化妆品微生物挑战试验

化妆品微生物挑战试验
刘树葆臧跃扬桂菊
（天津化妆品科学技术研究皖有强公司）
摘要：本文参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法，研究了不同产品在相同防腐条件下，微生物挑战试验结果的差异性。

关键词：防腐体系，微生物挑战试验，膏霜，乳液，水剂。

目前，化妆品琳琅满目，产品配方复杂多样，通常包含多种成分，尤其许多化妆品中的营养成分非常适合微生物的生长，而微生物存在于我们生活着的世界的每一个角落，从而为化妆品的生产和保存带来困难。

微生物污染将导致产品在气味、颜色、粘度、性能上都会发生改变。

因此化妆品微生物污染对产品质量、正常使用以及使用者健康来说是一个极大的冒险“’。

为防止微生物污染，就对产品的防腐提出了挑战，所以必须建立很好的防腐体系，以保证产品的安全、稳定性“’，为消费者提供安全和高品质的产品。

评价化妆品质量的～个重要指标就是微生物是否达到化妆品卫生规范的要求，本实验参照美国化妆品、盥洗用品和香精协会（ＣＴＦＡ）推荐的防腐体系效能评价方法。

’，对相同防腐体系不同功能的膏霜、乳液及水剂产品进行微生物挑战试验，以指导配方师合理添加防腐剂。

１．实验方法
ｉ．Ｉ．ＣＴＦＡ推荐的防腐单次挑战试验
ＣＴＦＡ推荐的经典的为期２８天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后～次性接入若干种类、～定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。

１．２试验仪器
恒温培养箱：霉菌培养箱：显微镜：灭菌平皿：直径为９ｃｍ；ｐＨ计；高压灭菌锅；酒精灯：锥形烧瓶；量筒：灭菌刻度吸管：ｌＯｍｌ、２ｍｌ、ｉｍｌ；试管。

Ｉ．３．培养基和试剂
生理盐水：ＳＣＤＬＰ液体培养基：卵磷脂、吐温８０一营养培养基：乳糖胆盐培养基：蛋白胨水：靛基质试剂：十六烷三甲基溴化铵培养基；绿脓菌素测定用培养基：硝酸盐蛋白胨水培养基：普通琼脂斜面培养基：血琼脂培养基；甘露醇发酵培养基：血浆：孟加拉红培养基。

ｌ＿４挑战用微生物
测试用菌种由天津市卫生防病中心提供，霉菌和杂菌由实验室从污染产品中分离到的菌珠。

菌种包括：金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肺炎克雷伯氏菌、大肠埃希氏菌。

实验前，将各菌种接种于合适的培养基中，于３７。

Ｃ（细菌）和２８℃（霉菌）培养箱中培养。

细菌培养４８小时，霉菌培养７２小时后，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中制成～定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。

１．５待测样品
选择了８种化妆品基质，其中膏霜２种、乳液２种、水剂２种。

按相同的防腐体系常规方法加入基质中，在进行微生物挑战性实验前预先进行细菌总数及霉菌和酵母菌的测定，试验样品的菌落数均应小于１０，作为待测样品。

１．６接种的方式和数量
接种的方式：采用混合接种。

因为自然界的微生物有混生杂居的特点，所以混合接种符合实际污染的情况。

接种的数量：将各菌种接种于合适的培养基中，于３７。

Ｃ（细菌）和２８。

Ｃ（霉菌培养箱中培养。

细菌培养４８小时，霉菌培养７２小时后，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中制成～定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。

细菌：每克悬液含菌量为５Ｘ１０８ｃＦｕ／克或ＣＦＵ／ｎ，１；霉菌；每克悬液含菌量为３×１０６ＣＦＵ／克或ＣＦＵ／ｍｌ。

１．７微生物挑战实验
称取８种化妆品基质样品各１００克，加入灭菌的容器内，加入混合细菌和霉菌悬液，充分混匀。

每克样品含细菌量为５Ｘ１０６ＣＦＵ／克或ＣＦＵ／Ｍ；含霉菌量为３×１０４ＣＦＵ／克或ＣＦＵ／ｍｌ。

然后置于２８。

Ｃ下。

在接菌的０、７、１４、２１、２８天取样分析：准确称取１０克样品，加到含有玻璃小球和９０ｍｌ灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀，此悬液为１：１０稀释液：然后再用生理盐水按１：１０依次稀释。

按平板倾注法计数样品中含菌量细菌培养３７。

Ｃ下４８小时；霉菌培养２８。

｜Ｃ下７２小时。

１．８评价方法
在２８天全部降至小于ＩＯＣＦＵ／ｇ（ＣＦＵ／ｍ１）视为防腐效果优秀，在第７天下降到１０００ＣＦＵ／ｇ（ＣＦＵ／ｍ１）以下视为勉强通过，其它视为不通过。

２．实验结果与讨论
在接种的０、７、１４、２ｌ和２８天取样检测，其结果如下表：
微生物挑战试验结果（混合菌量）（ＣＦＵ／ｇ）
样品菌种初始浓第０天第７天第１４天第２ｌ天第２８天评价
度
膏霜ｌ＃细菌５×ｌ０６４×１舻（１０＜１０（１０＜１０、，霉菌３×１０４３Ｘ１０４（１０（１０（１０（１０
膏霜２＃细菌５×１０６５×１０６２×１０。

４×１０４（１０（１０Ｘ霉菌３×１０４３×ｉ０４２×１０３（１０（１０＜１０
５×１０６
膏霜３＃细菌２Ｘ１０６（１０（１０（１０（１０√
３×１０４
霉菌３×１０４（１０（１０（１０（１０
乳液１＃细菌５×１０６５×１０６３×１０４６×１０４２×１０５２×１０６×霉菌３×１０４３Ｘ１０４（１０（１０＜１０（１０
乳液２＃细菌５×１０６５×１０６（１０（１０（１０（１０√霉菌３Ｘ１０＇３×１０４（１０（ｔ０＜ｉ０《１０
乳液３＃细菌５×１０６４×１０６（１０（１０（１０（１０√霉菌３×１０４２×１０４（１０（１０（１０（１０
水剂ｌ＃细菌５×１０６５×１０６（１０（１０（１０（１０√霉菌３Ｘ１０４３×１０４（１０（１０（１０（１０
水剂２＃细菌５×１０６４×１０６＜１０（１０＜１０（１０√霉菌３×１０４３×１０４（１０（１０（１０（１０从表中可以看到，２＃膏霜和Ｉ＃－￥Ｌ液没能通过微生物挑战试验，而其它产品则通过了试验。

一个
有效、稳定的防腐体系的存在是保证产品保质期质量的重要因素，但它并不能替代良好的严格的生产操作工艺，而原材料质量、包装设计、货架期以及消费的使用（包括可预见的误用）等因素都会对化妆品中微生物的污染产生影响。

化妆品中微生物的污染主要有两种途径，一是在化妆品制造过程中受到的污染，称为一级污染，包括设备、原料、生产及包装四个过程。

另一种途径是在消费者的使用过程中造成的污染，称为二级污染。

除了配方中的防腐体系，正确控制和完善这些因素也是提高产品微生物质量的保证“’。

３．结论
原料选择、配方组合、生产设备、生产过程、存放条件及使用过程都会对产品微生物稳定性产生影响，配方师调配方过程中应考虑防腐剂的品种、使用剂量及合理配伍等，但对最终产品直接进行微生物挑战试验最为客观和重要“１”。

以上试验表明，虽然上述产品防腐体系相同，但由于产品体系不同（膏霜、乳液及水剂），产品功能不同，加入的成分也不完全相同，所以防腐效果也不尽相同。

配方师可以参照试验结果对没有通过测试的产品配方的防腐体系进行调整，正确选择防腐体系以保证产品质量。

参考文献
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ＴｈｅＭｉｃｒｏｂｉａｌＣｈａｌｌｅｎｇｅＴｅｓｔｏｆＣｏｓｍｅｔｉｃｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔｓ：Ｔｈｅｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓｏｆｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔｆｏｒａｓｅｒｉｅｓｏｆｐｒｏｄｕｃｔｓｉｓｓｔｕｄｉｅｄｉｎｔｈｅｓａｎｌｅｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍ，ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏＣＴＦＡ＇ｓｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｏｎｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄ：Ｐｒｅｓｅｒｖａｔｉｖｅｓｙｓｔｅｍ，ＭｉｃｒｏｂｉａｌＣｈａｌｌｅｎｇｅｔｅｓｔ，Ｃｒｅａｍ，ＭｉｌｋＴｏｎｅｒ．
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