中谱红色谱柱
色谱条件的选择
柱温：室温
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1. 胞苷
2.尿苷
3.鸟苷
4.胸苷
5.腺苷
分析条件：
色谱柱：ODS柱 （15cm× 6.0mm） （经甲烷基化处理的ODS柱）
流动相：100mM磷酸缓冲液和 200mM高氯酸钠溶液 梯度洗脱
流速：1.5ml/min
柱温：50℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.未知峰
2.胞嘧啶
3.尿嘧啶
4.鸟嘌呤
5.腺嘌呤
6.胞苷
7.尿苷
8.胸腺激素
9.腺苷
10.鸟苷
11.胸苷
核酸
色谱柱选择方法
糖的分离
★糖的种类很多，可分为单糖（木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳 糖）、二糖（蔗糖，麦芽糖）、低聚糖和多糖。
★单糖和二糖可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以 使用阴离子交换柱分离，缺点是分离时间较长。
色谱柱选择方法
肽和蛋白质
凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （二醇基水溶性凝胶柱，
进行洗脱；
分析条件：
核酸
色谱柱：Shim-pak WAX－1
（5cm× 4.0mm）
（叔氨基阴离子交换柱，
用于分析核苷酸）
流动相：20mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ）
480mM磷酸缓冲液（ pH＝6.8 ）
梯度洗脱
流速：1.0ml/min
色谱柱(气相)日常维护
偏离或漂移是由于下列原因产生的
温度 流速
确保在两次进样之间有足够的平衡时间 检查体系是否有漏
主要检查进样口部分 柱前
前次色谱过程中的残余的低挥发性流出物
6
基线漂移
漂移
正确地使用高纯度的载气 色谱柱老化 色谱柱的最高使用温度不能超过该柱所规定的最高温度极限 进样口温度与检测器温度要高于色谱柱的最高使用温度
载气不纯
使用高纯度的载气及高质量的气体净化器，并定期更换
载气中杂质与固定相发生反应
若使用分离/无分流进样口
进样口底部的密封垫可能会与样品反应
使用金制进口密封垫
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柱故障的诊断与排除
附加峰 (第二页)
即使进纯样，也会出现附加峰 做一次空运行--
如果这些峰还存在，不是由样品产生的，按照前面介绍的方法检查 进样口温度过热，可以导致样品组分的降解 每次将进样口降低20℃， 观察这些峰是否还出现
进样口温度太低
高沸点的化合物不能很快地气化 增加进样口温度
进样口温度太高
许多挥发性的组分在进样口降解 降低进样口温度
进样口被污染
进样口的污染物与样品发生反应 清洗进样口，更换衬管和进样垫
衬管有活性
使用脱活的衬管
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柱故障的诊断与排除
峰型不好
柱过载
将样品稀释10倍重新进样
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柱故障的诊断与排除
附加峰 (第一页)
有两种类型的附加峰 1. 即使不进样也会出现的峰 (鬼峰) ，并且在色谱分析过程中也会出现 在真实的峰之中 2. 由样品产生的附加峰
常用色谱柱简介
常用色谱柱简介气相色谱毛细柱（键合，聚二甲基硅氧烷）HP-1，DB-1，P-1，CP-SIL5CB，Ultra-1,007-1,RTx-1,AT-1类似固定相：SE-30，SP-2100，OV-1，OV-101,使用温度：-60℃-320℃应用范围：烷烃，芳烃，多环芳烃，醇，酚，酮，酯，醛，胺，卤代烃，吡啶，糖衍生物，氨基酸衍生物，维生素衍生物，镇痛药，农药，溶剂，胆固SPB-50型中等极性柱醇，香料，咖啡，食品添加剂等。
(键合, 50%二苯基,50%二甲基聚硅氧烷)对照品牌：HP-50，HP-17，DB-17，RTx-50，AT-50 SPB-5型弱极性柱类似固定相：OV-17, SP-2250,使用温度：30℃-310℃（键合，5%苯基，95%甲基聚硅氧烷）应用范围：烷烃，低沸点芳烃，多环芳烃，醇，甘对照品牌：HP-5，DB-5，BP-5，CP-SIL 8CB，油三酸酯，喹啉，卤素化合物，香料，农药，酯，Ultra-2, ,RTx-5,AT-5镇痛药，除草剂等。
类似固定相：SE-54，SE-52，OV-73 使用温度：-60℃-320℃PTE-5，PTE-5QTM型弱极性柱应用范围：烷基苯，多环芳烃，醇，酚，酮，脂肪(MS专用柱,键合,5%苯基,95%甲基聚硅氧烷)酸酯，苯二甲酸酯，硝基芳烃，芳胺，烷基胺，联对照品牌：HP-5 MS，DB-5 MS, DB-5.625，XTI-5，苯胺，卤代烃，多氯联苯，，糖类衍生物，维生素衍BPX625，半挥发污染物分析柱（US EPA方法525，生物，有机酸，镇痛药，农药，抗组胺药，溶剂，625.5，625）生物碱，防腐剂，香料等。
类似固定相：SE-54,SE-52 使用温度：-60℃-320℃应用范围：多氯联苯，胺，有机磷，有机氯农药，SUPELCOWAX 10型极性柱含氯除草剂，酚，苯胺，香料等。
(键合,聚乙二醇二万)对照品牌：HP-Wax，DB-Wax，BP-20，CP-Wax 52CB，SPB-1701型中等极性柱HP-INNO Wax,AT-Wax(键合, 14%氰丙基,86%二甲基聚硅氧烷)类似固定相：PEG-20M, CARBOWAX-20M,使用温对照品牌：HP-1701，DB-1701，RTx-1701，AT-1701，度：35℃-280℃BP-10，CPSil19CB应用范围：低沸点芳烃，醇，酮，酸，酯，醛，醚，类似固定相：OV-1701,SP-2250 使用温度：室温-280乙二醇，丙二醇，甘油，吡啶，胺，亚硝胺，卤代℃烃，胆汁酸衍生物，冰片，薄荷，精油，香料，酒，应用范围：醇，卤素化合物，有机氯农药，酸性药苯乙烯，茶，溶剂等。
色谱柱
第5章色谱柱5-1引言色谱柱是HPLC分离过程的核心。
一支稳定、高效的色谱柱对建立普适性强、重现性好的方法是必不可少的。
不同供应商的色谱柱，甚至来源相同、认为完全一样的色谱柱之间，可能也会存在很大差异，尤其是不同的色谱柱在塔板数、谱峰的对称性、保留值、峰间距以及使用寿命方面会有所不同，而这些不同对建立理想的HPLC方法会产生很大影响。
本章中，我们将提供一些有关色谱柱担体、固定相及柱填料的信息供读者参考；讨论色谱柱应用中的问题，以及适宜的解决方案，以确保方法普适性强、重现性好，同时也讨论了在常规HPLC分析中，为获得最佳结果，一支“好”色谱柱的重要意义。
选择HPLC柱时，大多数使用者都认为柱间的重现性是方法建立中极为重要的因素。
色谱工作者不愿在校准了一具体系统后，又不得不为一新色谱柱再重新建立HPLC方法。
一些生产厂能在一定程度上保证柱性能指标的重现性，如色谱柱塔板数（N），特定样品与条件下的选择性，反压（压力降），特定测试溶质的保留值（k）。
因此，对许多使用者来说，生产优质产品的厂家的信誉很重要。
价格对一些用户是重要的因素，但上述讨论的其它因素在建立一个普适性强、令人满意的方法时往往更加重要。
色谱柱价格在建立和应用普适性强、可靠的HPLC方法的整个费用中，仅占一小部分（见5-3节）。
灌注色谱填料包含孔径达4000~8000A0（艾）的贯穿孔，而且在这些贯穿孔网络中还有较小的内联孔（如300~1000A0（艾））。
在高流速时，溶质可通过对流和扩散的共同作用，进入（并离开）该孔结构。
其效果减少了峰展宽，所以大的多孔微粒在柱效方面与小微粒相当，但压力降却小得多。
目前这种类型填料的使用还较少，因此，其实用性还有待于进一步探讨。
不过，这种填料似乎非常适于大分子如蛋白质的制备分离，用于小分子的日常分析分离则较少。
颗粒大小（粒度）在HPLC中极为重要。
约5μm的微粒直径很好地兼顾了分析柱的柱效、反压和寿命。
更小的多孔微粒（如3μm）对快速分离很有用。
HPLC法测定益气健脾口服液中枸橼酸的含量
HPLC法测定益气健脾口服液中枸橼酸的含量摘要：目的：建立益气健脾口服液中枸橼酸含量测定的方法。
方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为中谱红ODS-H(250×4.6 mm,5 μm)，流动相为0.1%磷酸二氢铵溶液(用磷酸调节pH至2.8)，流速为0.7 ml/min，采用等度洗脱，柱温为28℃，检测波长为210 nm，进样量为10 μl，进行含量测定。
结果：枸橼酸的理论塔板数大于7000，峰面积的RSD为1.9，小于2.0%；枸橼酸浓度在25.31~126.5 μg/mL(R2=0.9992)范围内线性关系良好：重复性，色谱条件耐用性的RSD%均小于2.0；平均加样回收率为100.7%，RSD%为1.6；精密度的RSD%为0.4，表明精密度良好。
结论：该方法高效简便，准确性、重复性好，耐用性强，可为该款益气健脾口服液对枸橼酸质量控制的提供科学依据，更科学评价和有效控制益气健脾口服液中枸橼酸含量。
关键词：益气健脾口服液；含量测定；枸橼酸；高效液相色谱法益气健脾口服为中药成方制剂，其质量标准收载于国家食品药品监督管理总局国家药品标准WS-5257(B-0257)-2014Z及国家药品监督管理局药品补充申请批件2019B02293。
处方是由太子参，山药，桑叶，莲子，绿豆，乌梅，白扁豆，黑豆，南山楂，稻芽，鸡内金以上十一味中药经过煎煮提取加工而成的中成药口服液体制剂，辅料为蔗糖。
药方中的药材均为药食同源，药性温和，安全性高，可长期服用，组方还兼具着健脾，益气，消食三大功效，遵循君臣佐使。
山药可健脾益胃，免疫调节[1]，药力为方中之首，为君药；太子参增强益气健脾、生津润肺[2]之功，故太子参为臣药；佐以绿豆、南山楂合用，既能改善脾虚湿盛导致的口淡不渴，食少乏力，也可清热解毒，调和五脏，避免诸邪反复蕴结于内[3]，协助山药、太子参治疗兼症；使以桑叶疏散风热，清肺润燥，乌梅消食去滞，涩肠止泻，运脾化湿[4]抗氧化，降血脂[5]，莲子，白扁豆，黑豆清心醒脾，健脾利湿，稻芽消食和中，健脾开胃，鸡内金理气利湿，健胃消食[3]，为药方引经调和。
柱选择
推荐使用的色谱柱数量 :
PLgel 20µm MIXED-A 线 性 操 作 范 围: 筛 柱 板 孔 径: 效: 2000 -20,000,000 10µm > 17,000 plates/m 4
推荐使用的色谱柱数量:
凝胶色谱在色谱柱上发生的剪切降解
用示差和PD两角度激光光散射检测器联用，在四氢呋喃1ml/min条件 下分析异氰酸苯酯化纤维素，从不同色谱柱中洗出的聚合物，其重均 分子量 发生了变化。
PlusPore –凝胶色谱柱的新家族 凝胶色谱柱的新家族
基于苯乙烯 / 二乙烯基苯的一种新型凝胶色谱填料 产生于一种新的聚合工艺 Four products in the PlusPore range Not blended materials – 色谱柱内只装填了一种填料 与传统凝胶色谱柱填料相比有更高的孔体积
** THF作流动相 1ml/min流速窄分布聚苯乙烯标样 Mp=9200作测试样测得
PLgel 色谱柱选择方法
混合床硅胶技术的优势
色谱柱方案选择极为简单 Optimized columns 对于各种应用范围都是最优化的色谱柱 简单的备件库存 No artifacts due to column mismatch 简单的增加同类型色谱柱就可以获得更高的分辨率 在使用在线激光光散射检测器或黏度检测器时分布两端外推 更容易
GPC所使用的窄孔柱 所使用的窄孔柱
色谱柱封装规格： PLgel MiniMIX 250x4.6mm columns 典型流速 0.3ml/min 必须减小系统的扩散， 避免谱带展宽发生 (如: 用小体积定量环) 适当减小样品浓度以避免粘滞效应 (在小分子情况下适当浓一些是可以接 受的)
窄孔柱的分辨率
气相色谱柱选择的技巧 色谱柱操作规程
气相色谱柱选择的技巧色谱柱操作规程气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和气相色谱柱在石油、化工、生物化学、医药卫生、食品工业、环保等方面应用很广。
它除用于定量和定性分析外，还能测定样品在固定相上的调配系数、活度系数、分子量和比表面积等物理化学常数。
一种对混合气体中各构成分进行分析检测的仪器。
气相色谱柱选择的技巧：一般，初次使用气相色谱仪的伙伴对色谱柱不知怎样合理配置色谱柱，总希望柱子越多越好，盲目购置很多柱子或固定液、担体等，结果有很多闲置造成挥霍。
现在向大家推举一些值得考虑的阅历。
一般准备几个柱子就基本可以解决各类气相色谱分析工作的要求，可优先选择固定液分别为SE—30（或者OV—101）、OV—17、PEG—20M、DEGS、FFAP，的柱子各一个。
对于填充柱，担体可选白色担体、红色担体（包括未酸洗、酸洗、硅烷化）、GDX系列（或者Porapak系列），三种，基本可以解决工作中绝大部分项目。
对柱子长短的选择：由于辨别率与柱长的平方根成正比。
柱子长，则提高辨别率。
一般来说：15m的短柱用于快速分别较简单的样品，也适于快速成分析；30m的色谱柱是常用的柱长，大多数分析在此长度的柱子上成；50m、60m或更长的色谱柱用于分别比较多而杂的样品。
对于口径的选择：柱径直接影响柱子的效率、保留特性和样品容量。
小口径柱比大口径柱有更高柱效，但柱容量更小。
0.25mm：具有较高的柱效，柱容量较低。
分别多而杂样品较好。
0.32mm：柱效稍低于0.25mm的色谱柱，但柱容量约高60%。
0.53mm：具有仿佛于填充柱的柱容量，可用于分流进样，也可用于不分流进样，当柱容量是紧要考虑因素时（如痕量分析），选择大口径毛细管柱较为合适。
中科国环环境讨论中心专家认为，对于一般用户，可选30米或50米长的毛细管，口径选0.32mm较为便利。
色谱柱与色谱分析
鸭绿江文献检索论坛's Archiver鸭绿江论坛› 药物化学› 转贴：分享：关于TLC和柱层析之我的体会转贴：分享：关于TLC和柱层析之我的体会关于TLC和柱层析之我的体会柱层析和TLC是有机化学工作者必须下苦功夫的两项实验技术。
这两项技术掌握与否，对于提高实验的效率至关重要。
常见的例子是：在柱层析时，由于层析柱中的硅胶填料装得不均匀（没有填严实），使得柱子在淋洗过程中就因为出现太多气泡变花，导致分离效果不好。
更常见的例子是：层析柱虽然装得不错，但是由于淋洗剂选择不恰当，结果导致几十毫克产品，用了几百毫升淋洗剂都还没有完全分离。
分离同样的东西，熟手可能只需要半个小时，而一个层析技术不过关的人可能半天都不能得到纯品。
由此可见，这两项技术掌握与否，对于提高工作效率，减轻工作量，减少有机溶剂的使用，从而对身心健康和环境保护都有明显的作用。
柱层析关键在于柱子是否装好和淋洗剂是否选择恰当。
而淋洗剂的选择则是通过TLC确定。
这里要指出的一点是：TLC的作用除了跟踪反应进程，检测试剂和原料纯度外，一个重要的用途就是为柱层析选择适当的淋洗剂。
首先谈柱层析：装柱子（添硅胶）时，有两种方法：即湿法装柱和干法装柱，二者各有优劣。
不论干法还是湿法，硅胶（固定相）的上表面一定要平整，并且硅胶（固定相）的高度一般为15cm左右，太短了可能分离效果不好，太长了也会由于扩散或拖尾导致分离效果不好。
湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后，再填入柱子中，然后再加压用淋洗剂“走柱子”，本法最大的优点是一般柱子装的比较结实，没有气泡。
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶，然后再轻轻敲打柱子两侧，至硅胶界面不再下降为止，然后再填入硅胶至合适高度，最后再用油泵直接抽，这样就会使得柱子装的很结实。
接着是用淋洗剂“走柱子”，一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。
通常上面加压，下面再用油泵抽，这样可以加快速度。
干法装柱较方便，但最大的缺陷在于“走柱子”时，由于溶剂和硅胶之间的吸附放热（可以用手摸柱子明显感觉到），容易产生气泡，这一点在使用低沸点的淋洗剂时如乙醚，二氯甲烷更为明显。
保健品中褪黑素含量测定的HPLC-DAD法和HPLC-FLD法的比较
保健品中褪黑素含量测定的HPLC-DAD法和HPLC-FLD法的比较郑秋萍（福建省产品质量检验研究院，福建福州 350002）摘 要：目的：比较高效液相色谱-二极管阵列检测器（High Performance Liquid Chromatography-Diode Array Detection，HPLC-DAD）法和高效液相色谱-荧光检测器（High Performance Liquid Chromatography Fluorescence Detection，HPLC-FLD）法测定保健品中褪黑素含量的优劣。
方法：样品经甲醇提取稀释后，采用高效液相色谱仪进行测定，色谱柱为中谱红C18（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为甲醇和0.05%三氟乙酸，DAD 检测波长为222 nm；FLD激发光波长为286 nm，发射光波长为352 nm。
结果：HPLC-DAD法在0.060～6.000 μg·mL-1线性关系良好，相关系数大于0.999，检出限为2.7 mg·kg-1，定量限为9.0 mg·kg-1，方法回收率为94.9%～108.2%，RSD小于5%；HPLC-FLD法在0.001 0～0.050 0 μg·mL-1线性关系良好，相关系数大于0.999，检出限为0.006 5 mg·kg-1，定量限为0.022 mg·kg-1，方法回收率为81.4%～96.8%，RSD小于5%。
结论：两种方法均可以测定保健品中褪黑素含量，HPLC-FLD法灵敏度优于HPLC-DAD法，可作为褪黑素含量测定的首选方法，HPLC-DAD法准确度优于HPLC-FLD法，可作为褪黑素含量测定的备选方法。
关键词：褪黑素；高效液相色谱-二极管阵列检测器法；高效液相色谱-荧光检测器法Comparison the Detection Methods of HPLC-DAD andHPLC-FLD on Melatonin in Health Care ProductsZHENG Qiuping(Fujian Inspection and Research Institute for Product Quality, Fuzhou 350002, China) Abstract: Objective: To compare the advantages and disadvantages of high performance liquid chromatography diode array detection (HPLC-DAD) and high performance liquid chromatography fluorescence detection (HPLC-FLD) methods for the determination of melatonin content in health products. Method: After diluting the sample with methanol extraction, it was determined using a high-performance liquid chromatograph. The chromatographic column was medium spectrum red C18 (150 mm×4.6 mm, 5 μm), the mobile phase was methanol and 0.05% trifluoroacetic acid, and the detection wavelength of DAD was 222 nm; the excitation wavelength of FLD is 286 nm, and the emission wavelength is 352 nm. Result: The HPLC-DAD method showed a good linear relationship between 0.060 μg·mL-1 and 6.000 μg·mL-1, with a correlation coefficient greater than 0.999, a detection limit of 2.7 mg·kg-1, and a quantitative limit of 9.0 mg·kg-1. The recovery rate of the method was 94.9% to 108.2%, and the RSD was less than 5%; the HPLC-FLD method has a good linear relationship between 0.001 0 μg·mL-1 and 0.050 0 μg·mL-1, with a correlation coefficient greater than 0.999, a detection limit of 0.006 5 mg·kg-1, and a quantitative limit of 0.022 mg·kg-1. The recovery rate of the method is 81.4% to 96.8%, and the RSD is less than 5%. Conclusion: Both methods can determine the content of melatonin in health products. The sensitivity of HPLC-FLD method is better than that of HPLC-DAD method, and it can be used as the preferred method for melatonin content determination. The accuracy of HPLC-DAD method is better than that of HPLC-FLD method, and it can be used as an alternative method for melatonin content determination.Keywords: melatonin; high-performance liquid chromatography-diode array detection; high performance liquid chromatography-fluorescence detection作者简介：郑秋萍（1995—），女，福建莆田人，硕士，助理工程师。
色谱柱应用
当分离Ar中痕量O2时，用Porapak Q柱，此时 O2在Ar之前流出；
当两者含量差不多时，两种柱子均可。
*出峰顺序：
分子筛：Ar O2 N2，CH4先于CO 多孔聚合物柱： N2 O2 Ar 活性炭：CO先于CH4
固定液的粘度和凝固点要低，以便在载体表 面能均匀分布。
各组分必须在固定液中有一定的溶解度，否 则试样1）化学分类法
A．烃类：烷烃，芳烃 B．硅氧烷类 C．醇类（氢键形固定液） D．酯类：中强极性固定液
（2）极性分类法 A．相对极性法
1 用已知物对照进行定性分析 2 用经验规律和文献值进行定性分析
（二）定量分析
气相色谱的检测信号峰高或峰面积，均可 用于定量和半定量分析。在严格控制操作条件 下，气相色谱定量分析的相对标准偏差可达 1% 5%。
七、气体分析时色谱柱的选择
1、一般原则
①考虑分离组分性质及含量、设备状况、能否进 行低温程序升温，是否可以进行阀切换等因素。
④反吹阀或住切换的时间不当，使组分被反吹、切 换时损失：根据色谱图的分离情况重排反吹、切换 时间。
⑤衰减电位器衰减过头或运行过程中衰减量发生变 化：检查或重新调整电位器
⑥柱温变低：检查柱箱温度并重新设定 ⑦进样量不重复：改进进样技术 ⑧燃气不足：换钢瓶或重新设定燃气流速
3、拖尾峰 ①柱温太低：适当提高柱温 ②色谱柱选用不当：更换色谱柱 ③系统死体积太大：柱后加尾吹减小死体积 ④金属填充柱吸附：改用玻璃填充柱 ⑤色谱柱过载：减少进样量或稀释样品再进样
注意事项
分析上述气体时，多用TCD检测器，需考虑载气 的选择问题。
色谱柱的选择技巧与原则
色谱柱选择
参照标准
各种担体，名目繁多。
在常用硅藻土担体中：
红色担体（如6201、201），可用于非极性或弱极性物质的分离。
白色担体（如101）可用于极性物质或碱性物质。
釉化红色担体（如301）可用于中等极性物质。
硅烷化白色担体可用于强极性氢键型物质如废水测定。
分离酸性物质，如酚类，要用酸洗处理的担体。
分离碱性物质，如乙醇胺，要用碱洗处理的担体。
有些特殊的情况下要用特殊的担体，如氟担体分离异氰酸酯类。
但是在普通的常量分析中，对担体可以不必过份讲究，甚至如耐火砖粉粒，玻璃珠砂和海沙也可以使用。
色谱柱
条件同上 色谱柱：30m×0.53mm×3.0m DB-624 毛细管柱 中等极性
乙酸丙酯 乙酸丁酯 乙酸戊酯
丙烯酸甲酯
工作场所空气有毒物质测定饱和脂 肪族酯类合物
工作场所空气有毒物质测定饱和脂 肪族酯类化合物
工作场所空气有毒物质测定饱和脂 肪族酯类化合物
工作场所空气有毒物质测定不饱和 脂肪族酯类化合物
苯系物 非甲烷总烃 正己烷
溶剂汽油 环己烷 苯
甲苯
水中苯系物的测定 气相色谱法
固定污染源排气中非甲烷总烃的测定 气相色谱法 工作场所空气有毒物质测定烷烃类 化合物
GB/T11890-1989
HJ/T38-1999 GBZ/T160.38-2007
色谱柱 1：3m*2.5mm 螺旋形不锈 钢柱 固定相：3．5％有机皂土+2．5％ DNP 固定液涂于 60～80 目 101 白色担体 色谱柱 2: 30m*0.25mm*0.25um Elite-5 毛细管柱 弱极性 色谱柱：1m*3mm 不锈钢柱 装硅烷化玻璃微珠或不装任何填 料（空柱） 色谱柱 1：3m*4mm 不锈钢或玻 璃柱
条件同上 GBZ/T160.48-2007
条件同上 GBZ/T160.48-2007
GBZ/T160.51-2007 色谱柱：35m*0.22mm*5um FFAP(聚乙二醇) 强极性
甲醛 丙酮 丁酮 环己酮
乙酸甲酯
工作场所空气有毒物质测定脂肪族 醛类化合物
工作场所空气有毒物质测定脂肪族 酮类化合物
GBZ/T 160.40 – 2004
GBZ/T 160.41-2004
GBZ/T160.42-2007
色谱柱分类与选择-内部培训讲义资料
当流动相pH值小 于3时, 硅醇基呈 中性(未解离)
+ HN (CH 3 )
2
电性(大部解离)
Base Base 对碱性化合 物的保留及 严重拖尾
两实验使用相同的传统C8硅胶柱
既然pH< 3时硅醇基离解受抑制，为何不在所有 情况下采用酸性条件进行分离?
低pH可导致分离选择性的完全丧失!
0.04
AU
C18 硅胶
湿润的孔
未湿润的孔
注意：保留时间与填料表面积与配体有关。然而，如果硅胶表面未湿润， 那么有效的色谱表面积会减少 95%，因此，减少被分析物的保留 时间即等于“疏水塌陷”，记住：几乎所有的表面积都在孔内！
疏水塌陷
流动相：0.1% 醋酸水溶液
— stationary phase: base-deactivated octadecylsilyl silica gel for chromatography R (3 μm). — stationary phase: octylsilyl base-deactivated silica gel for chromatography R (4 μm) with a pore size of 6 nm,
极性封尾，增加极性保留
由于空间位阻的存在，键合反应最多 只能覆盖50%的硅羟基，超过一半硅 羟基是活性硅羟基，与碱性基团会发 生离子交换作用，增加了保留，导致 峰形拖尾，用短链氯硅烷（如三甲基 氯硅烷）键合活性的硅羟基，可以减 小这种影响，这种操作被称为封尾， 封端，封口。
Hypersil ODS即没有封尾 Hypersil ODS-2有封尾
C18键合并端基封尾后 还能看见什么？硅羟基!—即使进行高密度 键合，硅胶表面仍将残留约50%硅羟基 (SiOH)!
色谱柱及柱温控制
色谱柱及柱温控制色谱柱是气相色谱法的核心部分，许多组成复杂的样品，其分别过程都是在色谱柱内举行的。
色谱柱分为两类，填充柱和毛细管柱(开管柱)，后者又分为空心毛细管柱和填充毛细管柱两种。
目前在工业分析中应用最广的是填充柱，但毛细管柱的应用也日益增多。
色谱柱的分类及特征见表8-10。
表8-10色谱柱的分类及特征通常把色谱柱内填充的固体物质叫作固定相，其作用是把样品中的混合组分分别成单一组分。
按照色谱柱内填充固定相的不同，可把气相色谱法分为两类—气固色谱法和蔼液色谱法。
若色谱柱内填充的是具有活性的固体吸附剂，如分子筛、氧化铝、活性炭等，则举行的分析就叫作气固色谱法。
若色谱柱内填充的是一种惰性固体[通常叫作载体，其无吸附性、催化性，但有较大的比表面积(1m2/g)和一定的机械强度，如红色的6201载体等]，其表面涂上一层高沸点有机化合物的液膜(通常叫固定液，如、β、β'-氧二丙腈、聚乙二醇-400等)，则举行的分析叫作气液色谱法。
色谱柱的分别效能主要是由柱中填充的固定相所打算的，但柱温也是影响分别效果的因素之一。
1．色谱柱的材料、外形及衔接办法填充柱可用玻璃管、不锈钢管、铜管、管、铝管等制成。
最常用的是不锈钢管、玻璃管、聚四氟乙烯管。
色谱柱的外形，常用的是U形和螺旋形两种。
柱的内径普通为2～6mm，常用的是4mm。
柱长普通为0.5～10m。
可装颗粒度为40～60目(对长柱管)或60～80目(对短柱管)的固定相。
分别组成复杂的样品，常需用法长柱管，固然用法短柱管，其分析速度就比较快。
毛细管柱内径惟独0.2～0.5mm，长度达几十米，甚至达百米以上(多用玻璃或石英创造)，因而能获得高效率，可解决复杂的、填充柱难以解决的分析问题。
色谱柱是可以装卸和更换的，为了保证柱和蔼路系统衔接时的气密性，柱的衔接方式很重要，常用的有两种办法。
一种是用于不锈钢柱管，把柱管口用特地的扩口器扩大成喇叭口形，协作紫铜垫圈与专用的螺母衔接，优点是耐高温，缺点是不易密封。
色谱峰,色谱柱及参数
死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
死体积(dead volume，V0)--由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其它3部分只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t0（F为流速）梯度方法的建立：)1(N a 1-a 41Rs --+=kk ）（ )15.1/(∆Φ=-m G V F t k Rs ：分离度，表示两峰分离程度的物理量。
k ：容量因子，表示某溶质在固定相和流动相中物质的量的比，在等度洗脱中。
一种物质的k 值是恒定不变的。
上面两试针对的是梯度洗脱，k 表示的平均容量因子。
a ：分离因子，两个溶质的容量因子的比。
通常k 大的作为分子。
表示两物质分离能力的大小。
N ：理论塔板数，表示柱子的分离能力，也就是柱效。
G t ：梯度时间；F ：流速；m V ：死体积；∆Φ：梯度变化范围。
常见问题和维护：整个液相系统最值得关注的常数：压力除体系受到污染之外，几乎所有柱前的问题都能在压力变化上表现出来。
压力来源：泵上的压力传感器最常见的问题：压力小（几乎为零）：说明没有流动相流过柱子。
可能原因：柱前漏夜流速设为0了流动相干了吸滤头没有放流动相液面之下流路中有大段气泡处理方法：漏液：从泵的出口到柱子的前端接口（柱后漏液几乎不会影响压力值）顺次检查。
泵上有自己的漏液传感器。
检测到漏液。
会停止工作并蜂鸣，变红。
同时显示错误信息：ERROR：LEAK DETECTED。
发现漏液点，先停泵，重新接好。
将漏液擦干。
有的漏液不明显，这时压力的也不会太小，检查时要注意，可用手仔细摸各个接口，感觉是否湿冷。
流路中有大段气泡：通过大流速（如5ml/min）冲洗可以去除泵体内气泡。
布鲁克气相色谱柱选择
23 1
性，但 对于极性化合 物 也有良 好的 保留
10
时间和分离度，并且可以接受极性溶剂。
分析极性组分需要高度惰性的色谱柱。 布 鲁克 的 惰 性 柱 适 合 分析 各种 极性 组 分，例 如 甘 油 醇 类，磺 酸 盐 类 如甲 磺 酸 盐、苯磺酸盐和甲苯磺酸盐等，这些组分 极易与固定相反应。采用布鲁克的惰性 柱可以得 到良 好 的 对 称 峰，从而保证 准 确的定量结果。
6. 苯磺4. d酸i-iso甲pro酯pyl(sMulfaBteS(D)PS)
5. dibutyl sulfate (DBS)
7. 苯磺6. M酸et乙hyl酯benz(eEnBesSulf)onate(MBS)
5
8. 甲基7. E苯thy磺l be酸nze甲nes酯ulfo(nMateT(ESBS))
■ 不 锈 钢 微 填 充 柱 和 填 充 柱：柱 容 量 大，适合大量样品的组成分析。
石化产品和碳氢化合物的分析
布 鲁克为石油 化学工 业领 域的 分析工 低流失，耐高温 作者提供最全面的气相色谱解决方案。
C40
布 鲁克气相 色谱 的 配 置、生 产、测 试 、 运输、硬件安装、配 套色谱柱、软件和 其它耗 材 都 遵循业界最 通 用的 标 准（如 ASTM、UOP、ISO、GPA、EN），这样不
10. 反-2-丁烯
11. 1-丁烯
12. 异丁烯
13. 顺-2-丁烯
14. 异戊烷
16
15. 正戊烷
16. 1,3-丁二烯
17. 反-2-戊烯
18. 2-甲基-2-丁烯
19. 1-戊烯
20. 顺-2-戊烯
21. 己烷类
17 19
18 20
高效液相色谱法同时测定丹参药材和饮片中苋菜红、胭脂红、金胺O含量
高效液相色谱法同时测定丹参药材和饮片中苋菜红、胭脂红、金胺O含量张华;朱泽兵;马英杰;阳文武【期刊名称】《中国药业》【年(卷),期】2022(31)19【摘要】目的建立同时测定丹参药材和饮片中苋菜红、胭脂红、金胺O含量的高效液相色谱法。
方法色谱柱为中谱红RD-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-0.05 mol/L乙酸铵溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为512 nm(苋菜红和胭脂红)、432 nm(金胺O),进样量为10μL。
结果苋菜红、胭脂红、金胺O质量浓度均在1~50μg/mL范围内与峰面积线性关系良好(r≥0.9993,n=5);检测限分别为0.10,0.10,0.03 mg/kg,定量限分别为0.33,0.33,0.10 mg/kg;精密度和稳定性试验的RSD均小于2.0%;平均加样回收率分别为95.93%,94.70%,96.33%,RSD分别为1.03%,1.21%,1.17%(n=6)。
2批丹参药材中检出金胺O,含量分别为0.16 mg/kg和0.21 mg/kg;21批丹参饮片中均未检出上述3种色素,或检出量低于定量限。
结论该方法操作简便、灵敏度好、准确度高,可用于丹参药材和饮片中苋菜红、胭脂红、金胺O的含量测定。
【总页数】4页(P71-74)【作者】张华;朱泽兵;马英杰;阳文武【作者单位】重庆市万州食品药品检验所·三峡库区道地药材开发利用重庆市重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R932;R284.1;R286.0【相关文献】1.高效液相色谱法测定丹参饮片中丹参酮ⅡA的含量2.高效液相色谱法测定复方丹参片中有效成分丹参酮ⅡA的含量3.用高效液相色谱法测定丹参药材中丹参酮ⅡA 含量的最优测定条件分析4.高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA含量的方法5.高效液相色谱法测定复方金蒲片中丹参酮ⅡA的含量因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
色谱柱类型
填料类型：SiO2,C4,C8,C18,NH2,CN,C6H6,SCX,OH色谱柱类型：通用分析柱，快速分析柱，凝胶色谱分析柱，蛋白质分析柱，氨基酸分析柱，保护柱，半制备/制备柱等。
填料品牌：CenturySIL, Spherigel, Kromasil, Nucleosil, Lichrospher,Spherisorb,Hypersil 等系列。
CenturySIL填料简介CenturySIL填料是我们公司从国外引进的最新色谱填料，此填料采用的是超纯硅胶键合而成，其中包括：Century Si-60、C18、C18 BDS、C18 EPS、C18 AQ、C8、C8 BDS、 NH2、CN、C30和Chiral AX等。
1.CenturySIL C18是应用范围最广的一种反相色谱填料，具有新一代填料的所有特征；采用超纯硅胶及先进的键合技术，全封尾。
有各种粒度和孔径的填料供选择。
2.CenturySIL C18 BDS是碱性去活C18填料，分离碱性化合物峰形好，使用寿命长，能在PH=1.0~10.0的范围内使用。
3.CenturySIL C18EPS是极性嵌合选择性色谱固定相（Embedded-PolarityStationary），这种填料既可获得BDS的高柱效和对称峰，同时又具有普通C18填料对极性溶质的高选择性。
4.CenturySIL C18AQ是利用特殊的极性基团封尾技术生产的新一代色谱填料，特别适用于当流动相为纯水或高比例水含量条件下的极性化合物的分离和分析。
它的亲水性封尾使得C18在100%的水中也能保持伸展，溶剂化好，且流动相能快速获得平衡，使极性化合物有更长的保留时间，获得更高的柱效和对称的峰形。
5.CenturySIL C8 BDS采用与CenturySIL C18 BDS同样的技术合成的色谱固定相，亲油性比C18小。
6.CenturySIL NH2是通过丙基把氨基键合在硅胶上的色谱固定相。
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中谱红色谱柱是指由中谱科技（福州）有限公司开发和生产的液相色谱柱。
这类色谱柱在药品分析、食品检测、工商质检等领域有着广泛的应用。
其中，“中谱红”是中谱科技的一个品牌，他们生产多种类型的色谱柱，例如RD-C18、ODS-H等型号，这些色谱柱适用于不同类型的样品分析。
“中谱红RD-C18”是一种反相色谱柱，常用于磺胺类药物的分离与测定，采用5 μm颗粒大小、4.6×150 mm的尺寸规格，流动相为0.05%磷酸：乙腈梯度洗脱，波长为270 nm。
该色谱柱具有普适性和优异的稳定性。
“中谱红ODS-H”色谱柱采用了聚合型键合高密度C18，并经过特色封尾技术处理，对中药、食品中的复杂化合物及化学药中的杂质分离有较好的效果。
这种色谱柱在提高温度时选择性会更好，适合于大黄等中药材的液相分析。