土壤分离.ppt
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挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
平板划线菌落分离效果图
挑取单个菌落接种于 斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
五、实验结果
1.你所做的涂布平板法和划线法是否得到了 单菌落？如果不是请分析其原因并重做。
2.在三种不同平板培养基上你分离得到哪些 类群的微生物？简述它们的菌落特征。
2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔分别编 上10-2、10-3、10-－4、10-5、10-6。取已稀释成10-1 的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取 1mL土壤悬液加入10-2的无菌水的试管中，并在试 管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10-2土壤 稀释液。同法依次连续稀释至10-3 10-4、10-5 、10-6 土壤稀释液。
释液0.1mL，加在灭菌的空培养皿中。 倒入已融化的培养基 混菌
在平坦的桌面上，水平轻轻转动培养皿，使菌 液、培养基充分混匀铺平，凝固后倒置于恒温培养 箱中培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离
混匀
凝固 28～ 30℃
培养
实验内容3（微生物的分离—平板划线法）
实验三
土壤微生物的分离 与纯化
•一、实验目的 •二、实验原理 •三、实验器材 •四、实验内容 •五、实验结果 • 六、 思考题
一、实验目的
1.学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微 生物菌种的方法。
2.综合练习微生物学实验的各种无菌操作技 术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种
液的稀释倍数即得。
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离—平板涂抹法
实验内容2（微生物的分离—混合法）
吸取稀释液 以无菌操作法分别吸取10-4、10-5 、 10-6土壤稀
六、思 考 题
1.平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 2.在划线分离时，为什么每次都需要将接
种环上的剩余物烧掉？
在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管（或枪头）
倒平板
将培养基加 热融化，待 冷却至55－ 60 ℃时，倒 平板。
吸取稀释液
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10-4、10Fra Baidu bibliotek5、 10-6 土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。
涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒 置于恒温箱培养。
制平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10-1）在平板上划线。
1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作 连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。
2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿 约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一 次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划 线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。
四、实验内容
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
实验总流程
各浓度做 三个平皿
从土壤分离微生物操作过程
挑选单菌落 接种斜面
实验内容1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：
1. 称取土壤10g，放入90mL无菌水的三角瓶中，振 荡 20min，即为稀释10-1的土壤悬液。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
三、实验器材
实验材料：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一
号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 实验仪器与用具 无菌水：带有玻璃珠装有90ml无菌水三角瓶、装有
9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电
子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴等
平板划线菌落分离效果图
挑取单个菌落接种于 斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
五、实验结果
1.你所做的涂布平板法和划线法是否得到了 单菌落？如果不是请分析其原因并重做。
2.在三种不同平板培养基上你分离得到哪些 类群的微生物？简述它们的菌落特征。
2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔分别编 上10-2、10-3、10-－4、10-5、10-6。取已稀释成10-1 的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取 1mL土壤悬液加入10-2的无菌水的试管中，并在试 管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10-2土壤 稀释液。同法依次连续稀释至10-3 10-4、10-5 、10-6 土壤稀释液。
释液0.1mL，加在灭菌的空培养皿中。 倒入已融化的培养基 混菌
在平坦的桌面上，水平轻轻转动培养皿，使菌 液、培养基充分混匀铺平，凝固后倒置于恒温培养 箱中培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离
混匀
凝固 28～ 30℃
培养
实验内容3（微生物的分离—平板划线法）
实验三
土壤微生物的分离 与纯化
•一、实验目的 •二、实验原理 •三、实验器材 •四、实验内容 •五、实验结果 • 六、 思考题
一、实验目的
1.学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微 生物菌种的方法。
2.综合练习微生物学实验的各种无菌操作技 术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种
液的稀释倍数即得。
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离—平板涂抹法
实验内容2（微生物的分离—混合法）
吸取稀释液 以无菌操作法分别吸取10-4、10-5 、 10-6土壤稀
六、思 考 题
1.平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 2.在划线分离时，为什么每次都需要将接
种环上的剩余物烧掉？
在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管（或枪头）
倒平板
将培养基加 热融化，待 冷却至55－ 60 ℃时，倒 平板。
吸取稀释液
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10-4、10Fra Baidu bibliotek5、 10-6 土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。
涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒 置于恒温箱培养。
制平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10-1）在平板上划线。
1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作 连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。
2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿 约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一 次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划 线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。
四、实验内容
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
实验总流程
各浓度做 三个平皿
从土壤分离微生物操作过程
挑选单菌落 接种斜面
实验内容1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：
1. 称取土壤10g，放入90mL无菌水的三角瓶中，振 荡 20min，即为稀释10-1的土壤悬液。
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
三、实验器材
实验材料：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一
号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 实验仪器与用具 无菌水：带有玻璃珠装有90ml无菌水三角瓶、装有
9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电
子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴等