生物制品分析概论资料
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生物制品分析
两种或两种以上疫苗原液按特定比例配制成的具
有多种免疫原性的灭活疫苗或活疫苗。 伤寒副伤寒甲乙联合疫苗、吸附百白破联合疫苗、 麻疹腮腺炎联合减毒疫苗等。
4、双价疫苗及多价疫苗
两种或两种以上同一种但不同型（或群）抗原合
并组成的疫苗。
双价肾综合症出血热灭活疫苗等。
二、抗毒素及抗毒血清（免疫血清类） 抗毒素（抗毒血清）：用细菌类毒素或毒素免 疫马或其他大动物所取得的免疫血清 破伤风抗毒素、白喉抗毒素和肉毒抗毒素等
四、重组DNA蛋白制品
1、细胞因子类：重组人干扰素等
2、生长因子类：重组人表皮生长因子等
3、激素类：重组人生长激素等
4、酶类：注射用重组链激酶等 5、疫苗：重组乙型肝炎疫苗等 6、单克隆抗体：注射用抗人T细胞CD3鼠单抗 7、生物类似药：一般指结构和功能明确的治
疗用重组蛋白
五、诊断制品 用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫状态 的制品。 毒素、诊断血清、分型血清和因子血清等。
三、防腐剂和灭活剂含量测定 生物制品在生产中为了脱毒、灭火和防止活菌污染， 常加入适量本分、甲醛、氯仿和汞制剂等作为防腐剂 和灭活剂。 对这些非有效成分，ChP2015中规定其含量应控制在 一定限度内。
四、纯度检查
生物制品在经过精制后，要检查纯度是否达到规定要求，常 用电泳法和高效液相色谱法。 ChP重组人促红素注射液（CHO细胞）纯度测定 1）亲水硅胶体积排阻色谱柱：排阻极限300kD，孔径24nm，
系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶
标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对 供试品的抗原特异性进行检查。
四、免疫斑点法 原理同免疫印迹法 以供试品与特异性抗体结合后抗体再与酶 标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色， 对供试品的抗原特异性进行检查。
药物分析生物制品分析PPT课件
第10页/共19页
第四节 生物制品检查内容
（七）安全检查
安全检查对象 1.菌毒种和原材料 2.半成品 3.成品
第11页/共19页
第四节 生物制品检查内容
安全检查内容
（一）过敏性物质检查 （二）杀毒、灭活和脱毒检查 （三）毒性物质检查 （四）外源性污染检查
第12页/共19页
第四节 生物制品检查内容
第一节 生物制品分类 （一）疫苗类
1、细菌类疫苗 2、病毒类疫苗 3、联合疫苗 4、双价疫苗及多价疫苗
第1页/共19页
第一节 生物制品分类
（二）抗毒素及抗毒血清
用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物 所取得的免疫血清
（三）血液制品
由健康人的血浆或经特异免疫的人血浆，经 分离、提纯或由重组 DNA技术制成的血浆蛋白组 分，以 、及血液细胞有形成分。 如人血白蛋白、 人免疫球蛋白、 乙型肝炎人免疫球蛋白等。
利用酶标记抗原（抗体），通过酶促 显色反应，可以直接观察特征颜色变化来 测定抗体（抗原）。
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第四节 生物制品检查内容
（一）物理性状检查
1.外观 2.真空度及溶解速率 3.装量
第9页/共19页
第四节 生物制品检查内容
（二）蛋白质含量测定 （三）防腐剂和灭活剂含量测定 （四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定
1、安全性：安全使用，副作用小 2、有效性：使用后能产生相应的效力 3、可接受性：制品的生产工艺、储运条 件、成品的药效、稳定性、外观、包装、 使用方法和价格是可接受的
第4页/共19页
第三节 鉴别试验
1.免疫双扩散法 凝胶中进行的固相沉淀反应。抗原抗
体在琼脂凝胶中扩散，由近及远形成梯度， 当两者在比例适当处相遇，发生反应，反 应的沉淀物因其颗粒较大，在凝胶中不再 扩散，形成沉淀带。
第四节 生物制品检查内容
（七）安全检查
安全检查对象 1.菌毒种和原材料 2.半成品 3.成品
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第四节 生物制品检查内容
安全检查内容
（一）过敏性物质检查 （二）杀毒、灭活和脱毒检查 （三）毒性物质检查 （四）外源性污染检查
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第四节 生物制品检查内容
第一节 生物制品分类 （一）疫苗类
1、细菌类疫苗 2、病毒类疫苗 3、联合疫苗 4、双价疫苗及多价疫苗
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第一节 生物制品分类
（二）抗毒素及抗毒血清
用细菌类毒素或毒素免疫马或其他大动物 所取得的免疫血清
（三）血液制品
由健康人的血浆或经特异免疫的人血浆，经 分离、提纯或由重组 DNA技术制成的血浆蛋白组 分，以 、及血液细胞有形成分。 如人血白蛋白、 人免疫球蛋白、 乙型肝炎人免疫球蛋白等。
利用酶标记抗原（抗体），通过酶促 显色反应，可以直接观察特征颜色变化来 测定抗体（抗原）。
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第四节 生物制品检查内容
（一）物理性状检查
1.外观 2.真空度及溶解速率 3.装量
第9页/共19页
第四节 生物制品检查内容
（二）蛋白质含量测定 （三）防腐剂和灭活剂含量测定 （四）纯度检查 （五）相对分子质量或分子大小测定
1、安全性：安全使用，副作用小 2、有效性：使用后能产生相应的效力 3、可接受性：制品的生产工艺、储运条 件、成品的药效、稳定性、外观、包装、 使用方法和价格是可接受的
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第三节 鉴别试验
1.免疫双扩散法 凝胶中进行的固相沉淀反应。抗原抗
体在琼脂凝胶中扩散，由近及远形成梯度， 当两者在比例适当处相遇，发生反应，反 应的沉淀物因其颗粒较大，在凝胶中不再 扩散，形成沉淀带。
Chap20生物制品分析概论
20
a
无菌试验 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
外源性DNA测定、宿主细胞蛋白质 致突变试验 生殖毒性试验
21
a
第三节 常用定量分析法
22
a
23
a
24
a
25
a
色谱法
1．反相高效液相色谱法(RP-HPLC) 以(C4、C8、C18)烷基硅烷键合相为柱填料，以 甲醇-水、乙腈-水或甲醇、乙腈与缓冲液构成的 溶液为流动相，以紫外、荧光或电化学检测器为
低电渗流和吸附现象，可将毛细管内壁涂层。 (2)毛细管凝胶电泳：在毛细管中装入单体，引发
聚合形成凝胶，主要用于测定蛋白质、DNA等 大分子化合物。
37
a
(3)胶束电动毛细管色谱 在缓冲液中加入离子型表面活性剂如十二烷 基硫酸钠，形成胶束，被分离物质在水相和 胶束相(准固定相)之间发生分配并隨电渗流 在毛细内迁移，达到分离。本模式能用于中 性物质的分离。
18
a
过敏试验
过敏试验是检查异性蛋白的试验。药物中若夹 杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种 过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者 可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下 降，甚至休克和死亡。
19
a
降压物质检查法 (Test for Depressor Substances)
降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低 的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低 的物质。
检测手段，这种色谱体系在生化药物(例如肽 类、氨基酸、蛋白质、多糖等)定量分析中应用 广泛。
26
a
2.高效离子交换色谱法(HPIEC) HPIEC是蛋白质、多肽分离分析中常见的方法之 一。具有较高质量的活性回收。
生物制品分析概论
SDS-PAGE。 3、HPCE：CZE、MECC、CGE、CIEF
46
47
48
1、纸电泳法： （1）操作方法； （2）定量方法：同纸色谱 （3）应用：蛋白质、核苷酸类
49
应用：血清蛋白、脂蛋白等的分离测定
3、PAGE法
22
（一）血清学法-体外抗原抗体试验
抗原抗体类生物制品的鉴别 抗原抗体在体外结合时，可因抗原物理性状不
同或参与反应的成分不同而出现各种类型的反应， 如凝集反应、沉淀反应、中和反应和补给结合反 应，即经典血清学反应，在此基础上，又衍生出 免疫扩散、免疫电泳、荧光标记、酶标记等高度 敏感的检测技术。 1.免疫双扩散法 2.免疫电泳法 3.免疫印迹法 4.免疫斑点法 5.酶联免疫法
总相关蛋白质含量不超过10%。
30
如果生物制品在生产过程中使用了抗生素，则不仅 要在纯化工艺中除去，而且要在原液检定中增加残 余抗生素活性的检测方法。
常用方法：抑菌圈测量。 结果判定：对照溶液有抑菌圈，阴性对照无抑菌圈，
供试品溶液抑菌圈的直径小于对照溶液抑菌圈的
31
（一）热原检查法和细菌内毒素检查 法 （二）异常毒性检查 （三）过敏试验
破伤风抗毒素 白喉抗毒素 肉毒抗毒素 凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所 得 的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。 如：抗蝮蛇毒血清 抗五步蛇毒血清 抗狂犬病血清
14
定义：由健康人的血液或经特异免疫的人血浆， 经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白成分， 以及血液细胞有形成分统称为血液制品。
如：人血白蛋白 人免疫球蛋白 人凝血因子
生物制品分析概论
1、生物制品药物分析有那些特点？ 2、为什么必须对生物制品进行全
46
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1、纸电泳法： （1）操作方法； （2）定量方法：同纸色谱 （3）应用：蛋白质、核苷酸类
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应用：血清蛋白、脂蛋白等的分离测定
3、PAGE法
22
（一）血清学法-体外抗原抗体试验
抗原抗体类生物制品的鉴别 抗原抗体在体外结合时，可因抗原物理性状不
同或参与反应的成分不同而出现各种类型的反应， 如凝集反应、沉淀反应、中和反应和补给结合反 应，即经典血清学反应，在此基础上，又衍生出 免疫扩散、免疫电泳、荧光标记、酶标记等高度 敏感的检测技术。 1.免疫双扩散法 2.免疫电泳法 3.免疫印迹法 4.免疫斑点法 5.酶联免疫法
总相关蛋白质含量不超过10%。
30
如果生物制品在生产过程中使用了抗生素，则不仅 要在纯化工艺中除去，而且要在原液检定中增加残 余抗生素活性的检测方法。
常用方法：抑菌圈测量。 结果判定：对照溶液有抑菌圈，阴性对照无抑菌圈，
供试品溶液抑菌圈的直径小于对照溶液抑菌圈的
31
（一）热原检查法和细菌内毒素检查 法 （二）异常毒性检查 （三）过敏试验
破伤风抗毒素 白喉抗毒素 肉毒抗毒素 凡用细菌或病毒本身免疫马或其他大动物所 得 的免疫血清叫抗菌或抗病毒血清。 如：抗蝮蛇毒血清 抗五步蛇毒血清 抗狂犬病血清
14
定义：由健康人的血液或经特异免疫的人血浆， 经分离、提纯或重组DNA技术制成的血浆蛋白成分， 以及血液细胞有形成分统称为血液制品。
如：人血白蛋白 人免疫球蛋白 人凝血因子
生物制品分析概论
1、生物制品药物分析有那些特点？ 2、为什么必须对生物制品进行全
生物制品分析概论
➢ 甲状腺粉及其片剂、鱼肝油与鱼肝油酸钠注射液、胰酶及 其肠溶片、肠溶胶囊等
▪ 第二代生物药物：根据生物化学和免疫学原理，应用 近代生化分离纯化技术从生物体制取的具有针对性治 疗作用的特异生化成分
➢ 尿激酶、肝素钠、抑肽酶、胰岛素、人血白蛋白、人免疫 球蛋白、人凝血因子Ⅷ、人纤维蛋白原
编辑ppt
生物药物发展
生物制品分析概论
第二军医大学药学院
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本章内容
▪ 背景概述 ▪ 鉴别试验 ▪ 杂质检查 ▪ 含量（效价）测定
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第一节 背景概述
一、生物药物与生物制品
▪ 生物药物（Biopharmaceutics或Biopharmaceuticals） 是利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，
其特异的分子结构和(或)其他特性(包括理化性质和生 物学活性等)设计一组试验来全面评价一种药物。
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一、理化鉴别法
▪ 化学法：通常利用药物与某试剂在一定条件下反应， 生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。
➢ 蛋白质类生物制品——蛋白质变性反应 ➢ 胰蛋白酶+对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐→紫色 ➢ 胃蛋白酶+鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液→沉淀
▪ 第三代生物药物：应用生物工程技术生产的天然生理 活性物质，以及通过蛋白质工程原理设计制造的具有 比天然物质更高活性的类似物，或与天然物质结构不 同的全新的药理活性成分。
➢ 重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素1b、重组 人白细胞介素-2、重组人红细胞生成素（EPO）等
生物药物分类
生化药物
生物合成药物
活菌颗粒、酪酸梭菌活菌片等 ▪ 诊断制品——体外诊断制品（HBsAg酶联免疫诊断试剂
盒）、体内诊断试剂
▪ 第二代生物药物：根据生物化学和免疫学原理，应用 近代生化分离纯化技术从生物体制取的具有针对性治 疗作用的特异生化成分
➢ 尿激酶、肝素钠、抑肽酶、胰岛素、人血白蛋白、人免疫 球蛋白、人凝血因子Ⅷ、人纤维蛋白原
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生物药物发展
生物制品分析概论
第二军医大学药学院
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本章内容
▪ 背景概述 ▪ 鉴别试验 ▪ 杂质检查 ▪ 含量（效价）测定
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第一节 背景概述
一、生物药物与生物制品
▪ 生物药物（Biopharmaceutics或Biopharmaceuticals） 是利用生物体、生物组织或组成生物体的各种成分，
其特异的分子结构和(或)其他特性(包括理化性质和生 物学活性等)设计一组试验来全面评价一种药物。
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一、理化鉴别法
▪ 化学法：通常利用药物与某试剂在一定条件下反应， 生成有颜色的产物或沉淀进行鉴别。
➢ 蛋白质类生物制品——蛋白质变性反应 ➢ 胰蛋白酶+对甲苯磺酰-L-精氨酸甲酯盐酸盐→紫色 ➢ 胃蛋白酶+鞣酸、没食子酸或多数重金属盐的溶液→沉淀
▪ 第三代生物药物：应用生物工程技术生产的天然生理 活性物质，以及通过蛋白质工程原理设计制造的具有 比天然物质更高活性的类似物，或与天然物质结构不 同的全新的药理活性成分。
➢ 重组人生长激素、重组人胰岛素、重组人干扰素1b、重组 人白细胞介素-2、重组人红细胞生成素（EPO）等
生物药物分类
生化药物
生物合成药物
活菌颗粒、酪酸梭菌活菌片等 ▪ 诊断制品——体外诊断制品（HBsAg酶联免疫诊断试剂
盒）、体内诊断试剂
第13章 生物制品分析概论08
• 检查方法是根据在琼脂培养基上抗生素对微 生物的抑制作用，比较对照品和供试品对接种 的试验菌产生抑菌圈的大小，检查供试品中抗 生素（氨苄西林、四环素）的残留量。 一般要求不得检出残留的抗生素。
二 安全性检查
• （一）无菌检查 • 无菌检查
无菌检查法是用于确定要求灭菌的生物制品、 原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 若供试品符合无菌检查的规定，仅表明供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。 • （1）薄膜过滤法
•
• （2）溴化氰裂解法 取供试品与对照品适量，用水透析16小时，
冷冻干燥，加溴化氰裂解液20μl溶解，室温放 置24小时，加水180 μl ，再冷冻干燥，冻干的 裂解物用水复溶至适当浓度，用SDS-PAGE法 进行电泳，银染色法染色。
将供试品溶液和对照品溶液的肽图进行比较， 即得。
• 肽图可以作为与天然产品和对照品的蛋白质 一级结构作精细比较的手段。不同批次产品肽 图的一致性是工艺稳定性考察的重要依据。
• 以标准品溶液吸光度对相应的浓度作为标准曲线，并以供试品 溶液吸光度在标准曲线上得到相应菌体蛋白含量，按以下公式计 算 供试品菌体蛋白残留含量（％）＝
• （此处公式见P382) 式中：c为供试品溶液中菌体蛋白质含量，ng/ml； D为供试品稀释倍数； T为供试品蛋白质含量，mg/ml。
二宿主细胞DNA的检查
• 各国对生物制品的管理情况 1983年11月，美国FDA制订了“重组DNA生产的药
品，生物制品的生产和检定要点”文件， 1987年6月，欧共体制定了“基因重组技术医药产品
的生产及质量控制”文件，
• 1990年，我国卫生部颁发了“人用重组DNA制品质 量控制要点”，“基因工程人α型干扰素制备及质量控 制要点”。2000年10月1日，国家药品监督管理局批准 颁布执行《中国生物制品规程》。《中国药典》 （2005年版）将生物制品单独列出，作为第三部。
二 安全性检查
• （一）无菌检查 • 无菌检查
无菌检查法是用于确定要求灭菌的生物制品、 原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。 若供试品符合无菌检查的规定，仅表明供试品 在该检验条件下未发现微生物污染。 • （1）薄膜过滤法
•
• （2）溴化氰裂解法 取供试品与对照品适量，用水透析16小时，
冷冻干燥，加溴化氰裂解液20μl溶解，室温放 置24小时，加水180 μl ，再冷冻干燥，冻干的 裂解物用水复溶至适当浓度，用SDS-PAGE法 进行电泳，银染色法染色。
将供试品溶液和对照品溶液的肽图进行比较， 即得。
• 肽图可以作为与天然产品和对照品的蛋白质 一级结构作精细比较的手段。不同批次产品肽 图的一致性是工艺稳定性考察的重要依据。
• 以标准品溶液吸光度对相应的浓度作为标准曲线，并以供试品 溶液吸光度在标准曲线上得到相应菌体蛋白含量，按以下公式计 算 供试品菌体蛋白残留含量（％）＝
• （此处公式见P382) 式中：c为供试品溶液中菌体蛋白质含量，ng/ml； D为供试品稀释倍数； T为供试品蛋白质含量，mg/ml。
二宿主细胞DNA的检查
• 各国对生物制品的管理情况 1983年11月，美国FDA制订了“重组DNA生产的药
品，生物制品的生产和检定要点”文件， 1987年6月，欧共体制定了“基因重组技术医药产品
的生产及质量控制”文件，
• 1990年，我国卫生部颁发了“人用重组DNA制品质 量控制要点”，“基因工程人α型干扰素制备及质量控 制要点”。2000年10月1日，国家药品监督管理局批准 颁布执行《中国生物制品规程》。《中国药典》 （2005年版）将生物制品单独列出，作为第三部。
1 生物制品概论课件
• 抗独特型抗体疫苗
• 抗独特型抗体诊断制品
第四节 动物生物制品课程的学习
• 理论学习 45学时 • 30%: 考勤、上课回答问题(课后复习题
或作业) • 70%: 期末考试
• 11-12周“动物生物制品学大实验” • 五个综合实验。
• 学习方法
课后思考题
• 1．基本概念：生物制品学、动物生物制品、 疫苗、活疫苗与灭活疫苗、病毒抗体复合物疫 苗、重组活疫苗、基因工程活载体疫苗、亚单 位疫苗、基因工程亚单位疫苗、抗独特型疫苗、 单价疫苗、多价疫苗与混合疫苗、同源疫苗与 异源疫苗、益生素、副免疫制品
• 生物制品的命名以明确、简练、科学为 基本原则。
• 生物制品名称不采用商品名或代号。
• 采用“动物种名＋病名＋制品种类”的 形式。
• 诊断制剂则在制品种类前加诊断方法名 称
• 共患病一般可不列动物名
三、以生物制品种类的命名原则
• 由特定细菌、病毒、立克次体、螺旋体、 枝原体等微生物以及寄生虫等制成的主 动免疫制品，一律答为疫苗。
2、 抗血清和抗毒素(antiserun and antitoxin)
• 由特定的病原微生物或类毒素、毒素以 及亚单位成分免疫动物，采血制备的血 清。
• 细菌、病毒为抗原制备的称抗血清；用 类毒素和毒素为抗原制备的称抗毒素。
• 注射特定抗血清或抗毒素可预防或治疗 特定病原引起的传染病。
3、 诊断制品(Diagnostic Preparations)
的形式。
• 两种以上血清型制成的多价疫苗，命名 采用“动物种名＋病名＋由若干型名＋x
价疫苗”的形式。
• 制品的制造方法、剂型、灭活剂、佐剂 一般不标明。但为区别已有的制品，可 以标明。
第三节 动物生物制品的研究 状况和发展动向
• 抗独特型抗体诊断制品
第四节 动物生物制品课程的学习
• 理论学习 45学时 • 30%: 考勤、上课回答问题(课后复习题
或作业) • 70%: 期末考试
• 11-12周“动物生物制品学大实验” • 五个综合实验。
• 学习方法
课后思考题
• 1．基本概念：生物制品学、动物生物制品、 疫苗、活疫苗与灭活疫苗、病毒抗体复合物疫 苗、重组活疫苗、基因工程活载体疫苗、亚单 位疫苗、基因工程亚单位疫苗、抗独特型疫苗、 单价疫苗、多价疫苗与混合疫苗、同源疫苗与 异源疫苗、益生素、副免疫制品
• 生物制品的命名以明确、简练、科学为 基本原则。
• 生物制品名称不采用商品名或代号。
• 采用“动物种名＋病名＋制品种类”的 形式。
• 诊断制剂则在制品种类前加诊断方法名 称
• 共患病一般可不列动物名
三、以生物制品种类的命名原则
• 由特定细菌、病毒、立克次体、螺旋体、 枝原体等微生物以及寄生虫等制成的主 动免疫制品，一律答为疫苗。
2、 抗血清和抗毒素(antiserun and antitoxin)
• 由特定的病原微生物或类毒素、毒素以 及亚单位成分免疫动物，采血制备的血 清。
• 细菌、病毒为抗原制备的称抗血清；用 类毒素和毒素为抗原制备的称抗毒素。
• 注射特定抗血清或抗毒素可预防或治疗 特定病原引起的传染病。
3、 诊断制品(Diagnostic Preparations)
的形式。
• 两种以上血清型制成的多价疫苗，命名 采用“动物种名＋病名＋由若干型名＋x
价疫苗”的形式。
• 制品的制造方法、剂型、灭活剂、佐剂 一般不标明。但为区别已有的制品，可 以标明。
第三节 动物生物制品的研究 状况和发展动向
生物制品分析概论
运行电压：12 KV DW： 214 nm
第三十四页
第三十五页
二、生化鉴别法
1.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
激活
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
第三十六页
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白 原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝 血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水 浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝 结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结 块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白， 同法操作，凝结块在2小时内不溶。
重组人促红素：最大吸收 279nm±2nm； 最小吸收250nm±2nm；在320nm~360nm 处无吸收峰
第三十页
3.高效液相色谱法
主峰保留时间和肽图的一致性
结合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白质 类生物制品精确的鉴别方法
第三十一页
高效液相色谱法：
1、反相高效液相色谱法
2、分子排阻色谱法 毛细管电泳 1、毛细管区带电泳CZE
第十三页
重组DNA制品
天然基因
合成的核 苷酸序列
重组
内切酶 载
的遗
连接酶 体
传物
导
质
入
目的 分离纯化 受体
到
产物
细胞
增殖、表达
第十四页
重组DNA制品
• 细胞因子类 • 生长因子类 • 激素类 • 酶类 • 疫苗 • 单克隆抗体
第十五页
诊断制品
• 用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫 状态的制品。
生物鉴别法
第二十八页
第三十四页
第三十五页
二、生化鉴别法
1.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
激活
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
第三十六页
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白 原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝 血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水 浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝 结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结 块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白， 同法操作，凝结块在2小时内不溶。
重组人促红素：最大吸收 279nm±2nm； 最小吸收250nm±2nm；在320nm~360nm 处无吸收峰
第三十页
3.高效液相色谱法
主峰保留时间和肽图的一致性
结合N-末端氨基酸序列分析，是蛋白质 类生物制品精确的鉴别方法
第三十一页
高效液相色谱法：
1、反相高效液相色谱法
2、分子排阻色谱法 毛细管电泳 1、毛细管区带电泳CZE
第十三页
重组DNA制品
天然基因
合成的核 苷酸序列
重组
内切酶 载
的遗
连接酶 体
传物
导
质
入
目的 分离纯化 受体
到
产物
细胞
增殖、表达
第十四页
重组DNA制品
• 细胞因子类 • 生长因子类 • 激素类 • 酶类 • 疫苗 • 单克隆抗体
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诊断制品
• 用于检测相应的抗原、抗体或机体免疫 状态的制品。
生物鉴别法
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生物制品分析生物制品分析共43页文档
生物制品分析生物制品分析
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
41、实际上，我们想要的不是针对犯 罪的法 律，而 是针对 疯狂的 法律。 ——马 克·吐温 42、法律的力量应当跟随着公民，就 像影子 跟随着 身体一 样。— —贝卡 利亚 43、法律和制度必须跟上人类思想进 步。— —杰弗 逊 44、人类受制于法律，法律受制于情 理。— —托·富 勒
45、法律的制定是为了保证每一个人 自由发 挥自己 的才能 ，而不 是为了 束缚他 的才能 。—— 罗伯斯 庇尔
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
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3）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。
4）将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色，用脱 色液脱色至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。
应仅与抗人血清或血浆产生沉淀线，与抗马、抗猪、 抗牛、抗羊血清或血浆不产生沉淀线。
鉴别试验
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系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与
鉴别试验
ChP人血白蛋白的鉴别
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1）将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倒于水平板上（每平方厘米加 0.19ml琼脂糖），凝固后打孔，直径3mm，孔距3mm（方阵型）。
2）中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留一孔加入
免疫双扩散法
相应阳性对照血清。每孔加样20μ l，然后置水平湿盒中，37℃ 水平扩散24小时。
根据用途分为三类
1）预防类：细菌类疫苗、病毒类疫苗、联合疫苗 2）治疗类：抗毒素及免疫血清、血液制品、细胞因子及DNA重组技术制品 和单克隆抗体
3）诊断类：体内诊断类、体外诊断类
根据所用材料、制法或用途分为以下几类：
一、分类
疫苗类药物
指用病毒或立克次体接种于动物、 鸡胚，或经组织培养后加以处理 制造而成。
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安全性
使用安全，副作用小。
使用后能产生相应效力。 02
有效性
制品的生产工艺、储存条件、 成品的药效、稳定性、外观、 包装、使用方法和价格可接受。
03
可接受性
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CONTENTS
第三节
3
鉴别试验
鉴别试验
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免疫双扩散法
01 02
免疫电泳法
免疫印迹法
03
04
免疫斑点法
酶联免疫法
酶联免疫法。
酶联免疫法
如动感乙型脑炎灭活疫苗（Vero细胞）、人用狂
犬疫苗（Vero细胞）和重组乙型肝炎疫苗（酿酒 酵母）等均采用该法进行鉴别。
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CONTENTS
第四节
4Leabharlann 生物制品检查内容生物制品检查内容
01 02
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安全性
毒性试验 防腐剂试验 热原质试验 有关安全性的特殊试验 量）
联合疫苗
指两种或两种以上疫苗原液按特定比例配 合制成的具有多种免疫原性的疫苗。
双价及多价疫苗
由两个及以上同种但不同型（或群）抗 原合并组成的含有双价或多价抗原成分 的一种疫苗分别称。
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CONTENTS
第二节
2
生物制品的 质量要求
生物制品的质量要求
生物制品的质量标准有别于其他商品，强调其特殊性。 01
与正常人血清或血浆比较， 主要沉淀线应为IgG。
4）将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色，用脱色
液脱色至背景无色。
鉴别试验
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系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶
标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对 供试品的抗原特异性进行检查。
免疫印迹法
ChP2010收载的重组人促红素注射液（CHO细胞） 和注射用重组人干扰素α 1b等均采用该法进行
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第二十章 生物制品分析
制作人：沈阳药科大学 药学院 80K药物分析 陈丹丹 131080102
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1 2
生物制品的分类
生物制品的质量要求 鉴别试验 生物制品检查内容
CONTENTS 3
4
目录
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CONTENTS
第一节
1
生物制品的分类
一、分类
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生物制品（Biological Products） 是应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技 术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备， 用于人类疾病预防、治疗和诊断的药品。
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抗毒素及抗血清类药物
抗毒素：用细菌类毒素或毒素免疫马 或其它大动物所取得的免疫血清； 抗菌或病毒血清：用细菌或病毒本身 免疫马或其他大动物所得免疫血清。
血液制品
由健康人血浆或经特异免疫的人血浆， 经分离、提纯或由重组DNA技术制成的血 浆蛋白组分，以及血液细胞的有形成分。
重组DNA制品
细胞因子类、生长因子类、激素类、
静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于琼脂糖凝胶板负极 1/3处的上下各打一孔，孔径3mm，孔距10-15mm。
免疫电泳法
2）测定孔加供试品溶液10μ l和溴酚蓝指示液1d，对照孔加正常人
血清或血浆10μ l和溴酚蓝指示液1d。 3）用三层滤纸搭桥和巴比妥缓冲液（电泳缓冲液）接触，100V恒 压电泳月2h（指示剂迁移到前沿）。电泳结束后，在两孔之间距离 两端月3-5mm处挖宽3mm槽，向槽中加入血清抗体或人血浆抗体，槽 满但不溢出。放湿盒中37℃扩散24小时。 3）用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖胶板，以除去未结合蛋白。
05
鉴别试验
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系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个孔，在相邻
两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对 应，浓度、比例适当，则一定时间后、在抗原与抗
免疫双扩散法
体孔之间形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品
的特异性进行检查。
ChP2010收载的伤寒Vi多糖疫苗、狂犬病人免疫球
蛋白和人血白蛋白等，均采用该法进行鉴别。
相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时 形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗
免疫电泳法
体生成的沉淀弧的位置和性状进行比较，即可分析
供试品中的成分及其性质。
ChP2010收载的人血白蛋白和冻干人免疫球蛋白等
均采用该法进行鉴别。
鉴别试验
ChP冻干人免疫球蛋白的鉴别
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1）将1.5%琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，厚度约3mm，
酶类、疫苗类、诊断制品。
疫苗类药物
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指用病毒或立克次体接种于动物、鸡胚，或经组织培养后加以处理制造 而成。 细菌类疫苗
由有关细菌、螺旋体或其衍生物制成的减毒 活疫苗、灭活疫苗、重组DNA疫苗和亚单位疫 苗等。
病毒类疫苗
由病毒、衣原体、立克次体或其衍生物 制成的减毒活疫苗、灭活疫苗、重组DNA 疫苗和亚单位疫苗等。
鉴别。
鉴别试验
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所用原理同免疫印迹法，但具体操作有所不同。
以供试品与特异性抗体结合后抗体再与酶标抗体 特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的
免疫斑点法
抗原特异性进行检查。
ChP2010收载的注射用重组人干扰素α 2a等，均
采用该法进行鉴别。
鉴别试验
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ChP2010规定抗毒素和抗血清制品鉴别试验采用