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土壤中微生物的分离_PPT幻灯片
• 实验目的：
1、学会倒平板 2、了解土壤中微生物分离方法 3、学会稀释涂布平板计数法对微生物计数
微生物的分离及稀释平板法计数
（1）倾注平板法 (混合平板法)
（2）涂布平板法
稀释到适量浓度
倾注或涂布平板
培养
菌落计数
实验安排
• 10-710-610-5 稀释度为细菌培养,肉汤蛋白胨 培养基
• 10-5
• 10-510-410-3 稀释度为真菌培养,马丁氏培养 基
每个梯度3个平行，所以每种菌需要9块平板, 注意标记
• 培养 将细菌、真菌、放线菌培养基倒置于28度培养箱 中培养3-5d；统计所长出的菌落数；
• 挑菌（纯化） 将培养后长出的单菌落数量、形态、培养特征进 行观察，分别挑取单菌落于相应平板上划线、分离， 培养，检查菌落是否一致、单纯（也可以用显微镜 涂片染色镜检是否是单一的微生物），如有杂菌需 进一步纯化、分离。
一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示原 样品中的细胞数。
三、作业
• 利用涂布平板法对土壤样品进行活菌计数
菌落计数 ：
稀
10-4
释
度
10-5
10-6
平板中的 细 1 2 3 平 1 2 3 平 1 2 3 平
CFU数 菌
均
均
均
放 线 菌
真 菌
• 每克含菌样品中细菌/放线菌/真菌 活细胞数＝ （同一稀释度平板上菌落平均数× 10×稀释倍数× 10 ） 含菌样品克数
土壤微生物的分离和纯化实验
实验八土壤微生物的分离和纯化一、目的1．了解从土壤中分离与纯化微生物的基本原理及方法。
2．掌握几种常用的分离的基本操作技术。
二、原理在自然界中，土壤是微生物生活中的最适宜的环境，土壤中存在大量的微生物，但土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，因此，为了研究某一微生物的特性，或者要大量地培养和利用某种微生物，必须把它们从这些混杂的微生物群中分离出来。
从而获得某一菌株的纯培养。
这种获得纯培养的方法称之为微生物的分离和纯化三、器材1．牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏l号培养基、马铃薯蔗糖琼脂培养基。
2．盛有100毫升无菌水的三角瓶，9毫升无菌水的试管，无菌吸管，无菌玻璃涂抹棒，10％的酚液，25％的乳酸，土样，接种环，标签。
四、方法(一)涂抹平板分离法1．制备土壤稀释液称取土样10克，放入装有玻璃珠和100毫升无菌水的三角瓶中，振摇15—20分钟，使土与水充分混合，将菌分散，静止片刻，用吸管从中吸取1毫升土壤悬液注人盛有9毫升无菌水试管中，吹吸三次，并振摇使之充分混匀，然后再吸取1毫升注入另一支盛有9毫升无菌水的试管中，以此类推制成10-1、10-2、l0-3、10-4、l0-5……的各种稀释度的土壤悬液。
2．倒平板将牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，马铃薯蔗糖培养基溶化。
待冷至50—60℃时，在高氏l号培养基中加入10％酚2滴，在马铃薯蔗糖培养基中加入25％乳酸2滴，然后分别倒平板，每支培养基倒一皿(用右手持盛培养基的试管，左手拨出棉花塞，试管口在火焰上灭菌，然后左手将培养皿在火焰附近打开少许，迅速注入培养基，加盖后轻轻摇动培养皿使培养基均匀分布，平放在桌面上，待凝后即成平板。
(见图18)。
3．涂抹将上述每种培养基平板标上10-3、10-4、10-5稀释度，然后用无菌吸管分别从10-5、10-4、10-3稀释度的试管中吸取土壤悬液，每一平板注入0.2毫升，再用灭菌玻璃涂抹刮棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，静止5分钟。
土壤细菌的分离及纯化课件
生物塑料合成
02
土壤细菌可以用于合成生物塑料，如聚羟基脂肪酸酯（PHA）
。
蛋白质和酶的生产
03
土壤细菌可以用于生产各种酶和蛋白质，广泛应用于食品、医
药、化工等领域。
05 土壤细菌的研究前景
土壤细菌的基因组学研究
土壤细菌基因组学研究有助于揭示土壤细菌的 多样性和进化机制，为土壤生态系统的功能和 稳定性提供基础数据。
01
02
03
稀释涂布平板法
将土壤样品稀释后涂布在 培养基平板上，通过培养 获得单菌落。
划线分离法
将土壤样品划线接种在培 养基平板上，通过培养获 得单菌落。
富集培养法
通过选择特定的培养基和 培养条件，使目标细菌大 量繁殖，再从中分离。
分离步骤
2. 制备培养基
根据分离目标选择适合的培养 基配方，按照要求制备培养基 。
通过研究土壤细菌的代谢途径，可以发现新的生物合 成途径和酶，为生物工程和生物制药等领域提供新的
资源和工具。
代谢途径研究还可以帮助了解土壤细菌在碳循环、氮 循环和硫循环等过程中的作用，为环境保护和农业可
持续发展提供理论支持。
土壤细菌的生态学研究
1
土壤细菌的生态学研究有助于深入了解土壤生态 系统的结构和功能，以及土壤细菌与其他微生物 和动植物之间的相互作用。
纯化步骤
样品采集
采集具有代表性的土 壤样品，保证样品无 污染。
样品处理
将土壤样品进行破碎 、研磨、稀释等处理 ，使细菌充分释放。
分离纯化
根据纯化方法的不同 ，在固体或液体培养 基上进行细菌的分离 纯化。
菌落观察
观察菌落的形态、颜 色、大小等特征，初 步判断细菌的种类。
【全面版】实验八土壤中细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的分离与纯化PPT文档
马丁氏培养基，豆芽汁葡萄糖培养基 酵母菌及霉菌的分离与纯化
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
3、无菌生理盐水。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环 上剩物烧掉？
3、为什么要把培养皿倒置培养？
谢谢观看
棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属 于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 3、为什么要把培养皿倒置培养？
4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂 酵母菌及霉菌的分离与纯化
捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
四实验步骤四实验步骤1制备土壤稀释液2涂布法进行分离3培养4菌落计数5划线分离五实验报告五实验报告1在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化
பைடு நூலகம் 三、实验材料
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
3、无菌生理盐水。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
2、在分区平板划线法中，为什么每次都需将接种环 上剩物烧掉？
3、为什么要把培养皿倒置培养？
谢谢观看
棒、称量纸、药勺、橡皮头、10％酚溶液。 1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
四、实验步骤
1、制备土壤稀释液 2、涂布法进行分离 3、培养 4、菌落计数 5、划线分离
五、实验报告
1、在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属 于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。
酵母菌及霉菌的分离与纯化 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 3、为什么要把培养皿倒置培养？
4、其它物品 无菌培养皿、无菌移液管、无菌玻璃涂 酵母菌及霉菌的分离与纯化
捷辂诖渠氲鳘前咐赂断蝶孑揶孤龈油超碗庥捣惩濠论瓜颍蓑晾埠引兰唐骏沟刘处氤馇白烙鄙膪美嫖学苠策杯碇挨枢税烬夹麈訾江汇绨 星酃恍庇骤紫末嗑倘
四实验步骤四实验步骤1制备土壤稀释液2涂布法进行分离3培养4菌落计数5划线分离五实验报告五实验报告1在你所制备的培养基的平板上长出的菌落分别属于哪个类群
实验八 土壤中细菌、放线菌、 酵母菌及霉菌的分离与纯化
一、实验目的 1、熟悉从自然界中分离微生物的原理； 2、掌握细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的分离纯化
பைடு நூலகம் 三、实验材料
土壤中微生物的分离
3. 划线时动作要轻巧，避免划破平板。 4. 注意整个操作过程是在火焰周围的无菌操作区
域内进行，操作完成后将接种工具火焰灭菌后 再放回原处。
思考题
1. 涂布好的平板在培养时为何要倒置?
倒平板操作示意图
②制备样品稀释液（以土壤为例）
准确称取土壤样品1g，放人盛有99ml无菌水并 放有小玻璃珠的三角瓶中，振摇约20min，使 微生物细胞分散，即成10-2的土壤样品稀释液； 用无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有 9mL无菌水的试管中，吹吸几次，让菌液混合 均匀，即成10-3稀释液；再换一支无菌吸管吸 取10-3稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试 管中，也吹吸几次，即成10-4稀释液，以此类 推，连续稀释，制成10-5、10-6、10-7、10-8、 10-9等一系列稀释菌液。
2.平板划线分离法
①倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，标明培养基名 称、样品编号和实验日期。
②划线：点燃酒精灯，在火焰旁左手拿无菌平板，右 手拿接种环以无菌操作沾取少许待分离的样品， 在无菌平板表面进行平行划线、连续化线、交叉 划线、扇形划线、方格划线或其他形式的划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能 一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
基，PDA培养基。 3. 溶液或试剂：盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌
水并带有玻璃珠的三角烧瓶，95%酒精。 4. 仪器或其他用具：天平，玻璃涂布棒，移夜枪，
无菌枪头，接种环，无菌培养皿，记号笔等。
实验方法
1．稀释涂布平板法
①倒平板
将固体培养基加热溶化，待冷却至55~60℃时， 在酒精灯火焰旁，将培养基迅速倒入已灭菌的培 养皿中约15~20ml，平放于桌面上，待冷却凝固 后即为无菌平板。
域内进行，操作完成后将接种工具火焰灭菌后 再放回原处。
思考题
1. 涂布好的平板在培养时为何要倒置?
倒平板操作示意图
②制备样品稀释液（以土壤为例）
准确称取土壤样品1g，放人盛有99ml无菌水并 放有小玻璃珠的三角瓶中，振摇约20min，使 微生物细胞分散，即成10-2的土壤样品稀释液； 用无菌吸管吸取10-2稀释液1mL，移入装有 9mL无菌水的试管中，吹吸几次，让菌液混合 均匀，即成10-3稀释液；再换一支无菌吸管吸 取10-3稀释液1mL，移入装有9mL无菌水的试 管中，也吹吸几次，即成10-4稀释液，以此类 推，连续稀释，制成10-5、10-6、10-7、10-8、 10-9等一系列稀释菌液。
2.平板划线分离法
①倒平板：按稀释涂布平板法倒平板，标明培养基名 称、样品编号和实验日期。
②划线：点燃酒精灯，在火焰旁左手拿无菌平板，右 手拿接种环以无菌操作沾取少许待分离的样品， 在无菌平板表面进行平行划线、连续化线、交叉 划线、扇形划线、方格划线或其他形式的划线， 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少， 并逐步分散开来，如果划线适宜的话，微生物能 一一分散，经培养后，可在平板表面得到单菌落。
基，PDA培养基。 3. 溶液或试剂：盛9ml无菌水的试管，盛99ml无菌
水并带有玻璃珠的三角烧瓶，95%酒精。 4. 仪器或其他用具：天平，玻璃涂布棒，移夜枪，
无菌枪头，接种环，无菌培养皿，记号笔等。
实验方法
1．稀释涂布平板法
①倒平板
将固体培养基加热溶化，待冷却至55~60℃时， 在酒精灯火焰旁，将培养基迅速倒入已灭菌的培 养皿中约15~20ml，平放于桌面上，待冷却凝固 后即为无菌平板。
一 土壤微生物的分离与鉴定.
（3）培养与移植
待平板完全冷凝后，将平板倒置37℃恒温箱中培养 24～48小时，检查分离结果。将培养后长出的单个菌 落分别挑取接种到牛肉膏蛋白胨培养基的斜面上，然 后置于37℃恒温箱中培养，待菌苔长出后，检查菌苔 是否单纯，也可用显微镜涂片染色检查是否是单一的 微生物，若有其它杂菌混杂，就可再一次进行分离、 纯化，直至获得纯培养。
微生物学实验
制作人员: 张敦林、周业飞、周红霞
实验二
土壤的稀释分离、纯化及无菌 操作技术
（一）实验目的 （二）实验原理 （三）实验器材 （四）实验方法 （五）实验作业
（一）实验目的
1、了解微生物分离和纯化的原理
2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化接 种培养的基本操作技术，掌握微生物的无菌操作 技术。
（1）土壤稀释液的制备 ① 称取土样10g，放入盛90ml无菌水三角瓶中，振荡 15～20分钟，使微生物细胞分散，静置约20～30秒， 即成10-1的土壤悬液。 ② 另取装有9ml无菌水的试管，编号为10-2、10-3、 10-4、10-5、10-6及10-7，用无菌吸管吸取10-1土壤悬液 lml，加入编号10-2的无菌试管中，吹吸三次，使之混 合均匀，即成10-2的土壤稀释液。再用另一支吸管吸 取10-2试管中的土壤稀释液1ml，加入编号10-3的无菌 试管中，轻轻摇动，使之混合均匀，即成10-3的土壤 稀释液，一定要每次更换一支无菌吸管（连续稀释）。 同法依次分别稀释成10-4、10-5和10-6等一系列稀释度 菌悬液
（三）平板划分离法
交叉划线法
连续划线法
（五）实验作业
1．在你所实验的三种培养基平板上长出的菌 落属于哪个类群？简述它们的菌落形态特征。 2．稀释分离时，为什么要将已融化的琼脂培 养基冷却到45～50℃左右才能倾入到装有菌液 的培养皿内？ 3．划线分离时，为什么每次都要将接种环上 多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 4．培养时为什么要将培养皿倒置培养？
实验六-土壤中微生物的分离和PPT课件
完整版课件
15
固体斜面培养特征
完整版课件
16
液体培养特征
完整版课件
17
半固体穿刺培养特征
完整版课件
18
3 微生物的无菌操作接种原理
• 1) 斜面接种
菌种管和待接试管在手中的拿法
完整版课件
19
试管拔塞后的灭菌
完整版课件
20
试管拔塞后的取菌
完整版课件
21
• 2) 穿刺接种
穿刺接种
（a）水平穿刺接完种整；版（课件b）垂直穿刺接种
• 10 体表不同部位的微生物
• 取一个平板, 用记号笔在平板背面化分为几部分,每部分标 记好要检测的部位,如手,头发,衣服等, 可将洗手前后分别 检测.然后用不同的人体部位按在标记好的平板部位上,将 平板倒转, 恒温37℃培养两天后观察.
22
三 实验器材
• 1 培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基,倒平 板, 斜面,液体,半固体培养基.
• 2 器材：花园土，99mL无菌水1瓶，9mL无 菌水4支，1mL枪头, 0.1mL, 直径9cm的无 菌平皿，天平，试管架，无菌称量纸，酒 精灯，火柴，接种环，涂布棒，记号笔等.
• 3 菌种: 金黄色葡萄球菌, 变形杆菌,枯草杆 菌.
了研究某种微生物的特性或者要大量培养和使用某种微生 物，必须从这些混杂的微生物群落中获得纯培养，这种获 得纯培养的方法称为微生物的分离与纯化。 • 在自然界中，上壤是微生物生活的良好环境，其中生活的 微生物数量和种类都是极其丰富的。土壤中的微生物数量 与种类非常多,在通气良好的花园土中，好气性微生物占 有绝对优势。本实验以花园土为材料分离土壤中的好气性 细菌. • 分离微生物常用的方法有稀释平板分离法和划线分离法， 根据不同的材料，可以采用不同方法，其最终目的是要在 培养基上出现欲分离微生物的单个菌落，必要时再对单菌 落进一步分离纯化。在用稀释平板法分离微生物时，还可 以同时测定待分离的微生物的数量。
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2. 另取装有9mL无菌水试管5支，用记号笔分别编 上10-2、10-3、10-－4、10-5、10-6。取已稀释成10-1 的土壤液，振荡后静止0.5min，用无菌吸管吸取 1mL土壤悬液加入10-2的无菌水的试管中，并在试 管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10-2土壤 稀释液。同法依次连续稀释至10-3 10-4、10-5 、10-6 土壤稀释液。
计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种
液的稀释倍数即得。
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离—平板涂抹法
实验内容2（微生物的分离—混合法）
吸取稀释液 以无菌操作法分别吸取10-4、10-5 、 10-6土壤稀
实验三
土壤微生物的分离 与纯化
•一、实验目的 •二、实验原理 •三、实验器材 •四、实验内容 •五、实验结果 • 六、 思考题
一、实验目的
1.学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微 生物菌种的方法。
2.综合练习微生物学实验的各种无菌操作技 术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管（或枪头）
倒平板
将培养基加 热融化，待 冷却至55－
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10-4、10-5、 10-6 土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。
涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒 置于恒温箱培养。
释液0.1mL，加在灭菌的空培养皿中。 倒入已融化的培养基 混菌
在平坦的桌面上，水平轻轻转动培养皿，使菌 液、培养基充分混匀铺平，凝固后倒置于恒温培养 箱中培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离
混匀
凝固 28～ 30℃
培养
实验内容3（微生物的分离—平板划线法）
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
三、实验器材
实验材料：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一
号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 实验仪器与用具 无菌水：带有玻璃珠装有90ml无菌水三角瓶、装有
9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电
子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴等
制平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10-1）在平板上划线。
1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作 连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。
2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿 约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一 次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划 线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。
挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
平板划线菌落分离效果图
挑取单个菌落接种于 斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
五、实验结果
1.你所做的涂布平板法和划线法是否得到了 单菌落？如果不是请分析其原因并重做。
2.在三种不同平板培养基上你分离得到哪些 类群的微生物？简述它们的菌落特征。
四、实验内容
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
实验总流程
各浓度做 三个平皿
从土壤分离微生物操作过程
挑选单菌落 接种斜面
实验内容1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：
1. 称取土壤10g，放入90mL无菌水的三角瓶中，振 荡 20min，即为稀释10-1的土壤悬液。
六、思 考 题
1.平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 2.在划线分离时，为什么每次都需要将接
种环上的剩余物烧掉？
计算出每克土壤中细菌的数量。 即用某一培养皿内真菌的菌落数乘以该培养皿接种
液的稀释倍数即得。
每毫升样品中微生物细胞数=
每皿菌落平均数 × 稀释倍数 × 1/取样体积数
挑取单个菌落，进行划线分离。
微生物的分离—平板涂抹法
实验内容2（微生物的分离—混合法）
吸取稀释液 以无菌操作法分别吸取10-4、10-5 、 10-6土壤稀
实验三
土壤微生物的分离 与纯化
•一、实验目的 •二、实验原理 •三、实验器材 •四、实验内容 •五、实验结果 • 六、 思考题
一、实验目的
1.学习从混杂的微生物群体中分离与纯化微 生物菌种的方法。
2.综合练习微生物学实验的各种无菌操作技 术。
二、实验原理
土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种 微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营 养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它 适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰 其他一些不需要的微生物，再用各种方法分 离、纯化该微生物，直至得到纯菌株。
在土壤稀释过程中，需换用不同的吸管（或枪头）
倒平板
将培养基加 热融化，待 冷却至55－
取一吸管，以无菌操作法分别吸取10-4、10-5、 10-6 土壤稀释液0.1mL，加在已制好的平板培养基上。
涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养机上充分混匀铺平，倒 置于恒温箱培养。
释液0.1mL，加在灭菌的空培养皿中。 倒入已融化的培养基 混菌
在平坦的桌面上，水平轻轻转动培养皿，使菌 液、培养基充分混匀铺平，凝固后倒置于恒温培养 箱中培养。 计算出每克土壤中放线菌的数量。 挑取单个菌落，进行划线分离
混匀
凝固 28～ 30℃
培养
实验内容3（微生物的分离—平板划线法）
稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离
三、实验器材
实验材料：新鲜土壤。 培养基：灭菌的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一
号培养基、马铃薯蔗糖培养基。 实验仪器与用具 无菌水：带有玻璃珠装有90ml无菌水三角瓶、装有
9mL无菌水的试管。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌三角玻棒、电
子天平、记号笔、接种环、酒精灯、火柴等
制平板。 凝固后，用接种环取相应的菌液一环（10-1）在平板上划线。
1.连续划线法：将挑取有样品的接种环在平板培养基表面作 连续划线。完毕后，倒置于28～300C温室培养。
2.分区划线法：用接种环以无菌操作挑取土壤稀释液1环， 先在培养基的一边作第一次平行划线3—4条，再转动培养皿 约600C角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第一 次划线部分作第二次划线会，同法依次作第三次和第四次划 线。划线完毕，盖上皿盖，倒置于温室培养。
挑取单个菌落接种于斜面培养基上，如果不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
平板划线菌落分离效果图
挑取单个菌落接种于 斜面培养基上，如果 不纯，再移植纯化， 最后得到纯培养。
五、实验结果
1.你所做的涂布平板法和划线法是否得到了 单菌落？如果不是请分析其原因并重做。
2.在三种不同平板培养基上你分离得到哪些 类群的微生物？简述它们的菌落特征。
四、实验内容
稀释涂板法 稀释混合平板法（混菌法） 划线分离 微生物的培养
实验总流程
各浓度做 三个平皿
从土壤分离微生物操作过程
挑选单菌落 接种斜面
实验内容1（微生物的分离—稀释涂平板法）
制备土壤稀释液：
1. 称取土壤10g，放入90mL无菌水的三角瓶中，振 荡 20min，即为稀释10-1的土壤悬液。
六、思 考 题
1.平板培养时为什么要把培养皿倒置？ 2.在划线分离时，为什么每次都需要将接
种环上的剩余物烧掉？