无菌检验
无菌检验方法验证
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无菌检验阳性结果调查
实验室调查：一个合适的调查程序和记录是必要的
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无菌检验阳性结果调查
若产品不合格，必须通过该批生产过程回顾找出污染 原因和污染源 –人 – 物料 – 环境 – 设备 – 方法和工艺
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方法二：用实验确定是否具有抑菌性的方法 在规定量的供试液中加入实验用微生物10~100个，
如微生物生长良好，即说明供试品对该种微生物无抑 菌活性。如已用药典规定的各试验菌试验，结果均能 生长良好，说明供试品无抑菌性，可用常规方法检验 之。将这些试验记录在案——就是证明该供试品无抑 菌性的验证试验部分；如加入的微生物不生长或生长 缓慢，说明供试品有抑菌性，将这些试验记录在案— —就是证明该供试品有抑菌性的验证试验部分；如加 入的微生物中有某一种菌最不能生长或生长最缓慢， 这一种菌就是该样品的敏感菌。
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验证试验和对验证结果技术评价的判断为：如平行3 次的试验中，各管微生物均生长良好，说明供试品 已消除了抑菌活性。可以确定按该方法进行该品种 的无菌检查；如有供试品管的微生物生长微弱、缓 慢或不生长，说明供试品仍有抑菌活性，应考虑进 一步增加冲洗量或中和剂的用量以消除抑菌活性， 并重新验证，直至验证证明已充分消除或有效降低 抑菌活性。
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
无菌检验技术—无菌检查原理
• (3)冲洗剂，即用于冲洗开放性伤口或腔体的冲洗剂。
• (4)眼用制剂。
• (5)用于烧伤、创伤或溃疡的制剂。包括：用于烧伤或严重创伤的局部用 散剂、凝胶剂、软膏剂、乳膏剂；用于烧伤、创伤或溃疡的气雾剂和喷 雾剂等。
• (6)用于手术、耳部伤口或耳膜穿孔的滴耳剂或洗耳剂。 • (7)用于手术或创伤的鼻用制剂。 • (8)用于止血并可被组织吸收的制剂。如明胶发泡剂、凝血酶等，用于止
• 1.2无菌检查的一般方法 • 无菌检查需用最严格的无菌操作法将被检查的药品或材料的样本分别接 种于适合各种微生物生长的不同培养基中，于不同的适宜温度下培养一定 的时间，逐日观察微生物的生长情况，并结合阳性和阴性对照试验的结果 ，判断供试品是否被微生物污染，从而判断供试品是否合格。
• 无菌检査法一般包括薄膜过滤法和直接接种法。前者适用于有抗菌作用 或大容量的供试品如抗生素青霉素钠注射液和5%葡萄糖注射液(500ml)， 后者适用于小容量非抗菌作用的供试品如维生素B12注射液(1ml)。
• 无菌检查应在环境洁净度B级和局部洁净度A级的单向流空气区域內或隔 离系统中进行，其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染。单向 流空气区、工作台面及环境应定期按现行国家标准进行洁净度验证。
• 1.5无菌检查一般步骤 • (1)玻璃仪器的洗涤、干燥、包扎、灭菌。 • (2)培养基的制备及适应性检查 • (3)无菌检查环境的测定。 • (4)菌悬液的制备。 • (5)检查方法验证。 • (6)样品的无菌检查。 • (7)报告检查结果。
• 1.3无菌检查的范围 • 凡进入人体无菌部位(人体的血液循环系统、肌肉、皮下组织)或接触创
伤、溃疡面等部位而发生作用的制品或要求无菌的材料、无菌器具均应 进行无菌检查。对于规定灭菌的药物，包括注射剂及用于体腔、严重烧 伤、溃疡及眼科用药等，必须严格无菌，即在规定检验量的供检品中不 得检出活微生物。
无菌检验标准操作规程(最全)
无菌检验标准操作规程一、目的无菌检验是指检查经灭菌方法处理后的医疗器械(具)、植入物品、敷料等是否达到无菌标准的一种方法。
临床部门不应常规进行无菌检验，如有需要，可联系当地疾病预防控制中心派专人来采样检测。
二、试验前准备1．无菌检验应在洁净度为100级以上的洁净实验室内实施，并证实该实验室各项指标符合GB50073—2001《洁净厂房设计规范》、GB／T16292～16294—1996《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》等相关要求，且在有效期范围之内。
2．按卫生部《消毒技术规范》(2002年版)制备无菌检验用洗脱液、需氧一厌氧培养基与真菌培养基(见附)。
3．在无菌检验前三日，分别在需氧一厌氧培养基与真菌培养基内各接种1ml洗脱液，分别置30～35℃与20～25℃：培养72h，应无菌生长。
4．阳性对照管菌液制备：(1)在检验前一天取金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]的普通琼脂斜面新鲜培养物，接种一环至需氧一厌氧培养基内，在30～35℃培养16～18h 后，用0．9％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml(可通过比浊法或稀释后用1m1接种平板来确认)。
(2)取生孢梭菌[CMCC(B)64941]的需氧菌、厌氧菌培养基新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于30～35℃培养18～24h后，用0.85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
(3)取白念珠菌[CMCC(F)98001]真菌琼脂培养基斜面新鲜培养物一接种环种于相同培养基内，于20～25℃培养24h后，用0．85％无菌氯化钠溶液稀释至10～100cfu／ml。
三、样本制备根据检样的类型与大小，以及带孔(腔)与否，可以按照以下不同的方法进行制备。
1．敷料类等非管道类样品：取2个包装内的样本，剪成约10mm×30mm 大小的样片21片，接种需氧一厌氧菌培养管5管与真菌培养管2管。
每培养管含培养基40m1，各接种3片样片。
无菌检验操作规程
无菌检验操作规程无菌检验操作规程一、目的和适用范围为了保证实验室无菌检验的准确性和可靠性，规范无菌检验操作，并确保实验室工作人员的安全和健康，特制定本操作规程。
本操作规程适用于实验室进行无菌检验的所有工作，包括培养基制备、无菌器具处理、样品采集和处理、培养方法等方面。
二、基本要求1. 实验室应具备无菌检验所必需的设施和设备，并保持良好的清洁卫生环境。
2. 实验室工作人员应严格按照操作规程进行操作，并保持良好的个人卫生习惯。
3. 实验室应保证培养基的质量，确保无菌性和适用性。
4. 实验室应建立必要的记录和档案，对无菌检验的结果进行及时记录和分析。
三、无菌器具处理1. 确保无菌器具的质量，每批次器具在使用前应进行质量检验。
2. 器具的清洗和消毒应在专门的消毒台上进行，使用无菌的工具和材料。
3. 清洗器具时应使用无菌特效洗涤剂，并充分冲洗干净。
消毒时应使用适当浓度的消毒剂，消毒时间应符合标准要求。
4. 清洗后的器具应存放在无菌柜或密封的袋子中，以防再次污染。
四、样品采集和处理1. 采集样品前，要对采样器具进行清洁和消毒处理，并使用无菌容器保存样品。
2. 采样时要保持无菌采样器具的封闭性，避免外界环境的污染。
3. 对于液体样品，应在无菌操作台上进行，严禁倒杯操作。
对于固体样品，应在无菌条件下处理。
4. 样品采集完成后，应及时将采样器具和容器送到实验室，并妥善保存，以防止再次污染。
五、培养基制备1. 制备培养基的操作应在无菌操作台上进行，工作台面应经过清洁和消毒处理。
2. 使用的培养基应经过质量检验，确保无菌性和适用性。
3. 制备培养基时，要注意保持操作的无菌性，避免污染。
4. 制备完成的培养基应标明名称、批号和有效期，并妥善保存，避免污染和变质。
六、培养方法1. 培养前要将培养基及所需器具放置在无菌操作台上，以使其达到与环境相同的温度。
2. 培养时要保持培养器具的密封性，避免外界空气和微生物的污染。
3. 培养容器的开启和关闭要快速，并尽量避免与空气接触时间过长。
医疗器械无菌检验
医疗器械无菌检验无菌检验是医疗器械质量检验中的重要环节，旨在保证医疗器械在使用过程中没有细菌或其他微生物污染，以降低感染的风险。
本文将从无菌检验的定义、检验方法和检验标准等方面介绍医疗器械无菌检验的相关知识。
一、无菌检验的定义无菌检验是通过一系列实验方法和对医疗器械进行质量评定的过程，用以确认器械能否达到一定的无菌状态。
无菌状态是指器械在使用过程中没有细菌、真菌、病毒或其他寄生虫等微生物的污染。
二、无菌检验的方法常见的无菌检验方法包括菌落总数检验、微生物限度试验和生物指示物检验。
1. 菌落总数检验菌落总数检验是通过在含营养物质的培养基上培养菌落，并计算菌落的数量来评估医疗器械的无菌状态。
常用的培养基有营养琼脂培养基和加入抑菌剂的营养琼脂培养基。
菌落总数的限度标准根据具体的器械和使用环境的要求而不同。
2. 微生物限度试验微生物限度试验旨在评估医疗器械中特定微生物的污染情况。
根据器械的特点和使用要求，可以选择进行不同的微生物限度试验，例如大肠菌群、金黄色葡萄球菌等。
试验方法一般采用培养方法和定量方法。
3. 生物指示物检验生物指示物检验是通过使用已知数量的高度耐热的生物指示物，如枯草杆菌孢子，来评估医疗器械的无菌状态。
将生物指示物置于器械的内部或表面，经一定条件处理后，通过监测生物指示物生长情况来判断是否满足无菌标准。
三、无菌检验的标准医疗器械无菌检验的标准一般由国家卫生与计划生育委员会和相关行业标准制定机构制定。
对于不同的医疗器械，一般会根据其使用环境、材料特性和功能等因素制定不同的无菌检验标准。
常见的无菌检验标准包括国家标准、行业标准以及国际标准，如GB19082-2009《医用防护服的无菌要求》和ISO 11137《辐射灭菌》等。
四、无菌检验的重要性无菌检验在医疗器械质量控制中起到至关重要的作用。
医疗器械在手术、检验和治疗等过程中接触人体的内腔和外表面，如存在细菌等微生物的污染，将会增加感染的风险，导致患者健康受损甚至致命。
产品无菌检验操作规程
产品无菌检验操作规程一、引言无菌检验是产品质量控制中一项重要的程序。
本操作规程旨在规范无菌检验的操作步骤，确保产品达到无菌检验标准，保证产品质量和安全性。
二、检验前准备1. 检验员应按照要求穿戴无菌工作服，并佩戴口罩、手套和帽子等相关防护装备。
2. 准备好检验所需的器械和试剂，包括培养基、试管、针头、培养皿等。
3. 确保工作区域的清洁和无菌，使用消毒剂对操作台面进行消毒。
4. 检验前应对培养基和试剂进行严格的质量控制，确保其无菌性。
三、样品准备1. 根据产品特性和规定要求，选择合适的样品量，并在符合无菌操作条件下进行取样。
2. 将样品转移到无菌试管或培养皿中，避免污染。
3. 特殊产品的样品准备应根据产品特性和相应的要求进行试验。
四、培养基接种1. 使用无菌针头，将样品均匀接种于含有培养基的培养皿中。
2. 对于液体产品，将样品转移到含有培养基的试管中，并确保样品和培养基充分混合。
3. 确保培养基接种过程中无空气污染，避免培养皿或试管周围的细菌进入培养基。
五、培养条件控制1. 根据产品特性和试验要求，选择适宜的培养温度和时间，并进行相应的标注。
2. 确保培养过程中温度的稳定性和恒定性，避免对微生物生长产生影响。
3. 需要进行气体环境控制的试验，应在无菌条件下进行，并根据要求调节相应的气体浓度和流速。
4. 在培养过程中需注意观察培养皿或试管的状态，及时记录培养结果。
六、检验结果判读1. 在规定的培养时间后，检查培养皿或试管中是否有细菌菌落的形成。
2. 对于有细菌菌落形成的培养皿或试管，使用显微镜进行观察，确定是否有可疑细菌。
3. 对于液体产品，进行相关的物理化学指标测定，确定是否符合质量标准。
4. 根据样品的培养结果和其他相关数据，判断产品是否符合无菌要求。
七、记录和报告1. 检验员应及时记录无菌检验的操作步骤和检验结果，确保数据的准确性和可追溯性。
2. 写明样品的标识、培养温度和时间等相关信息。
3. 对于不合格的样品，应及时通知相关部门，并进行相应的处理。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程随着医疗技术的不断发展，医疗器械在诊疗中的作用越来越重要。
在医疗器械的生产过程中，无菌是一个非常重要的环节。
本文将介绍医疗器械产品无菌检验的操作规程，以确保医疗器械的安全和可靠性。
一、无菌检验的重要性医疗器械在使用过程中与人体直接接触，如不具备无菌性，会引起严重的感染问题。
因此，无菌检验是确保医疗器械产品质量的重要环节。
只有通过无菌检验，才能保证医疗器械的无菌性，从而有效地减少感染的风险。
二、无菌检验操作规程（一）准备工作1. 确保检验环境的洁净度：无菌检验需要在无菌条件下进行，因此应确保检验环境的洁净度。
工作区域应进行深度清洁，并使用有效的空气过滤系统和洁净工作台。
2. 准备必要的无菌材料：无菌检验操作所需的材料包括无菌培养基、培养皿、观察镜等。
这些材料应该在使用前进行无菌处理，并且要保持密封。
3. 检查设备和工具的完好性：确保所使用的设备和工具没有损坏或者污染。
损坏或污染的设备和工具可能影响无菌检验的准确性和有效性。
（二）无菌检验操作步骤1. 样品采集：根据具体要求，采集待检样品。
样品采集应在无菌条件下进行，以避免外界污染。
2. 样品处理：将样品置于无菌室内进行处理。
首先，应对样品外表进行目测观察，排除明显可见的外部污染。
然后，将样品放入无菌培养皿中，采用湿敷法、浸润法等方法进行培养基的接种。
3. 培养：将培养皿放入恒温培养箱中，设置适当的温度和培养时间。
在培养过程中，需要定期观察培养皿内的情况。
4. 结果判断：根据培养结果，判断样品是否具备无菌性。
常见的无菌检验结果包括阳性、阴性和疑似阳性。
阳性结果表示样品中存在微生物生长，即不符合无菌要求；阴性结果表示样品无细菌生长，满足无菌要求；疑似阳性结果需要进行进一步的确认和处理。
5. 结果记录和报告：将检验结果进行详细记录，并根据需要制作无菌检验报告。
报告中应包括样品标识、检验结果、检验日期等信息，以便后续跟踪和管理。
4无菌检验方法验证
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无菌检验方法验证
1.ONE
开展验证的思路和程序
首先了解供试品是否具有抑菌性，抑什么菌
2.TWO
考虑和选择出适当的方法已消除或减低供试品的抑菌性
3.three 4.four
用实验证明你所用的方法已消除抑菌性——能使人工加 入的各种菌生长良好。
将所作实验记录在案——即为确认该供试品在该检验量
条件 无菌检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净 度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行， 其全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污 染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物 的检出。
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无菌检验方法验证
方法验证试验 当建立产品的无菌检查方法时，应进行
六、验证结论。
七、【检查】项下【无菌】或【微生物限度】具体方法确定。
八、实验员签名、验证报告批准人签名。
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无菌检验阳性结果调查
无菌检查试验所用的设备及环境的微生物监控结果 不符合无菌检查法要求
回顾无菌测试过程，发现有可能引起微生物污染的 因素
阴性对照有菌生长
稀释：—— 验证降低供试品相对抑菌浓度的有效稀释 倍数。
离心：—— 验证所用转速、时间和微生物的分YO布UR情SIT况E H。ERE
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3、确定供试品是否有抑菌性、抑什么菌 方法一： 可通过查阅临床药物实验手册、文献资料 （特别是杂志“Drug”，每一种新药上市，都有专 门的综述）、申报资料中的药效学资料，关注其对不 同细菌的MIC情况、参考已经验证过的品种、抗菌 药物可根据抗菌谱确定其敏感菌、中成药如果抗菌谱 不清楚，至少需选择一株细菌和一株真菌来试验等方 法。也可直接通过验证实验确定之。
无菌检查.操作规程
无菌检查.操作规程无菌检查是指对无菌状态的物品、器械、培养基等进行检查，以确定其是否具有无菌性的一种操作。
无菌检查主要是为了保证医疗器械和药品的质量，防止传播致病菌和交叉感染。
下面是无菌检查的操作规程，共1200字。
一、仪器与试剂准备1. 玻璃器皿：无菌检查中常使用的玻璃器皿应先清洗，然后用高压蒸汽高温灭菌。
确保玻璃器皿表面没有任何污物和细菌。
2. 培养基：根据需要选择适当的培养基，如营养琼脂、肉膏琼脂等。
使用前应检查培养基包装是否完好，是否过期，如有问题应废弃，以免影响检测结果。
3. 培养皿：无菌培养皿应提前准备好，如果有无细菌培养基的培养皿，最好优先选择使用。
4. 培养皿贴壁：无菌贴壁是为了避免液体滴入培养皿内引起细菌污染，使用前应检查贴壁是否完好。
5. 双口试管：用于无菌培养物的传递，提前准备好。
二、人员准备工作1. 手部卫生：进行无菌检查前，操作人员应进行手部卫生，包括洗手和消毒。
先用流动水清洗手部，然后使用75%酒精进行消毒。
2. 穿戴无菌操作服：无菌检查需要穿戴无菌操作服，操作服要求干净、整洁，且经过高温蒸汽灭菌。
穿戴手套前，应先检查手套是否完整、无损。
3. 工作台表面消毒：将工作台表面用70%酒精进行擦拭消毒，确保无菌操作环境。
三、操作步骤1. 取一份待检物品：如医疗器械或药品，然后进行外观检查。
确保物品包装完好，无明显损伤和破损。
2. 打开培养皿：将培养皿的盖子拉开一些，方便后续操作。
3. 将待检物品放入培养皿：用镊子或无菌力ps，将待检物品放入培养皿内，尽量避免让待检物品直接接触培养皿的边缘。
4. 培养皿倒置：将培养皿倒置放于工作台上，检查物品是否有菌落生成。
5. 灭菌培养皿口：用长火柴将培养皿上的边缘逐一燃烧，防止细菌飞溅和传播。
6. 检查结果：观察培养皿上是否有菌落生成。
如果有菌落，则证明待检物品不符合无菌要求；如果无菌皿上没有菌落生成，则证明待检物品具有无菌性。
7. 结果记录：将无菌检查结果记录在检验记录表格上，包括待检物品的名称、批号、检查日期等信息。
产品无菌检验操作规程
产品无菌检验操作规程1.目的2.范围本操作规程适用于生物制品、医疗器械等无菌产品的无菌检验。
3.定义3.1无菌状态：指产品中不存在可繁殖的微生物，无细菌、真菌、病毒等微生物的存在。
3.2细菌菌落计数：针对产品表面的微生物菌落，用来评价产品表面的微生物污染情况。
3.3结果解释：根据无菌检验的结果判断产品是否通过检验或被污染。
4.用具和试剂4.1不锈钢操作台：用于操作无菌检验的工作台。
4.2灭菌器：用于对试剂、无菌操作的用具等进行灭菌处理。
4.3滑板培养基：可供细菌、真菌的培养和分离。
4.4特制无菌采样器：用于取样时保持无菌状态。
5.环境要求5.1操作室温度控制在20-25摄氏度。
5.2操作室相对湿度控制在45%-60%。
5.3操作室应保持无尘、洁净状态，避免与其他非无菌产品接触。
6.操作流程6.1准备工作6.1.1检查操作台的无菌状态，保证干净无尘。
6.1.2检查灭菌器的工作状态，保证灭菌的效果。
6.1.3上岗前必须进行手部消毒，并将手部放入操作台内的空气幕进行吹干。
6.2取样6.2.1使用特制无菌采样器，取样前注意采样器的无菌状态。
6.2.2将特制无菌采样器放入培养基中，取出后使用。
6.2.3按照相应的取样方法进行取样，注意取样的过程中避免污染。
6.3培养6.3.1将取样后的特制无菌采样器立即放入滑板培养基上，进行培养。
6.3.2滑板培养基进行按照接种方法进行培养，注意培养的温度和时间。
6.3.3培养后的滑板培养基进行观察和计数，记录细菌菌落的数量。
6.4结果解释6.4.1根据滑板培养基上的菌落数量判断产品是否通过无菌检验。
6.4.2如果滑板培养基上有菌落，需要进一步进行鉴定和分离。
7.记录和报告7.1无菌检验过程中的操作记录，包括取样时间、温度、湿度等。
7.2无菌检验结果的记录，包括滑板培养基上的菌落数量和鉴定结果。
7.3不合格产品的处理记录，包括如何处理不合格产品及原因分析。
7.4无菌检验报告，根据记录编制无菌检验报告，并归档保存。
无菌检验方法适用性试验方案
无菌检验方法适用性试验方案无菌检验是一种用于确认样品是否含有微生物的技术方法，广泛应用于药品、医疗器械、食品等行业中。
为了确保无菌检验方法的可靠性和准确性，需要进行适用性试验。
本文将详细介绍无菌检验方法的适用性试验方案。
一、背景介绍二、试验目的1.验证培养基的适用性：验证所选培养基是否能够有效地促进微生物的生长，并区分不同的微生物种类。
2.验证培养条件的适用性：验证所选培养条件（如温度、湿度、压力等）对于无菌检验结果的影响。
3.验证无菌器材的适用性：验证所选无菌器材是否能够有效地防止微生物的污染。
三、试验内容1.培养基适用性试验（1）准备不同类型的培养基，如营养琼脂、马铃薯葡萄糖琼脂、选择性琼脂等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物（如大肠杆菌、枯草杆菌、白色念珠菌等）。
（3）分别在不同培养基上培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养基上的菌落计数结果，评估培养基的适用性。
2.培养条件适用性试验（1）选取不同的温度、湿度、压力等培养条件。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）在不同培养条件下培养，并进行菌落计数。
（4）比较同一微生物在不同培养条件下的菌落计数结果，评估培养条件的适用性。
3.无菌器材适用性试验（1）准备不同类型的无菌器材，如培养皿、试管、注射器等。
（2）分别接种已知数量的目标微生物。
（3）使用无菌器材进行培养，并进行菌落计数。
（4）比较不同无菌器材上的菌落计数结果，评估无菌器材的适用性。
四、数据处理和结果分析根据试验结果进行数据统计和分析，并评估不同培养基、培养条件和无菌器材的适用性。
可以使用统计方法，如t检验、方差分析等，对数据进行处理和分析，以验证试验结果的可靠性。
五、质量控制1.试验过程中要严格遵循无菌操作规程，防止试验过程中的交叉污染。
2.试验中使用的培养基、培养条件和无菌器材应符合相关标准和规范，确保试验结果的可靠性。
六、结论根据试验结果，对所选的无菌检验方法进行适用性评估，判断其是否符合要求。
无菌工艺和无菌检验
灌封为万级环境下的局部百 级
生物负荷、耐热性灭菌 釜中的温度控制
生物负荷（设置警戒线）灌封 区不得检出污染菌，过滤前后 滤膜的完整性检查
要求严格
更严格（操作方式、走动缓慢、 身体表面微生物的检测……）
27
无菌生产工艺工艺验证要点： 无菌工艺模拟或 培养基灌装验证
28
解读：PDA Technical Report N0.22
GMP附录1：无菌药品 第十条（二）： A级区监测的频率及取样量，应能及时发现所有人为干预、 偶发事件及任何系统的损坏。
38
模拟的无菌工艺应该包含（1）：
（FDA的建议）
最长的无菌生产、操作时间 无菌生产中每次发生的干预事件 冷冻干燥 设备的无菌组装 人员数目和活动 无菌条件的转移 交接班变化、中断和衣物更换
以生物负荷（产品灭菌前微生物污染水 平）为基础的方法，用于生产过程中很少检 出芽孢，产品稳定性较差，只能适度灭菌的 产品。
15
过度杀灭法 Overkill process
适用于稳定性很好，能经受苛刻灭菌条 件的产品。
16
过度杀灭法 VS 残存概率法
17
灭菌抉择树：
能否121℃、15分钟湿热灭菌
19
灭菌工艺与生物负荷的关系：
灭菌工艺
灭菌前生物负荷控制级别
过度杀灭 F0≥12
残存概率 F0≥8
F0＜8
低。 不必每批监控污染菌
高。 应每批监控污染菌,尽量加入除 菌过滤器,应有原料微生物标准
很高。 必须采用除菌过滤器,每批监 控灭菌前污染菌(或过滤前污染菌),监 控每批灌装区的环境
无菌生产工艺类别
Process Simulation Testing for Aseptically Filled Products
卫生学检查技术—无菌检查法
无菌检查法
一、基本知识
（一）基本概念 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、医疗器
具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。
（二）检查对象 各类注射剂、吸入粉雾剂、眼用制剂、可吸收的止
血剂、用于手术、烧伤及严重创伤的局部给药制剂等
二、无菌ห้องสมุดไป่ตู้查的人员与环境
无菌检查的人员：具备微生物专业知识，并经无菌技术培训。 无菌检查环境：环境洁净度为10000级下的局部洁净度100级的单向 流空气区域内或隔离系统 无菌检查要求：全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防 止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。日常检验还需对试 验环境进行监控。
三、供试品的无菌检查
阳性对照 应根据供试品特性选择阳性对照菌，选择方法可以见下表。阳性对照试验的菌
液制备同方法验证试验，加菌量小于100cfu，供试品用量同无菌检查每份培养基 接种的样品量。阳性对照管培养48～72小时应生长良好。
不同特性的供试品
无抑菌作用 及抗革兰氏阳性菌为主
阳性对照菌 金黄色葡萄球菌
试验若经确认无效，应重试。重试时，重新取同量供试品， 依法检查，若无菌生长，判供试品符合规定；若有菌生长， 判供试品不符合规定。
抗革兰氏阴性菌为主
大肠埃希菌
抗厌氧菌的供试品
生孢梭菌
抗真菌的供试品
白色念珠菌
三、供试品的无菌检查
阴性对照 供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释剂，冲洗液同法操作，作为
阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 无菌试验过程中，若需使用表面活性剂、灭活剂、中和剂等试剂，应
证明其有效性，且对微生物无毒性。 中国药典的“无菌检查法”有直接接种法和薄膜滤过法两种。只要供试
《无菌检验原始记录》资料
无菌检验原始记录资料1. 引言本文档为《无菌检验原始记录》资料的详细记录和分析。
无菌检验是指在无菌条件下对物品进行检验，以确定其中是否存在细菌或其他微生物的方法。
本次无菌检验涉及的物品包括药品、医疗器械、食品等。
本文档将提供检验过程的详细记录，并分析结果以评估物品的无菌性能。
2. 检验对象及目的2.1 检验对象本次无菌检验的对象为医疗器械A。
2.2 检验目的检验医疗器械A是否符合无菌要求，以评估其无菌性能。
3. 检验方法3.1 前期准备•清洁工作台：使用消毒剂对工作台进行彻底清洁，并进行适当灭菌处理。
•检验器具：收集所需的各种无菌器具，如培养皿、无菌填料等。
•培养基：准备适当的培养基。
3.2 检验步骤1.将医疗器械A放置在清洁工作台上，检查其外部是否有明显污染。
2.使用消毒液对医疗器械A进行清洁，消毒时间为10分钟。
3.将清洁后的医疗器械A放入无菌培养皿中。
4.将培养皿密封并标记，以便后续分析。
5.将培养皿放入适当的培养基中，培养时间为24小时。
6.培养结束后，观察培养皿中是否有细菌生长。
7.根据细菌生长情况，评估医疗器械A的无菌性能。
4. 实验结果经过24小时的培养，观察到培养皿中无任何细菌生长。
因此，医疗器械A符合无菌要求，具有较好的无菌性能。
5. 结论和建议根据本次无菌检验的结果，可以得出以下结论和建议：1.医疗器械A通过了无菌检验，满足无菌要求。
2.建议继续保持对医疗器械A的无菌条件管理，并进行定期检验，以确保其无菌性能。
6. 参考文献1.无菌检验技术规范，国家药典委员会、中国食品与药品监督管理局。
2.WHO《无菌技术指南》。
本文档详细记录了《无菌检验原始记录》的实验步骤、检验结果以及结论和建议。
通过本次检验，我们可以对医疗器械A的无菌性能进行初步评估，并提出后续管理建议，以确保其安全使用。
医疗器械产品无菌检验操作规程
医疗器械产品无菌检验操作规程一、目的：为了保证医疗器械产品的无菌性，减少感染的风险，确保器械在使用前不会对患者产生任何不良影响。
二、适用范围：适用于医疗器械产品的无菌检验操作。
三、设备与工具：1.灭菌器：包括高压蒸汽灭菌器和乙烯氧化物灭菌器。
2.无菌室：应具备无菌室必备的设备，如无菌工作台、超净台和灭菌器等。
3.操作工具：包括手套、无菌棉签、无菌剪刀、无菌镊子等。
四、检验步骤：1.准备工作：(2)检查设备与工具的正常工作状态，如灭菌器是否正常运行，无菌室的洁净程度等。
(3)检查器械包装是否完好无损，无破损、打开或湿润的情况。
2.环境准备：(1)打开无菌室，确保无菌室内外的卫生环境。
(2)将要检验的医疗器械产品放置在无菌工作台上，避免与非无菌物品接触。
3.无菌检验操作：(1)佩戴手套并将其消毒，确保双手干净。
(2)打开器械包装，注意保持包装内物品的无菌性。
(3)使用无菌棉签、无菌剪刀或无菌镊子等工具检查器械的外观，如有任何异常，应及时记录并报告。
(4)若器械需要使用前进行灭菌处理，则将其放入灭菌器中进行灭菌，按照灭菌器的操作规程进行处理。
(5)灭菌完成后，将器械取出并放置在无菌工作台上，等待其冷却。
(6)冷却后，使用无菌棉签或其他无菌工具进行取样，采样点应包括器械的各个部位。
(7)采样完成后，将无菌棉签放置在含有营养物质的培养基中，进行菌落培养。
(8)培养基培养一定时间后，观察培养基上是否有菌落生长，如有则说明器械不符合无菌要求。
5.清洁与记录：(1)清洁无菌工作台和使用的工具，保持无菌室的清洁。
(2)进行记录，包括器械的名称、批号、灭菌方式、采样结果等。
六、注意事项：1.操作者应注意个人的清洁和卫生，保证双手清洁且戴好手套。
3.在操作过程中，应尽量避免对器械进行过多的接触，以免造成污染。
4.检查无菌室的洁净程度并及时清理，保持其无菌环境。
七、附录：无菌检验操作记录表器械名称：批号：灭菌方式：采样结果：日期：时间：。
无菌检验的名词解释
无菌检验的名词解释无菌检验是一种用于判断物体是否无菌的检测方法。
所谓无菌，指的是物体中完全没有细菌、真菌、病毒和其他微生物的存在。
无菌检验通常应用于医疗、食品、制药等领域，确保产品的安全和质量。
一、无菌检验的原理与方法无菌检验的原理是通过将待检物体接触无菌培养基，培养一定时间，观察无菌培养基是否有微生物生长，以判断待检物体是否无菌。
常用的无菌检验方法有以下几种：1. 膜过滤法：将待检物体经由过滤膜滤过，将过滤膜放置在富含营养物质的培养基上，培养一定时间后观察是否有微生物生长。
2. 分装法：将待检物体分装到无菌培养基中，培养一定时间后观察培养基是否有微生物生长。
3. 表面刮取法：用无菌棉签或刮刀刮取待检物体的表面，将刮取物涂抹在培养基上，培养一定时间后观察是否有微生物生长。
4. 压榨法：将待检物体放入含有无菌溶液的压榨器中，施加压力，使其中的微生物被释放到无菌溶液中，然后将无菌溶液培养于培养基上，培养一定时间后观察是否有微生物生长。
二、无菌检验的重要性无菌检验在医疗、食品、制药等领域中具有重要意义。
1. 医疗领域：在手术、注射、输血等医疗过程中，无菌检验可以保证医疗设备和器械的无菌状态，减少交叉感染的风险。
2. 食品领域：无菌检验可以判断食品是否受到微生物污染，保证食品的安全和品质。
常见的食品无菌检验包括奶制品、肉制品、果蔬制品等。
3. 制药领域：药品的生产过程中，无菌检验是确保药品无菌性的重要环节。
药品生产过程中的患者用药、灌装、注射等环节都需要严格进行无菌检验。
4. 生物实验室：无菌检验是生物实验室中常见的操作，为保护实验样品的纯净性和独立性，无菌检验在实验室操作中起到关键作用。
三、无菌检验的应用领域无菌检验广泛应用于医疗、食品、制药和实验室等领域。
1. 医疗领域：手术室、ICU、产房、输血室等医疗场所都需要进行无菌检验，确保医疗设备和手术器械的无菌状态。
2. 食品领域：乳制品、肉类制品、果蔬制品等在生产过程中需要进行无菌检验，确保产品的卫生安全。
无菌检查法及其验证
※其中硫乙醇酸盐及改良马丁培养基都有 1支不接种作为空白 ※接种量 ＜100cfu（不能多）
无菌检查法及其验证
第14页
培养基适用性检验
⑤结果判断 空白对照应无菌生长, 若加菌培养基管均
生长良好, 判该培养基灵敏度检验符合要 求。 试验同时应做空白对照
无菌检查法及其验证
第15页
培养基说明
无菌检验培养基所能支持生长微生物是有 限。
无菌检验法概念
• 无菌检验是经过目检微生物在培养基中 生长来判断结果。
• 无菌检验只能给出该批产品受污染程度。 • 无菌检验合格只能说明被测样品无菌，
不能证实整批样品无菌。
无菌检查法及其验证
第1页
无菌检验设施、环境、人员
• 检验环境应在洁净度10000级下局部洁 净度100级单项流空气区域内或隔离系 统中进行, 其全过程必须严格恪守无菌操 作。
无菌检查法及其验证
第8页
培养基储存
• 制备好培养基应该保留在2-25℃、避光环 境, 若保留于非密闭容器中, 普通在3周内使 用；若保留于密闭容器中, 普通可在1年内 使用。
• ※应结合实际情况进行验证, 以确定培养基 使用期。
无菌检查法及其验证
第9页
培养基适用性检验
本检验可在供试品无菌检验前或与供试品 无菌检验同时进行。
液冲洗滤膜, 冲洗次数不得少于三次。 冲洗后, 如用封闭式薄膜过滤器, 分别将100ml硫
乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入对应 滤筒内。 假如采取普通薄膜过滤器, 取出滤膜, 将其剪成3等 份, 分别置于含50ml硫乙醇酸盐流体培养基及改 良马丁培养基容器中, 其中一份做阳性对照用。
无菌检查法及其验证
• 隔离系统按相关要求进行验证, 其内部环 境洁净度须符合无菌检验要求。
无菌检查的名词解释
无菌检查的名词解释无菌检查是一种常见的实验室检验方法，用于确定样品或环境中是否存在微生物的生长。
微生物是一类微小生物，包括细菌、真菌、病毒等。
无菌检查通常用于医疗环境、食品加工、制药工业以及生命科学研究等领域，以确保产品的质量和安全性。
1. 无菌检查的基本原理无菌检查的基本原理是通过将待检样品接种到富含营养物的培养基上，并在适宜的温度和湿度条件下培养一段时间，观察是否出现微生物的生长。
如果在培养期间没有观察到任何微生物的生长，则可认为该样品或环境是无菌的。
2. 无菌检查的常用方法- 前处理：无菌检查前，需要对待检样品进行适当的前处理。
例如，对于食品或药品样品，可以进行灭菌或消毒处理，以杀死或减少潜在的微生物污染。
- 培养基准备：根据待检样品的性质和预期的微生物污染情况，选择合适的培养基进行准备。
培养基一般包含营养成分、缓冲剂和某些抑菌剂，以促进特定微生物的生长和抑制其他微生物的生长。
- 接种方法：根据样品的特性，可以采用不同的接种方法。
常见的方法包括菌液接种、划线接种和擦拭接种等。
在接种过程中，需注意避免污染和交叉感染。
- 培养条件：根据待检样品中可能存在的微生物类型，选择适宜的培养条件进行培养，包括温度、湿度和培养时间等。
不同的微生物对环境条件有不同的要求。
- 结果解读：在培养一段时间后，观察培养基上是否有菌落的出现。
根据菌落形态、色素和其他特征，可以初步判断菌落的类型。
进一步的分离和鉴定则需要其他实验方法。
3. 无菌检查在医疗环境中的应用在医疗环境中，无菌检查被广泛应用于手术器械、药品、液体及其他医疗设备的质量控制。
在手术前和手术室清洁后，医护人员会对手术器械进行无菌检查，以确保手术过程中无细菌感染的风险。
此外，各类药品和液体也需经无菌检查，以防止医疗物品污染导致交叉感染或其他潜在危险。
4. 无菌检查在食品加工和制药工业中的应用食品加工和制药工业对产品的无菌性要求极高，因此无菌检查也被广泛应用于这些行业中。
无菌检测抽样方案
无菌检测抽样方案1. 引言无菌检测是医疗、生物制药、食品工业等行业中非常重要的检验项目之一。
无菌检测的目的是判断样品中是否存在微生物污染，保证产品的安全性和质量稳定性。
为了进行有效的无菌检测，需要制定合理的抽样方案来获取代表性样品。
本文将介绍一种基于无菌检测标准的抽样方案。
2. 抽样标准和要求在制定抽样方案之前，我们需要了解无菌检测的相关标准和要求。
无菌检测通常遵循以下标准：•ISO 11737-2：生物制品的无菌检验 - 微生物总数。
•USP <71>：注射用水、注射用溶液、眼用制剂等的微生物检验的质量控制方法。
•EP 2.6.1：无菌制剂微生物检验。
根据上述标准，无菌检测的抽样方案应满足以下要求：•单个样品应足够大，以便筛选潜在微生物污染。
•抽样方法应具备代表性，能够反映样品中微生物的真实情况。
•抽样过程要避免外界环境对样品的污染，确保无菌检测的准确性。
3. 抽样方案基于上述抽样标准和要求，我们提出以下无菌检测抽样方案：3.1 抽样器具准备•无菌手套：检测人员戴上无菌手套，避免手部细菌的污染。
•无菌取样器：使用无菌取样器，避免器具对样品的污染。
•无菌培养基：准备与要检测微生物类别相适应的无菌培养基。
3.2 抽样方法1.样品表面抽样：使用无菌取样器在样品表面轻轻刮取，保持取样器与表面的接触角度不大于45度。
2.悬浮液抽样：在取样器中加入一定体积的无菌缓冲液，通过旋转或震荡等方法将样品中的微生物悬浮于溶液中。
3.批量抽样：对样品进行亚批次的划分，从每个亚批次中分别取样，确保整个样品范围的覆盖性。
3.3 抽样区域选择•检测接触面：选择样品中可能与外界环境接触的区域进行抽样，例如样品表面、容器内壁、密封处等。
•重点区域：对于复杂结构的样品，需要根据经验和实际情况选择可能存在微生物聚集的重点区域进行抽样。
4. 抽样过程控制在抽样过程中，需要控制以下关键因素：1.工作区域的清洁：确保抽样环境的无菌状态，定期对工作区域进行消毒和清洁。
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杂菌计数 和病原性鉴定
细菌制品检测室
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2014-4-14
目的及用途
用于允许含一定数量杂菌疫
（菌）苗的检验鉴定。
2014-4-14
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1.杂菌计数
重新抽取样品3瓶
分别做50倍稀释，移植到含4%血 清及0.1%血红素的马丁琼脂（或G.A） 琼脂平板2只，37℃培养 48小时，室温24小时
数菌落数（CFU） 计算杂菌数
2014-4-14 9
检 验
2014-4-14
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一、 抽样
1、抽样原则： （1）随机抽取样品。 （2）注意：
抽样应有代表性。
2014-4-14 11
2、抽样数量：
（1）半成品： 对每瓶（罐）分别进行，2～ 10ml 。 （2）成品： 每批制品按生产量的1%抽样， 不能少于5瓶，最多不超过10瓶。
适用范围
适应于非SPF鸡胚制造 疫苗的检验。
2014-4-14
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培养物 S.S琼脂或麦康凯平板2付 挑选2-3菌落
O多1因子血清做玻片凝集反应
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O多1因子血清凝集反应
用白金耳在玻片上滴1-2滴因子 血清，再用白金耳取少量被检 物与因子血清混合，轻轻摇动 玻片，2分钟之内出现凝集反应， 判为阳性。
2014-4-14
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3.结果判定
小白鼠；豚鼠不应死亡或注射部 位化脓，如出现化脓；坏死等症 状，证明有病原菌，该批制品不 合格。
2014-4-14
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4.注意事项：
如同时污染需氧菌、厌氧菌， 依据两种鉴定方法同时进行。
2014-4-14
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禽沙门氏菌 检验
细菌制品检测室
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卡氏水分滴定仪。 电子天平。 计算机。 打印机。 程序驱动软件。 称量舟。
2014-4-14
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判定标准
各份样品含水量 不得超过 4% ， 如有超过时可重 检 1 次。
2014-4-14
44
谢谢各位
2014-4-14 45
无菌检验 或纯粹检验
细菌制品检测室
1
2014-4-14
概 述
2014-4-14
2
无菌检验或纯粹检验 原则依据：
1、各类生物制品（除另行规定 者外）都不应有外源微生物 污染。 2、灭活疫（菌）苗不得含有活 的本菌或本毒。
2014-4-14 3
无菌检验或纯粹检验
适应范围： 各类生物制品的无菌 检验或纯粹检验。
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2.病原性鉴定
需氧菌的鉴定
培养物移植到马丁肉汤在37℃培养
24小时，将培养物做100×稀释，接种 18～22g小白鼠3只，每只皮下注射 0.2ml，观察10日。
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厌氧菌鉴定
将培养物培养时间延长到96小时，放65℃水浴30 分钟，移植到T.G或厌气肉肝汤小管， 37℃培养 24～72小时，如有菌生长，接种350～450g豚 鼠2只，肌肉注射1ml，观察10日。
5.3 无菌室、生物洁净工作台，仅是避尘较 严密的操作室，并非完全无菌，所以在 检验样品的过程中必须注意器皿；工作 服的消毒处理，除操作人员本身洁净和 消毒外，还须注意周围环境的整净，防 止不需要的微生物侵入作业系统。 5.4 无菌检验培养基在检验的前1－2天，放 置温室进行预培养。
2014-4-14
2014-4-14
4
无菌检验用途（各类生物制品）
分类举例： 1、灭活制品（疫苗、菌苗、诊断制 品等）。 2、活制品 （1）菌（毒）、虫种。 （2）活疫（菌）苗。 3、虫（寄生虫）苗。
2014-4-14 5
无菌检验目的：
保证各类生物制品没有杂菌 污染。 灭活菌苗不含有活的本菌。
2014-4-14
6
纯粹检验：
活菌纯粹检验： 用适于本菌生长的培养基培 养。
2014-4-14
7
灭活检验：
用适于本菌生长的培养基， 或对本毒敏感的细胞、组织和 动物。
2014-4-148 Nhomakorabea相关检验示意图
无菌检验
各类生物制品
纯粹检验
细菌类制品
生物制品出现污染 杂菌计数 病原性鉴定 禽沙门氏检验 （除SPF鸡胚制品外）
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注意事项
5.1接到样品后首先检查样品外观即包 装是否破损，胶塞是否松动，瓶签是 否清楚，液体苗表层是否清亮，冻干 制品是否有真空。 5.2检验时选用处理过的吸管或注射器 抽取样品，为防止杂菌带入样品中， 一个样品用一个吸管或一个注射器， 以免交叉污染。
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冻干制品 剩余水分测定
细菌制品检测室
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█ 适应范围： 细菌、病毒类冷冻真空 干燥的生物制品。
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方法
1 、真空烘干法 2 、卡氏测定法（费休氏法）
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样品数量
每批次抽取 4份样品，每份 样品重量在 100 -300毫克 , 被检样品必须测定真 空度。
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主要仪器设备
真空烘干法
1、电子分析天平 1 台： 2、电热真空干燥箱一台：根据检验工作量，选 择适当的型号。 3、真空泵一台。 4、化学试剂 （ 1 ）变色硅胶；（ 2 ）无水氯化钙； （ 3 ）五氧化二磷（ P2O5 ）。
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卡氏测定法（费休氏法）
培养3天后移植
T.G G.A G.P（25 ℃） 培养5天，应无菌生长 T.G G.A（37℃）
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2、活疫苗检验
（1）细菌类制品： T.G 琼脂斜面 25℃ 培养5天应纯粹 T.G 琼脂斜面 37℃ （2）病毒类制品： T.G G.A G.P （25℃） 培养5天应无菌生长 T.G G.A （37℃）
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二、 检验用培养基
1、TG：硫乙醇酸盐培养基。 2、GA：酪胨琼脂培养基。 3、GP：葡萄糖蛋白胨汤培养基。 TG GA GP 细菌制品另加2支适应本菌 生长的琼脂斜面培养基
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培养基针对的细菌：
1、TG：硫乙醇酸盐培养基。 厌氧性及需氧性细菌
2、GA：酪胨琼脂培养基。 厌氧性及需氧性细菌
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3、血液制品及浑浊制品的检验
（1）加防腐剂的血液制品及 混浊制品按（灭活苗检验） 方法进行。 （2）不加防腐剂的血液制品 及混浊制品按（活疫苗检验） 方法进行。
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4.无菌检验的有关规定：
4.1 生物制品感染了不应有的外原微生物就 是污染。 4.2 有些制品培养后出现混浊不易判定，可 移植培养1次，再判定。 4.3 如发现个别瓶有杂菌或结果可疑时，可 重检原瓶（冻干制品，重新抽样）。检 品无菌生长，判定无菌生长或纯粹，检 品有菌生长，应加倍抽检验样品重新检 验，仍有菌生长，判定不符合规定。
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2、灭活检验
（1）细菌灭活后，接种到适于本 菌生长的培养基，应无菌生长。 （2）细菌毒素脱毒后接种实验动 物，应正常。 （3）病毒灭活后，接种对本毒敏 感的细胞、禽胚、动物，应正常。
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（二）成品检验
1、灭活苗的检验 样品1ml /50ml T.G培养基
T.G G.A G.P 25℃培养
T.G
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G.A
37℃培养
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四、检验方法
（一）、半成品检验：
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1、细菌类半成品：
T.G
T.G
+ 适宜培养基 25℃ 培养3-5天应纯粹 + 适宜培养基 37℃
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2、 病毒类半成品：
T.G T.G G.A 25℃ 培养3-5天应无菌生长 G.A 37℃
3、GP：葡萄糖蛋白胨汤培养基。 霉菌及腐生菌
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各类细菌适宜的培养基：
厌气菌——普通琼脂斜面 布氏杆菌——肝汤琼脂斜面
巴氏杆菌——含10%绵羊血琼脂斜面 链球菌——含10%绵羊血琼脂斜面 沙门氏菌——马丁琼脂斜面 大肠杆菌——普通、马丁琼脂斜面
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三、 培养温度