实验九 动物组织中核酸的提取和鉴定
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告一、实验目的1、掌握从生物样本中提取核酸（DNA 或 RNA）的基本原理和方法。
2、学习使用各种试剂和仪器进行核酸提取的操作步骤。
3、了解核酸鉴定的常用方法及其原理。
4、培养实验操作技能和科学研究的严谨态度。
二、实验原理核酸包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA），是生物体遗传信息的携带者。
核酸提取的基本原理是利用细胞裂解液将细胞破碎，使核酸释放出来，然后通过一系列的物理和化学方法将核酸与其他细胞成分分离，最后得到纯度较高的核酸样品。
DNA 提取常用的方法有酚氯仿抽提法、盐析法等。
酚氯仿抽提法是利用酚和氯仿的混合液去除蛋白质，然后通过乙醇沉淀得到 DNA。
盐析法是利用高浓度的盐使蛋白质变性沉淀，从而分离出 DNA。
RNA 提取常用的方法有异硫氰酸胍法、Trizol 法等。
Trizol 法是基于异硫氰酸胍和酚的作用，能够有效地裂解细胞并抑制 RNA 酶的活性，从而提取出完整的 RNA。
核酸鉴定的方法主要有紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳法等。
紫外分光光度法通过测定核酸在 260nm 和 280nm 处的吸光度值（A260 和 A280）来评估核酸的纯度和浓度。
A260/A280 的比值在 18 20 之间表示 DNA 纯度较高，在 19 21 之间表示 RNA 纯度较高。
琼脂糖凝胶电泳法则是根据核酸分子在电场中的迁移率不同来分离和鉴定核酸，DNA 分子在琼脂糖凝胶中迁移距离与分子量大小成反比，RNA 通常会呈现出 28S、18S 和 5S 三条带。
三、实验材料与仪器1、实验材料新鲜的动物组织（如肝脏、肌肉等）或培养的细胞。
大肠杆菌菌液。
2、实验试剂细胞裂解液（含蛋白酶 K）。
酚氯仿混合液（酚：氯仿＝ 1:1）。
无水乙醇、75%乙醇。
3M 醋酸钠（pH 52）。
Trizol 试剂。
异丙醇。
RNA 酶抑制剂。
琼脂糖。
50×TAE 电泳缓冲液。
核酸染料（如 EB 或 GelRed）。
核酸的提取与鉴定实验报告
核酸的提取与鉴定实验报告
实验报告：核酸的提取与鉴定
I. 实验目的：
通过实验学习核酸提取和鉴定的步骤，掌握核酸提取实验技能，初步了解PCR技术及其在分子生物学中的应用。
II. 实验原理：
DNA分子在水性条件下具有极强的极性，由此，在化学性质上只要是极性且亲水性的溶剂都能迅速膨胀和破裂DNA分子的双链
结构，并溶解其中的碱基、核苷酸、脱氧糖等。
利用这一原理，
我们可以用溶液来提取含有核酸的样品，然后通过紫外吸光度计
检测该提取物中核酸的含量。
此外，PCR技术是一种被广泛运用
于DNA扩增的技术，其主要原理是通过DNA聚合酶扩增DNA
的特定片段。
III. 实验步骤及结果：
1. 核酸提取：将实验样品加入细胞破解液并混匀，离心后取上
清液，加入等体积的异丙醇，轻轻振荡混合并离心15分钟，然后
弃上清液，加入70%无水乙醇并离心，倒掉液体后用氧气吹干。
最终的核酸提取物的溶解液浑浊且无法肉眼辨认样品。
2. 核酸鉴定：将已经提取的样品分别用紫外吸光度计测量其光密度，结果表明与对照的D.W相比，样品中的核酸具有极高的光密度值，证明核酸提取步骤成功，核酸鉴定实验成功。
IV. 结论：
通过本次实验，我们成功地提取了样品中的核酸，并对提取后的核酸进行了鉴定，证明提取物中含有大量的核酸，表明核酸提取和鉴定实验成功，也为分子生物学的研究提供了基础。
实验九 动物肝脏DNA提取和鉴定
酸钠； （4）整个操作步骤应尽量简化，缩短实验过程，减少核酸
变性、降解、机械切割的机会。
•
1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.1 2.1320. 12.13Sunday, December 13, 2020
（3）EB灵敏度高，可检测出10ng或更少的DNA含量。 （4）既可用于DNA也可用于RNA的检测。 （5）EB可加到样品中，也可加到凝胶中，可随时用紫外
灯检测电泳的进程和效果。 （6）EB-DNA复合物中的EB发出的荧光比游离的EB强10倍，
因此不需洗净凝胶中游离的EB也可检测出DNA的条带。
3、缺点：
DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷，在电 场中向正极移动（电荷效应） 。 DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关 外，还与DNA分子的大小和空间构象有关（琼脂糖凝胶 的分子筛效应）。 电泳时，用溴酚蓝做前沿指示剂，用溴化乙啶 （ethidium bromide，EB） 指示DNA样品在凝胶中的 确切位置。 溴化乙啶是一种荧光染料，可插入DNA双螺旋结构的 两个碱基对之间，与DNA分子形成络合物，在紫外光的 激发下发出橙黄色的荧光。
蛋白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除 去蛋白质。)
➢ 设法除去RNA的污染； ➢ 防止DNA酶的降解作用；
选材
要提取动物组织DNA，一般选择细 胞膜较脆弱，容易破碎的动物脏器，如 胸腺、肝脏、脾脏、胰脏等。
细胞破碎方法—机械物理法：
• 研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石 英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使 用。
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定
实验九动物组织中核酸的提取和鉴定实验七动物组织中核酸的提取和鉴定【原理】动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)⼤部分与蛋⽩质结合形成核蛋⽩。
核蛋⽩可被三氯醋酸沉淀，再⽤95％⼄醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后⽤10％NaCl 溶液提取出核酸的钠盐，加⼊醇可使核酸钠沉淀析出。
先⽤⽔由动物肝中提出核蛋⽩，再籍酚将核酸与蛋⽩质之间的结合键断裂，并⽤⼄醚抽提去蛋⽩质及其它杂质，最后⽤⼄醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸⽔解产⽣磷酸。
有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。
此三类化合物可⽤下列⽅法鉴定之。
1、磷酸：能与钼酸试剂作⽤⽣成磷钼酸，后者在还原剂的作⽤下。
还原成兰⾊的钼兰。
常⽤的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维⽣素C 等。
H 3PO 4＋12H 2MoO 4→H 3PO 4·12MoO 3+12H 2O H 3PO 4·12MoO 3H 3PO 4·6MoO 3·3Mo 2O 52、嘌呤碱：能与苦味酸作⽤形成针状结晶3、戊糖：(1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热⽣成糠醛，后者可与3;5⼆羟甲基苯缩合成绿⾊化合物。
(2)脱氧核糖：在强酸中加热，可⽣成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与⼆苯胺作⽤⽣成⼀蓝⾊化合物。
上述⼆反应如下【操作】(⼀)核酸提取l、⽤酚提取法：（1）取⼩⽩⿏⼀只，断头处死，剖腹取肝，置于研钵中，加⼊玻璃少许，研磨⾄糊状后，加⼊蒸馏⽔3ml，继续研磨约三分钟。
（2）于该研钵中再加酚液5ml，研磨约⼗分钟后，倒⼊—-圆底离⼼管中，离⼼5分钟（约2000转/分钟）。
（3）⽤⽑细管将上液吸出，置于⼀圆底离⼼管中，加⼄醚2ml，⽤拇指将管⼝按住，⽤⼒振摇1—2分钟(提出酚)，离⼼5分钟后，⽤⽑细滴管吸取全部下层液于⼀圆底离⼼管中。
（4）于该管中加⼊95％⼄醇2ml，⽤玻棒搅拌约2分钟，离⼼3分钟，取出．去上清液，沉淀部分即为核酸。
动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定
加数滴使呈碱性
10
10
硝酸银
灰褐色沉淀
核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 3,5-二羟甲苯
管号
1#实验管
2#对照管
4
–
–
4
6
6
沸水加热5min,比较两管颜色.
核糖 浓酸 糖醛 + 3,5二羟甲苯
3H2O
绿色复合物
脱氧核糖鉴定
试剂(滴)
核酸水解液 5% H2SO4 二苯胺试剂
管号
1#实验管
RCF在离心管内不相同，靠转子外最大, 靠中心轴最小，有表可查。
离心机种类及用途
1、低速离心机 常规使用,台式,最大速度3 000~6 000r/min,
RCF可达6 000g。常用于收集细胞、细胞核或 叶绿体等较大的细胞器、抗原-抗体复合物等 粗颗粒沉淀。 2、高速离心机
较大立式，常有制冷系统。最高速率可达 25 000r/min、RCF达60 000g。用于分离微生 物细胞、线粒体、溶酶体等细胞器和蛋白质沉 淀物。
开 始 做 实 验 ！
亚细胞结构的分离
生物颗粒在离心场中所需离心加速度和时间
离心加速度 时间
沉降的组分
100g 4 000g 15 000g 30 000g 100 000g
5min 10min 20min 30min 3~10h
真核细胞 叶绿体 细胞碎片 细胞核 细菌、线粒体 溶酶体、细菌细胞碎片 核糖体
实验步骤
猪
3、超速离心机
一类速度非常高的离心机，最大转速 可超过30 000r/min，最大RCF可达600 000g ，用于沉淀核糖体、膜泡等小的细胞器和 生物大分子。具有精密的制冷、真空装置 4、微。量离心机
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
实验目的：
1. 了解动物组织中核酸的提取方法；
2. 掌握核酸鉴定实验的基本步骤；
3. 实验中验证提取的核酸是否具有一定的纯度。
实验原理：
动物组织中的核酸主要包括DNA和RNA两种类型，可利用
溶解细胞膜、蛋白质酶解、沉淀和洗涤等步骤提取核酸，并通过酶切鉴定分离所得核酸的类型。
核酸的鉴定主要通过比色、电泳或光谱等方式识别。
此外，核酸的纯度可通过测量260
nm和280 nm的光密度比值来评估。
实验步骤：
1.取动物组织，并将其切碎放入离心管中；
2.加入溶解液（如Tris-HCl缓冲液 pH 8.0），彻底溶解组织；
3.加入蛋白酶，使蛋白质完全酶解，生成核酸；
4.加入溶液（如EDTA），停止蛋白酶的作用；
5.加入酒精，将核酸沉淀下来；
6.用乙醇洗涤核酸沉淀，去除杂质；
7.将核酸用去离子水溶解，并进行测量；
8.通过酶切反应鉴定核酸的类型；
9.通过比色、电泳或光谱等方式识别核酸；
10.通过测量260 nm和280 nm的光密度比值来评估核酸纯度。
实验结果：
提取的核酸样品通过酶切反应鉴定为DNA。
通过比色、电泳
或光谱等方式识别，验证了核酸的存在。
通过测量260 nm和280 nm的光密度比值为1.8，表明核酸具有一定的纯度。
实验结论：
本实验成功提取了动物组织中的DNA核酸，并通过酶切反应鉴定了其类型。
通过比色、电泳或光谱等方式识别，验证了核酸的存在，并通过测量260 nm和280 nm的光密度比值评估了核酸的纯度。
动物组织中核酸的提取与鉴定
动物组织中核酸的提取与鉴定
一、生物大分子制备方法基本设计思路
流程：选材→破碎→抽提→浓缩→分离纯化 破碎方法：机械、物理、化学、生物 浓缩方法：沉淀（盐析，可逆变性，有机溶剂等） 生化实验三大分离技术： 离心技术 层析技术 电泳技术
二、实验方法及设计流程
1、提取（3课时） 猪肝 → 匀浆→ 三氯醋酸沉淀核蛋白→ 离心（3200-3500 rpm，5min）
复习与计思路， 写出核酸提取制备的设计原理。
2、样品如何判断是DNA、还是RNA,反应条 件如何？
3、造成产量偏低的原因，从提取过程分析。
动物组织中核酸的提取与鉴定实验方案
实验原理
本实验运用盐溶液法用动物肝脏分离制备DNA 核酸在细胞内都与蛋白质结合成核蛋白，要分离核 酸必须使核酸与蛋白质分离并除去蛋白质。 已知在0.14mol/LNaCl溶液中核糖核蛋白溶解度最 大，而脱氧核糖核蛋白溶解度最小，在1mol/LNaCl 溶液中脱氧核糖核蛋白溶解度增大，核糖核蛋白的 溶解度则明显下降，根据这种特异性即可把这两种 核蛋白分开
动物猪肝猪羊兔组织捣碎机离心机量筒烧杯锥形瓶玻璃棒离心管称量瓶滴管等实验步骤取动物肝脏浸入预先在冷水浴中冷却的014mollnacl001molledta溶液反复洗涤几次直至组织无血为止将洗净的组织剪成碎块称取10g加入20ml014mollnacl001molledta溶液在组织捣碎机中匀浆44000rmin离心15分钟后弃上清液在沉淀中加入4倍体积的低温014mollnacl001molledta溶液搅匀后离心弃上清液如此反复23次保留沉淀实验步骤将沉淀物悬于5倍体积的014mollnacl001molledta溶液中搅匀边搅拌边滴加sds溶液直至sds的最终浓度达10gl为止然后加入固体nacl使nacl最终浓度达1moll继续搅拌3045min以确保nacl全部溶解将上述混合液倒入一个具有塞的锥形瓶中加入等体积的氯仿异戊醇振荡10min在室温3000rmin离心10min此时可见3层小心吸取上层水相记录体积放入锥形瓶中再加入氯仿异戊醇混合物振荡离心如此反复抽提数次直至界面处不出现蛋白凝胶为止最后一次离心后小心吸取上层溶液计量体积放入干燥小烧杯加入2倍体积的预冷95乙醇产生沉淀后4000rmin离心10min弃去上清液沉淀即为dna实验步骤加2倍体积预冷乙醇如用滴管滴加边加边慢慢顺一个方向在烧杯中搅动有粘稠维丝物缠在玻璃棒上直至再无丝状物缠上为止将玻璃棒上的dna取下依次用75乙醇95无水乙醇洗一次放入干净量瓶中至于干燥器中抽干十二烷基硫酸钠sds组织捣碎机离心机宝山壁画宝山壁画是引人注目的昂贵文物
动物组织核酸的提取与鉴定
动物组织核酸的提取与鉴定一.目的要求（1）了解生物大分子制备的基本技术。
（2）学习和掌握用盐溶法从动物组织提取分离DNA的原理和操作技术。
（3）学习和掌握鉴定核酸的方法。
二. 材料与用品材料与试剂实验对象动物肝脏仪器：匀浆器（研钵）、冰盒、离心机、电磁炉、玻棒、冰箱。
试剂：0.9%生理盐水、20%三氯醋酸、95%乙醇、10%NaCL溶液。
三. 原理动物含有丰富的DNA，可作为提取DNA的良好材料，在细胞核内，核酸通常与某些组织蛋白质结合成复合物，即以脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白的形式存在。
在不同浓度的盐溶液中，脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白的溶解度有很大差别。
当NaCl浓度为0.14mol/L时，脱氧核糖核蛋白的溶解度极低，仅为其在纯水中溶解度的1%，而核糖核蛋白的溶解度相当大，利用这一性质可将脱氧核糖核蛋白与核糖核蛋白以及其他杂质分开。
提取出来的脱氧核糖核蛋白须除去蛋白质。
当脱氧核糖核蛋白与氯仿-异戊醇混合液一起振荡时，蛋白质变性而与核酸分开，蛋白质沉淀夹在水相和有机相之间，DNA溶于在水相中。
经过分离后，再用乙醇将水相中的DNA沉淀出来。
为了防止脱氧核糖核酸酶（DNase）的作用而引起DNA降解损失，在用于提取的缓冲液中均含有0.001mol/L的EDTA（乙二胺四乙酸）螯合剂，以除去保持DNase活性所必须的Mg2+。
为了防止DNA的变性，操作尽可能在低温下进行。
四. 内容与方法1. 提取DNA（1）取动物肝脏在冰浴上去除脂肪和结缔组织，切成小块，称取20g，加入60mL预冷的0.14mol/L NaCl – 0.01 mol/L EDTA溶液，在组织捣碎机中高速匀浆5~10min。
（2）匀浆后的组织糜于4℃、10000r/min离心10min，弃去上清液。
在玻璃匀浆器中，用4倍体积的低温0.14mol/L NaCl – 0.01 mol/L EDTA溶液洗涤沉淀，然后按上述操作进行离心，弃去上清液。
核酸的提取与鉴定
3．核糖的鉴定 取试管2支，按表操作 将2支试管放入沸水浴内加热10min
管号
测定 对照
水解液
4滴 —
5%硫酸
— 4滴
3，5二羟甲苯试剂
6滴 6滴
4．脱氧核糖的测定 取试管2支，按表操作 将两管同时放人沸水浴l0min
管号
测定 对照
水解液
20滴 —
5%硫酸
— 20滴
二苯胺试剂
40滴 40滴
析出的核酸(DNA与RNA)均由单核苷酸组成，在单 核苷酸中含有磷酸、有机碱(嘌呤与嘧啶)或戊糖(核糖、脱 氧核糖)。核酸用硫酸水解后，即可游离出这三类物质。 用下述方法可分别鉴定出这三类物质：
1．磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨 基奈酚磺酸还原形成蓝色钼蓝。
2．嘌呤碱：用硝酸银与之反应生成灰褐色的絮状嘌呤银化 合物。
纯冰乙酸)，加入2.75ml浓硫酸，摇匀。放在棕色瓶中保 存。此试剂需临用时配制。 5． 0.9%Nacl。 6． 20%三氯醋酸。 7． 95%乙醇。
实验步骤
(一)匀浆制备
称取新鲜猪肝(或大白鼠肝脏)5克，加入等量冰冷的 0.9%NaCl溶液（可先放少量，待研磨成匀浆后加入剩余 部分），及时剪碎。放人研钵中加入少量石英砂，研磨成 匀浆。研磨过程中，要随时将研钵置于冰中冷却。（匀浆 制备一定要在低温条件下制作，操作要迅速，以避免核酸 分解。）
（四）DNA与RNA成分的鉴定
1．磷酸的鉴定 取试管2支，按表操作
管号
测定 对照
水解液
5%硫酸
钼酸铵试剂
氨基奈酚磺 酸
10滴
—
5滴
20滴
—
10滴
5滴
20滴
2．嘌呤碱的鉴定:取试管2艾，按表操作
动物组织核酸的分离、鉴定和含量测定
• 定糖法: DNA糖部分为脱氧核糖，RNA糖部分为核糖， 分别可以进行二苯胺显色法和地衣酚显色法 • 定磷法: 测定核酸的磷酸部分
实验方法
• 1ml SC溶液溶解DNA， 8000rpm离心5分钟后，将上清转移到5ml离 心管中，用1ml 0.01M NaOH溶液加入沉淀中，使其充分溶解，并再 次离心5分钟，上清与第一次溶解液合并备用 • A260测定：以SC溶液作为空白，取上清测A260值（OD<3.0即在测量 范围之内），并计算DNA浓度（1OD=50µg/ml DNA） • A280测定： A260/A280比值计算。纯的DNA为1.8，RNA为2.0。如果样 品中混有RNA，则比值大于1.8；如果样品中混有蛋白质，则比值小 于1.8 • 若A260/A280比值较为正常，则可确定二苯胺法测量DNA浓度的粗略 稀释倍数，使A260值在2.0左右（
• 实验结果以研究论文形式提交电子版本 • 包括摘要、前言、实验材料和实验方法、 实验结果和分析、讨论和参考文献
60℃水浴中保温1h，冷却测 OD595 以DNA的含量为横坐标，光密度（吸收值）为纵坐标，绘制标准曲线。
注：待测溶液中的DNA含量应调整至标准曲线的可读范围内。 样品1和样品2为不同稀释倍数的DNA溶液 二苯胺法的测定范围是40-400 ug/ml DNA，浓度太小会影响测定结果
DNA含量计算
根据标准曲线,以样品的光密度计算出相应DNA 含量,并同紫外法测定的值进行比较，分析二者差异的 原因。 注：二苯胺试剂具有腐蚀性，且二苯胺反应产生的蓝 色不易褪色，操作中应防止洒出，比色时，比色杯外 面一定要擦干净。
酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提
酚：有效的使蛋白质变性，不能完全抑制RNA酶的活性， 能溶解带有长poly(A)的RNA分子。使用前必须用水饱和并 用Tris平衡至pH>7.8，以防止DNA分配到有机相。 氯仿：强烈的脂溶性，去除脂类杂质，增加有机相比重。 纯酚的比重为1.07，有机相和水相有时很难分开。加入氯仿 （比重为1.47）可以避免这一问题。同时，酚有时会微溶于 水，可以用氯仿将水相中的酚去除。 异戊醇：降低表面张力，减少气泡产生，使离心后的水相、 变性蛋白相及有机溶剂相维持稳定。
实验九动物组织中DNA的提取与鉴定PPT课件
DNA鉴定
琼脂糖凝胶电泳
将提取的DNA进行琼脂糖 凝胶电泳，观察电泳结果， 判断DNA的纯度和浓度。
紫外吸收法
利用紫外分光光度计测量 DNA溶液在260nm处的吸 光度值，计算DNA的浓度 和纯度。
荧光染料染色法
利用荧光染料染色DNA， 通过荧光分光光度计测量 DNA的荧光强度，判断 DNA的纯度和浓度。
细胞内的DNA。
DNA提取
离心
将匀浆后的样品进行离心，使细胞碎片和 杂质沉淀到底部，上清液中含有DNA。
洗涤
用洗涤液清洗吸附柱，去除未被吸附的杂 质。
吸附
将上清液加入到吸附柱上，DNA被吸附在 吸附柱的硅基质膜上，而蛋白质和其他杂 质被排除。
洗脱
用洗脱液将DNA从吸附柱上洗脱下来，收 集洗脱液中的DNA。
移液器
用于精确移取和量 取实验试剂。
电脑和PPT软件
用于制作和展示实 验课件。
03
实验步骤
样品处理
样品收集
选择新鲜的动物组织样品，确保 无菌条件下收集，避免样品受到
污染。
样品处理
将收集的动物组织切成小块，用 生理盐水或磷酸盐缓冲液冲洗，
去除表面的污物和血液。
样品匀浆
将处理过的组织块放入匀浆器中， 加入适量的匀浆介质（如石英砂、 玻璃珠等），破碎细胞，释放出
电泳技术的局限性
琼脂糖凝胶电泳技术虽然能够较好地分离DNA条带，但对于较长片段和大分子量DNA的 分辨率有限，未来可考虑采用其他电泳技术或优化现有技术。
纯度分析的注意事项
在紫外分光光度计检测过程中，需要注意消除样品中蛋白质、酚类等物质的干扰，以确保 纯度分析的准确性。同时，对于不同来源和性质的DNA样品，可能需要采用不同的纯度 分析方法。
动物组织中的核酸提取与鉴定
动物组织中核酸的提取与鉴定一、原理根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离，然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白，使核酸释放出来，再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出，达到分离提纯的目的。
二、试剂1.地衣酚（orcinol）试剂：称取100mg地衣酚溶于100ml 浓盐酸中，再加入100mgFeCl3·6H2O，该溶液应在使用前新鲜配制。
2.二苯胺试剂：称取1g二苯胺（经重结晶）溶入100ml冰醋酸中，再加入2.75ml浓H2SO4摇匀，冰箱内保存备用。
3. 0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸），250ml；4. 1mol/L氯化钠溶液，250ml；5. 95%乙醇（冷）；6. 氯仿；7. 异戊醇三、器材a)冷冻离心机（3000rpm）b)组织捣碎机或组织匀浆器c)不锈钢剪刀d)冰浴e)试管、试管夹f)量筒、吸管g)带塞比色管、带塞离心管h)玻棒、烧杯i)电炉等三、方法1. 制匀浆将新鲜肝脏或冷冻肝脏称重后用冷的0.14mol/L氯化钠溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）洗去血水，用不锈钢剪刀将肝脏剪成碎块，放入组织捣碎机中加入2倍体积的0.14mol/LNaCl 溶液（内含0.01mol/L柠檬酸）制备匀浆。
将匀浆置离心机中离心20min（3000rpm）。
上层液倾出留待抽提RNA ，下层用二倍体积冷的1mol/LNaCl溶液抽提1h，待分离DNA核蛋白。
2. 核酸的抽提2.1RNA的提取0.14mol/L的NaCl抽提液（内含RNA核蛋白）加入等体积的氯仿和1/40体积的异戊醇，置带塞离心管中，振摇30min，此时提取液为乳白色混悬液，以3000rpm离心15min，离心物呈三层。
用滴管吸出上层清液，在低温下加入1.5~2倍的冷95%乙醇，并轻轻搅拌。
低温放置15min，3000rpm离心10min，弃去上清液，即得RNA颗粒状沉淀，待定性。
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告
动物组织中核酸的提取与鉴定实验报告1. 引言核酸（DNA和RNA）是生物体内存储遗传信息和调控基因表达的重要分子。
对于研究生物的遗传特征和进化过程，核酸的提取与鉴定是必不可少的实验步骤。
本实验旨在通过提取动物组织中的核酸，使用常用的鉴定方法分析核酸的质量和纯度。
2. 实验原理核酸提取与鉴定的基本原理是将动物组织中的核酸从其他的细胞组分（如蛋白质、唾液等）中分离出来，并通过吸光度测定和凝胶电泳等方法进行核酸的定性和定量。
2.1 核酸提取核酸提取的步骤包括细胞破碎、蛋白质的去除和核酸的沉淀。
常用的核酸提取方法包括酚-氯仿法、柱式提取法和商业试剂盒法等。
2.2 核酸定性和定量核酸的定性主要通过凝胶电泳进行，通过核酸带的迁移速度和分子量，可以初步判断核酸的纯度和是否受到降解。
核酸的定量则是通过吸光度测定，利用核酸特征的吸收峰波长（260 nm）测定核酸的浓度。
3. 实验材料与方法3.1 实验材料•动物组织样品•细胞破碎缓冲液•蛋白酶•酚-氯仿提取液•乙醇•TE缓冲液•焦亚硫酸铵•乙酸•0.8%琼脂糖凝胶3.2 实验步骤1.将动物组织样品切碎并加入细胞破碎缓冲液，用超声波破碎细胞壁。
2.加入蛋白酶进行蛋白质的消化。
3.加入酚-氯仿提取液，离心分离上层的核酸。
4.将上层的核酸转移到新离心管中，加入等体积的冷乙醇沉淀核酸。
5.离心沉淀的核酸，去除上层的乙醇并用TE缓冲液重悬核酸。
6.使用吸光度计测定核酸的纯度和浓度。
7.进行凝胶电泳，观察核酸的迁移带和分子量。
4. 结果与分析4.1 核酸提取结果通过核酸提取实验，成功从动物组织中提取到了核酸。
提取的核酸样品呈现无色透明的状态，说明核酸净化得较好。
4.2 核酸定性和定量结果将提取得到的核酸样品进行凝胶电泳，观察到了明显的核酸带。
通过与分子量标准品的比较，可以初步判断核酸的分子量范围是否正常。
通过吸光度测定，确定了核酸的浓度。
5. 结论通过本实验，成功提取到了动物组织中的核酸，并通过凝胶电泳和吸光度测定等方法对核酸进行了定性和定量分析。
动物组织和细胞中核酸的提取和测定_
实验九动物组织和细胞中核酸的提取和测定第一部分动物组织和细胞中DNA和RNA的提取【实验目的】学习从组织和细胞中提取DNA和RNA的方法【实验原理】1.从动物组织和细胞中提取DNADNA存在于细胞核中。
提取DNA的方法首先需要温和裂解细胞及溶解DNA的技术，接着需采用化学和酶学方法，除去杂蛋白、RNA及其他的大分子。
本实验在EDTA（螯合二价阳离子以抑制Dnase）存在的情况下，用蛋白酶K消化真核细胞和组织，用去垢剂（如SDS，十二烷基磺酸钠）溶解细胞膜并使蛋白质变性。
核酸通过有机溶剂抽提得以纯化，污染的RNA通过RNase消化清除。
这个方法可产生十微克至数百微克的DNA，适用于标准琼脂糖凝胶上的Southern分析，可用作PCR反应的模板，以及用于构建基因组DNA文库。
2.从动物组织和细胞中提取RNARNA存在于细胞质及核中，是一种极易降解的核酸分子。
为了快速从细胞中分离完整的RNA，许多方法都用到了高浓度的强变性剂硫氰酸胍使细胞破裂。
高浓度的硫氰酸胍还使细胞内的各种RNA 酶失活，使释放出的RNA不被降解。
细胞裂解后存在于裂解溶液内的有RNA，核DNA，蛋白质和细胞残片，通过酚，氯仿等有机溶剂处理，离心，使RNA最终与其它细胞组分分离开来。
【实验材料】1.实验器材研钵和研棒，匀浆机，橡胶刮棒，低温冷冻离心机，恒温水浴，宽口移液管，锤子，塑料袋，涡旋。
2.实验试剂(1)裂解缓冲液：10mmol/L Tris-Cl(PH8.0)，0.1mol/L EDTA(PH8.0)，0.5%(m/V)SDS，20µg/mg无Dnase 的胰RNase，裂解缓冲液的前三种成分可预先混合并于室温保存。
RNase在用前适量加入。
(2)溶液D(变性液)：4mol/L硫氰酸胍，25mmol/L柠檬酸钠.2H20，0.5%(m/V)月桂基肌酸钠，0.1mol/L β-巯基乙醇，将250g硫氰酸胍、0.75mol/L(PH7.0)柠檬酸钠17.6ml和26.4ml10%(m/V)月桂基肌酸钠溶于293ml水中.加入搅拌子于磁力搅拌器上65℃混匀,直至完全溶解。
动物组织中DNA的提取与鉴定
实验原理—DNA提取
氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀，将核酸 物质萃取出来；再向萃取液中加入适量乙醇，可 使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在 DNA纯化研究中非常常用，氯仿-异戊醇抽提的原 理是，氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相 分层；异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。 而DNA不溶于乙醇等有机溶剂，因此可以通过乙 醇沉淀来纯化和浓缩DNA。
实验原理—DNA鉴定
DNA是由脱氧核糖核苷酸单体构成，其组成部分包括磷酸、 有机碱（嘌呤与嘧啶）、戊糖（脱氧核糖）。
1）磷酸
钼酸铵
磷钼酸
Vc 或 氨基萘酚磺酸 钼蓝
（显蓝色） 2）嘌呤碱
硝酸银
嘌呤银化合物（灰褐色、絮状）
3）脱氧核糖 蓝色化合物
硫酸
ω-羟基-γ-酮基戊醛
二苯胺
实验试剂 1. 含有0.14 mol/L NaCl的0.015 mol/L柠檬酸 钠溶液 2. 1mol/L NaCl溶液 3. 氯仿-异戊醇（24 : 1, V/V） 4. 95%乙醇 5. 氨水溶液 6. 5% AgNO3溶液
实验步骤
（三）DNA的纯度测定与定量
1. 取DNA提取液0.1 mL，用水或缓冲液稀释一定浓度，用 紫外分光光度计分别测定同一样品的260 nm和280 nm的吸 光值（OD），检测DNA的纯度及浓度。 a) 若A260 nm / A280 nm 接近于1.8，则说明DNA样品的纯度高； b) DNA浓度（μg/mL） = A260 nm × 50 × 稀释倍数 × （1/光 经） c) DNA得率（mg）= DNA浓度 × 最终DNA原液（mL）
7.2.5%钼酸铵试剂 （取蒸馏水400 mL，加入浓硫酸83 mL， 将钼酸铵25 g溶于其中，最后稀释至1 L，冰箱放置一个月 不变质） 8. Vc-钼酸铵溶液 （称取还原型抗坏血酸0.53 g溶解于100 mL 2.5%钼酸铵溶液，贮于棕色瓶中，当天配制） 9. 3, 5-二羟基甲苯试剂（取比重1.19的HCl 100mL，加入 FeCl3·6H2O 100 mg及二羟甲苯100 mL，混合溶解后，置于 棕色瓶中，临用前新鲜配制） 10. 二苯胺试剂（取1 g纯的二苯胺溶于10 mL重蒸馏的冰乙 酸中，加入2.75 mL浓硫酸，放置于棕色瓶，临用前新鲜配 制）
实验十六动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定实验报告
实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定__实验报告实验十六：动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定一、实验目的1.掌握动物组织中核酸的提取方法；2.了解核酸的基本组成成分；3.学会利用分光光度计测定核酸含量；4.通过实验，加强理论与实践的结合，提高实验技能。
二、实验原理核酸是生物体内的一种重要生物大分子，包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两种。
在动物组织中，DNA主要存在于细胞核中，而RNA主要存在于细胞质中。
核酸的提取通常采用酚-氯仿抽提法，其原理是利用两种物质的极性差异进行分离。
酚（Phenol）是一种弱酸，可与水形成氢键，但与氯仿（Chloroform）不溶，因此可以将酚相和水相分离。
在水相中，氯仿与水互不相溶，而酚与氯仿互溶，因此可以将酚从水相中去除。
通过多次抽提，可以将DNA和RNA有效分离。
三、实验步骤1.实验准备（1）实验材料：动物组织（肝脏、肌肉等）、研钵、离心管、移液器、枪头、称量纸、酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、70%乙醇、0.15mol/L NaCl溶液、0.01mol/L Tris-HCl缓冲液（pH=7.0）、0.001mol/L EDTA溶液（pH=8.0）、0.04mol/L Na2HPO4溶液（pH=7.0）、0.04mol/L NaH2PO4溶液（pH=7.0）、双蒸水。
（2）设备仪器：冷冻高速离心机、漩涡振荡器、电子天平、烘箱、分光光度计。
2.实验步骤（1）样品制备：称取50-100mg动物组织，在研钵中研磨成粉末状，加入适量双蒸水，漩涡振荡器混匀。
将悬浊液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，弃上清液。
用70%乙醇洗涤沉淀两次，4℃下8000rpm离心10分钟，弃上清液。
将沉淀物真空干燥后保存。
（2）核酸提取：在沉淀物中加入适量酚-氯仿混合液（体积比1:1），用枪头充分振荡混匀。
将混合液转移到离心管中，以12000rpm离心10分钟，将水相和酚相分离。
动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定
动物组织中 核酸的提取及其组成
成分的鉴定
添教材
实验目的
学习离心技术，掌握离心机的正确使用 了解本实验设计思路
实验思路
动物肝组织
提取 （匀浆）
分离 （离心）
核酸
核酸沉淀物
水解核酸
Байду номын сангаас分别鉴定
糖、磷酸、碱基
【鉴定的原理】
核糖 浓酸
糖醛 + 3，5二羟甲苯（地衣酚）
沉淀物中再加入 10%NaCl溶液4ml搅匀
再置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌
取出冷却后再离心
（3000转/分，3分钟）
将上清液倒入小烧杯内
取4ml 95%乙醇，逐滴加入小烧杯
白色沉淀物，静置5分钟，转入离心管
再离心（3000转/分，3分钟）
倾去上清液，即得到核酸纳的白色沉淀 3.核酸水解
含有核酸离心管
3H2O
绿色复合物
磷酸 + 钼酸铵
磷钼酸 还原
钼兰（兰色）
氨基萘酚磺酸
浓酸 脱氧核糖
ω-羟基γ-酮基戊醛 + 二苯胺
3H2O
兰色化合物
【操作】
1.制备匀浆 猪肝 + 沙 + 研磨匀浆 + 生理盐水
2.分离抽提 肝匀浆倒入刻度离心管
立即加入2%三氯醋酸4ml搅匀
静置、离心（3000转/分，3分钟）、倾去上清液
加入5%H2SO4溶液4ml
用玻棒搅匀，在沸水中加热5分钟
核酸水解液
4.RNA和DNA成分鉴定
1）磷酸鉴定：取试管2支，分别标明测定管 与对照管，按讲义操作（观察颜色有何不同）
2）核糖鉴定：取试管2支，分别标明测定 管与对照管，按讲义操作（比较两管颜色）
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实验七动物组织中核酸的提取和鉴定
【原理】
动物组织细胞中的核糖核酸(RNA)与脱氧核糖孩酸(DNA)大部分与蛋白质结合形成核蛋白。
核蛋白可被三氯醋酸沉淀，再用95％乙醇加热可以除去附着在沉淀上的脂类杂质，然后用10％NaCl溶液提取出核酸的钠盐，加入醇可使核酸钠沉淀析出。
先用水由动物肝中提出核蛋白，再籍酚将核酸与蛋白质之间的结合键断裂，并用乙醚抽提去蛋白质及其它杂质，最后用乙醇将核酸沉淀。
核酸(RNA、DNA)可被硫酸水解产生磷酸。
有机碱（嘌岭、嘧啶）和戊糖（核糖、脱氧核糖）。
此三类化合物可用下列方法鉴定之。
1、磷酸：能与钼酸试剂作用生成磷钼酸，后者在还原剂的作用下。
还原成兰色的钼兰。
常用的还原剂有氨基苯磺酸、氯化亚锡，维生素C等。
H3PO4＋12H2MoO4→H3PO4·12MoO3 + 12H2O
H3PO4·12MoO3H3PO4·6MoO3·3Mo2O5
2、嘌呤碱：能与苦味酸作用形成针状结晶
3、戊糖：
(1)核糖：经与强酸(盐酸与硫酸)共热生成糠醛，后者可与3;5二羟甲基苯缩合成绿色化合物。
(2)脱氧核糖：在强酸中加热，可生成ω—羟基γ—酮基戊醛，后者再与二苯胺作用生成一蓝色化合物。
上述二反应如下
【操
作】
(一)
核酸提取
l、用
酚提取法：
（1）
取小白鼠一
只，断头处
死，剖腹取
肝，置于研
钵中，加入
玻璃少许，
研磨至糊状
后，加入蒸
馏水3ml，
继续研磨约
三分钟。
（2）
于该研钵中再加酚液5ml，研磨约十分钟后，倒入—-圆底离心管中，离心5分钟（约2000转/分钟）。
（3）用毛细管将上液吸出，置于一圆底离心管中，加乙醚2ml，用拇指将管口按住，用力振摇1—2分钟(提出酚)，离心5分钟后，用毛细滴管吸取全部下层液于一圆底离心管中。
（4）于该管中加入95％乙醇2ml，用玻棒搅拌约2分钟，离心3分钟，取出．去上清液，沉淀
部分即为核酸。
2、用三氯醋酸提取法
（1）杀兔；取肝，称重，按每克肝脏4ml比例加入1％三氯醋酸，制成肝匀浆。
每组量取肝匀浆5ml于带塞离心管中，3000转／分离心5分钟。
（2）将离心后的上清液倾去，于沉淀中加95％乙醇5ml充分混匀，在水浴中加热至沸2分钟，注意酒精沸腾后将火关小，避免酒精蒸汽燃烧。
冷却后离心。
（3）倾去上层乙醇液。
于沉淀中再加入10％NaCI溶液4ml，置沸水浴中8分钟，并用玻棒不断搅拌，取出；冷却后再离心，
（4）将上清液倾入另一离心管中，再离心一次，除去可能存在的微量残渣，将上清液倒入一试管。
取等量95％的乙醇，逐滴加入到上清液中，即可见白色沉淀逐渐出现，静置10分钟后。
将其内容物摇匀后倒入一圆底离心管中，离心5分钟，将上液倾去，所得白色沉淀即为核酸钠。
(二)核酸的水解：
在有核酸沉淀的离心管中加入蒸馏水2ml。
振摇至沉淀溶解后，加入10％H2SO42mL摇匀，于沸水浴中加热10分钟，即得核酸水解液，用流水冷却后进行下列定性试验。
(三)鉴定：
l、嘌呤碱的鉴定：
取中试管一支，加入饱和苦味酸约2ml，再加入核酸水解液4—6滴，摇匀。
静置于室温中，观察有无黄色针状结晶出现，。
2、脱氧核糖的鉴定：
摇匀，于沸水浴中加热15分钟后，观察二管颜色之变化。
3、核糖的鉴定：
摇匀，于沸水浴加热10分钟后观察色颜色之变化。
4、磷酸的鉴定
【试剂配法】
1、饱和苦味酸溶液：称取1.3克的苦味酸，溶于100ml的蒸馏水中，静置过夜。
临用前倒取上层液。
2、钼酸试剂，称取钼酸铵5克，溶于100ml蒸馏水中，再加入浓硫硫15ml待冷却后加蒸馏水至1000ml，此试剂可置阴凉处保质一月。
3、拜耳（Bial）氏试剂：称取1.5克3，5一二羟甲苯，加入浓盐酸50ml。
再加10％三氯化铁20—30滴，贮于冰箱。
此试剂应在临用前配制。
4、二苯胺试剂：称取纯二苯胺lg溶于1000ml的冰醋酸中，加入浓硫酸2.75ml，贮于棕色瓶中，此试剂亦需临用前配制。
5、3％维生素C：称取维生素C 3克溶于5％三氯醋酸100ml中（已氧化变质的维生素C不能用）。
【注意事项】
1、在用饱和NaHCO3调节pH值时，一定用试纸测定，将pH调节在6.5以下。
2、肝匀浆一定要磨得较细，细胞彻底破坏。
【实验报告与思考题】
1、核酸提取、鉴定的原理如何？
2、在本实验的操作过程中应注意什么问题？
3、DNA和RNA在组成上有什么区别？如何鉴别？。