土壤可溶磷的测定(CaCl2)教案资料
土壤有效磷测定教案资料
土壤有效磷测定土壤中有效磷的测定 -NY/T 1121.7-2014A 碳酸氢钠提取——钼锑抗比色法适用于石灰性、中性土壤 PH≥6.5方法提要由于浸提液(0.5MNaHCO3)提高了CO32-离子的活性，使其与Ca2+形成CaCO3沉淀，从而降低了Ca2+的活性, 使一定量活性较大的Ca-P被浸出，同时也可使比较活性的Fe—P 和AI-P通过水解作用而浸出(由于碳酸盐的碱溶液，也降低了铝和铁离子的活性，有利于磷酸铝和磷酸铁的提取。
此外，NaHCO3碱溶液中存在着OH-、HCO3-、CO32-等阴离子均能置换吸附态的磷酸盐H2PO4-。
) ，从而增加了碳酸氢钠提取中性和石灰性土壤速效磷的能力。
由于浸出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再沉淀；浸出液中的磷可用钼锑抗比色法定量测定。
主要仪器设备1 千分之一电子天平；2 恒温水浴振荡器；3 150ml塑料瓶和50ml塑料小烧杯；4 锥形瓶(或比色管)：50mL或25mL比色管；5 紫外分光光度计；试剂1 氢氧化钠：10%(m/V)溶液；(调节浸提剂pH至8.5)2 碳酸氢钠浸提剂［c(NaHCO3)=0.50mol·L-1，pH=8.5］称取42.0gNaHCO3溶于950mL水中，用10%氢氧化钠溶液调节pH至8.5(用酸度计测定)，用水稀释至1L。
贮存于塑料瓶中备用。
如贮存期超过20d，使用时须重新校正pH。
3 酒石酸锑钾［K(SbO)C4H4O6·1/2H2O］：0.30%(m/V)溶液；(提供三价锑离子,作用是生成的三元杂多酸比磷钼酸铵具有更强的吸光作用;同时,加快抗坏血酸的还原反应.)4 抗坏血酸(C6H8O6左旋，比旋光度+21-22°,分析纯)(还原剂, 抗坏血酸主要优点是生成的颜色稳定，干扰离子的影响较小，适用范围较广，但显色慢，需要加温。
如果溶液中有一定的三价锑存在时，则大大加快了抗坏血酸的还原反应，在室温下也能显色。
第五章 土壤中磷的测定PPT
酸性、强酸 性土壤
双酸法
HCl-H2SO4
1:5；25℃
钼锑抗比色法
酸性土，森 林，土壤
30 min
Mehlich 3 法
HOAcNH4NO3-
1:10；25℃ 钼锑抗比色法
NH4F-HNO3-
EDTA
各种类型土 壤
防止消化过程中溶液蒸干，以利消化作用的顺利进 行。 本法用于一般土壤样品分解率达97%～98%，但对红 壤性土壤样品分解率只有95%左右。
二、待测液中磷的测定
（一）重量法
（1） 磷酸铵镁法：先使P生成NH4MgPO4·10H2O↓， 再灼烧成Mg2P2O7（焦磷酸镁），称至恒重。此法 曾作过标准方法，但繁琐、费时，现很少采用。 （2） 磷钼酸喹啉法：为黄色沉淀。精密度和准确 度都高，多用于肥料中P的测定。
它可以相对地说明土壤的供磷水平，可以作为一个 指标判断施用磷肥是否必要，亦可作为施肥（磷） 推荐的一个方法。
三、土壤有效磷的测定方法评述
简单地说，土壤有效磷的测定就是选用适宜的浸提 剂将土壤中存在的磷的有效形态提取出来，然后加 以定量。其关键在于将固相中容易转入液相中的磷 提取出来。因此，对于酸性土壤和石灰性土壤来说， 由于磷酸盐的存在形态不同，因而在浸提剂的选择 上就应该有所区别。
二、待测液中磷的测定
（二）比色法
磷的比色测定有两个比色体系，即钼兰比色法和 钒钼黄比色法。
钼兰比色法：一般测定微量元素的磷，常用于土壤 磷的测定，该法灵敏度较高。
钒钼黄比色法：一般测定含磷量较高的样品，如肥 料、种子等
1、钼兰比色法的原理
在含磷的溶液中加入钼酸铵试剂，在一定的 酸度条件下，待测液中的正磷酸与钼酸根络合形 成磷钼杂多酸。
土壤可溶磷的测定(CaCl2)
土壤中可溶磷的测定（CaCl2 浸提）一、试剂的制备所需试剂：试剂A：取6g 钼酸铵溶解到125ml蒸馏水中，再取0.1454g酒石酸锑钾溶解到50ml 水中。
将以上两种试剂加入到500ml 2.5M 的H2SO4中，用蒸馏水稀释到1000ml.试剂B：在200ml 试剂A中加入1.056g抗坏血酸。
此试剂有效期24 小时，宜用前配制。
2.5 M H2SO4：将140ml 浓硫酸稀释到1000ml。
0.01 M CaCl2：取1.53g CaCl2·2H2O(96%) 溶解到蒸馏水中，再定容到1000ml。
磷标准溶液：精确称取0.439g 磷酸二氢钾（在60℃下烘干1 h ）溶解到500ml蒸馏水中，再加入25ml 3.5M H2SO4定容到1L。
此溶液即为含100mg/L 的磷基准溶液。
二、实验步骤1、标准曲线的绘制分别移取2 mg/L磷标准溶液1，2，3，4，5，6，7，8，9 ml 于25ml容量瓶中，即得0.08，0.16，0.24，0.32，0.40，0.48，0.56，0.64，0.72mg/L磷，再逐个加入5ml提取液（0.01MCaCl2），加入适量蒸馏水，使其中体积达到18ml。
分别移入5ml抗坏血酸（试剂B），加入蒸馏水定容。
另准备一25ml容量瓶加入5ml提取剂，抗坏血酸（试剂B），蒸馏水定容，作为空白样。
十分钟后，在720nm波长下测定其吸光度值。
所有试样做三个平行样。
2、提取土壤中的磷称取通过2mm筛的风干土样10g于250ml锥形瓶中，再加入100ml0.01M CaCl2。
在震荡机上震荡10min（震荡机速率为每分钟180次），然后用无磷滤纸过滤，用干燥的烧杯接收。
取20ml滤液加入到25ml容量瓶中，再加入5ml抗坏血酸。
十分钟后在720nm波长下测定其吸光度值。
土壤中有效磷的测定(精)
四、实验步骤
1、土壤样品预处理 称 取 风 干 土 壤 样 品 1g （ 精 确 至 0.01g ） , 放 入 50~100mL小塑料瓶（或50mL带塞比色管）中， 加 入 0.03mol·L-1NH4F-0.25mol·L-1HCl 溶 液 20mL，稍摇匀，立即放在振荡机上，振荡30 分钟。用无磷干滤纸过滤，滤纸承接于盛有 100g·L-1H3BO3溶液15滴的50mL 三角瓶中，摇 动瓶内溶液（加H3BO3防止F-1对显色的干扰和 腐蚀玻璃仪器）。
NH4F-0.025mol/L HCl溶液。
（4） H3BO3溶液（100g/L）
（5） 15g/L钼酸铵-3.5mol/L盐酸溶液：溶解15g 钼酸铵于300mL蒸馏水中，加热至60℃左右，如有 沉淀，将溶液过滤，待溶液冷却之后，慢慢加入 350mL 10mol/L HCl溶液，并用玻璃棒迅速搅动， 待溶液冷却至室温，用蒸馏水稀释至1L，充分摇 匀，储存于棕色瓶中。放置时间不得超过两个月。
参考文献
武汉大学化学与分子科学学院实验中心 主编.《分析化学实验》.武汉：武汉大学 出版社 ，2002 任仁主编.《化学与环境》.北京：化学工 业出版社，2001
三、主要仪器和试剂
1、 仪器：721分光光度计，25mL容量瓶， 吸量管，振荡机，漏斗，滤纸。
2、 试剂：
（1） HCl溶液（0.5mol/L）
（2） NH4F溶液（1mol/L）
（ 3 ） 提 取 剂 ： 分 别 移 取 15mL
1假m如ol/4L6N0Hm4LF蒸溶液馏和水2中5m，L
0.5mol/LHCl溶液， 配 制 成 0.03mol/L
2、土壤中有效磷的测定
准确移取上述土壤滤液5~10mL容量 瓶中，用吸量管加入15g·L-1钼酸铵-盐酸 溶液5mL，摇匀，加入蒸馏水至瓶颈刻 度，滴加25g·L-1.氯化亚锡3滴后，再用水 稀释至刻度，充分摇匀。显色15min后， 再分光光度计上，以试剂为空白，用 1cm比色皿在680nm处测其吸光度值。
土壤全磷的测定实验方法
土壤全磷的测定实验方法一、目的意义磷是植物的营养元素之一，测定土壤中的全磷，可以了解土壤中能够逐渐被植物利用及易为植物吸收的磷贮备量，为合理施肥提供参考数据。
二、方法原理土壤中全磷的测定，主要是如何将土壤中所有存在的各种形态的磷化合物及正磷酸盐的形态分解出来。
由于涉及到土样消化及消化液中磷的测定两个步骤，因而方法比较多，可根据待测液中磷含量，干扰离子的浓度、分解的蛋白质及实验条件来选择合适的方法。
本实验仅介绍酸溶-抗坏血酸还原比色法。
用硫酸及过氧酸消化土样，使土样中有机质分解，各种不溶性磷化合物转化为正磷酸而存在于消化液中，土壤中二氧化硅则脱水沉淀分离。
铝酸镂同土壤中的磷作用生成磷铝酸镂，遇还原剂时，则生成复杂的的兰色“磷钥兰”。
其呈现颜色的深浅，在一定条件下与磷的含量成比例关系，以抗坏血酸作还原剂，颜色稳定性好，并且是铁离子的有效掩蔽剂，防止其对比色的干扰。
三、操作步骤消化：准确称取通过0.25mm筛孔的风干土样1g,置于消化管中，用少量蒸储水润湿，加浓硫酸（比重1.84）8ml摇匀后，再加入70~72%过氯酸10滴，摇匀，管口上加一小漏斗，置于消化炉上加热消煮，至管内溶液开始转白，继续消煮20分钟，全部消煮时间为30~40分钟，取下冷却。
定容：将冷却的消化液用蒸偏水少量多次地从消化管中通过漏斗洗入100ml容量瓶中，待溶液冷却后，用蒸偏水稀释至刻度，摇匀，静置，待澄清后，滤入IoO l nl干燥的三角烧瓶中。
比色：吸取滤液5ml（对磷（P205）在0.15%以下的土壤可吸IonlI）于50ml容量瓶中。
用少量蒸储水将粘在瓶口的少量滤液洗下，加6N硫酸5ml和5%铝酸镂2ml,加少许蒸镭水，再加固体抗坏血酸0.05g,用蒸储水稀释至刻度，充分摇匀，拨开瓶塞，置于沸水浴上加热，至沸腾后保持10分钟，使其充分显色，取下冷却至室温，再经摇匀后，在721分光光度计上用660毫微米红色滤光片进行比色测定光密度，从标准曲线中读出磷的浓度，换算成原样品中P205的百分含量。
土壤中全磷的测定方法及仪器试剂
土壤中全磷的测定方法及仪器试剂土壤全磷测定法 (分光光度法定量测定)1、主题内容与适用范围本标准对土壤全磷测定的原理、仪器、设备、样品制备、操作步骤等做了说明和规定。
本标准适用于测定各类土壤全磷含量。
2、测定原理土壤样品与氢氧化钠熔融，使土壤中含磷矿物及有机磷化合物全部转化为可溶性的正磷酸盐，用水和稀硫酸溶解熔块，在规定条件下样品溶液与钼锑抗显色剂反应，生成磷钼蓝，用分光光度法定量测定。
3 仪器、设备3.1 土壤样品粉碎机；3.2 土壤筛：孔径1mm和0.149mm；3.3 分析天平：感量为0.0001g；3.4 镍（或银）坩埚：容量≥30mL；3.5 高温电炉：温度可调（0～1000℃）；3.6 分光光度计：要求包括700nm波长；3.7 容量瓶：50、100、1000mL；3.8 移液管：5、10、15、20mL；3.9 漏斗：直径7cm；3.10 烧杯：150、1000mL；3.11 玛瑙研钵。
4试剂所有试剂，除注明者外，皆为分析纯，水均指蒸馏水或去离子水。
4.1 氢氧化钠（GB 629）；4.2 无水乙醇（GB 678）；4.3 10％（M/V）碳酸钠溶液：10g无水碳酸钠（GB 639）溶于水后，稀释至100mL，摇匀；4.4 5％（V/V）硫酸溶液：吸取5mL浓硫酸（GB 625，95.0～98.0％，比重1.84）缓缓加入90mL水中，冷却后加水至100mL；4.5 3mol/L硫酸溶液：量取168mL浓硫酸缓缓加入到盛有800mL左右水的大烧杯中，不拌，冷却后，再加水至1000mL；4.6 二硝基酚指示剂：称取0.2g 2，6-二硝基酚溶于100mL水中；4.7 0.5％酒石酸锑钾溶液：称取化学纯酒石酸锑钾0.5g溶于100mL水中；4.8 硫酸钼锑贮备液：量取126mL浓硫酸，缓缓加入到400mL水中，不断搅拌，冷却。
另称取经磨细的钼酸铵（GB 657）10g溶于温度约60℃300mL水中，冷却。
土壤磷土壤有效微量元素测定方法
2.3 待消煮溶液至清亮后，需继续加热，把剩余 的H2O2彻底除去，否则对磷的测定影响较大。
2.4 如试液为HCI、HCIO4介质，显色剂应用HCI配 制；试液为H2SO4介质，显色剂也用H2SO4配制。 显色液酸的适宜浓度范围为0.2～1.6mol/L，最 好是0.5～1.0mol/L。酸度高显色慢且不完全， 甚至不显色；低于2.0mol/L易产生沉淀物，干 扰测定。
2.2 测试时若需稀释，应用DTPA浸提液稀释，以保持基 体一致，并在计算时乘上稀释倍数。
2.3洗净所后用备玻用璃。器皿应事先在10％HNO3溶液中浸泡过夜，
2.4 锌是比较容易受污染，注意不要使用胶塞。
2.5 所需配制的标准溶液系列应根据仪器本身的精度要 求配制
2.6 如在样品所需测定的某一元素含量较高，可能会存 在反转现象。
2.注意事项：
2.1 振荡后，必须尽快过滤，否则浸提时间会延长；过滤 时应使用慢速滤纸，而且先倒少量溶液过滤，否则滤 液易混浊。
2.2 如果土壤有效磷含量较高，应减少浸提液的吸样量， 并加浸提剂补足至10.00mL后显色，以保持显色时溶 液的酸度。
2.3 加入显色剂时，必须慢慢地放入，并且一边慢慢摇动， 否则溶液很容易冲出瓶口。
一、土壤有效磷测定
1.方法提要（原理）
碳酸氢钠溶液除可提取水溶性磷外，也可以 抑制Ca2+的活性，使一定量活性较大的Ca-P盐 类 中 的 磷 被 浸 出 ， 也 可 使 一 定 量 活 性 Fe-P 和 Al-P盐类中的磷通过水解作用而浸出。由于浸 出液中Ca、Fe、Al浓度较低，不会产生磷的再 沉淀。浸提液中的磷可用钼锑抗比色法定量测 定。土壤浸出的磷量与土液比、液温、振荡时 间及方式有关。本法严格规定土液比为1：20， 浸 提 液 温 度 为 25℃±1℃ ， 振 荡 提 取 时 间 为 30min。
土壤全磷的测定(精)
（2） 固相中的磷： 液相中磷少，由固相磷补充，所以重要。 液相中磷（有效性高），只有0.05~0.03 kg/亩(少)， 植物（小麦）吸收1~1.5 kg/亩（高出50~300倍），所 以植物吸收的磷主要来自土壤固相。
3. 土壤有效磷供应状况 指在一个生长季节内，能够被植物吸收利 用的土壤磷素。包括 （1）液相磷 （2）土壤胶体弱吸附或交换态磷
Fe3+形成配合物而掩蔽之。在钼锑抗比色法中， 允许Fe3+含量达400mg/L，因为Fe3+可与抗坏血 酸形成配合物；在H2SO4-HClO4消煮时，HClO4 又能与Fe3+成配合物，所有这些都减少了Fe3+的
干扰。
Si4+：在酸度较低时（0.25mol/L以下）可生成SiMo 杂多酸，但在P的测定中，PMo杂多酸形成的酸度 较高（在0.45mol/L以上），此酸度抑制了SiMo杂 多酸的形成。另外，用H2SO4-HClO4消煮时，由于 HClO4的脱水作用很强，使胶状Si脱水成SiO2析出， 所以少量的Si可用控制酸度的方法消除。
的碱。与重量法相比无大优点，且多了手续，如标
准酸、碱，现少用。
总之，重量法、滴定法均需沉淀重量大，即含量高
时用，而土壤中的P一般较少，所以现在普遍采用 比色法。
3、比色法：
（1） 钒钼黄法（又叫钼黄法）：抗干扰离子的范
围大，灵敏度较低，适于测定含P量高的样品。 （2） 钼兰法：最早在1887年提出，后经不断研究、 改进，直到1962年Murphy等提出用抗坏血酸作为 测P的还原剂，才形成了现在的钼锑抗比色法。
稀释倍数大，结果的误差也大。
注意：比色分析要求工作曲线与样品的测定条件一
致，所以要求严格按照操作手续进行。
实验七：土壤无机磷的测定
实验七：土壤无机磷的测定一、实验方法及目的采用SMT法测定土壤无机磷；掌握土壤无机磷的测定方法及分光光度法。
二、实验原理1）样品的前处理：用1mol/L的HCL溶液将土壤中无机磷转移到提取液中。
2）提取液中正磷酸盐的测定：在酸性条件下，试液中的P（正磷酸盐）与钼酸形成配合物-磷钼杂多酸（又叫磷钼酸杂聚配合物）。
H3PO4 + 12H2MoO4 = H3P(Mo3O10)4 + 12H2O P多时呈黄色，少时无色在一定酸度下，加入还原剂后，杂多酸中的Mo 被还原，产生特殊兰色（钼兰），其中一部分Mo6+被还原成Mo5+或Mo3+，或Mo3+、Mo5+都有。
在钼兰的吸收光谱曲线中有两个吸收峰(660nm或880nm)。
测定时可以根据分光光度计的性能选用。
我国国标采用700nm波长。
三、实验仪器与药品1仪器：多用调速振荡器，离心机，分光光度计。
2试剂：1）1mol•L-1HCl溶液：准确移取83.3ml浓HCl溶于定容至1L；2）（1+1）硫酸溶液3）磷标准贮备液（50.0 μg.mL-1）：称取0.2197±0.001g于110℃干燥2h在干燥器中放冷的磷酸二氢钾(KH2PO4)，用水溶解后转移至1000mL容量瓶中，加入大约800mL水、加5mL1+1硫酸用水稀释至标线并混匀。
1.00mL此标准溶液含50.0 μg磷。
4）抗坏血酸（10%）：溶解10g抗坏血酸(C6H8O6)于水中，并稀释至100mL。
此溶液贮于棕色的试剂瓶中，在冷处可稳定几周。
如不变色可长时间使用。
5）钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵[(NH4)6Mo7O24•4H2O]于100mL水中。
溶解0.35g酒石酸锑钾[KSbC4H4O7•½H2O]于100mL水中。
在不断搅拌下把钼酸铵溶液徐徐加到300mL硫酸(1+1)中，加酒石酸锑钾溶液并且混合均匀。
此溶液贮存于棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。
6）过100目筛土样0.2g。
土壤有效磷的测定 ppt课件
土壤有效磷的测定
4、钼锑抗显色剂
称取0.50g 抗坏血酸(左旋)溶 于100mL钼锑抗贮备液中。 (有效期24小时，如贮于2-8℃ 冰箱中，则有效期7天。)
土壤有效磷的测定
5、磷标准贮备溶液（100 mg/L）
称取0.4394g KH2PO4 (105℃ 烘2小时) 溶于约200mL 水中， 加入5mL 浓H2SO4，转移入 1L 容量瓶中，用水定容，可 较长时间保存。
浸提时间：
Olsen法连续提取测定土壤有效磷的结 果表明，0.5 mol/L NaHCO3溶液浸提出 的土壤有效磷量随振荡时间而增加。
将各次连续测定值与各参比标准进行相 关性分析，结果表明Olsen法对土壤有 效磷进行一次提取已经能够反应土壤的 有效磷水平，无需进行多次提取。
土壤有效磷的测定
土壤有效磷的测定
3、酸度计 可准确调节pH到8.5
土壤有效磷的测定
1、 0.5 mol/L NaHCO3浸提液 称取42.0g NaHCO3 于800mL水中， 稀释定容至1L。以50%（m/V）NaOH 溶液调节浸提液的pH至8.5（用pH计测 定） 。贮存于聚乙烯或玻璃瓶中，用 塞塞紧。此溶液曝于空气中可因失去 CO2而使pH增高，使用前应检查pH是 否改变并校准。
土壤有效磷的测定
4、以空白溶液为参比液，使 用1cm比色皿，在分光光度计 上，用880nm或700nm波长进 行比色，测读吸光度。
土壤有效磷的测定
注1:
如果吸取滤液10mL于50mL容量瓶中， 加水和钼锑抗试剂后，会产生大量的 CO2气体，由于容量瓶瓶口小， CO2气 体不易逸出，在摇匀过程中，常造成试 液外溢，导致测定误差。为了克服这个 缺点，可以准确加入提取液、水和钼锑 抗试剂于三角瓶中，混匀，显色。
第三章 土壤氮、磷、钾的测定教案第二次课
《农化分析技术》理论（实验）教学授课教案授课人：雷恩春工程（系）2006年级农产品质量检测专业工程4班200 年月星期教学类型：理论教学，2学时单元名称：第三章土壤氮、磷、钾测定课时名称：第二节土壤中磷的测定教学目的：通过本次课的学习，目的是使学生掌握土壤中氮的测定方法。
知识能力培养的要点：1、一般掌握土壤中磷素的形态。
2、重点掌握土壤中磷的测定。
3、难点土壤中磷的测定--钒钼黄比色法。
教学方法与教具：课堂讲授、学生互动、多媒体理论教学、白板第三章土壤氮、磷、钾测定第二节土壤中磷的测定复习提问上课内容……………………………………………………5分钟一、概述………………………………………………………………10分钟（一）土壤中磷素的形态（二）土壤中磷的含量及影响因素二、土壤全磷测定（一）样品的分解……………………………………………………10分钟1、碱熔法（1）Na2CO3熔融法（2）NaOH熔融法2、酸溶法（二）待测液中P的定量……………………………………………20分钟1、重量法（1）磷酸铵镁法（2）磷钼酸喹啉法2、滴定法3、比色法（1）钒钼黄法（又叫钼黄法）（2）钼兰法1）测定原理2）测定条件：酸度、试剂浓度、还原剂种类、干扰离子三、土壤有效磷测定（一）Olsen法（NaHCO3法）1、方法原理…………………………………………………………5分钟2、显色条件…………………………………………………………10分钟（1）pH8.5（2）浸提温度（3）土液比1:20（4）振荡时间（5）振荡频率3、浸出液中磷的定量——钼锑抗比色法…………………………10分钟（1）反应原理（2）显色条件（3）干扰的消除（4）土壤有效磷丰缺指标（二）Bray1法（NH4F-HCl法）…………………………………5分钟（三）Mehlich3法、Mehlich1法、CaCl2法……………………5分钟（四）其它方法：树脂法、同位素法、微生物学方法…………5分钟课堂讨论、思考题：……………………………………………5分钟1、Olsen法测定石灰性土壤有效磷的浸提原理2、讨论影响土壤有效磷浸提条件的因素？。
可溶性活性磷实验报告
一、实验目的1. 了解可溶性活性磷的概念和测定方法；2. 掌握测定可溶性活性磷的原理；3. 学会使用凯氏法测定可溶性活性磷的含量。
二、实验原理可溶性活性磷是指土壤中可供植物吸收利用的磷素，包括无机磷和有机磷。
测定可溶性活性磷的方法有酸解法、碱解法和凯氏法等。
本实验采用凯氏法测定可溶性活性磷，其原理如下：1. 将土壤样品与浓硫酸、浓硝酸混合，在高温下进行消解，使土壤中的有机磷和无机磷转化为无机磷酸盐；2. 消解液经过过滤、洗涤、干燥后，用氢氧化钠溶液中和至中性；3. 加入过量的钼酸铵溶液，与磷酸根离子反应生成磷钼酸铵沉淀；4. 在酸性条件下，磷钼酸铵沉淀被还原为磷钼蓝；5. 测定磷钼蓝的吸光度，根据标准曲线计算可溶性活性磷的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：土壤样品、浓硫酸、浓硝酸、氢氧化钠、钼酸铵、抗坏血酸、磷酸二氢钾、蒸馏水等；2. 实验仪器：电子天平、高温炉、凯氏瓶、消解器、离心机、分光光度计、移液管、容量瓶等。
四、实验步骤1. 称取0.5g土壤样品，放入凯氏瓶中；2. 加入5ml浓硫酸和2ml浓硝酸，充分混合；3. 将凯氏瓶放入高温炉中，加热至瓶内液体呈淡黄色，继续加热至瓶内液体呈无色透明；4. 取出凯氏瓶，冷却至室温，加入20ml蒸馏水；5. 将凯氏瓶放入消解器中，消解至液体呈无色透明；6. 将消解液转移至离心管中，离心分离；7. 取上清液，加入1ml氢氧化钠溶液中和至中性；8. 加入1ml钼酸铵溶液，混合均匀；9. 加入1ml抗坏血酸溶液，混合均匀；10. 静置30min；11. 用分光光度计测定吸光度，根据标准曲线计算可溶性活性磷的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制：取不同浓度的磷酸二氢钾溶液，按照实验步骤进行测定，绘制标准曲线；2. 实验结果：根据标准曲线计算土壤样品中可溶性活性磷的含量；3. 结果分析：比较不同土壤样品的可溶性活性磷含量，分析土壤肥力状况。
六、实验结论通过本次实验，我们掌握了可溶性活性磷的测定方法，学会了使用凯氏法测定可溶性活性磷的含量。
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土壤可溶磷的测定
(C a C l2)
土壤中可溶磷的测定（CaCl2 浸提）
一、试剂的制备
所需试剂：
试剂A：取6g 钼酸铵溶解到125ml蒸馏水中，再取0.1454g酒石酸锑钾溶解到50ml 水中。
将以上两种试剂加入到500ml 2.5M 的H2SO4中，用蒸馏水稀释到1000ml.
试剂B：在200ml 试剂A中加入1.056g抗坏血酸。
此试剂有效期24 小时，宜用前配制。
2.5 M H2SO4：将140ml 浓硫酸稀释到1000ml。
0.01 M CaCl2：取1.53g CaCl2·2H2O(96%) 溶解到蒸馏水中，再定容到
1000ml。
磷标准溶液：精确称取0.439g 磷酸二氢钾（在60℃下烘干1 h ）溶解到500ml蒸馏水中，再加入25ml 3.5M H2SO4定容到1L。
此溶液即为含100mg/L 的磷基准溶液。
二、实验步骤
1、标准曲线的绘制
分别移取2 mg/L磷标准溶液1，2，3，4，5，6，7，8，9 ml 于25ml容量瓶中，即得0.08，0.16，0.24，0.32，0.40，0.48，0.56，0.64，0.72mg/L磷，再逐个加入5ml提取液（0.01MCaCl2），加入适量蒸馏水，使其中体积达到
18ml。
分别移入5ml抗坏血酸（试剂B），加入蒸馏水定容。
另准备一25ml容量瓶加入5ml提取剂，抗坏血酸（试剂B），蒸馏水定容，作为空白样。
十分钟后，在720nm波长下测定其吸光度值。
所有试样做三个平行样。
2、提取土壤中的磷
称取通过2mm筛的风干土样10g于250ml锥形瓶中，再加入100ml0.01M CaCl2。
在震荡机上震荡10min（震荡机速率为每分钟180次），然后用无磷滤纸过滤，用干燥的烧杯接收。
取20ml滤液加入到25ml容量瓶中，再加入5ml 抗坏血酸。
十分钟后在720nm波长下测定其吸光度值。