实验十一细菌常用生理生化反应实验接种
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实验十一 细菌常用生理生化 反应实验接种
一 实验目的
• 1 学习各种生理生化反应实验的原理 • 2 学习巩固各种生理生化反应实验的接
种方式并熟练掌握各种接种方法
二 实验原理
• 1 葡萄糖发酵实验原理: • 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在
肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能 利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类 物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某 种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气 体(如氢气、甲烷、二氧化碳等);产酸后溴甲 酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色(pH5.2), 产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡. 参见 课本第109页
实验名称
培养基
接种方式 菌种
淀粉水解实验
淀粉培养基平板 平板点种 大肠杆菌,枯草杆菌
明胶分解 葡萄糖发酵 柠檬酸盐利用 硫化氢产生实验
富氏明胶培养基 平板点种 葡萄糖发酵培养基 半固体穿刺 柠檬酸盐培养基 斜面接种 硫化氢产生实验培养基 固体穿刺
大肠杆菌,枯草杆菌
大肠杆菌,恶臭假单胞菌
大肠杆菌,产气杆菌 大肠杆菌,变形杆菌
参见课本第119页。
• 5 柠檬酸盐实验原理: • 肠杆菌科各属细菌利用柠檬酸的能力不同,
有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源,有的则 不能。某些菌分解柠檬酸形成CO2、由于 培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠,使 培养基碱性增加,根据培养基中的指示剂 变色情况来判断试验结果。指示剂可用1% 的溴麝香草酚蓝酒精溶液,变色范围为 pH6.3(黄)~7.6(蓝).
参见课本第117页。
三 实验器材
• 1 培养基:生理生化反应用的各种平板, 斜 面,液体,半固体培养基.
• 2 器材:试管架,酒精灯,火柴,接种环 (针),牛皮纸, 记号笔等.
• 3 菌种: 大肠杆菌,产气杆菌, 变形杆菌,枯草 杆菌,恶臭假单胞菌.
四 实验操作
• (一) 接种: 标记按下表接种
• 1 微生物鉴定的基本步骤是什么? • 2 常用于微生物分类鉴定的形态学特征有哪
些? • 3 常用于微生物分类鉴定的生理生化特征有
哪些?
• 3吲哚实验原理: • 某些细菌能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸,
产主吲哚,吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合。形 成玫瑰吲哚,为红色化合物,其反应如下:
参见课本第111页。
• 4 硝酸盐还原实验原理: • 某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮气等。如果细菌能
把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,当培养基中加入格利斯亚硝酸试剂时, 则培养液呈粉红色或红色,为正反应。 • 如果在培养液中加入格利斯亚硝酸试剂后溶液不出现红色,则有两种可能性: • 1)细菌不能还原硝酸盐,故培养后的培养液中仍有硝酸盐存在,此为负反应。 • 2)硝酸盐被细菌还原为亚硝酸盐后,亚硝酸盐继续被还原成氨和氮气,故 培养液中也没有硝酸盐存在,此反应为正反应。 • 培养液中硝酸盐存在与否可用下列方法检查:在培养液中加入二笨胺试剂, 如溶液呈蓝色,则说明原来的硝酸盐未被还原,此系负反应。但如果在培养 液中加入二苯胺试剂,溶液不呈现蓝色,则说明培养液中己不存在硝酸盐, 故为正反应。
• 有些细菌具有合成淀粉酶的能力,可以分 泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为 麦芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再变 蓝色 ,在平板上加上碘液后,有淀粉的部分 培养基遇淀粉变为兰色, 淀粉被分解部分的 培养基呈现透明的状态,可以使菌落周围 出现透明圈。
参见课本第106页。
8 硫化氢产生实验原理
• 某些细菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢, 硫化氢遇重金属盐如铅盐、铁盐时则生成 黑色硫化铅或硫化铁沉淀,从而可确定硫 化氢的产生。在培养基中加入柠檬酸铁铵, 培养后观察是否有黑色沉淀产生。培养基 中加入硫代硫酸钠是为了保持低的氧化还 原电位,防止产生的硫化氢被空气中的氧氧 化,采用固体穿刺接种也是为了更好的保持 低的氧化还原电位.
吲哚产生实验
蛋白胨水培养基 液体接种
甲基红和伏普实验 葡萄糖蛋白胨水培养基 液体接种
硝酸盐还原实验 硝酸盐还原实验培养基 液体接种
大肠杆菌,产气杆菌 大肠杆菌,产气杆菌
大肠杆菌,恶臭假单胞菌
• (二) 培养
• 将接种好的培养基放在37℃培养箱中培养, 两天后观察.
• 两天后(时间待定)观察.
五 思考题
• 2 V. P. 反应和甲基红试验原理: • V. P. 反应:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮
酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇(亦称三羟基丁酮), 然后被还原为2,3-丁二醇,乙酰甲基甲醇在碱性条件下,被空气中 的氧气氧化成为二乙酰,二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用 生成红色化合物。此为V.P.正反应(若培养基中胍基太少,可加 少量肌酸等胍基化合物)。在试管中加入α-萘酚时,可促进反应进行。 • 甲基红反应:某些细菌在糖代谢过程中,将培养基中的糖先分解为丙 酮酸,丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。有机酸的产生可由加 入甲基红指示剂的变色进行检测。甲基红变色范围为pH4.2 (红)~6.3(黄)。细菌分解葡萄糖产酸,将培养液由原来的橘黄 色变为红色,此为M.R.正反应。 • 参见课本第113页和114页。
参见课本第116页。
Fra Baidu bibliotek
• 6 明胶水解实验: • 某些细菌能分泌明胶酶分解明胶,产生小
分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力, 则平板培养基中的明胶被分解成小分子的 物质,在平板上加上蛋白凝固剂后,明胶 被分解部分的培养基呈现透明的状态,可 以使菌落周围出现透明圈。
参见课本第108页。
7 淀粉水解实验原理
一 实验目的
• 1 学习各种生理生化反应实验的原理 • 2 学习巩固各种生理生化反应实验的接
种方式并熟练掌握各种接种方法
二 实验原理
• 1 葡萄糖发酵实验原理: • 糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在
肠道细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能 利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类 物质的能力上有很大的差异。有些细菌能分解某 种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气 体(如氢气、甲烷、二氧化碳等);产酸后溴甲 酚紫指示剂可由紫色pH(6.8)变为黄色(pH5.2), 产气的细菌可使半固体培养基中存有气泡. 参见 课本第109页
实验名称
培养基
接种方式 菌种
淀粉水解实验
淀粉培养基平板 平板点种 大肠杆菌,枯草杆菌
明胶分解 葡萄糖发酵 柠檬酸盐利用 硫化氢产生实验
富氏明胶培养基 平板点种 葡萄糖发酵培养基 半固体穿刺 柠檬酸盐培养基 斜面接种 硫化氢产生实验培养基 固体穿刺
大肠杆菌,枯草杆菌
大肠杆菌,恶臭假单胞菌
大肠杆菌,产气杆菌 大肠杆菌,变形杆菌
参见课本第119页。
• 5 柠檬酸盐实验原理: • 肠杆菌科各属细菌利用柠檬酸的能力不同,
有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源,有的则 不能。某些菌分解柠檬酸形成CO2、由于 培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠,使 培养基碱性增加,根据培养基中的指示剂 变色情况来判断试验结果。指示剂可用1% 的溴麝香草酚蓝酒精溶液,变色范围为 pH6.3(黄)~7.6(蓝).
参见课本第117页。
三 实验器材
• 1 培养基:生理生化反应用的各种平板, 斜 面,液体,半固体培养基.
• 2 器材:试管架,酒精灯,火柴,接种环 (针),牛皮纸, 记号笔等.
• 3 菌种: 大肠杆菌,产气杆菌, 变形杆菌,枯草 杆菌,恶臭假单胞菌.
四 实验操作
• (一) 接种: 标记按下表接种
• 1 微生物鉴定的基本步骤是什么? • 2 常用于微生物分类鉴定的形态学特征有哪
些? • 3 常用于微生物分类鉴定的生理生化特征有
哪些?
• 3吲哚实验原理: • 某些细菌能够分解培养基内蛋白胨中的色氨酸,
产主吲哚,吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合。形 成玫瑰吲哚,为红色化合物,其反应如下:
参见课本第111页。
• 4 硝酸盐还原实验原理: • 某些细菌能将培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐、氨和氮气等。如果细菌能
把培养基中的硝酸盐还原为亚硝酸盐,当培养基中加入格利斯亚硝酸试剂时, 则培养液呈粉红色或红色,为正反应。 • 如果在培养液中加入格利斯亚硝酸试剂后溶液不出现红色,则有两种可能性: • 1)细菌不能还原硝酸盐,故培养后的培养液中仍有硝酸盐存在,此为负反应。 • 2)硝酸盐被细菌还原为亚硝酸盐后,亚硝酸盐继续被还原成氨和氮气,故 培养液中也没有硝酸盐存在,此反应为正反应。 • 培养液中硝酸盐存在与否可用下列方法检查:在培养液中加入二笨胺试剂, 如溶液呈蓝色,则说明原来的硝酸盐未被还原,此系负反应。但如果在培养 液中加入二苯胺试剂,溶液不呈现蓝色,则说明培养液中己不存在硝酸盐, 故为正反应。
• 有些细菌具有合成淀粉酶的能力,可以分 泌胞外淀粉酶。淀粉酶可以使淀粉水解为 麦芽糖和葡萄糖,淀粉水解后遇碘不再变 蓝色 ,在平板上加上碘液后,有淀粉的部分 培养基遇淀粉变为兰色, 淀粉被分解部分的 培养基呈现透明的状态,可以使菌落周围 出现透明圈。
参见课本第106页。
8 硫化氢产生实验原理
• 某些细菌能分解含硫氨基酸产生硫化氢, 硫化氢遇重金属盐如铅盐、铁盐时则生成 黑色硫化铅或硫化铁沉淀,从而可确定硫 化氢的产生。在培养基中加入柠檬酸铁铵, 培养后观察是否有黑色沉淀产生。培养基 中加入硫代硫酸钠是为了保持低的氧化还 原电位,防止产生的硫化氢被空气中的氧氧 化,采用固体穿刺接种也是为了更好的保持 低的氧化还原电位.
吲哚产生实验
蛋白胨水培养基 液体接种
甲基红和伏普实验 葡萄糖蛋白胨水培养基 液体接种
硝酸盐还原实验 硝酸盐还原实验培养基 液体接种
大肠杆菌,产气杆菌 大肠杆菌,产气杆菌
大肠杆菌,恶臭假单胞菌
• (二) 培养
• 将接种好的培养基放在37℃培养箱中培养, 两天后观察.
• 两天后(时间待定)观察.
五 思考题
• 2 V. P. 反应和甲基红试验原理: • V. P. 反应:某些细菌在糖代谢过程中,分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮
酸脱羧通过缩合和脱羧后转变成乙酰甲基甲醇(亦称三羟基丁酮), 然后被还原为2,3-丁二醇,乙酰甲基甲醇在碱性条件下,被空气中 的氧气氧化成为二乙酰,二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的胍基起作用 生成红色化合物。此为V.P.正反应(若培养基中胍基太少,可加 少量肌酸等胍基化合物)。在试管中加入α-萘酚时,可促进反应进行。 • 甲基红反应:某些细菌在糖代谢过程中,将培养基中的糖先分解为丙 酮酸,丙酮酸再被分解为甲酸、乙酸、乳酸等。有机酸的产生可由加 入甲基红指示剂的变色进行检测。甲基红变色范围为pH4.2 (红)~6.3(黄)。细菌分解葡萄糖产酸,将培养液由原来的橘黄 色变为红色,此为M.R.正反应。 • 参见课本第113页和114页。
参见课本第116页。
Fra Baidu bibliotek
• 6 明胶水解实验: • 某些细菌能分泌明胶酶分解明胶,产生小
分子物质。如果细菌具有分解明胶的能力, 则平板培养基中的明胶被分解成小分子的 物质,在平板上加上蛋白凝固剂后,明胶 被分解部分的培养基呈现透明的状态,可 以使菌落周围出现透明圈。
参见课本第108页。
7 淀粉水解实验原理