验室负责人简历 (61)实验室工作人员一览表 (63)北京市医疗机构临床基因扩增检验实验室自查/审核表 (69)前言1.临床基因扩增实验室质量管理手册由以下部分组成:1。
PCR实验室室间质量控制操作程序

PCR实验室室间质量控制操作程序一、目的:二、范围:本程序适用于PCR实验室室间质量控制的操作。
三、定义:1.PCR实验室:进行PCR实验的专用实验室。
2.室间质量控制操作:对PCR实验室进行质量控制的一系列操作,包括设备校准、环境监测、试剂品质检查等。
四、程序:1.PCR实验室设备1.1定期校准PCR仪和热盖加热装置,确保温度准确无误。
1.2检查PCR仪、热盖加热装置的温度传感器,确保传感器工作良好。
1.3定期维护PCR仪的铜块组件和热盖加热装置的矽胶垫,确保其表面平整无磨损。
1.4检查PCR仪和热盖加热装置的控制面板、显示屏等部件,确保其正常工作。
2.PCR实验室环境2.1定期监测PCR实验室的温度和湿度,确保其符合实验要求。
2.2定期检查PCR实验室的通风设备,确保其正常工作。
2.3检查PCR实验室的灭菌设备,确保其有效杀灭细菌和病毒。
2.4清洁PCR实验室的工作台、操作台和实验设备,确保无灰尘和杂质。
3.试剂品质检查3.1定期检查PCR反应试剂盒的保存条件,确保其处于推荐温度范围内。
3.2检查PCR反应试剂盒的有效期,确保试剂的有效性。
3.4校正试剂的浓度,确保PCR反应的准确性。
五、操作流程:1.PCR实验室设备1.1按照设备厂商提供的操作手册进行校准操作。
1.2使用温度计等工具检测温度传感器的准确性。
1.3定期更换铜块组件和矽胶垫。
1.4定期进行控制面板和显示屏的检查。
2.PCR实验室环境2.1每天记录PCR实验室的温度和湿度。
2.2定期检查通风设备的运行状况。
2.3每天使用生物指示剂测试灭菌设备的杀菌效果。
2.4每天清洁工作台、操作台和实验设备。
3.试剂品质检查3.1每天检查PCR反应试剂盒的存储温度。
3.2每天检查PCR反应试剂盒的有效期。
3.4每天进行试剂浓度的校正。
六、记录:1.PCR实验室设备的校准记录。
2.PCR实验室环境的温湿度监测记录。
3.PCR实验室环境的通风设备检查记录。
PCR实验室消除污染操作步骤

PCR实验室消除污染操作步骤1.开始之前在进行任何实验之前,必须仔细清洗所有使用的器皿、仪器和试剂,并确保其没有任何污染和残留物。
此外,实验人员必须正确佩戴实验枣、手套和仪器保护罩,避免污染发生。
2.工作台清洁在实验室进行任何操作之前,首先要清洁工作台表面。
可以使用酒精和漂白剂溶液来擦拭工作台表面,确保没有任何污染物。
3.试剂和材料所有需要用到的试剂和材料都必须经过检查,确保其未受到任何污染。
如果发现有污染,必须及时更换。
4.DNA污染处理如果实验期间有可能出现DNA污染,能够有效去除DNA污染的方法包括使用紫外线照射、使用DNA降解酶处理、加入DNA脱附剂等等。
根据具体实验情况,选择合适的方法进行处理。
5.试剂复用防止污染为了避免试剂的交叉污染,必须标志清楚试剂的使用记录,避免使用同一管筒或器皿装入不同试剂。
6.使用无菌操作所有实验操作需要在无菌条件下进行,使用无菌工具和试剂,以避免细菌和其他污染物的引入。
7.反应管清洗在进行PCR反应之前,一定要确保反应管内部是干净的,并且没有任何污染。
8.防止交叉污染为了防止不同试剂和样品之间的交叉污染,应该使用单独的试剂和样品管,避免任何接触。
9.废弃物处理所有废弃物必须正确处理,特别是含有DNA和RNA的废弃物。
废弃物应放入相应的容器中,避免对环境造成污染。
10.彻底清洁实验室所有实验结束之后,实验室必须进行彻底清洁,包括擦拭工作台、清洗仪器和试剂瓶等。
确保实验室处于干净整洁的状态。
11.实验室空气净化实验室中可以安装空气过滤器和消毒器,以净化实验室的空气,降低污染的风险。
总之,PCR实验室的消除污染操作步骤包括准备实验前清洁、工作台清洁、DNA污染处理、试剂和材料清洁、无菌操作、反应管清洗、防止交叉污染、废弃物处理、实验室清洁和空气净化等。
只有严格按照这些操作步骤进行消除污染操作,才能保证PCR实验的准确性和可靠性。
临床基因扩增PCR实验室SOP标准操作程序文件(32项)

临床基因扩增实验室标准操作程序编写人:审核人:批准人:启用日期:年月日XXX医院前言为使基因扩增检验技术有效地应用于临床,更好地为疾病的预防、诊断和治疗服务,保证检验质量,严格按照《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》(卫医发[2002]10号文)附件《临床基因扩增检验实验室基本设置标准》要求,制定本实验室管理文件,本实验室任何实验均需遵循本管理文件中规定执行。
临床基因扩增检验技术指以临床诊断治疗为目的,以扩增检测DNA或RNA 为方法的检测技术,快速、可靠、准确、安全、收费合理方式下,以规范的操作对临床标本进行分析。
本室采用经国家药品监督管理局批准的试剂盒。
开展的检测项目:1、乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测2、人巨细胞病毒(HCMV)核酸定量检测标准操作程序文件1.目的:为了分子实验室的规范管理,特制订本程序。
2.范围:分子实验室。
3.职责:3.1临床PCR检验实验室工作人员共同遵守、相互督促。
3.2因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、样本准备区、PCR扩增区)的非本室人员需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行。
4.实验室设置:4.1实验室设计为:专用走廊、试剂准备区、样本制备区、PCR扩增区组成。
三个区域各有一个缓冲间。
(见设置图)4.2三个工作区各配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。
试剂准备区—白色、样品处理区—兰色、基因扩增区—红色。
4.3工作区的配置、功能、内务管理制度见各工作区文件。
4.4 实验室须严格遵守试剂区→样本区→扩增区的流向制度,严禁误入和逆进入各工作区。
4.5实验室流程:1)PCR室工作人员上班后,由过道走廊→试剂区→样本区→扩增区流向,打开排风、光源、温控装置。
2)标本接收区接收标本、验收登记后离心(不开盖),由内走廊入口将标本送入标本制备区缓冲间(标本制备区内门关闭)。
3)PCR工作人员按从试剂区→样本区→扩增区更衣开始流水操作。
PCR实验检测标准操作规范

PCR检测实验室操作规范一、PCR 实验室的设置及管理1.目的:建立实验室的合理设置和科学管理,防止实验污染,保证检测结果的可靠性。
2.适用范围:本程序适用于分子诊断室的设置、工作流程和日常管理等。
3.负责人:4.细则:4.1流感实验室为急传所的专业实验室,从事临床标本的基因扩增检测及相关科研工作等。
4.2 本实验室采用实时荧光定量(定性)PCR 技术作为病毒基因诊断的主要手段,实验室分为三个区:试剂准备区(第一区)、标本处理区(第二区)、扩增分析区(第三区)。
每一工作区配备专用的设备、仪器、辅助设施、耗材、清洁用品、办公用品、专用工作服,并有明显的区分标识。
标本的接收则在检验科标本接收处进行。
4.3 各工作区专用的仪器设备、办公用品、工作服、实验耗材和清洁用具等,不可混用。
4.4 各工作区配置、功能和内务管理见各相关SOP 文件。
4.5 严格遵守从“试剂准备区→标本处理区→扩增分析区”的单一流向制度,不得逆向进入前一工作区。
4.6 非本实验室工作人员,未经许可不得入内;进修、实习或其他科室人员因科研活动需要,进入实验区域(试剂准备区、标本处理区、扩增分析区)需首先熟悉本程序的各项规定并严格遵守执行,在本实验室人员监督指导下进行。
4.7 实验完毕后做好清洁消毒工作。
二、PCR 实验室工作制度1.目的:保持良好的工作环境,以确保检测结果的可靠性,防止交叉污染,防止差错、事故及纠纷的发生。
2.适用范围:所有本实验室人员。
3.负责人:4.细则:4.1 本实验室进行临床基因扩增检测及相关实验工作,不得进行其它实验操作。
4.2 各区的用品不得混用。
4.3 在各区的实验操作过程中,操作者必须戴手套和帽子,严格按照操作规程。
4.4 试剂准备区只能进行试剂的贮存及配制等相关操作(见相关SOP 文件)。
4.5 标本处理区只能进行临床标本的保存,核酸提取、保存及其加入至扩增反应管和测定RNA 时cDNA 的合成(见相关SOP 文件)。
PCR室内质量控制标准操作程序-检验科PCR室作业书

PCR室内质量控制标准操作程序1.目的:随时了解并控制实验室检测的精密度变化。
2.适用范围:核酸扩增荧光定量检测实验室。
3.负责人:操作人:4.程序:4.1血清质量控制品制备及操作4.1.1质控品制备:收集本室检测的临床样本,HBVDNA定量为106copies/ml的样本混匀,并分装于0.5ml的离心管中,每支110µl,编号后(如Qb0201-n),-20℃保存。
4.1.2操作:每次检测过程中将此分装的室内质控品与样本同时检测,记录此标本的检测结果;计算前10次检测结果的平均值作为本批质控品的靶值。
4.1.3如果使用商品化的质控品,按4.1.2要求执行。
4.2室内质控图的使用方法4.2.1描点a)图中X线为靶线,X±2s为警告线,X±3s为失控线。
对于同一批号的质控血清不论使用几个月,其空图均不变化。
只要将图纸上方“起止日期”项填入每个月的实际起止日期即可。
b)每天将该批号质控血清按有关规定程序复融随同病人的标本同时检测。
将日期、检测结果和操作者如实记录在图下方的相应位置,并按前面的方法画出图上的对应点,用直线将该点与前一天的点连接。
c)月底计算当月全部质控血清检测结果的X、s和CV,并进行图形分析和小结,将质量控制图存入质控资料档案。
4.2.2图形分析a)如果在X±3s线以外,则为失控,应立即报告有关负责人,迅速查找原因。
必要时复测标本,然后方可发出报告,并将失控情况、查找过程及处理结果等详细记录。
b)如果在X±2s线以外,或出现连续6点以上在一侧等规律变化,均应即使向有关负责人反映,并积极查找原因。
但当天的检验结果一般可以发出。
4.2.3通过观察图形的规律性变化进行误差分析,消除误差来源a)曲线漂移:提示有系统误差,准确度发生了一次性的向上或向下改变。
这种变化往往是由于一个新的情况引起的。
如更换不同批号试剂,启用新批号的质控血清、操作人员的变换等。
pcr操作流程组织

pcr操作流程组织PCR(聚合酶链式反应)是一种用于扩增DNA片段的技术,广泛应用于分子生物学、医学诊断、法医学等领域。
PCR操作流程的组织非常重要,只有严格按照步骤进行操作,才能确保PCR反应的准确性和可靠性。
首先,准备PCR反应体系。
通常,PCR反应体系包括DNA模板、引物、dNTPs(四种脱氧核苷酸)、聚合酶、缓冲液和水。
在准备反应体系时,需要根据实验设计确定每种成分的浓度和体积,并按照比例将它们混合在一起。
接着,进行PCR反应。
将混合好的反应体系加入PCR管中,然后放入PCR仪中进行扩增。
PCR反应通常包括三个步骤:变性、退火和延伸。
在变性步骤中,将反应体系加热至95°C,使DNA双链解旋成两条单链。
在退火步骤中,将温度降至50-60°C,引物与DNA模板结合。
在延伸步骤中,将温度升至72°C,聚合酶在引物的引导下合成新的DNA链。
最后,进行PCR产物的分析。
通常,可以通过琼脂糖凝胶电泳或实时荧光定量PCR等方法对PCR产物进行分析。
通过分析PCR产物的大小和数量,可以确定PCR反应是否成功,并进一步进行后续实验。
在进行PCR操作时,需要注意以下几点:首先,保持实验环境的清洁和无菌,避免外源DNA的污染。
其次,严格控制反应体系中每种成分的浓度和体积,以确保PCR反应的准确性和可靠性。
最后,在PCR反应过程中,要及时监测反应的进展,并根据需要进行调整。
总的来说,PCR操作流程的组织对于PCR反应的成功至关重要。
只有严格按照步骤进行操作,并注意实验细节,才能确保PCR反应的准确性和可靠性,为后续实验提供可靠的数据支持。
PCR技术的广泛应用,也使得PCR操作流程的组织变得越发重要。
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乙型肝炎病毒(HBV DNA PCR ABI7300)检侧标准操作程序一、INFORMATIONFORTEST检测信息
项目名称乙型肝炎病毒核酸
方法聚合酶链反应
方法依据卫生部《全国临床检验操作规程》第三版(2006)
第七篇第六章第一节
二、ANALYTICALPRINCTPLE检测原理
聚台酶链式反应(PCR〕可对特定核苷酸片段进行指数级的扩增,而实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
在实时荧光定量PCR反应中,引入了一种荧光化学物质,荧光物质有两种:荧光探针和荧光染料。
我们目前是使用TaqMan荧光探针的检测原理:PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。
探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR扩增时,Taq酶的5’一3’外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收到荧光信号,即每扩增一条DNA链,就有一个荧光分子形成,荧光信号强度也等比例增加(图一)。
这样就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线图。
三、操作步骤
(一)试剂配制
1、进入试剂准备区,开启冰箱冷冻层取出HBV-DNA检测试剂盒。
查看外包装盒(包括生产批号、有效期),无误后拆开试剂盒,取出核酸提取液、反应液及Taq酶(核对核酸提取液、HBVPCR反应液及Taq酶管上批号与试剂外包装盒批号是否一致)(图1),不一致则不可使用,需更换新的试剂。
室温平衡20min,完全融化后2000rpm离心备用。
2、核酸提取液的分装
(1)取0.5ml离心管架置于超净工作台内(开机前用紫外线消毒30分钟),用右手拿起镊子逐个将离心管放入离心管架(注意应夹住离心管外壁,不能碰到管内壁),摆放顺序为横列从左往右摆,竖列为从上往下隔行排,离心管个数为n(n=样本数+对照品+质控品)。
完成后将镊子放回原位(图2)。
(2)用移液器准确吸取核酸提取液50ul分装至0.5m1离心管中(左上角第一排开始,从左住右依次加入)。
因核酸提取液内含固体沉淀颗粒物,为使颗粒均匀分布,故每次取样时都要用移液器反复吸打3-4次(图3)。
分装完毕后将移液器量程归位。
(3)加完一架后用右手拿镊子将离心管拿起,左手大拇指和中指夹紧离心管下部,然后用食指将盖子盖上,顺序为:从右下角第一个开始,从右住左依次盖上(图4),离心管盖全部盖完后,通过传递窗转移至标本处理区。
3、HBV-DNA反应液的配制
每批需设置空白对照、阴性对照、临界阳性对照(同时检测低值阳性质控品,则无需再检测临界阳性对照〕、阳性质控品、阳性标准品。
所需每批需配制数n=样本数+对照品+阳性标准品+质控品,每个测试反应体系配制如下表:
试剂HBV PCR反应液Taq酶用量(ul)35.7 0.3
(1)每盒HBV-DNA试剂可检测32人份,根据每日需检测标本份数计算出每批所需HBV PCR反应液和Taq酶用量(例有111人份需要进行检测,则有3盒试剂可直接使用10ul移液器将Taq酶加入HBV PCR 反应液中,另有111-3*32=15人份试剂需将HBV PCR反应液和Taq酶使用移液器按反应体系比例吸取至1.5m1离心管中配制(图5)。
(2)取出离心后备用的HBV PCR反应液和Taq酶,按上述要求配制后用旋涡振荡器振荡混匀5-10sec,然后再用离心机2000rpm离心10sec备用(图6)。
(3)从操作台面上拿取HBV-DHA试剂配制盒(可选用空余的200u1枪头盒)至超净工作台内,打开配制盒并用记号笔在相应的孔位右旁按顺序编号(图7)。
编号规则为:样本扩增反应管对应的孔位按相应的样本流水号编写、阳性质控品反应管对应的孔位编“Q”(如有高值则标为H,低值为L),阴性对照品孔位编“-”,临界阳性对照对应的孔位编“±”,空白对照对应的孔位编“B”,1号标准品对应的孔位
编“S1”,2号标准品对应的孔位编“S2”,依此类推。
(4)编号完毕后,用右手拿起镊子夹起反应管(ABI7300使用的是八联一薄壁反应管,镊子应夹住反应管外壁,不可接触到内壁。
按(图8)所示方向依次将所有反应管(反应管数=n)隔列摆放到配置盒上。
(5)从离心机中取出已混好Taq酶的PCR反应液,用移液器(量程调至36ul),准确吸取反应液并按从上到下、从左至右的顺序依次加至反应管中,注意:吸头应深入到反应管底部,放液时应缓慢,切勿形
成气泡(图9)。
全部加样完毕后将配制盒通过传递窗转移至样本处理区。
(二)标本处理
1、标本、质控品及对照品的处理
(1)从冰箱冷冻室取出HBV DNA阳性质控品、阴性对照品,室温平衡20min待其完全融化。
(2)核对标本和原始申请单的条形码和检验项目,无误后依次粘贴上相应的流水号,如
ADICON
P 0001
2016-01-12
2、从传递窗中取出试剂准备区分装好核酸提取液的离心管架,移至生物安全柜内在管盖上用记号笔写上阿拉伯数字1、2、
3、......,阳性质控管标上“Q”(如有高值则标为H,低值为L),阴性对照管标上“-”,临界阳性对照管标上“±’,。
离心管盖上标记的是1,就表示该管要加入流水号为P0001的标本(图10)。
注意:每个离心管的编号方向都应朝向管口开启的方向。
(图11)
3、去除标本管盖:将标本从前处理取至标本准备区,按排列顺序依次去除样本管上的橡胶塞。
具体操作为:在生物安全柜中,左手拿起血清管并固定,右手拇指和中指涅紧橡胶塞,右手食指轻轻顶住橡胶塞顶部凹面,逆时针方向轻轻旋下橡胶塞后废弃于装有消毒液的垃极桶(图12)。
(注意:手指切勿接触到血清管口或碰触到血清,如手套上有血清则需及时跟换新的手套;待所有样本管盖都去除完毕后,也需更换新的手套。
)
4、样本及对照品的处理:
a、左手拿起样本,用量程为200u1调至50u1的移液器准确吸取样本(注:为保证样本的均一性和吸样准确,每次取样时需用移液器将样本吸打3-5次;吸样时移液器套筒不可接触到样本管内壁)(图13)
b.吸样完毕后,将样本管放至另一试管架中(切勿不可将样本放回原试管架位)(图14)。
c.再用左手按前面所述样本流水号和离心管编号的对应关系拿起相应的离心管,打开离心管盖(注:单手操作,食指和中指固定离心管,拇指稍向后上方发力打开管盖,手指切勿碰到离心管口和管盖内侧)(图15)。
d.管盖完全打开后,用左手食指、拇指和中指固定离心管,将吸头中的样本全部打入离心管底部,轻轻吸打混匀3-5次。
(图16)
e.加样完毕后弃枪头干盛有消毒液的垃极桶中(注:一个吸头只能用于一个样本的吸样,禁止使用一个吸头重复吸取不同样本)。
同时盖上离心管盖并放回离心管架(放回的位置需另起一行,切不可放回原位),继续处理下一个样本。
对照品和质控品同病人样本一样处理。
(图17)
f.待一架离心管全部加样完成后用振荡混匀器充分振荡混匀10-15秒。
g.左手将混匀后的离心管转移至恒温金属浴上(注:离心管需对称的放置在恒温金属浴相匹配的孔槽内),用计时器计时,100℃误差不超过±1℃〕干浴10min(误差不超过±30sec)。
(图18)
干浴时用离心管架置于加热的离心管上,防止离心管盖因加热爆开导致标本间的污染(图19)。
h.十分钟后〔前后不超过半分钟),右手用摄子夹起橡皮垫从恒温金属浴中拿出离心管(图20)。
I.将上述离心管按顺序对称放入低温高速离心机转子孔内,摆放离心管时要将离心管开口朝内,盖上转子盖及离心机盖后,12,OOOrpm离心10min(注:离心时需在转子孔内放置0.5m1离心管专用适配器(图21)。
j.待离心结束后,取出离心管并按编号顺序依次摆放在离心管架上(参照(图10)的排列方式)并4'C冰箱保存备用;若当夭不使用,则应保存在一20'C条件下,使用前置室温平衡20min,再以12,OOOrpm 离心10min。
5、待全部样本加样完毕更换手套,左手用镊子夹起反应管盖的一侧的延伸段(不要碰到管盖),然后用右手大拇指从左住右依次盖紧管盖(不要碰到其他未盖的反应管口)(如图22)。
6、将反应管连同试剂配置盒通过传递窗传至扩增分析区。
(三)扩增分析
1、打开扩增仪专用电脑,待电脑完全启动进入操作界面后再开启定量PCR仪主机电源。
a.按压托盘以打开它(图23)。
b.将反应管按顺序纵向放置放入反应板架(注:在反应管总数不足96个时,应对称的将反应管放置在反应板架上,两边放置要求尽可能对称,可以防止热盖下压时发生倾斜,也可以使各反应管受力和受热都比较均匀)(图24)。
c.按压托盘以关闭它。