酵母菌计数实验 - 360文档中心

酵母菌大小的测定及计数实验流程

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实验九酵母菌的计数

实验九：酵母菌的计数
contents
目录
• 实验简介 • 实验材料 • 实验操作 • 结果分析 • 结论与总结
01 实验简介
实验目的
掌握酵母菌的计数方法。
探究酵母菌在发酵过程中的作用。
了解酵母菌在不同环境下的生长情况。
实验原理
酵母菌是一种单细胞真菌，具有细胞壁、细胞膜、细胞质和细胞核等结构。
未来改进方向
优化实验操作
为了提高计数的准确性和可靠性，我们可以在实验过程中采用更加先进的显微技术和设备，如自动计数仪等。
扩大样本量
为了使实验结果更具有代表性，我们可以增加样本数量和实验重复次数，以提高数据的稳定性和可靠性。
THANKS FOR WATCHING
感谢您的观看
结果讨论
根据实验结果，我们可以讨论酵母菌在不同环境中的生长特点、影响因
素以及在实际应用中的意义。同时，我们还可以提出改进实验的方法和
措施，以提高实验的准确性和可靠性。
05 结论与总结
实验结论
酵母菌数量计算
通过实验，我们成功地计算出了样品中酵母菌的数量。通过对比标准曲线，我们得出了较为准确的计数结果。
数据记录与处理
数据记录
详细记录每个视野或平板上的酵母菌数量，确保数据准确无误。
数据处理
根据实验要求，对数据进行统计、分析和图表绘制，得出结论。
04 结果分析
数据解读
酵母菌数量
通过实验计数，我们得到了不同样品中酵母菌的数量。这些数据可以帮助我们了解酵母菌在样品中的分布和密度。
误差分析
在实验过程中，由于操作、仪器误差等因素，可能会导致计数结果存在一定的误差。Байду номын сангаас 们需要对误差进行分析，以评估实验的准确性和可靠性。

微生物学实验5 酵母菌细胞总数和大小的测定

镜，载玻片，盖玻片等
2022/9/12
1
三．实验原理
➢ 利用血球计数板进行微生物计数的原理？总菌数（个/ml）＝5×104 A·B A：5个中方格中的总菌数，B：稀释倍数（＝1）；
➢ 利用接目测微尺测定微生物大小的原理？
接目测微尺每格长度（mm）=10n/m n：两重合线间镜台测微尺格数 m：两重合线间接目测微尺格数
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2
四．实验内容
1. 利用血球计数板对所给酵母培养液进行计数：上下两个计数室各计数一次
2. 微生物大小测定 ➢ 40 ×10放大系统下对接目测微尺进行标定； ➢ 在同样放大系统下测定所给酵母细胞大小：要求测定
10个细胞长和宽
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3
五. 实验结果报告与思考题
1. 计数：将2个计数室结果分别填入P14的表中，并按公式计算菌体细胞浓度：
2. 大小测定
➢ 接目测微尺标定结果：高倍镜下两重合线间镜台测微
尺格、目镜测微尺
格；
目镜测微尺每小格实际长度为
μm。
➢ 10个细胞测定结果填入 P17的表中，计算酵母细胞大小的范围及平均值（宽×长）
3. 思考题：讲义P14 2，3； P17 3
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实验五酵母菌细胞总数和大小的数板进行微生物计数的方法。 2. 学习并掌握接目测微尺的标定方法及微生物大小的测
定方法，增强微生物细胞大小的感性认识。
二．实验材料
1. 菌种：啤酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）菌悬液 2. 其他：血球计数板，接目测微尺，镜台测微尺，显微

酵母菌大小测定及显微镜直接计数[指南]

实验一：酵母菌大小测定一、实验器材1、菌种：酵母菌液体培养物2、仪器和其他物品目镜测微尺，镜台测微尺，普通光学显微镜，擦镜纸，载玻片，滴管等。

二、实验目的及要求1、学习并掌握使用显微测微尺测定微生物大小的方法。

2、掌握对不同形态细菌大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细胞大小的感性认识。

三、基本原理微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。

微生物大小测定需借助测微尺---目镜测微尺和镜台测微尺，两者配合使用。

镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为10个小格，共100个小格，每个小格10μm。

镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜测微尺每格地相对长度。

目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，一般有等分为50小格和100小格两种。

测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物像。

由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度也不一样。

因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。

然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞实际大小。

四、操作步骤1、装目镜测微尺(换目镜)把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝上放在目镜镜筒内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。

※双目显微镜的左目镜通常配有屈光度调节环，不能被取下，因此使用双目显微镜时目镜测微尺一般都安装在右目镜中。

2、校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。

（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。

探究培养液中酵母菌数量的动态变化

探究培养液中酵母菌数量的动态变化问题探究：
1、如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，应当采取怎样的措施？摇匀试管取1ml酵母菌培养液稀释几倍后，再用血球计数板计数，所得数值乘以“n×2.5×104”，即为1ml酵母菌原液中酵母菌个数。
2、本探究需要设置对照吗？如果需要，请讨论说明怎样设计；如不需要，请说明理由。
计算公式
• 16格×25格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数 /100×400×104×稀释倍数
• 25格x16格的血球计数板计算公式：酵母细胞数/ml=小格内酵母细胞个数 /80×400×104×稀释倍数
探究培养液中酵母菌数量的动态变化方案设计：
一、提出问题培养一种酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？也可以提出其他的探究问题，例如，在不同温度（以及通氧、通CO2 等）条件下酵母菌种群数量增长的情况如何？不同培养液（如加糖和不加糖）中酵母菌种群数量增长的情况如何？等等。二、猜想假设酵母菌种群的数量随时间呈S型增长变化。三、设计实验 ①全班同学分成甲、乙、丙等若干实验组。②分别用等量培养液，在相同适宜环境中培养等量酵母菌。③每天用血球计数板，采用抽样检测的方法计数一个小方格内的酵母菌数量并作记录，连续7天。④7天后，各组向全班汇报本小组7天的数据，算出每一天数据的全班平均值，根据平均值画出酵母菌种群数量的增长曲长。
(3)将血球计数板用擦镜纸擦净，在中央的计数室上加盖专用的厚玻片。 (4)将稀释后的酵母菌悬液，用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘，使菌液缓缓渗入，多余的菌液用吸水纸吸取，捎待片刻，使酵母菌全部沉降到血球计数室内。 (5)计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线位，取左上、右上、左下、右下4个中格（即100个小格）的酵母菌数。如果规格为25格 ×16格的计数板，除了取其4个对角方位外，还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数。

酵母菌的计数

* *
16个中格
探究培养液中酵母菌种群数量
♣ 酵母菌的计数（2）计算：每毫升培养液中的酵母菌细胞数是多少？所数小方格中细胞总数x400x104x稀释倍数酵母细胞个数/mL= 所数的小方格数
的动态变化
例1 :在用血球计数板（2mm×2mm方格）对某一稀释 50倍样品进行计数时，发现在一个计数室内（盖玻片下的培养液厚度为0.1mm）酵母菌平均数为16，据此估算10mL培养液中有酵母菌 2x107 个。
探究培养液中酵母菌种群数量
的动态变化
♣ 酵母菌的计数（6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养： ♠培养液配制 ♠灭菌 ♠接种
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡萄糖20g，1000 mL水），分装到5个烧杯中（200mL/烧杯）用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
的动态变化
探究培养液中酵母菌种群数量
的动态变化
♣ 酵母菌的计数（4）血球计数板的清洗：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
探究培养液中酵母菌种群数量
例2:酵母菌的计数通常用血球计数板进行，血球计数板每个大方格容积为0.1mm3 ，由400个小方格组成。现对某一样液进行检测，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先稀释后再计数。若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有 2×108 个。

实验九酵母菌的计数

实验九酵母菌的计数一、实验目的1. 了解酵母菌计数的方法和步骤。

2. 练习从样品中筛选出有效的酵母。

3. 熟练掌握血球计数板的使用方法和计算准确菌落数的技巧。

二、实验原理酵母比细菌大，通常直径在3-5um左右。

因此，酵母计数需要使用高倍显微镜和血球计数板。

血球计数板具有网格状的结构，格子大小为1mm x 1mm，每个格子被分成16个小方格，靠着板子底部的深度为0.1mm。

在这样的板子上，可以计算出每个小方格中的数量，进而计算出酵母菌落数。

三、实验步骤1. 酵母菌培养液制备取一小瓶酵母菌液（1ml/瓶）和50ml的培养基置于培养瓶中，摇晃好进行稀释。

2. 稀释酵母菌液使用吸管和15ml的试管来进行酵母菌液的稀释。

取出大约0.5ml的酵母菌液放入试管中，使用吸管加入5ml的无菌蒸馏水，进行混合。

将10倍的稀释液取出0.5ml，进行第二次稀释。

3. 取样取出10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中。

重复三次。

4. 计数使用高倍显微镜（400×）观察血球计数板，并手动计算每个格子中的酵母菌数量。

计算方法：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16） x 10^45. 数据分析计算出平均酵母菌浓度，将结果用来评估样品中酵母菌的含量。

四、实验注意事项1. 所有实验用品都需要在自然环境下进行消毒，并最好使用自动消毒器。

2. 使用高倍显微镜时，需要避免透过培养液的气泡和混沌，以获得清晰的图像。

3. 在计算酵母菌浓度时，需要始终保持准确的记录，并进行计算。

出现微小误差可能会有较大的影响。

4. 进行实验时需要着实考虑消除外因因素。

五、实验数据处理与分析在实验中，首先需要从样品中筛选出有效的酵母，并进行稀释。

稀释后的酵母菌液，需要使用吸管加入到试管中，并定期混合。

取10ul的酵母稀释液，加入到血球计数板的中心宫格中（使用不同液体的试管不同），所得数据如下表：| 每个小方格中的酵母菌数量 ||----------|--------------|| 1 | 9 || 2 | 12 || 3 | 15 || 4 | 13 || 5 | 11 || 6 | 16 || 7 | 12 || 8 | 14 || 9 | 10 || 10 | 12 || 11 | 10 || 12 | 11 || 13 | 9 || 14 | 8 || 15 | 16 || 16 | 18 ||----------|--------------|平均酵母菌浓度：（每个小方格中酵母菌总数÷ 16）X10^4 = (154÷16) X 10^4 = 9.63 X 10^4/ml。

实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数

数据整理
02
03
数据校验
我们将实验数据整理成表格，方便后续分析。
在数据整理过程中，我们进行了数据校验，确保数据的准确性和可靠性。
数据处理与图表绘制
数据处理
我们对实验数据进行处理，包括数据清洗、数据转换和数据变换等。
图表绘制
根据处理后的数据，我们绘制了图表，包括柱状图、折线图和饼图等，以便更好地展示数据和发现数据之间的关系。
实验应用血细胞计数板对酵母菌进行计数
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 实验结果与分析 • 实验结论 • 参考文献
01
实验目的
掌握血细胞计数板的使用方法
了解血细胞计数板的构造和原理
血细胞计数板是一种用于细胞计数的工具，由一块载玻片和一块盖玻片组成，上面刻有方格，用于放置细胞悬液。通过显微镜观察，可以对细胞进行计数。
03
实验步骤
准备实验材料
01
02
03
04
血细胞计数板：用于计数酵母菌的数量。
显微镜：用于观察和计数酵母菌。
试管、吸管、培养皿等：用于制备酵母菌悬液。
无菌水、营养琼脂培养基等：用于培养和制备酵母菌。
制备酵母菌悬液
将营养琼脂培养基倒入培养皿中，待其冷却凝固。
用接种环取少量酵母菌，轻轻划线在培养基上，放置在
学习正确使用血细胞计数板的方法
在实验过程中，需要掌握如何制备细胞悬液、如何将细胞悬液滴加到计数室、如何进行显微镜观察等操作步骤。
学习酵母菌的计数方法
了解酵母菌的形态特征
酵母菌是一种单细胞真菌，具有椭圆或球形的细胞形态，通过出芽方式进行无性繁殖。
学习酵母菌的计数方法

探究培养液中酵母菌种群数量的变化

探究培养液中酵母菌种群数量的变化1、实验原理：1．在含糖的液体培养基（培养液）中酵母菌繁殖很快，迅速形成一个封闭容器内的酵母菌种群，通过细胞计数可以测定封闭容器内的酵母菌种群随时间而发生的数量变化。

2．养分、空间、温度和有毒排泄物等是影响种群数量持续增长的限制因素。

3．酵母菌计数方法：抽样检测法。

先将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取培养液，滴于盖玻片边缘，让培养液自行渗入。

多余培养液用滤纸吸去。

稍待片刻，待细菌细胞全部沉降到计数室底部，将计数板放在载物台的中央，计数一个小方格内的酵母菌数量，再以此为根据，估算试管中的酵母菌总数。

注意：从试管中吸出培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几次。

仪器介绍：血细胞计数板血细胞计数板的构造血细胞计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面,刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室其中共有400个小格，供微生物计数用。

这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。

血细胞计数板的使用以计数酵母菌为例(1)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可.(2)将血细胞计数板用擦镜纸擦净,在中央的计数室上加盖专用的厚玻片.(3)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血细胞计数室内.(4)计数；五点取样法3.计算公式酵母细胞数/ml=每个小格酵母菌数目×400×104×稀释倍数注释：培养的时间不同取样酵母菌的稀释倍数是不同的。

2．方法步骤：提出问题→作出假设→讨论探究思路→制定计划→实施计划→按计划中确定的工作流程认真操作，做好实验记录→分析结果，得出结论→将记录的数据用曲线图表示出来。

酵母菌数量的测定—显微镜直接计数法

14
五、数据处理
各中格中的菌数（个）
二室平均
菌数
A
B
值（个/
1
2
3
4
5
（个 mL）
）第一
室第二
室
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六、思考题能否利用显微镜直接计数的方法测定
酵⺟菌菌液中的死细菌与活细菌？如果可以，如何进行？如果不可以，请说明原因。
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式1：总菌数（个/mL）=A/5×16×10000×B 式2：总菌数（个/mL）=A/5×25×10000×B
三、实验器材血球计数板、显微镜、盖玻片、滴管、酿酒酵⺟菌液
8
四、实验步骤
1、加样品
•取净洁干燥的血球计数板盖上盖玻片。 •将菌悬液适当稀释（稀释1倍），摇匀。
•用滴管吸取菌悬液，加1～2滴于盖玻片边缘，让菌液靠毛细渗透作用进入计数室。 •放置5 min左右让计数室充满菌液。
• 如遇酵⺟出芽，芽体大小达到⺟细胞一般时，即作为两个菌体计算。
• 计算一个样品要从两个计数室中计得的平均数值来计算样品的含菌量。
• 菌体在血球计数板处于不同空间，要在不同焦距下才能看全，所以，观察时必须不断调节细螺用自来水冲洗，切勿用硬物洗刷； •镜检观察是否清洗干净； •洗后干燥（晾干、吹干，或乙醇、丙酮等有机溶剂脱水干燥）。
4
5
血球计数板规格
计数室高度：0.1mm 大方格边⻓：1mm。每个大方格分成400个小方格。
规格一：每个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小方格。规格二：每个大方格分成25个中方格，每个中方格又分成16个小方格。
设五个中方格的总菌数为A，菌液的稀释倍数为B，规格一、规格二计数板，分别采用式 1、式2计算。

霉菌(酵母菌)总数测定方法

霉菌（酵母菌）总数测定方法
设备和材料：高压灭器、恒温水浴45℃、吸管1mL和10mL、试管20mL、三角瓶500mL和250mL、培养箱30~35℃、菌落计数器、放大镜
培养箱：25~28℃，培养基选用玫瑰红钠琼脂培养基。

1.供试液与稀释按细菌总数测定项下规定得方法进行
取供试液1：100和1：1000的稀释液个1mL分别注入平皿内，每个稀释液各用2~3个平皿，加入稀释液后，将熔化并冷却至45~50℃的虎红琼脂培养基倾入平皿内，充分摇匀，凝固后，翻转平板至25~28℃培养72小时，24、48、72小时计数，以72小时为准，计算平板内生长的霉菌落数。

若有根霉或毛霉蔓延已生长，为避免影响其它霉菌的同时，应及时将此平板取出计数。

2.酵母养菌霉菌菌数报告
酵母菌、霉菌计数，应选取带有菌丝体的菌落和酵母菌菌落进行点数，先点清每个平板上生长的菌落数，再求出每一稀释度的平均菌落数。

判定结果时，应选取平板上的菌落数即清楚可数，平均又在30~100个范围以内的菌落数，乘以稀释倍数后，做为供试品的霉菌总数报告之。

若有两个稀释度的菌落数皆在30~100个以内或三个稀释度皆不在此范围之内，应参照细菌总数测定的规则报告之。

若不合格同细菌总数测定。

依据：中国药典2005年版二部附录ⅪJ。

实验：应用血细胞计数板对酵母菌进行计数

④抱团的算一个
为探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化，某同学
进行了如下操作。其中操作不正确的是： C
A.吸出培养液进行计数之前将试管轻轻震荡几次 B.用滤纸吸去血球计数板边缘多余的培养液 C.在血细胞计数板中央滴一滴培养液，盖上盖玻片 D.待酵母菌沉降到计数室底部，将计数板放在载物台中央，在显微镜下观察
④需要做重复实验吗? 需要，可采取全班汇总的办法。
⑤怎样记录结果?记录表怎样设计? 时间、每个中格数量、中格平均班值、班级平均。。。
⑥如果一个小方格内酵母菌过多,难以数清,应采取怎样的措施? 稀释培养液后再计数 ⑦对于压在小方格界线上的酵母菌,应当怎样计数?
应计上不计下，计左不计右的酵母菌
6、实验操作
次数
12345678
时间(天) 0 1 2 3 4 5 6 7
酵母菌 A 0.8 5.2 5.6 4.8 2 0.8 0.4 0.08
数
B 0.8 1.2 2 2.8 3.2 3.6 3.2 3
（106/m
l） C 0.8 0.4 0.1 0
0
0
0
0
1.请写出此小组研究的课题名称 _________________________。此实验组设计的变量是:___________________________。
随着营养消耗、pH变化？、代谢产物的积累，使条件恶化，使
酵母菌的死亡率增加。
两个计数室
中
格
个数每数个即中样格方酵数母
菌
数
第0天第一天第二天第三天第四天第五天第六天第七天
1212121212121212 1 2 3 4 5
5个中格中酵母总数
平均值

酵母计数实验报告

一、实验目的1. 掌握酵母菌计数的基本方法。

2. 了解血球计数板的使用原理和操作步骤。

3. 通过实验，观察酵母菌在不同条件下的生长情况，分析酵母菌的种群数量变化。

二、实验原理酵母菌是单细胞真核微生物，其生长繁殖过程中会形成菌落。

通过计数一定体积培养液中的酵母菌数量，可以了解酵母菌的种群密度。

血球计数板是一种常用的微生物计数工具，其原理是将计数区域划分为多个小方格，通过显微镜观察，计数每个小方格内的酵母菌数量，从而推算出整个计数区域的酵母菌数量。

三、实验材料与试剂1. 实验材料：酵母菌菌种、琼脂培养基、无菌水、血球计数板、显微镜、载玻片、盖玻片等。

2. 实验试剂：无菌生理盐水、染色液（如龙胆紫）等。

四、实验步骤1. 菌种活化：将酵母菌菌种接种于琼脂培养基上，在适宜温度下培养24小时，得到活化菌种。

2. 制备酵母菌悬液：将活化菌种接种于无菌水中，振荡均匀，制成酵母菌悬液。

3. 酵母菌计数：将酵母菌悬液稀释至适当浓度，用血球计数板进行计数。

操作步骤如下：a. 将盖玻片放置于计数室上，用无菌滴管将酵母菌悬液滴于盖玻片边缘，让悬液自行渗入计数室。

b. 待悬液渗入计数室后，将盖玻片轻轻放置，避免产生气泡。

c. 将计数板置于显微镜载物台上，调整显微镜至适当倍数，观察计数室。

d. 计数每个小方格内的酵母菌数量，重复计数3次，求平均值。

4. 数据分析：根据计数结果，计算酵母菌的种群密度。

五、实验结果与分析1. 实验结果：在实验过程中，观察到酵母菌在适宜条件下生长良好，菌落呈白色，数量逐渐增多。

2. 数据分析：根据计数结果，计算出酵母菌的种群密度，并绘制酵母菌生长曲线。

六、实验结论1. 通过本次实验，掌握了酵母菌计数的基本方法，了解了血球计数板的使用原理和操作步骤。

2. 实验结果表明，酵母菌在适宜条件下能够迅速繁殖，其种群数量随时间推移呈现增长趋势。

3. 本实验为后续研究酵母菌生长特性、发酵工艺等提供了基础数据。

七、实验讨论1. 实验过程中，应注意无菌操作，避免污染。

酵母菌计数

酵母菌计数引言酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于大自然中的土壤、水体、植物和动物体内。

酵母菌对食品工业和生物工程领域具有重要的应用价值，例如酿造啤酒、面包发酵、乳酸发酵等。

因此，准确、快速地进行酵母菌计数对于相关领域的研究和生产至关重要。

本文将介绍酵母菌计数的方法和步骤，并探讨不同的技术和工具。

同时，还将提供一些相关的实验注意事项和数据分析方法。

酵母菌计数方法传统计数方法传统的酵母菌计数方法主要基于显微镜观察和计数。

以下是一般的步骤：1.样品制备：将待检样品（例如发酵液、土壤样品等）取适量放在离心管中，配制所需培养基，如YSB（酵母菌选择性培养基）。

2.离心沉淀：将样品放入离心机中，以一定的速度和时间离心沉淀。

3.洗涤：将离心沉淀后的样品用合适的缓冲液悬浮均匀，并重复以上步骤（离心和洗涤）一至两次，以去除杂质。

4.制作显微镜载玻片：使用均匀涂布技术或直接挤压法制作酵母菌悬液薄层载玻片。

5.显微镜观察和计数：使用显微镜观察载玻片上的酵母菌，并使用计数室或图像分析软件进行计数。

现代计数方法除了传统计数方法，现代的酵母菌计数方法还包括基于计算机视觉的自动计数方法、流式细胞术和PCR等技术。

1.自动计数方法：利用计算机视觉和图像分析算法进行酵母菌计数。

通过预处理图像、分割图像中的酵母菌细胞，并进行形态特征分析来实现自动计数。

2.流式细胞术：将待测酵母菌样品通过流式细胞术仪器，通过测量细胞的流式光散射和荧光信号，实现对酵母菌的计数和分类。

3.PCR方法：利用酵母菌的特定基因片段进行PCR扩增，再利用定量PCR技术进行定量检测和计数。

实验注意事项在进行酵母菌计数实验时，有一些注意事项需要注意，以确保实验结果的准确性。

1.样品制备：样品的选取和制备过程对实验结果影响较大，应严格按照标准操作流程进行。

2.培养基选择：不同的酵母菌种类对培养基的要求不同，因此应选择适合目标菌株生长的培养基。

3.显微镜操作：在显微镜操作过程中，应注意调节镜头，以获得清晰的酵母菌图像。

对酵母菌计数的方法

对酵母菌计数的方法
酵母菌计数是评估发酵工艺质量和分析微生物种类成分等研究中常用
的方法之一。

了解酵母菌计数的方法十分重要，本文就相关步骤进行
详细讲述。

首先，在使用平板计数法前，需要将试样稀释至102~104个酵母菌/mL。

具体而言，需要准备一定量的稀释液，例如0.5%氯仿溶液，将试样混
合到稀释液中，放在振荡器振荡20-30秒后取样，然后用10μL分液
管进行滴定，最后稀释至102~104 CFU/mL。

其次，通过将稀释后的试样移液至相应的培养基中，进行酵母菌扩增。

这一步需要准备平板模板，并将酵母菌稀释液在培养基上取7个点，
一般每个点取0.1mL；然后将已取好的点放在37℃高温水浴培养24-48小时，期间可以利用摇篮器不断振荡，以促进菌株萌发繁殖，直至形
成较致密的酵母菌菌落，即可判断培养基上的菌落数量。

然后，可以开始计数。

计数时首先应数出培养基平板上的菌落总数，
即菌落总密度；然后计算出每块上的酵母菌密度；最后，根据稀释因
子计算出最终的酵母菌数量。

最后，酵母菌计数后，可以把结果用菌落总数或者CFU/mL来表示，也
可以根据期望值是否满足给出合格或者不合格判定。

综上所述，对酵母菌计数时，首先要准备稀释液和培养基，对试样稀释，进行酵母菌扩增；然后，对培养基上的菌落数量进行统计，计算
出酵母菌的数量；最后，以菌落总数或者CFU/mL的形式给出最终的酵
母菌数量，并判定是否合格。

酵母菌的计数

实物图
计数室滴液处
正面图
侧面图
♣ 酵母菌的计数（1）计数工具——血球计数板
•每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。 •每个计数池分为9个大方格，其中中央的即为计数室，每个计数室的体积为0.1mm3 。
放大后的计数池
16个小格
25个中格
*
25X16 = 400小格
抽样检测： 5×16=80个小格抽样检测： 4×25=100个小格
无菌水/mL 酵母菌母液/mL 温度（℃）
— — 10 0.1 0.1 0.1 28 5 28
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
♣ 酵母菌的计数（6）讨论：计数前还应有哪些步骤？需注意些什么？
酵母菌培养： ♠培养液配制 ♠灭菌 ♠接种
配制质量分数为5％的葡萄糖溶液（葡萄糖20g，1000 mL水），分装到5个烧杯中（200mL/烧杯）用高压蒸汽灭菌锅将培养液和取样、计数时所用的滴管分别灭菌。贴标签。接种时要在酒精灯附近，用灭菌干净的 1mL刻度吸管每次吸取0.1mL酵母菌母液，往每个烧杯中加入。（注意：滴加量不要太多，避免初始菌数过多。）将烧杯置于28℃的恒温箱中培养
♣ 酵母菌的计数（4）血球计数板的清洗：
• 使用完毕后，将血球计数板在水龙头上用水柱冲洗，切勿用硬刷洗刷，洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检，观察每个小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
♣ 酵母菌的计数（5）注意事项：
探究培养液中酵母菌种群数量的动态变化
提出问题酵母菌种群的数量是怎样随时间变化的？
作出假设
设计实验
变量如何控制？

酵母菌计数实验报告

酵母菌计数实验报告酵母菌计数实验报告引言：酵母菌是一类单细胞真菌，广泛存在于自然界中的土壤、水体和植物表面等环境中。

它们在食品工业、酿酒业、面包糕点制作等领域具有重要的应用价值。

本实验旨在通过酵母菌计数实验，了解酵母菌的生长特性和繁殖能力，为相关领域的研究和应用提供实验数据支持。

材料与方法：1. 实验所需材料：琼脂培养基、酵母菌培养液、平板培养皿、移液管、恒温培养箱、显微镜等。

2. 实验步骤：a. 准备琼脂培养基：按照指定比例将琼脂粉溶解在适量的蒸馏水中，加热煮沸，冷却后倒入平板培养皿中。

b. 酵母菌培养液的制备：将酵母菌培养液加入适量的蒸馏水中，充分搅拌均匀。

c. 菌液接种：用移液管取一定体积的酵母菌培养液，均匀地滴在琼脂培养基表面，使其均匀分布。

d. 培养条件：将接种好的平板培养皿放入恒温培养箱中，保持适宜的温度（一般为30℃）和湿度，培养一定时间（如24小时）。

e. 计数：将培养好的平板培养皿取出，用显微镜观察和计数酵母菌的数量。

结果与讨论：通过实验观察和计数，我们得到了酵母菌的数量数据。

根据实验结果，我们可以得出以下结论：1. 酵母菌的生长特性：酵母菌在适宜的环境条件下能够迅速繁殖，并形成可见的菌落。

在实验中，我们观察到酵母菌在琼脂培养基上形成了白色的菌落，并且数量逐渐增多。

2. 酵母菌的繁殖能力：通过计数酵母菌的数量，我们可以了解到酵母菌的繁殖速度。

在实验中，我们发现酵母菌数量呈指数增长的趋势，这表明酵母菌具有较高的繁殖能力。

3. 影响酵母菌生长的因素：酵母菌的生长受到许多因素的影响，包括温度、湿度、营养物质等。

在实验中，我们控制了温度和湿度等条件，使得酵母菌能够在良好的环境中生长。

4. 实验误差的影响：在实验过程中，可能存在一定的误差，例如在计数酵母菌数量时，由于酵母菌数量较多，可能会出现计数不准确的情况。

此外，实验中的培养条件也可能对结果产生一定的影响。

结论：通过酵母菌计数实验，我们了解到了酵母菌的生长特性和繁殖能力。

酵母菌数的测定(直接计数)

实验直接计数法及酵母菌数的测定一、目的要求1、了解血球计数板测定微生物数量的原理。

2、了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。

二、实验原理微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。

前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。

后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。

三、实验器材菌种：酵母菌液仪器：显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等四、操作方法酵母细胞数的测定操作方法1、血球计数板的构造血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。

玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。

中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。

方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。

计数室通常有两种规格。

一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。

（本实验用）2、酵母菌数量的测定(1) 取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。

(2) 将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。

也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。

(3) 静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。

(4) 计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，取左上、左下、右上、右下的4个中格(即100小格)的酵母菌数。

如果是25中格计数板。

除数上述四格外，还需数中央1中格的酵母菌数(即80小格)。

由于菌体在计数室中处于不同的空间位置，要在不同的焦距下才能看到，因而观察时必须不断调节微调螺旋，方能数到全部菌体，防止遗漏。