高效液相色谱操作步骤
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
简述安捷伦高效液相色谱仪的操作流程和注意事项
安捷伦高效液相色谱仪（Agilent HPLC）是一种常用的分析仪器，广泛应用于化学、生物、环境等领域。
其操作流程和注意事项如下：
操作流程：
1. 准备样品溶液：根据分析目的选择适当的溶剂，将样品溶解或稀释至所需浓度。
2. 准备色谱柱：根据分析需求选择合适的色谱柱，并按照柱床规定的要求进行预处理，如洗涤、调pH等。
3. 连接系统：将色谱柱安装在仪器上，连接好进样器、泵、检测器和废液收集器等组件，确保连接紧密无漏。
4. 设置方法参数：根据分析需求，设置泵的流速、进样器的进样量、检测器的波长和灵敏度等方法参数。
5. 系统平衡：启动泵和检测器，运行空白试验，确保色谱柱和系统内部达到平衡状态。
6. 样品进样：将样品进样器插入样品瓶中，抽取足够的样品并注入进样器，按下进样按钮进行进样。
7. 进行分离：启动泵，使流动相通过柱床，样品分离过程中不断采集检测器的信号。
8. 数据处理：分析和处理检测器输出的信号，得出对应的峰面积、峰高度等结果，进行数据分析和解释。
注意事项：
- 严格按照使用手册和方法要求操作仪器，遵循操作规程，避免误操作和事故发生。
- 确保色谱柱、进样器及连接部分的密封性良好，防止泄漏和污染。
- 选择适当的溶剂和流动相，避免与柱材和样品相互作用，影响分析结果。
- 定期检查和维护仪器，如泵的排气、封头的更换、泄漏点的处理等，确保仪器正常运行。
- 样品处理过程中，注意避免光线、温度和湿度的影响，尽量保持稳定的分析环境。
- 使用仪器前，需提前熟悉相关方法和仪器操作，做好实验前的准备工作。
高效液相色谱仪的操作步骤
高效液相色谱仪的操作步骤高效液相色谱仪（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术。
它利用液体流动相和固定相之间的相互作用，将样品中的混合物分离出来，并通过检测器进行定量分析。
本文将介绍高效液相色谱仪的具体操作步骤。
1. 准备工作在进行高效液相色谱仪的操作之前，首先需要进行一些准备工作。
检查色谱柱是否安装正确，确保色谱柱是干净的，并检查流动相的配制是否准确。
2. 样品制备根据需要分析的物质，准备好待测样品。
样品制备可以包括溶解样品、过滤样品等步骤，以确保样品的纯净度和稳定性。
3. 仪器开机将高效液相色谱仪接通电源，打开仪器的电源开关。
等待仪器初始化，并确保仪器各个部分正常工作。
4. 设置参数在仪器上设置分析所需的参数。
包括选择适当的检测器类型和检测波长、设置流量、温度等。
5. 启动系统启动高效液相色谱仪系统，等待系统稳定。
通常需要一段时间使得流动相在管路中充分平衡，并确保流量稳定。
6. 校正进行色谱柱的校正。
校正过程包括流量校正、波长校正等。
通过校正可以保证仪器输出结果的准确性和可靠性。
7. 注射样品将样品通过注射器引入色谱柱中，控制样品的注射量，通常在微升至毫升的量级。
确保样品的注射量稳定和准确。
8. 分离分析开始运行高效液相色谱仪系统，进行样品的分离与分析。
在此期间，流动相通过色谱柱，将样品中的化合物根据它们与固定相之间的相互作用进行分离。
9. 监测结果通过检测器对分离后的化合物进行监测。
根据检测器的信号，可以得到每个化合物的峰面积、保留时间等数据。
10. 数据处理将监测到的信号输入到数据处理软件中，进行结果的计算和分析。
通常可以得到各个化合物的峰高、峰面积等数据，从而实现对样品的定量分析。
11. 关机分析结束后，关闭高效液相色谱仪的电源开关，并进行必要的清洗和维护工作。
确保仪器的正常运行，并延长其使用寿命。
总结：高效液相色谱仪的操作步骤涵盖了仪器准备、样品制备、仪器设置、校正、样品注射、分离分析、结果监测和数据处理等多个方面。
高效液相色谱仪(Agilent1100型)操作步骤
一、开机1、开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类);把流动相放入溶剂瓶中。
A瓶:为水相;B瓶:为有机相。
2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口, 5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
该页面主要由以下几部分组成:——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等;——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等;——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告;——中下部为动态监测信号;——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
二、编辑参数及方法1、开始编辑完整方法:从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
2、方法信息:在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
单击OK,进入下一画面。
3、泵参数设定:进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
高效液相色谱操作流程
1. 开机自检具体操作如下：（1）打开Alliance 2695和2489的电源开关至ON，仪器开始自检；（2）仪器进行大约5分钟的自检过程，待仪器自我测试完毕后，出现画面上方的状态显示区出现Idle，表示开机测试正常。
（3）打开Empower软件，进入系统(用户名system，密码manager)2. 流动相（1）有机溶剂要求用色谱纯（进口名牌最好），水合缓冲盐溶液要用超纯水，每48小时制备新鲜的水相流动相，尤其是100%含水流动相使用时间不超过两天。
（2）检查6根管子是否都在液面以下，溶剂的位置必须高于溶剂混合阀，并检查、计算溶剂的用量，不够需及时配制、添加。
洗针液的溶剂瓶应放于试验台面上，与2695仪器底部位于同一水平面上。
（3）柱塞密封垫（Seal Wash）、针以及进样器选用甲醇进行清洗，所用所有溶剂或溶液均需用0.45μm的膜过滤并超声脱气20分钟，用洁净的玻璃容器盛放，避免污染，同时玻璃容器应用超纯水清洗而不能用自来水。
3. 灌注柱塞密封清洗清洗操作步骤：（1）回到Menu画面，选择Diag，确定Seal Wash的管路放在正确的位置；（2）按Prime Sealwash，再按Start，直到清洗溶剂流出泵杆密封圈冲洗废液管，先按Halt，再按Close4. 灌注针头清洗操作步骤：回到Main画面，选择Diag，按下Prime NdlWash。
设定值为30秒，若想多洗几次，按Start Again。
5. 打开真空脱气机如液相仪管路干，可进行使用，如管路不干则按照以下步骤进行操作：按Menu/Status键，进入Status(1)画面；利用方向键将光标移至Degasser位置，按Enter；利用上下键选择模式为ON。
注意在开启除气装置时，要确认所用溶剂管路都充满溶剂；若没有溶剂时请执行溶剂的Dry Prime操作。
6. 执行干灌注确定流动相溶剂的管子放在正确的位置，检测器（Detector）废液管及定量环（Sample Loop）的废液管是否放置于适当的废液容器中。
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法操作步骤
高效液相色谱法的操作步骤如下:
1. 过滤流动相并根据需要选择不同的滤膜。
溶剂必须为色谱纯，且溶剂及样品必须过膜（0.45μm）。
超声脱气30分钟以上。
2. 用流动相冲洗金属过滤器，然后将过滤器浸入储液罐的流动相中。
有一段时间没用或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
3. 将储液罐放置在一定的高度，以避免由于搬运和其他操作人员的移动而造成不必要的跌落。
4. 然后按以下顺序依次启动高效液相色谱仪：泵→检测器→高效液相色谱软件→设置软件参数，如分析时间、检测波长、流速等。
5. 启动泵，运行5分钟，主要是为了排除系统中的气泡，结束后关闭所有排气阀。
6. 然后按照预先计划的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，运行流动相，走基线，直到基线平稳。
7. 基线平稳后，在软件中设置样品的运行参数，如流速和分析时间等。
分析时间会因样品、流速、柱长等因素变化。
8. 设计走样方法。
9. 在进样和进样后操作的过程中，需要及时调整和监控各项参数。
高效液相色谱仪的操作步骤 液相色谱解决方案
高效液相色谱仪的操作步骤液相色谱解决方案高效液相色谱仪操作步骤：1）．过滤流动相，依据需要选择不同的滤膜.2）．对抽滤后的流动相进行超声脱气10—20分钟。
3）．打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4）．进入hplc掌控界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5）．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6）．调整流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000、点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，察看基线的情况。
7）．设计走样方法。
点击file，选取se—lect users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，依据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2—5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading—inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8）．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，全部的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9）．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10）．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：11）．流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。
脱气后的流动相要当心振动尽量不引起气泡。
12）．柱子是特别脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
13）．全部过柱子的液体均需严格的过滤。
14）．压力不能太大，可以不要超过2000 psi。
液相色谱流动相说明流动相相当于液相的血液，可以想象对液相的紧要程度。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1.准备工作：a.检查设备是否正常运转，所有零件是否安装和连接正确。
b.检查每个必需的溶液和试剂是否充足并且符合规定的质量标准。
c.检查色谱柱是否装配完好，并根据要进行的分析校准适当的流量和压力范围。
d.打开色谱软件，并设置所需的分析方法和参数。
e.开始预热色谱柱直到达到所需的温度。
2.样品制备：a.准备待检测样品的溶液或提取物，并进行必要的预处理步骤，例如固相萃取、浓缩、稀释或离心等。
b.将样品溶液通过0.22微米滤膜过滤，以去除杂质、微粒和可能堵塞色谱柱的颗粒。
3.样品进样：a.打开进样器，并选择合适的样品进样模式（如定量进样或自动进样）。
b.使用微量注射器或自动进样器将样品注入进样器，并确定进样量符合分析方法的要求。
4.色谱柱选择：a.根据样品特性和分析目的选择合适的色谱柱类型（如反相、离子交换、大小排阻等），尺寸（长度和内径）和填充材料等。
b.根据样品的pH值调节移动相的酸碱度，以满足分析要求和保护色谱柱。
5.色谱条件设置：a.设置流量速率，根据色谱柱的额定最大流速和样品的分离要求来确定。
一般来说，较高的流速可提高分离速度，但也会降低分离效果。
b.设置柱温，并确保温度稳定在所需的分析条件下。
c.设置检测器的参数，如波长、增益、灵敏度等，以适应待测试样品的检测需求。
6.分析运行：a.开始进样和运行色谱，确保流量和压力稳定。
b.监测色谱峰形的变化和信号强度，以评估分离速度和效果。
c.记录每个样品的保留时间和峰高（面积），并进行相应的数据处理和分析。
7.数据处理：a.使用色谱软件导出和处理分析数据，如生成色谱图、峰面积测定、峰高度测定、定量计算等。
b.根据实验目的和要求，对分析数据进行统计学分析、校正和解释。
c.对数据进行结果汇总、报告撰写和存档。
8.后期维护：a.定期检查和维护仪器，如清洁色谱柱、更换零件、校准仪器、更换溶液等，以确保仪器的正常运行和结果的准确性。
b.对废液和废品进行妥善处理，符合环境保护要求。
高效液相色谱的使用流程
高效液相色谱的使用流程简介高效液相色谱（High-Performance Liquid Chromatography，简称HPLC）是一种用于分离、鉴定和定量化分析化学物质的常用技术。
本文将介绍高效液相色谱的使用流程。
使用流程1.准备工作–检查仪器：确保HPLC仪器处于正常工作状态，检查进样器、流动相泵、柱温箱和检测器等部件。
–准备试剂：根据需要，准备好所需的溶剂、标样溶液和样品溶液，并确保它们纯净、稳定且符合实验要求。
–校准仪器：进行必要的仪器校准，包括流速校准、进样器校准和检测器校准等。
2.设置分离条件–选择合适的柱：根据需要选择合适的固定相柱，例如反相柱、离子交换柱或手性柱等。
–设置流速：根据柱的要求和分离物的性质，设置合适的流速，一般为0.5-2.0 mL/min。
–选择合适的流动相：根据待分离物的性质，选择合适的流动相体系，包括溶剂和缓冲液等。
–设置柱温：根据实验要求和分离物的性质，设置适当的柱温，一般常温即可。
–设置检测器：选择合适的检测器，如紫外检测器、荧光检测器或质谱检测器，根据需要设置检测器的波长、激发波长等参数。
3.进样与分析–进样方式：根据需求和样品性质，选择适合的进样方式，包括自动进样器、手动进样器或固相萃取柱等。
–进样量：根据样品的浓度和分析要求，设置合适的进样量，一般范围为1-20 μL。
–开始分析：点击软件界面上的“开始”按钮，启动HPLC运行，此时仪器开始运行，进行样品分离和检测。
–数据记录：在分离过程中，系统会实时记录和显示数据，包括峰面积、保留时间和峰高等结果。
4.数据分析与解读–峰面积计算：根据检测器记录的峰面积数据，通过内置的计算公式，计算出目标化合物的峰面积。
–保留时间测定：根据检测器记录的保留时间数据，可以获得目标化合物的保留时间，用于鉴定和定量分析。
–峰高测定：根据峰高数据，可以了解化合物的峰高大小，用于比较不同样品或条件下的分离结果。
–结果解读：根据数据分析结果，判断样品中所含化合物种类和含量，并与已知标准进行对比验证。
高效液相色谱仪操作步骤(精)
本文由北京SEO整理发布高效液相色谱仪操作步骤：1)．过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜(0.45um)。
2)．对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)．打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4)．进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5)．有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。
6)．调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7)．设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8)．进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9)．关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10)．填写登记本，由负责人签字。
注意事项：1)．流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。
脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。
2)．柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。
3)．所有过柱子的液体均需严格的过滤。
4)．压力不能太大，最好不要超过2000 psi。
液相色谱法简介【我要发表论文】--------------------------------------------------------------------------------作者：dujinx正文气相色谱不能由色谱图直接给出未知物的定性结果，而必须由已知标准作对照定性。
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项
高效液相色谱仪的操作步骤及注意事项一、操作步骤：1.开机前先将流动相过滤和超声：水流动相用混合滤膜（0.2μm）过滤,有机流动相用有机滤膜过滤，之后超声脱气15-20分钟。
（过滤的目的是除去流动相里的杂质，以免杂质进入色谱柱堵塞色谱柱；超声的目的是排除流动相里面的气体，以防气体进入色谱柱损害色谱柱，影响柱效能）注：试验过程中由于只有0.45μm的混合滤膜，第一次使用时感觉效果不好，于是过滤水时同时使用两张混合滤膜过滤水流动相。
2.超声结束后，将流动相放置到规定位置（1号泵接水流动相，2号泵接有机流动相），开机逐个排气（先启动泵，排气结束后再打开检测器）。
3.排气结束后，关闭所有排气阀。
先用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，基线走稳之后，再打开水流动相（注意：水流动相和有机流动相流速之和为1ml/min），继续走基线，直到基线平稳。
注意：实验结束后，再用纯有机流动相冲洗色谱柱20-30分钟，冲出色谱柱内残留的样品物质，预防长时间不使用仪器样品的残留物质沉积在色谱柱内，导致下次使用难以冲出，色谱柱柱压偏高，基线不稳，出现大量鬼峰。
（不同规格的色谱柱其所允许的最大流速之和不同）4.走基线时，应将进样阀处于Load状态，用注射器进样时应快速进样，进样后将进样阀立即扳回到Inject状态，此时液相系统开始进入采样状态。
采样结束后，可在数据分析里面查看分析结果并可进行编辑，也可以在脱机状态下查看样品的分析结果并编辑。
二、使用中常见的问题及注意事项1.过滤时有时会出现流动相漏液。
可能的原因是滤膜放置不正确（有点偏）和接头有点错位，导致流动相从缝隙中漏出。
注意：操作时，应先向滤瓶内倒入少量流动相，观察是否漏液并开始过滤，若未漏液，再向滤瓶中添加流动相。
2.超声时，瓶外液体的液面应高于瓶内流动相的液面，否则流动相内的气体可能无法排出液体，气体仍然残留在流动相内，以致开机排气时无气泡排出。
3.开机排气结束后，应先将流动相流量调小，再关闭排气阀，否则会导致柱压瞬间升高超过压力上限，致使泵停止工作。
hplc操作流程
hplc操作流程高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析技术，它能够对化合物进行快速、高效、精确的分离和定量分析。
在实验室中，HPLC操作流程的规范性和准确性对于保证实验结果的可靠性至关重要。
下面将介绍HPLC操作流程的具体步骤，希望能够对大家有所帮助。
1. 样品处理。
首先，对待测样品进行处理。
通常情况下，样品需要通过溶解、过滤等步骤进行前处理，以确保样品的纯度和稳定性。
在处理过程中，需要注意避免样品受到外界污染或损害。
2. 色谱柱装填。
接下来是色谱柱的装填。
在进行色谱柱装填之前，需要根据待测化合物的性质选择合适的色谱柱和填料。
在装填过程中，要确保色谱柱的完整性和稳定性，避免气泡和漏液的产生。
3. 流动相配置。
根据待测样品的特性和分析要求，配置合适的流动相。
流动相的选择和配置对于分离和分析的效果具有重要影响，需要根据实际情况进行调整和优化。
4. 仪器参数设置。
在进行HPLC分析之前，需要对色谱仪进行参数设置。
包括流速、检测波长、温度等参数的设定，以确保分析的准确性和稳定性。
5. 样品进样。
将处理好的样品注入到进样装置中，进行自动或手动进样。
在此过程中，需要保证样品的进样量和速度均匀稳定，避免产生进样峰。
6. 色谱条件优化。
在进行分析之前，可以通过调整色谱条件来优化分离效果。
包括流速、温度、梯度程序等参数的调整，以获得最佳的分离效果和分析结果。
7. 数据采集和分析。
在分析过程中，需要对数据进行实时采集和记录。
通过色谱软件进行数据处理和分析，得到分析结果并进行解释和评价。
8. 仪器维护。
分析结束后，需要对色谱仪进行清洗和维护。
包括色谱柱的冲洗、流动相的更换、仪器的保养等工作，以确保仪器的正常运行和延长使用寿命。
以上就是HPLC操作流程的基本步骤，希望能够对大家在实验中的操作有所帮助。
在进行HPLC分析时，需要严格按照操作流程进行，确保实验的准确性和可靠性。
同时也要注意安全操作，避免发生意外事故。
祝大家实验顺利，取得理想的分析结果！。
高效液相色谱使用详细操作步骤
高效液相色谱使用操作步骤一、泵操作面板PUMP:运行键START:梯度运行键 PURGE:快冲键RESET ：复位键 HOLD ：程序暂停键STOP ：泵停止键TIME 0 RSVR ABCENTER （设置溶剂） TIME 0 PROGENTER （设置程序） TIME 0 % A30ENTER （设置比例）TIME 0 B 30ENTER（设置比例） TIME 0 %3 C 40 ENTER （设置比例）DELP ROG1 ENTER （删除程序）1.对于梯度泵设定举例如下：（人参皂昔得梯度）TIME 0%A 81 ENTER TIME 15 % A 81 ENTER TIME 60 %A 65 ENTER TIME65 %A 0ENTERTIME P ROG 0 TIME ：程序开启键FLOW ：流速: 精品文档,超值卜•载PROG ：程序RSVR: ABCDEL ：删除程序PMAX:最大压PMIN ：最小压力 ENTER:确定 TIMEFLOWENTER（设置流1 ENTERTIME 80 % 0 ENTERTIM E 81 % 81 ENT ERTIME 100 % 8 1 ENTER因为A+ B之与始终就就是100%,所以B相就不用设了O 7、对于对照品在这种条件下只要对照品得峰全部出完后按下RESET键等2 0分钟即可进第二针进完针后按START后再按下R E SET键等基线基走直才可进下一针。
二、检测器操作面板RESET :复位键A/Z:调零键WL:调波长ENTER:确定三、实验前得准备工作1、实验前流动相提前配好过滤脱气。
2、置换流动相时把泵得滤头从原来得流动相中换到新得流动相中滤头要轻拿轻放。
3、液路排气顺序:首先打开排气阀一按PURGE键进行排气结束后一按STOP键停止一再拧紧排气阀一按PUMP4、打开检测器首先观察右上角笊灯指示灯确认氣灯就就是否点亮，按WL键调好实验波长后按A/Z键调零。
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪使用方法
高效液相色谱仪（HPLC）是一种常用的分析仪器，用于分离
和定量分析化合物的混合物。
以下是HPLC的基本使用方法：
1. 样品准备：将待分析的混合物或溶液准备好，通常需要进行前处理，例如过滤、稀释或提取。
2. 系统准备：打开色谱仪的电源，启动仪器，确保所有组件处于正常工作状态。
检查液相、气相和其他溶剂的供应，并确保其质量良好。
3. 进样：将样品注射器连接到色谱柱，并根据实验要求设置注射器体积。
将样品注射器插入进样口，并将样品注入到色谱柱。
4. 创建梯度：根据分析要求，创建一个梯度程序。
这涉及到设置流动相的组成和梯度变化的速率。
5. 运行分析：点击开始按钮，启动分析过程。
色谱系统将自动进行溶剂梯度变化，使样品中的化合物逐步从色谱柱中分离出来。
6. 数据采集和分析：在分离过程中，色谱仪将采集到一系列数据点，包括峰高、峰面积、保留时间等。
使用相关的数据处理软件，可以对这些数据进行处理和分析。
7. 清洗和维护：在分析完成后，需要进行系统的清洗和维护。
这包括冲洗色谱柱、清理进样器和其他组件，并储存色谱仪在
正确的环境条件下。
以上是高效液相色谱仪的基本使用方法。
具体的使用流程和操作步骤可能会有细微的差异，取决于具体的仪器品牌和型号。
建议在使用前仔细阅读和理解相关的操作手册和使用说明。
高效液相色谱（HPLC）操作规程
高效液相色谱（HPLC）操作规程一操作1.准备工作⑴流动相的准备应根据实验选择合适的流动相，所有流动相原则上应选择HPLC级别，水应选择超纯水，并应保持新鲜。
所有流动相在进行实验前应经过相应的脱气处理，脱气时间应根据流动相的量相应增加，但一般超声脱气不应少于20min。
在实验过程中应保证足够的流动相，流动相的量与流速、洗脱时间等有关，应根据具体情况进行准备。
⑵样品的准备对于待测的样品，在进样之前应经过滤膜过滤，根据样品的不同选择不同种类、不同直径的滤膜。
2. 排气打开purge阀，键入stop→prime，直到无气泡停止stop。
B泵同样操作。
关闭purge阀。
3. 开机打开电脑主机和显示器，点击Galaxie，进入工作站。
选择系统，点击Agilent HPLC.点击overview，可观察仪器各部分状态。
打开泵及检测器的电源。
二 分析方法建立1.进入工作站系统界面。
点击数据，文件→新建→方法，出现视窗，点击前进即可。
键入方法名和相应描述→点击ok后出现方法文档。
2.210的设定点击控制→210图标→Elution。
选择流动相A和B的种类。
Compressibility、Pressure Constant以及Refill Time属于内置参数无需设定。
设置A、B流动相的比例，通过改变B的比例设定。
如需梯度洗脱，则根据方法对Equilibrium Time 和Hold Time进行设定。
点击Misscellaneous。
Start Mode选择Inject Trigger on Pump A。
End of Sequence 选择Leave Pump on。
210设定结束。
3.325的设定点击325图标，选择Signal。
其中Detector Bunch Rate建议设置成2（10Hz），Noise Monitor Length建议设定成64，Response Time建议设定0.5。
根据方法设定相应波长。
高效液相色谱仪标准操作规程
高效液相色谱仪标准操作规程1目的建立高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)更规范，保证结果更精确。
2范围适用于高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程。
3职责操作者。
4程序4.1开机4.1.1打开Allianee电源开关，仪器进入自检状态。
4.1.2打开检测器，“STATUS”闪烁，4分钟后“LAMP”亮，仪器正常。
4.1.3点击menu/Status进入“STATUS”界面，按direactfunction，选择dryprime后，选择“A/B/C/D”四个泵，点击“Enter”，管道快速充满液体。
4.1.4打开电脑，点击“Empower”登陆，输入帐户“system”，密码“manage”，进入“EmpowerPro”。
4.1.5在配置系统中新建一项目。
4.1.6点击“运行样品”，选择“项目”，3分钟后仪器进入运行界面。
4.2样品检测4.2.1点击“编辑”，编辑仪器方法并保存方法名。
4.2.2点击“新建方法组”，编辑方法组名。
(要求方法组与仪器方法同名)4.2.3标识样品名、进样品/进标准品、样品位置、进样体积、运行时间后，于“file”中保存参数4.2.4点击“准备”，仪器显示“准备进样”后，点击进样。
4.2.5点击鼠标右键，选择“波长”和“正好运行时间”，保存参数4.3数据处理4.3.1点击“浏览项目”，于“进样”栏中双击所选的样品名，进入“通道”栏，双击所选的样品名，进入样品数据主窗口4.3.2选择波长，点击“提取色谱”后，积分或以处理方法向导处理数据，保存处理方法后，于“file”“保存”中保存“全部”。
4.4打印报告4.4.1于所选“浏览项目”结果栏中，选择已处理好的数据（如果没有，点击更新），点击右键，选择预览报告。
4.4.2选择报告方法，确定后，进入报告预览状态。
简述高效液相色谱一般操作流程
简述高效液相色谱一般操作流程
高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于化学、生物、医药等领域。
其一般操作流程如下：
1. 样品制备：将待分离的混合物或化合物溶解在适当的溶剂中，通常需要进行前处理，如过滤、离心、稀释等。
2. 色谱柱选择：根据样品的性质和分离要求选择合适的色谱柱，如反相色谱柱、离子交换色谱柱、凝胶过滤色谱柱等。
3. 流动相选择：根据色谱柱的性质和样品的特点选择合适的流动相，如水、有机溶剂、缓冲液等，通常需要进行优化。
4. 色谱条件设置：根据样品的性质和分离要求设置合适的色谱条件，如流速、温度、检测波长等。
5. 样品注入：将样品注入色谱柱，通常采用自动进样器或手动进样器。
6. 色谱分离：样品在色谱柱中进行分离，不同成分在色谱柱中的停留时间不同，从而实现分离。
7. 检测：通过检测器检测样品分离后的成分，如紫外检测器、荧光检测器、质谱检测器等。
8. 数据分析：对检测到的数据进行分析和处理，如峰面积计算、质量浓度计算等。
以上就是高效液相色谱的一般操作流程，不同的样品和分离要求可能需要进行不同的优化和调整。
高效液相色谱仪操作步骤
高效液相色谱仪操作步骤1. 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。
2. 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3. 打开HPLC工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道，连接检测系统。
4. 进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。
5. 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和进样阀。
冲洗泵，直接在泵的出水口，用针头抽取。
冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10ml/min。
6. 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。
点击injure，选用合适的流速，点击on，走基线，观察基线的情况。
7. 设计走样方法。
点击file，选取select users and methods，可以选取现有的各种走样方法。
若需建立一个新的方法，点击new method。
选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。
选完后，点击protocol。
一个完整的走样方法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。
8. 进样和进样后操作。
选定走样方法，点击start。
进样，所有的样品均需过滤。
方法走完后，点击postrun，可记录数据和做标记等。
全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。
9. 关机时，先关计算机，再关液相色谱。
10. 登记。
一、问:用HPLC进行分析时保留时间有时发生漂移，有时发生快速变化，原因何在？如何解决？答:关于漂移问题：1．温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2．流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3．柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡关于快速变化问题1．流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2．泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
高效液相色谱仪操作流程
高效液相色谱仪操作流程高效液相色谱仪操作流程1、准备工作：（1）校准：在使用高效液相色谱仪之前，应先进行校准，以保证测定结果的准确性。
校准时要使用一系列标准物质，以便检验仪器的性能和精密度。
常用的校准模式有线性校准、多项式校准和外部校准等。
（2）柱温控制：所有的分析柱都有一定的温度要求，高效液相色谱仪的温度控制精度要求比较高，因此需要进行柱温控制。
（3）泵调试：泵是气液色谱系统中最重要的部件，也是最容易发生故障的部件。
使用前，应检查泵的抽真空度、流量稳定性等性能，以保证测定的精度和准确性。
（4）色谱柱稳定性检查：色谱柱的稳定性是检测的重要因素，影响到测定结果的准确性和精度。
在使用之前，应检查柱内各部分的稳定性，以确保其能够按照设定的条件正常工作。
2、色谱柱装载：（1）清洗色谱柱：色谱柱在使用前必须进行清洗，以去除柱内可能存在的有机物，并保证柱内液体的稳定性。
（2）安装色谱柱：色谱柱的安装是非常重要的，因为不正确的安装会影响测定结果的准确性。
色谱柱的安装应紧固，确保柱的稳定性，避免柱管损坏。
（3）组装液体系统：液体系统的组装包括柱头部、柱底部、负压调节器等，组装时应确保所有部件的密封性，以免出现压力泄漏等情况。
3、液相色谱仪系统调试：（1）开机：首先将高效液相色谱仪通电，根据用户手册按步骤启动计算机系统，以及液相色谱仪的电子控制系统。
（2）程序设定：根据实际检测要求，设定相应的程序参数，包括柱温、梯度曲线、进样量、采集时间等。
（3）样品进样：根据实际检测要求，将样品按要求的体积加入样品管中，然后将样品管放入色谱柱内，以开始检测。
4、色谱检测：（1）检测：将样品按照设定的梯度曲线进行移动，并根据程序参数进行数据采集和处理。
（2）分析数据：根据所采集的数据，可以分析出样品中各种成分的含量、比例等信息，从而得出测定结果。
（3）打印报告：将测定结果打印出来，以便查看和记录。
5、清洁：（1）清洁柱头部：在使用完毕后，应及时清洗柱头部，以免柱头部的污染影响下一次测定的准确性。
高效液相色谱使用方法
高效液相色谱使用方法一、流动相准备将流动相按比例混合，注意混合的流动相必须相互溶解，最好能将流动相混合在一起，若相互溶解性不好，可分成两种。
流动相配好后，将管路放入，注意不要将瓶口密封。
二、开机首先将真空泵打开，待泵的指示灯由黄变绿打；打开600泵开关，按Direct键，进入操作菜单。
三、抽气抽取管路A液体：先将注射器旋转插入，将旋钮由Run转至 Draw,抽液，完成后将旋钮由Draw至Run，再将注射器旋转取下，反复1-2次，抽至管路内无气泡。
抽取管路B液体：在泵操作菜单上将B设为100%，给0.2ml/min的流速，听到泵转换的声音后，将流速设为0，以抽取管路A的步骤进行抽气。
四、调节流动相比例与流速在泵操作菜单上设定流动相比例，并以0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml/min的速度逐步升高流速，每次间隔3-5分钟。
五、2410示差检测器的使用1、打开2410示差检测器开关2、调整检测器内、外温度3、实验前一天晚上，使用“purge”状态平衡过夜，若第二天还要做实验，结束工作后不关机，节省第二天的平衡时间，保持0.2ml/min的流速。
六、2487紫外检测器的使用1、打开2487示差检测器开关，机器自动进入自检过程，约需7分钟。
2、设置检测波长3、预热30分钟左右，即可注样测定。
试验四、番茄内源激素高效液相色谱法测定一、样品准备取新鲜番茄根、茎、叶5克左右，液氮冷冻，放入冰箱储存。
配80％甲醇，冰箱冷冻。
二、提取样品放入预冷研钵，加l0ml 80％的冰冻甲醇研磨至匀浆，转入小烧杯中，再用甲醇清洗研钵2次，每次l0ml，转入小烧杯中。
小烧杯放入冰箱(0～4℃)冷藏14小时以上。
三、过滤取出用漏斗滤纸过滤，并用10m180％甲醇清洗残渣，合并滤液；如果提取液中沉淀物或色素多，则用10000g离心l0~12min，上清液转入冻干瓶中。
四、浓缩将冻干瓶中的液体用减压蒸干机蒸干(至瓶中液体结冰)，然后用2m1 80％的甲醇冲洗，如果有浑浊物，再次用离心机12000g离心l0min，倒入带有刻度的试管中，为保证试管中的液体有5ml左右，将不足5ml的试管中再加入一些甲醇。
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• 色谱法于二十世纪五十年代之后飞速发展， 并发展出一个独立的三级学科-色谱学。
• 1952年英国科学家阿切尔·马丁、理查 德·辛格因发明了分配色谱法而共同获得 诺贝尔化学奖，此外色谱分析方法还在12 项获得诺贝尔化学奖的研究工作中起到关 键作用。
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1.概述-色谱分离的特点
• 活性炭:用于水溶性氨基酸、糖类及苷类
• 聚酰胺：主用于酚类、醌类如黄酮类、蒽醌类及 鞣质等成分
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色谱分离法
分配色谱
吸附色谱
凝胶过滤 色谱
大孔树脂 色谱
离子交换 色谱
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吸附色谱
• 物理吸附：硅胶、氧化铝、活性炭为吸附剂进行 的吸附色谱；
• 化学吸附：黄酮等酚酸性物质被氧化铝吸附、生 物碱被酸性硅胶吸附等；
高效液相色谱
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1.概述-发展
• 关于色谱分离方法的研究始于1901年，俄国植物 学家 Tswett（茨维特）在研究植物叶子的组成 时，用碳酸钙填充竖立的玻璃管，以石油醚洗脱 植物色素的提取液，经过一段时间洗脱之后，植 物色素在碳酸钙柱中实现分离，由一条色带分散 成三种颜色的6个色带。
• 两年后他发表了他的研究成果“一种新型吸附现 象及其在生化分析上的应用”，提出了应用吸附 原理分离植物色素的新方法，在这一方法中把玻 璃管叫做“色谱柱”，碳酸钙叫做“固定相”， 石油醚叫做 “流动相”。三年后，他将这种方 法命名为色谱法（Chromatography）。
• 操作模式多样 可通过选择不同的操作模式，以适应不同样品的分离。
• 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
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❖ 色谱分离的几个概念
❖ 所有的色谱分离操作均分为：装柱、上样、层 析、洗脱。
❖ 其中的固定不动的相，称为固定相；
❖ 携带试样混合物流过此固定相的流体，称为流 动相；
❖ 不同组分在色谱分离过程中分离情况取 决于各组分在两相间的分配系数、吸附能 力、亲和力等的差异。
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常用的固定相（色谱柱填料）
• 硅胶
• 凝胶
• 活性炭
• 纤维素衍生物
• 离子交换树脂
• 环糊精
• 大孔吸附树脂
• 聚丙烯酰胺
• 氧化铝
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• 硅胶：应用广泛，适合各类成分
• 氧化铝：主要用于碱性或中性亲脂性成分，如生 物碱、甾体、萜类等
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化学键合相
利用化学反应将不同的有机官能团通过共价键键
合到载体硅胶表面的游离羟基上而形成的固定相。
羟丙基葡聚糖凝胶(sephadex
LH-20)
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离子交换树脂法
原理：可交换离子与树脂上的交换基团进 行离子交换，并被吸附，用适当的溶剂 从柱上洗脱下来，实现物质的分离。
吸附规律 阳离子交换树脂—分离碱性成分 阴离子交换树脂—分离酸性成分
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大孔吸附树脂
❖ 吸附性和分子筛原理相结合以苯乙烯为母体，二乙烯苯 为交联剂（非极性）
• 应用范围广 复杂混合物，有机同系物，异构体，或无机试样的分 析。
液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
• 分离效率高 若用塔板理论数来表示色谱柱的效率，每米柱长可达 几千至几十万的塔板数，特别适用于极复杂混合物的 分离，且通常收率、产率、和纯度都较高。
❖ 吸附力：范德华力或氢键
❖ 工艺流程：树脂预处理→树脂上柱→药液上柱→树脂的 解吸→树脂的清洗、再生。
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分配色谱 原理：被分离成分在固定相和流动相之间的
分配系数不同。
正相分配色谱：流动相极性< 固定相极性 反相分配色谱：流动相极性>固定相极性
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液相色谱类型
• 正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。 • 反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。
• 反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱 官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓 冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的 组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5 （Phenyl）等。
• 3.食品、药品质量分析：药物残留，防腐剂、抗氧化 剂、人工合成色素等食品添加剂的分离与测定，保健 食品中的功效成分检测，真菌毒素分析等。
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色谱柱简介
• 正相柱------固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团胺基团，如 （NH2）和氰基团（CN）的键合相填料。 由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此， 分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先 被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正 已烷，氯仿，二氯甲烷等。
❖ 作为流动相的液体或气体，称为洗脱剂；
❖ 洗脱时从柱中流出的溶液，称为洗脱液；
❖ 加入洗脱剂使各组分分层的操作，叫层析，也 叫展开。
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分离原理
❖ 色谱过程的本质是待分离物质分子在固 定相和流动相之间分配平衡的过程，不同 的物质在两相之间的分配会不同，这使其 随流动相运动速度各不相同，随着流动相 的运动，混合物中的不同组分在固定相上 相互分离。
用的最多，约占60～70％。
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高效液相色谱仪的应用
• 1.环境污染物分析：大气、水、土壤和食品中的多环 芳烃、多环联苯，阴离子表面活性剂，有机氯农药、 有机磷农药，除草剂，酚类胺类，黄曲霉毒素等污染 物的分离与鉴定。
• 2.精细化工：在精细化工生产中使用的具有较高分子 量和较高沸点的有机化合物，如高碳数脂肪族或芳香 族的醇、药物、燃料，工业产品的醛、酮、醚、酸、 酯等化工原料，以及各种表面活性物质的分离与测定。
• 半化学吸附：聚酰胺与黄酮类、醌类等酚性化合 物之间的氢键吸附，吸附力较弱，介于物理吸附 与化学吸附之间。
• 常用的极性吸附剂：硅胶、氧化铝。 • 常用的非极性吸附剂：活性炭。
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凝胶过滤色谱
凝胶过滤色谱（凝胶渗透色 谱、分子筛滤过色谱、排阻 色谱）
原理：分子筛作用
葡聚糖凝胶（sephadex G）