微生物学实验复习提纲教案资料

微生物学实验复习提纲

1.研究微生物学的基本技术有哪些（显微镜技术、无菌技术、纯种分离技术和纯种培养技术）

2.细菌培养基的配制过程？

答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面

3.制造接种环、接种针的金属常用铂或镍,原因是软硬适度，能经受火焰反复灼烧，又易冷却.

4.灭菌吸管的包装的注意事项：（1）吸管必须干燥;(2)在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段约1.5cm 长的棉花（不能用脱脂棉）。作用是避免外界及口中杂菌吸入管内，并防止菌液等吸入口中。

5.空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌。则要多用几层报纸包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。

6.接种环在用前必须烧灼灭菌，用后也应立即烧灼。

7.酵母的死细胞和活细胞可通过哪些方式鉴别？

答：1.、用美蓝液对酵母菌染色后，活细胞为无色，死细胞为蓝色2、平板菌落计数法

8.细菌、放线菌、酵母菌和霉菌四大类微生物的菌落各有何特点？

答：细菌：湿润、光滑、透明、粘稠、易挑起、质地均匀、菌落各部位的颜色一致等。

放线菌：质地致密、丝绒状或有皱折、干燥，不透明，上覆盖有不同颜色的干粉（孢子），菌落正反面的颜色常不一致，基内菌丝与培养基结合较紧，难以挑起。

酵母菌：菌落与细菌的相仿，比细菌菌落大而且厚，菌落表面湿润、粘稠、易被挑起，其颜色多为乳白色，少数为红色。同时会散发出悦人的酒香味。

霉菌：菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取，菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致等。

9.培养基按化学成分、物理状态、用途划分可分为哪几种类型？

答：化学成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基物理状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基用途：基础培养基、鉴别培养基、选择培养基

10.实验常用的凝固剂是哪一种？固体培养基、半固体培养基及液体培养基加凝固剂琼脂的量为多少？琼脂在什么温度下溶化？什么温度下凝固？

答：常用凝固剂是琼脂，分别为1—2%，0.5% 96°C下融化，40°C凝固

11.配制培养基时应遵循哪些原则？配制培养基的一般方法和步骤是什么？配制培养基时不可用铜锅或铁锅，原因是什么？调pH一般用什么试剂调？配制pH低的琼脂培养基时，应怎样配制？

答：原则：目的明确、营养协调、理化适宜、经济节约方法：生态模拟、参阅文献、精心设计、试验比较

用磷酸缓冲液和碳酸钙做调节剂

12.培养基分装时，液体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？固体分装高度以试管的多少为宜，三角瓶的多少为宜？半固体分装高度以试管的多少为宜？

答：液体：试管高度的1\4,三角瓶的试管高度的1\2,固体：试管高度的1\5，三角瓶的1\2，半固体：试管高度的1\3

13.培养基灭菌时外用牛皮纸包扎的目的是什么？

答：防止灭菌时冷凝水润湿棉塞

14.摆斜面的正确方法是什么？

答：试管口搁在玻璃棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。

15.棉塞的作用是什么？正确的棉塞要求是什么？棉塞的长度多少在管口外，多少在管内为

宜？作棉塞的棉花要求是什么？能否用脱脂棉？为什么？

答：作用：阻止外界微生物进入培养基内造成污染和能通气

16.培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如果来不及灭菌应如何处理？

答：很明显，培养基里含有丰富的氮源，碳源，微量元素等等。如果不立即灭菌，那么，就会长菌。你可能会认为再灭菌不就可以了？！但是，很多的微生物，特别是真核微生物在生长的时候会改变溶液的PH，同时灭菌后细胞破碎，带入新的氨基酸，蛋白等，这些都是试验不稳定的因素。如果不能立刻灭菌，应该在配置培养基的时候直接称取粉末，不加入水溶解，可在室温保存。如果加入的是液体的，已经配置好的培养基，应该在4度并保存，但时间不宜过长。

17.什么是选择性培养基？

答：在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要的微生物的生长，有利于所需微生物的生长

18.什么是鉴别性培养基？

答：用于鉴别不同类型微生物的培养基，微生物产生某种代谢产物，与培养基中的特殊化学物质发生特定的化学反应，产生明显的特征变化

19.蛋白胨称取时应怎样？为什么？溶解可溶性淀粉的正确方法是什么？答：称取时动作要迅速，因为其很容易吸湿。称取可溶性淀粉放入小烧杯中，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所需水量的沸水中，继续加热，使可溶性淀粉完全溶化。

20.配制合成培养基加微量元素时最好用什么方法加入？天然培养基为什么不需要另加微量元素？

答：

21.采用什么方法能分离到能分解并利用苯作为碳源和能源物质的细菌纯培养？（以苯作为唯一碳源的选择培养基）

答：①从苯含量较高的环境中采集土样或水样；②配制培养基，倒平板，一般仅以苯作为唯一碳源（A），另一种不含任何碳源作为对照（B）；③将样品适当稀释（十倍稀释法），涂布A平板；④将平板置于温度适当的条件下（37℃）培养，观察是否有菌落产生；⑤将A平板上的菌落编号并分别转接至B平板，置于相同温度条件下培养（在B平板上生长的菌落可利用空气中的CO2的自养型微生物）；⑥挑取在A平板上生长而不在B平板上生长的菌落，在一个新的A平板上划线、培养，获得单菌落，初步确定为可利用苯作为碳源和能源的微生物纯培养物；⑦将初步确定的目标菌株转接至以苯作为唯一碳源的液体培养基中进行摇瓶发酵实验，利用相应的化学分析方法定量分析该菌株分解苯的情况。

22.什么是灭菌？消毒？列表比较高温灭菌或消毒的各大方法的温度、时间、适用对象？答：灭菌：采用强烈的理化因素使物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。如高温。

消毒：采用较温和的理化因素，杀死物体表面或内部的一部分对人体有害的病原菌，而对被处理物体基本无害的措施。如75%酒精。

23.干热灭菌原理是什么？为什么干热灭菌比湿热灭菌所需要的温度高，时间长？

答：原理见课本175页。由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死，所以温度高、时间长。

24.在干热灭菌过程中应注意哪些问题,为什么？

答：1 干热过程中，严防恒温调节的自动控制失灵而造成安全事故。电热干燥箱具有可以观察的窗口，灭菌过程中玻璃温度较高，注意避免烫伤。2 电热干燥箱内温度未降到70°C以前，切勿自行打开箱门，以