脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)活性试剂盒说明书
肉牛肌内脂肪沉积相关基因的研究
肉牛肌内脂肪沉积相关基因的研究杜新;罗光彬;王泽英;方雪松【摘要】相关基因对肌内脂肪含量的影响，已引起国内外研究人员的广泛关注，尤其是高档肉牛的育种方面。
本文就影响肌内脂肪沉积的几个相关基因的发现、表达部位以及对肉牛肌内脂肪沉积的影响进行了综述和展望。
%It has been drown wide attention of researchers both at home and abroad that the in-fluence of consequence gene on intramuscular fat content, especially on the breeding of high-grade beef. The discovery and expression of those genes and their effect on the beef intramuscular fat deposition were summarized and prospected in this paper.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2014(000)007【总页数】4页(P50-53)【关键词】肌内脂肪;基因;牛肉风味;牛肉品质【作者】杜新;罗光彬;王泽英;方雪松【作者单位】沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866;沈阳农业大学，辽宁沈阳110866;沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866;沈阳农业大学，辽宁沈阳 110866【正文语种】中文【中图分类】S823.3+6脂肪和脂肪酸对于牛肉的营养价值和肉品质方面有很大作用。
它们是由肌肉和肝脏生产的，以三酰甘油的形式存在，是主要的能源物质。
除此之外，脂肪的类型和数量影响肉的鲜度和风味。
总之，肌内脂肪（int ramuscular fat,IMF）含量与肉的鲜度相关。
为了提高肌内脂肪含量，本文从控制遗传的基因角度进行研究探讨。
IMF主要以磷脂和甘油三酯形式存在，其中磷脂是影响猪肉挥发风味成分的重要因素。
NEFA游离脂肪酸测定试剂盒(ACS-ACOD法)产品说明书
游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法）说明书【产品名称】通用名称：游离脂肪酸测定试剂盒（ACS-ACOD 法）英文名称：Nonestesterified fatty acid Assay Kit (Enzymic Method)（NEFA ）【包装规格】R1：2⨯60ml 、R2：2⨯20ml ；R1：2⨯45ml 、R2：2⨯15ml ；R1：1⨯45ml 、R2：1⨯15ml ；校准品（选配）：1⨯2ml （1个水平）。
【预期用途】用于体外定量测定人血清中游离脂肪酸的含量。
临床上主要用于高血脂症、冠心病和动脉粥样硬化的辅助诊断。
【检验原理】游离脂肪酸和辅酶A 在乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）的作用下反应生成乙酰辅酶A 。
乙酰辅酶A 在乙酰辅酶A 氧化酶（ACOD ）的作用下生成H 2O 2，随后通过Trinder ’s 底物在过氧化物酶（POD ）的作用下生成有色物质。
【主要组成成分】由试剂R1、R2和校准品组成。
试剂R1：乙酰辅酶A 合成酶（ACS ）0.8KU/L 、MgCl 2(氯化镁)5mmol/L 、吐温-20 0.1%；试剂R2：乙酰辅酶A 氧化酶(ACOD)20KU/L 、过氧化物酶（ POD ）30KU/L 、吐温-20 0.1%；校准品：含十六（烷）酸水溶液。
校准品可以溯源至北京华宇亿康校准品，注：校准品浓度见每批瓶标示。
不同批号试剂盒中各组分不可以互换。
【储存条件及有效期】试剂和校准品在2℃～8℃避光条件下保存可以稳定365天。
试剂和校准品开瓶后2℃～8℃可稳定15天。
备注：生产日期及失效日期见外盒或瓶标签。
【适用仪器】日立7180、奥林巴斯AU680、贝克曼LX-20/DXC800、迈瑞BS-380、朕江T900全自动生化分析仪。
【样本要求】1、空腹静脉采血，样本为新鲜的血清样本。
2、样本采集后立即离心分离，并在当日检测，如当日不能检测，冷藏2℃～8℃下可稳定48h ；避免反复冻融。
脂肪酸合成酶(FAS)的研究综述
畜牧·水产春秋在A上放牧，夏冬在B上放牧，保证草场不被破坏。
另外需要严格控制牲畜数目，在草场能承受的范围内进行合理放牧。
3 蒙古国羊绒业可持续发展的对策3.1 积极扶持技术创新和羊绒品牌建设技术创新是一个行业发展的不竭动力。
蒙古国政府应该大力加强科技创新，提高羊绒产业生产中清洗，剃毛，编织，成品的技术，并且对各大企业的产品研发和科技引进予以资金帮助，提高生产中的科技成分，提高羊绒生产效率和质量，适当降低羊绒生产成本。
此外还应提高羊绒行业品牌竞争力，建立起完善的品牌机制。
必要情况下，小众羊绒品牌应该合作共赢，形成规模，推出具有影响力的联合品牌，提升竞争力，占据一定的市场份额。
目前，蒙古国政府申请加入了国际羊毛局，并且增加了和各方的合作，这其中包括营销商标的合作。
同时，为了更进一步的提高蒙古国羊绒产品的质量，又申请了在国际羊毛局成立羊绒保证许可的专门实验室，开始实施“建立羊绒质量保证系统”项目的第二阶段工作，这预计将会给蒙古国羊绒业带来积极效应，有助于建设一个羊绒大国形象。
3.2 规范蒙古国羊绒交易市场合理完善的市场交易规则是促使羊绒交易市场健康发展的基础和关键。
所以国家应该对羊绒交易市场进行整顿，通过经济、法律和行政手段加强宏观调控，制定严格的交易秩序，颁布行业行规，明确经营者与消费者的相关权利、义务及责任。
在维护好市场秩序的同时，帮助羊绒企业实现管理规范化、产品标准化，不允许残次产品进行销售，杜绝假货，树立诚信优质的羊绒品牌形象。
4 结论目前蒙古国羊绒业的发展情况较为可观，具有一定的资源禀赋优势，但主要靠量取胜。
随着羊绒产业的不断发展和经验的积累，一批又一批的羊绒企业不断崛起，羊绒的生产工业水准不断提高。
现今工业发展过程中，技术、生产力、生产水平成为了企业能否快速成长的稳定因素。
在羊绒行业，走可持续的绿色发展道路是未来羊绒产业的发展趋势，企业要获得竞争优势，分得市场大蛋糕，就应当以生产技术和科技创新为保证。
WebofScience检索练习题：
WebofScience检索练习题：引⽂及综合检索练习题引⽂练习题（1－3）1．利⽤Web of Science检索钟南⼭院⼠发表的关于SARS的⽂献共有多少篇，并将被引次数最多的⼀篇⽂献列出（除TI、AU、SO外，列出Cited references、Times Cited数量）。
20 results found (Set #2)Sort by:1. Zhong NS, Zheng BJ, Li YM, et al.Epidemiology and cause of severe acute respiratory syndrome (SARS) in Guangdong, People's Republic of China, in February, 2003LANCET 362 (9393): 1353-1358 OCT 25 2003Times Cited: 612．利⽤清华全⽂数据库检索段志泉教授撰写的《实⽤⾎管外科学》（辽宁科学技术出版社）⼀书在国内被引⽤情况。
（写出检索过程和被引次数）范围 [全部⽂章] 命中 229 篇3．⽤⽹络搜索⼯具查找“American Journal of Pathology”、“Circulation”或⾃⼰研究的专业领域较重要杂志的影响因⼦，写出检索过程。
...American journal of Pathology 2001; 159(5) 1853-1860 (影响因⼦IF= 7.106) baidu:CIRCULATION 9.903 Circulation影响因⼦: 11.164 2gooogle:Circulation 103, 2810-2815 (2001) Impact Factor 10,9; Boffetta, P., Pershagen, 4．王⼠雯院⼠（解放军总医院⼼研所）在国际上率先提出并深⼊研究了什么疾病；她曾获得多项成果和科技奖励，其中“⽼年⼼脏病⼈⾮⼼脏⼿术围⼿术期临床与基础实验研究”曾获得什么奖项，写出检索过程。
FAS
(四) 转膜 1. PVDF膜则在M-OH中浸泡5min以上后转入转移液 中。将滤纸也浸入转移液中。 2.取胶： 将胶卸下,左上切角，置于洁净玻璃板上，按顺序 铺上膜与每侧一张（干转每侧三张）滤纸。注意用 玻棒逐出气泡，剪去滤纸与膜的过多部分。 3．转膜： 电转槽用去离子水淋洗晾干，加入1000ml电转液。 将胶平铺于海绵上，滴加少许电转液再次驱赶气泡， 封紧后放入电转槽，注意膜在正极一侧。降温，将 电泳槽置于冰水混合物中。400mA，4h。注意不同 蛋白的要求不同。
3．洗涤： 一抗孵育结束后，用PBST或TTBS漂洗膜后再浸洗 三次，每次5-10min。 4．结合二抗： 根据一抗来源选择合适的二抗，根据鉴定方法选 择HRP的抗体，按相应比例稀释 （1:1000~1:10000），室温轻摇一小时。 5．洗涤： 二抗孵育结束后，用PBST或TTBS漂洗膜后再浸洗三 次，每次5-10min。
(五) 封闭及杂交 1．封闭： 将膜从电转槽中取出，去离子水与PBST或 TTBS稍加漂洗，浸没于封闭液中缓慢摇荡一小 时。 2．结合一抗： 含一抗的封闭液滴加于摇床的塑料膜上，将 Western膜从封闭液中取出，滤纸贴角稍吸干， 正面朝下贴在一抗上，注意不要留下气泡，室 温下轻摇孵育一小时或4℃静置过夜。在反应 体系外面罩一湿润平皿以防止液体过多蒸发。
(三) 电泳 1．上样前将胶板下的气泡赶走。 2．所有蛋白样品调至等浓度后上样，样品 两侧的泳道用等体积的1×loading buffer上 样，Marker也用1×loading buffer调整至与 样品等体积。 2．以初始电压为45V时的电流强度进行稳 流电泳，当电压达65V时改为稳压电泳。 3．在目的蛋白泳动至距胶下缘1cm以上结 束。
FAS抑制剂—倒捻子素
王镜岩生化真题名词解释整理汇总
王镜岩——生物化学名词解释（2013年~2002年）【2013年】1.寡聚蛋白质（oligomeric protein）：两条或两条以上具有三级结构的多肽链组成的蛋白质。
（也称多聚蛋白质）。
如：血红蛋白（两条α链，两条β链）、己糖激酶（4条α链）。
附：仅由一条多肽链构成的蛋白质称为单体蛋白质。
如：溶菌酶和肌红蛋白【第三章蛋白质】（上159）2.酶的转换数(turnover number,TN)：即K3，又称催化常数（catalytic constant,K cat）是指在一定条件下每秒钟每个酶分子转换底物的分子数。
（通常来表示酶的催化效率）附：[ 或每秒钟每微摩尔酶分子转换底物的微摩尔数] ，大多数酶对它们的天然底物的转换数的变化范围是每秒1到104（上321）【第四章酶】3.糖的变旋现象（mutarotation）：是当一种旋光异构体，如糖溶于水中转变为几种不同的旋光异构体的平衡混合物时，发生的旋光变化的现象。
【第一章糖类】（上8；2013、2008）4.油脂的酸值（acid number）：是指中和1g油脂中的游离脂肪酸所消耗KOH 的毫克数。
【第二章脂类和生物膜】（上95）5.激素受体：位于细胞表面或细胞内，结合特异激素并引发细胞响应的蛋白质。
【第六章维生素、激素和抗生素】6.乙醛酸循环（glyoxylic acid cycle ,GAC）：是一种被修改的三羧酸循环，在两种循环中具有某些相同的酶和产物，但代谢途径不同，在乙醛酸循环中乙酰CoA首先和草酰乙酸缩合成柠檬酸，然后转变为异柠檬酸，再裂解为琥珀酸和乙醛酸，在这一循环中产生乙醛酸，故称乙醛酸循环。
【第八章糖代谢】（这个循环除两步由异柠檬酸裂合酶和苹果酸合酶催化的反应外，其他的反应都和“柠檬酸循环”相同。
）（2013、2012）资料2：又称三羧酸循环支路，该途径在动物体内不存在，只存在于植物和微生物中，主要在乙醛酸循环体中和线粒体中进行。
脂肪酸合成酶(FAS)的研究综述
脂肪酸合成酶（FAS）的研究综述作者：张芮陈斯钰来源：《农村经济与科技》2018年第13期[摘要]脂肪酸合成酶（FAS）作为一种合成脂肪酸的关键酶，具有丰富的酶系统功能，在高低等动物身上它的存在形式不同，并且它在影响生物的能量代谢中发挥着极大作用。
近年来，有关于脂肪酸合成酶的研究成果越来越多。
从FAS 的生理功能、结构特性和未来应用等方面，梳理了近几年关于FAS的研究成果。
[关键词]脂肪酸合成酶；基因结构；生理功能；应用[中图分类号]F301.24 [文献标识码]A1 脂肪酸合成酶的结构特性脂肪酸合成酶（fatty acid synthase， FAS）的概念是在1957年由Wakil等初次提出并命名。
研究发现FAS基因有Ⅰ型和Ⅱ型2种类型。
植物中的存在的FAS属于Ⅱ型。
而哺乳类动物的FAS是Ⅰ型，它是由一条相对分子质量为250kDa的多肽链首尾相连，形成的以二聚体为主要存在形式的多功能酶，存在于细胞浆中。
脂肪酸合成酶的结构因物种不同而存在差异。
Clemente等通过研究得出人、鹅、鼠的FAS基因中都存在不翻译的外显子I。
人与鹅的相同序列为41%，人和鼠相同序列为65%，得出其外显子有较小的保守性。
Roy等发现鸡的FAS基因在18号染色体上。
后来Joshi等学者发现了由7512个核苷酸编码成2504个氨基酸组成的位于17q25上的人的FAS基因。
同年研究学者发现猪的FAS基因存在于12p1 .5。
Kameda等通过实验也测出鹅中的FAS基因全序列大约长度有50kb。
据东方网2008年9月9日《科技日报》报道，瑞士苏黎世工学院的科学家们通过利用保罗谢勒研究所所采集的数据，了解了哺乳动物中脂肪酸合成酶的原子构成，并在《科学》杂志上发表相关的研究成果。
科学家已经研究了很久，关于哺乳动物中FAS难于令分子合成的机理。
然而，截至目前，科学家们一直在努力通过使用孤立的细菌酶来探究脂肪酸的合成过程中的每个步骤。
脂肪酸合成代谢ppt课件
影响乙酰CoA羧化酶活性的因素：（在动物体中） 柠檬酸：促进无活性的单体聚合成有活性的全酶，从
而加速脂肪酸的合成； 软脂酰CoA：促使全酶的解体，因而抑制脂肪酸的合
成。
(一) 脂肪酸的从头合成
二. 脂肪酸的合成
1. 脂肪酸从头合成的过程
脂肪酸合酶系统（fatty acid synthase system，FAS）
脂肪酸的合成由此可见由脂肪酸合酶系统形成1分子软脂酸需要消耗1分子乙酰coa7分子丙二酸单酰coa以及14分子还原辅酶同时释放出7分子co脂肪酸的合成内质网动物体线粒体植物体叶绿体或前质体延长过程该过程是以脂酰coa不是脂肪酸作为起点引物通过与从头合成相似的步骤即缩合还原脱水再还原逐步在羧基端增加二碳单位
(一) 脂肪酸的从头合成 1. 脂肪酸从头合成的过程
(2) 丙二酸单酰CoA的形成
二. 脂肪酸的合成
在脂肪酸的从头合成过程中，参入脂肪酸链的二 碳 单 位 的 直 接 提 供 者 并 不 是 乙 酰 CoA， 而 是 乙 酰 CoA的羧化产物 —— 丙二酸单酰CoA（malonylCoA）。
(一) 脂肪酸的从头合成 1. 脂肪酸从头合成的过程
去饱和作用有需氧和厌氧两条途径，前者主 要存在于真核生物中，后者存在于厌氧微生物中。
fatty acids synthesis 脂肪酸合成
enzyme,fatty acid synthase(FAS)
CYS
半胱氨酸残基
ACP-SH 4‘磷酸泛酰巯基结构域
Major sources of the reductant required for fatty acid synthesis
Major sources
The pentose phosphate pathway(p.145)
usually derived from triglycerides or phospholipids
CH3
(CH )n
COOH
unsaturated
The two carbon atoms in the chain that are
18:0 saturated (18:0)
bound next to either side of the double bond can occur in a cis or trans configuration.
Malate
Malic Enzyme
Carboxylation of acetyl-CoA to malonyl-CoA
乙酰CoA羧化生成丙二酰CoA
乙酰CoA
乙酰CoA羧化酶(ACC)
丙二酰CoA
Acetyl-CoA + HCO3- + ATP Malonyl-CoA + ADP
ACC Regulation
Essential fatty acids
Fatty acids that are required by the human body but cannot be made in sufficient quantity from other substrates, and therefore must be obtained from food, are called essential fatty acids.
脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)
货号：QS1108-10 规格：10 管/9 样脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。
FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。
自备实验用品及仪器：研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计、1mL石英比色皿、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：试剂一：液体10mL×1瓶，－20℃保存。
用前取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入275 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入275 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体10 mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入525 μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。
基于Fas
基于Fas /FasL 信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响金成浩，元顺女，朴龙一首都医科大学附属北京同仁医院麻醉科，北京100730摘要：目的 基于脂肪酸合成酶（Fas ）/脂肪酸合成酶配体（FasL ）信号通路探索舒芬太尼对急性心肌梗死（AMI ）大鼠心功能和心肌细胞凋亡的影响。
方法 选择健康雄性SD 大鼠108只，适应性饲养7天，随机分为对照组、模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组、舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组，每组18只。
模型组、舒芬太尼低剂量组、舒芬太尼高剂量组、舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组、舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组通过冠状动脉左前降支结扎法制作AMI 模型；对照组除不结扎冠状动脉左前降支外，其余步骤与AMI 模型相同。
舒芬太尼低剂量组和舒芬太尼高剂量组分别于AMI 模型制作成功后腹腔注射0.1、1 µg /kg 舒芬太尼。
舒芬太尼高剂量 + Fas 阴性对照组和舒芬太尼高剂量 + Fas 慢病毒组分别于AMI 模型制作成功后腹腔注射1 µg /kg 舒芬太尼，尾静脉注射200 nmol /kg NC shRNA 慢病毒或Fas shRNA 慢病毒。
对照组和模型组腹腔注射等量生理盐水。
术后72 h ，采集大鼠尾静脉血，采用ELISA 法检测血清肌钙蛋白T ；采用超声心动图检测左心室射血分数（LVEF ）、左心室缩短分数（LVFS ）、左心室舒张末期内径（LVEDd ）和左心室收缩末期内径（LVESd ）。
待大鼠心功能检测完成后，腹主动脉取血，采用ELISA 法检测血清TNF -α、IL -6。
所有大鼠断头处死，留取心脏，随机取6只大鼠的心脏组织，TTC 染色，计算心肌梗死面积；随机取6只大鼠的心脏组织，HE 染色，观察心肌组织病理形态变化，采用TUNEL 法检测细胞凋亡情况；取剩余6只大鼠的心脏组织，采用Western blotting 法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl -2、Bax 、Caspase -3及Fas /FasL 信号通路相关蛋白表达。
脂肪酸合成酶抑制剂胖大海提取物对营养性肥胖大鼠的减肥作用_高丽芳
GAO Li-fang，CAO Li-ge，TIAN mi，GAO Wen，CHEN Zhen-liang* （ Center for Food and Drug Safety Evaluation，Capital Medical University，Beijing 100069，China）
2011 年 8 月 第 32 卷 第 4 期
首都医科大学学报 Journal of Capital Medical University
Aug． 2011 Vol． 32 No． 4
［doi： 10． 3969 / j． issn． 1006-7795． 2011． 04． 020］
· 基础研究 ·
大学实验动物部提供动物喂养实验室（ 合格证号： 医 动物模型建立。在肥胖模型成功基础上，实验结束时
动字 01-4059 号） ，室内温度（ 22 ± 2） ℃ ，相对湿度（ 60 3 个胖大海提取物剂量组的大鼠体质量均低于肥胖模
± 10） % ，单笼饲养。根据测定所得体质量及血脂浓 型对照组，但与模型对照组相比，实验大鼠体质量差
减肥药物作用靶标，作为催化内源性长链脂肪酸合成 的关键酶，通过催化乙酰辅酶 A 和丙二酰辅酶 A 而生 成长链脂肪酸。脂肪酸合成酶抑制剂能通过增加下 丘脑丙二酰辅酶 A 浓度引起神经肽 Y 改变来降低食 欲，并能抑制脂肪酸的生成和储存、增加脂肪酸氧化， 使能量消耗增加［2-6］。
天然来源的脂肪酸合成酶抑制剂，尤其中草药中 提取的脂肪酸合成酶抑制剂，具有低成本、高安全、高 环保的特点，Zhao W H 等［7］研究发现胖大海提取物 具有脂肪酸合成酶抑制作用。本研究中将胖大海提 取物给予营养性肥胖大鼠，观察其预防性给予的效果 和作用，为其进一步开发研究提供实验依据。
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货号：MS1108 规格：100管/96样脂肪酸合成酶（fatty acid synthase，FAS）活性试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
FAS是脂肪酸合成关键酶，催化乙酰辅酶A和丙二酰辅酶A而生成长链脂肪酸。
FAS普遍表达于各种组织细胞中，在哺乳动物肝、肾、脑、肺和乳腺以及脂肪组织中表达丰富。
测定原理：
FAS催化乙酰CoA、丙二酰CoA和NADPH生成长链脂肪酸和NADP+；NADPH在340nm有吸收峰，而NADP+没有；通过测定340nm 光吸收下降速率，计算FAS活性。
自备实验用品及仪器：
研钵、冰、台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、可调式移液枪和蒸馏水。
试剂组成和配制：
试剂一：液体100mL×1瓶，－20℃保存。
用前1d取出置于4℃充分解冻后混匀。
试剂二：粉剂×1瓶。
临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入440μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：液体20mL×1瓶, 4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加入840μL试剂四，充分溶解，用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
粗酶液提取：
1.组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加
入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。
12000g，4℃离心40min，取上清置冰上待测。
2.细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500
万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000g，4℃，离心40min，取上清置于冰上待测。
3.血清等液体：直接测定。
FAS测定操作：
1. 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到340 nm，蒸馏水调零。
2. 试剂四置于40℃水浴中预热30 min。
3. 在96孔板或EP管中依次加入20μL上清液、4μL试剂二、4μL试剂三、164μL试剂四和8μL试剂五，混匀后于340nm处测定吸光值，记录第30s和90s时吸光值，分别记录为A1和A2。
△A测=A1-A2。
FAS活性计算：
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
第1页，共2页
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T
=1608×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=1608×△A ÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T
=1608×△A
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。
b.使用96孔板测定的计算公式如下
（1）按照蛋白浓度计算
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(Cpr×V样)÷T
=3216×△A÷Cpr
（2）按照样本质量计算
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol/min/g 鲜重) = (△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T
=3216×△A÷W
（3）按细胞数量计算
活性单位定义：37℃中每104个细胞每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/104cell) = (△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T
=3216×△A÷细胞数量
（4）按液体体积计算
活性单位定义：37℃中每毫升样本每分钟氧化1nmol NADPH 为1个酶活单位。
FAS(nmol /min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109 )÷V样÷T
=3216×△A
ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光径，0.5 cm；V反总：反应体系总体积，200μL=2×10-4L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W ：样品质量；V样：加入反应体系中上清液体积，20μL=0.02 mL；V样总：提取液体积，1 mL；T：反应时间，1min。
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