微生物细菌鉴定试验汇总

5.枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验
【原理】：当细菌可以利用铵盐作为唯一氮源，同时柠檬酸
盐为惟一碳源时，可在柠檬酸盐培养基上生长，分解柠檬 酸盐为碳酸盐，使培养基变碱，指示剂溴麝香草酚蓝由绿
色变为深蓝色为阳性，培养基不变色（绿色）为阴性。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于柠檬酸盐培 养基中，35º C，24-48h，观察。 【结果】：菌苔出现，培养基变为深蓝色为阳性。细菌不能 生长，培养基不变色（绿色）为阴性。
变黑，说明该菌产生硫化氢，生成黑色的硫化铁
沉淀。
7.动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
【原理】：培养基为含尿素、蛋白胨的半固体培养基，指示 剂为酚红。具色氨酸酶的细菌能分解色氨酸产生吲哚，加 入吲哚试剂后，培养基上层的吲哚会变红；具脲酶的细菌 能分解尿素产氨，使整个培养基变碱呈红色；有动力的细 菌沿穿刺线扩散生长。 【方法】：将大肠埃希菌和普通变形杆菌穿刺线接种于MIU 培养基，35º C，18-24h，观察动力和脲酶反应后，再滴加 吲哚试剂。 【结果】：扩散生长为动力阳性；滴加吲哚试剂后呈玫瑰 红色为阳性；培养基变红脲酶阳性。
分 解
致病菌：
不分解乳糖，菌落呈 无色、半透明。
美蓝
伊红 结合
紫黑色或紫红色化合物
其它类似培养基？
SS培养基
（Salmonella Shigella Agar Medium）
SS平板
基质
抑制物 底物 指示剂
肉汤基础培养基
胆盐、煌绿、枸橼酸钠、硫代硫酸钠 乳糖 中性红 pH（6.8—8.0） 碱性→黄色 酸性→红色
常用细菌生化反应

触酶试验
凝固酶试验
胆汁溶菌试验 氧化/发酵试验 氧化酶试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 硝酸盐还原试验 糖发酵试验
吲哚试验（靛基质试验）
甲基红试验 V-P（Voges-Proskauer）试验 枸橼酸盐（或柠檬酸盐）利用试验 克氏双糖铁（KIA）复合试验 动力、吲哚及脲酶（MIU）复合试验
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【原理】：该培养基用酚红指示剂，在酸性时呈黄色，碱性
时呈红色。细菌如能发酵乳糖和葡萄糖而产酸产气，则斜 面与底层均呈黄色，且有气泡。如只发酵葡萄糖不发酵乳
糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接触空气而
氧化挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层由于是 在相对缺氧状态下，细菌发酵葡萄糖所生成的酸类物质不
S
+
金葡
凝固酶试验
表葡
－
表葡、腐生
新 生 霉 素
R
腐生
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链球菌属鉴定流程
触酶试验：阴性
观察血平板上溶血环
β -溶血环
非β -溶血环
杆菌肽 、CAMP、 胆七 、高盐
Optochin、杆菌肽、 胆七 、高盐
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非β 溶血链球菌鉴定
菌 种
Optochin 敏感试验 S R R
胆汁溶菌试验
+ — —
试管法：于3支试管中分别加入1:4稀释的血浆0.5ml，1支
管加入待检菌肉汤培养物0.5ml,另两支分别加阴阳性对照 菌肉汤培养物0.5ml，35℃培养3～4h后观察结果。 应用：主要用于金葡菌的鉴定。

（3）种的鉴定
1）凝固酶试验
• 玻片法测定结合型凝固酶；试管法测定分泌型凝固酶。金黄色葡萄球菌、
苯丙氨酸脱氨酶试验方法
方法：

琼脂斜面法：将待检细菌接种到苯丙氨酸琼
脂斜面上， 35℃培养24～48h，取出，将三
氯化铁试剂4～5滴滴于斜面上，观察结果。

快速纸片法：将待检菌涂于苯丙氨酸纸片上， 孵育15min，取出，滴加三氯化铁试剂，立 即观察结果。

应用：多用于肠杆菌科的鉴定。 变
形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根
被氧化挥发而保持黄色。如细菌分解蛋白产生硫化氢，则
与硫化亚铁作用生成黑色的硫化铁，使培养基变黑。
6.克氏双糖铁（KIA）复合试验
【方法】：将待检菌接种于克氏双糖铁培养基（底
层穿刺，上层斜面划线），35º C，24h，观察。 【结果】：发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则上层和 底层均呈黄色且有气泡产生；只发酵葡萄糖而不 发酵乳糖，则底层变黄，上层仍为红色。如底层
的色氨酸产生吲哚，与吲哚试剂形成红色化合物。 【方法】：大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白 胨水培养基中，35º C18-24h后，加入吲哚试剂数滴， 静置分层，观察结果。
【结果】：在培养物液面上层呈玫瑰红色为阳性，不
变色者为阴性。
3.甲基红试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一 步分解为甲酸、乙酸等酸性物质，故培养基pH 在4.5以下， 加入甲基红指示剂后呈红色（阳性）；有些细菌分解葡萄 糖产生的酸进一步化为醇、酮等非酸性物质，使培养基pH
触酶试验
原理：
有触酶的细菌能催化过氧化 氢生成水和初生态氧，继而形 成氧分子出现气泡。

触酶许，置于洁净 的玻片上，滴加3%的过氧化氢1～2 滴，观察结果。 试管法：用洁净的玻棒蘸取待检菌 少许，置于装有3%过氧化氢的试管 内，观察结果。

触酶试验结果
应用： 用于革兰阳性球菌初步分属。 注意事项：
在6.2以上，加入甲基红指示剂后呈黄色（阴性）。
【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种葡萄糖蛋白胨 水培养基中，35º C18-24h，加入甲基红指示剂2-3滴观察
结果。
【结果】：红色为阳性，黄色为阴性。
4.V-P（Voges-Proskauer）试验
【原理】：某些细菌分解葡萄糖生成丙酮酸，进一步脱羧生成乙 酰甲基甲醇，在碱性环境下被氧化成二乙酰，后者与蛋白胨中 的精氨酸所含的胍基起作用，生成红色胍缩二乙酰，为VP试验 阳性。若培养基中胍基含量少，加入少量含胍基的化合物如肌 酐，以加速其反应。 【方法】：大肠埃希菌和产气肠杆菌分别接种于葡萄糖蛋白胨水 中，35º C，24-48h，加入VP试剂甲液和乙液各1滴，充分摇动， 观察。 【结果】：红色为阳性，若为阴性应再培养4h观察，仍无红色者 为阴性。


CAMP试验

原理：
B群链球菌能产生一种胞外因子——
CAMP,它能增强金黄色葡萄球菌β -溶 血毒素的活性，因此，在两菌交界处 出现箭头样的溶血增强区。
CAMP试验方法

方法：
取血平板一块，用产生β -溶血毒素
的金葡菌在中央划一道线，将待检菌据此 观察结果。

线0.5cm处垂直划线。35℃18~24小时培养，
中间型葡萄球菌呈现阳性反应。路邓葡萄球菌产生结合型凝固酶而不分泌游 离型凝固酶, 因而玻片凝固酶试验阳性、试管凝固酶试验阴性。
•玻片法 少许菌落 + 兔血浆 10 s 内出现凝集为阳性
试管法:
试管2支，各加0.5 ml兔血浆，取被检 菌和阳性对照菌分别加血浆混匀，37 ℃水浴3~4 h
阳性：金葡、中间葡 阴性：其它葡萄球菌
(-)凝固酶(+)
(-)商品化的胶乳凝集试验(+)
胆汁溶菌试验

原理： 胆盐、去氧胆酸钠和硫磺胆酸钠
能选择性地溶解肺炎链球菌，胆汁降
低细胞膜的张力-膜破损或裂解
胆汁溶菌试验方法


方法：
平板法：取胆酸钠溶液一环，放在平板的 菌落上，35℃30min观察结果。 试管法：于0.9ml培养了18～24小时的菌 液中，加入取氧胆酸钠试剂0.1ml或牛胆 盐0.2ml混匀，37℃水浴10～30min，观察 结果。 应用： 主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌。
【结果】：

首先确定细菌是否生长，细菌生长者培养基呈混浊状：
1）不分解糖，培养基顔色与接种前无变化，以“-”表示； 2）分解糖产酸不产气，培养基由紫色变为黄色，以“+” 表示； 3）分解糖产酸产气，除培养基顔色变化外，倒管中还有
气泡，以“⊕”表示。
2.吲哚试验（靛基质试验）
【原理】：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中
胆汁七叶苷试验
— — +
肺炎链球菌 草绿色链球菌
牛链球菌
氧化-发酵试验
又称O/F试验或Hugh-Ldifson（HL）试验
葡萄糖氧化/发酵试验

原理：
细菌分解葡萄糖对O2需求不同， 氧化型：细菌只在有氧环境中分解葡萄糖; 发酵型：细菌可在有氧、无氧环境中分解G; 产碱型：细菌在有氧、无氧环境中都不 分解葡萄糖;

色醌类化合物
氧化酶试验方法

方法： 滤纸法：用洁净滤纸蘸取菌落，加一滴 试剂，观察结果

菌落法：直接在菌落上加试剂，观察结
果

纸片法：使用试剂浸泡制成的试剂纸片，
取足够的菌落，观察结果。 应用：用于科别鉴定试验。

苯丙氨酸脱氨酶试验

原理：
有苯丙氨酸脱氨酶的细菌，可以 使苯丙氨酸脱氨形成苯丙酮酸，苯 丙铜酸与三氯化铁作用形成绿色化 合物。
伊红美蓝培养基（EMB）
EMB平板 基质 抑制物 底物 指示剂 肉汤基础培养基 伊红、美蓝 乳糖 伊红、美蓝 碱性 菌落持点 无色半透明菌落
酸性→紫黑色或紫红色，且有金属光泽
＋为紫黑色或紫红色菌落
－为无色半透明菌落 抑制作用
用途
抑制G＋菌
分离沙门菌和志贺菌属的弱选择培养基
原理：（EMB平板)
非致病菌： 乳糖
应用：
用于鉴定B群链球菌。
3）CAMP试验
• 无乳链球菌能产生 CAMP 因子，它可促进金黄色葡萄
球菌溶血能力，使其产生显著的协同溶血作用。本 法可作为无乳链球菌的初步鉴定试验
标本
涂片：G+C
鉴 定 流 程
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