实验二 线粒体和液泡系的活体染色

实验二 线粒体和液泡系的活体染色
实验目的：
1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系 的形态、数量与分布； 2. 学习一些细胞器的超活染色技术。
实验原理
活体染色：是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但 对活样品又没有毒害作用的一种活体染色方法，其目的是 显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和 产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。 应用：活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形态结 构和生理、病理状态。 分类：根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把 活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体内活 体染色是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的 胶粒固定、堆积在细胞内某些特殊结构里，达到易于识别 的目的。体外活体染色又称超活染色，它是由活的动、植 物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被 选择固定在活细胞的某种结构上而显色。
2、洋葱内表皮细胞线粒体的超活染色
用吸管吸取 1/5000 詹纳斯绿 B 染液，滴一滴在 干净的载玻片上，然后撕取洋葱鳞茎内表皮 1 小块，置于染液中，染色15-20min。 吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展 平，盖上盖玻片，显微镜观察。 先用低倍镜进行观察，找到细胞后，即可转入 高倍镜继续观察，此时，要注意细胞核位于细 胞的近中部的一侧。在它的周围有致密的原生 质体，在原生质中有被染成蓝绿色的小颗粒。 此即线粒体。
3、蛙胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染色 解剖蛙，剪取胸骨剑突软骨最薄部分一小块， 放入载玻片中央的1/3000中性红染液中，染色 5～10min。然后用吸管吸去染液，滴加1－2 滴Ringer液，盖上盖玻片，用油镜观察。 可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚， 在细胞核上方的胞质中，有许多被染成玫瑰红 色的大小液泡，这一特定的区域叫做高尔基区。
线粒体的超活染色
线粒体是细胞进行呼吸作用的场所，其形态和数量随 不同物种、不同组织器官和不同的生理状态而发生变 化。 詹纳斯绿B是毒性较小的碱性染料，可专一性地对线粒 体进行超活染色，这是由于线粒体内的细胞色素氧化 酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态)， 呈蓝绿色；而线粒体周围的细胞质中，这些染料被还 原为无色的色基(即无色状态)。
活体染色的原理
活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部 分，主要是靠染料的“电化学”特性。碱性染料的胶 粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子， 而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样， 它们彼此之间就发生了吸引作用。 但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那 些对细胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配 成稀淡的溶液。 一般说来，最为适用的是碱性染料，这可能是因为它 具有溶解在类脂质(如卵磷脂、胆固醇等)的特性，易于 被细胞吸收。
4、植物细胞液泡系的活体染色
撕取洋葱内表皮细胞，放在加有一滴 1/3000的中性红染色的载玻片中，染色 5～10min，吸去中性红染液，滴加1－1 滴Ringer液，盖上盖玻片，镜检。 可见被染成砖红色的中央大液泡。
5、蛙肝脏细胞线粒体的活体染色 解剖蛙，迅速取其肝脏。沿肝脏边缘，用刀片 切取2—3mm厚的切片，置玻片上，加2—3滴 1/10000浓度的詹纳斯绿染液，染色20—30分 钟。吸去染液，滴一滴Ringer液，加上盖玻片， 再放上一张小滤纸，用拇指轻压盖玻片，使细 胞分离或压碎。 要点：染液不能过多，肝脏切片要有部分露出 在空气中，以保持线粒体的氧化能力。 注意：最后取肝脏与染液交界处已经变色的部 位来观察。
作业
分别绘图示液泡系、线，对液泡系( 即高尔 基体)的染色有专一性，只将活细胞中的 液泡系染成红色，细胞核与细胞质完全 不着色，这可能是与液泡中某些蛋白质 有关。
实验步骤
1、人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
取清洁载玻片 ↓ 滴2滴1/5000詹纳斯绿B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放于载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 在低倍镜下，选择平展的口腔上皮细胞，换高倍镜观察，可见扁平 状上皮细胞的核周围胞质中，分布着一些被染成蓝绿色的颗粒状 或短棒状的结构，即是线粒体。