药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析
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914-第十三章生化药物和基因工程药物分析概念
914-第十三章生化药物和基因工程药物分析概念本章学习要点 1、了解生化药物、基因工程药物的定义、种类。
2、熟悉质量检验的基本程序与方法。
3、掌握生化药物、基因工程药物的特点及常用的化学定量分析方法。
二、杂质检查（一）一般杂质检查检查项目包括氯化物、硫酸盐、磷酸盐、铵盐、铁盐、重金属、酸度、溶液的澄清度或溶液的颜色、水分及干燥失重、炽灼残渣等。
（二）特殊杂质检查许多药物是从生物组织中提取或用微生物发酵法制得，药物中易残存一些杂质或其他成分。
1、原料药的纯度分析 2、生产过程中杂质检查三、安全性检查（一）热原检查法（家兔、鲎试剂）（二）异常毒性试验：用一定剂量的药物按指定的操作方法和给药途径给予规定体重的某种试验动物，观察其急性毒性反应。
反应的判断以试验动物死亡与否为终点。
（三）过敏试验（检查异性蛋白）药物中若夹杂有异性蛋白，在临床使用时易引起病人多种过敏反应，轻者皮肤出现红斑或丘疹，严重者可出现窒息、发结、血管神经性水肿、血压下降，甚至休克和死亡。
（四）降压物质检查法降压物质是指某些药物中含有的能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他导致血压降低的物质。
来源：用动物脏器或组织为原料制备生化药物，正常组织内存在的组胺及部分氨基酸脱羧形成的组胺、酪胺等胶类物质。
（五）无菌检查法（检查活菌）由于许多药物是在无菌条件下制备的，且不能高温灭菌。
因此，无菌检查就更有必要。
中国药典中几乎所有的注射用药如注射用尿激酶等，均做无菌检查。
1、无菌检查的基本步骤：①培养基的制备，为细菌生长、繁殖提供所必需的营养物质—碳源、氮源、维生素、矿物质等。
②选择对照用菌液，供对照试验用。
③具体检查，如接种、培养等操作。
④结果判断，得出阴性或阳性的结论。
2、注意事项：①无菌检查的全部过程应严格遵守无菌操作法，包括对操作环境、试验材料及用具酶灭菌等，防止微生物污染。
②应避免在有抑菌条件下操作。
③从事无菌操作人员应具备微生物学的基础知识及一定工作经验，否则要经过无菌技能的培训，方能从事此工作。
《药物分析》生化药物分析
发现并确定有 治疗作用的Pr
基因工程药物
分离或合成控制 该Pr合成的基因
分离纯化
将该基因导 入受体细胞 受体细胞 表达该Pr
重组胰岛素原的合成
胰岛素原
胰岛素原(A)n 胰脏 胰岛素原mRNA cDNA 重组质粒 转化细菌
基因工程药物主要类别
蛋白质多肽类： 激素类及神经递质类 （Human Somatotin）
O
O H2C O O HO OH O
HO
O
CH3
HO O O
OH CH2
O HO
CH2 OH
O O
O
O CH2 HCOH CH2 OH O HO H2C O
CH2 HO OH
O
HO
OH O CH2 OH HCOH CH2 O O OH CH2 O
CH2 HO OH
O O
HO
O CH2 HCOH CH2 O OH CH2 O
应用普通的或以基因工程、细胞工程、 蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得 的微生物、细胞及各种动物和人源的组 织和液体等生物材料制备的药品 分类： 自动免疫制品
菌苗、疫苗、类毒素 免疫血清 诊断制品 其他（包括血液制品、组织制品等）
4. 基因工程药物 biotechnology drugs 利用重组DNA等生物技术生产的药物
O
O
标准蛋白色谱图
6
1
2
4 5 3
12 时间(min) 1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸 酐酶 5.抑蛋白酶肽 6.酪氨酸 0 4 8
重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体 （rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究
《药物分析杂志》2005，25（3）253-257
药物分析13第十三章 生化药物分析 PPT课件
21
安全性检查： 残余外源性DNA含量 残余IgG含量 残余工程菌蛋白含量 抗生素活性 无菌试验 热原质试验 异常毒性
含量：
效价测定：细胞病变 抑制法
蛋白含量 比活性
药物分析中国药科大学药物分
Monday, November 25, 2019
22
核酸类
药物分析中国药科大学药物分
Monday, November 25, 2019
4
生物制品biological products
应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工 程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各 种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 菌苗、疫苗、类毒素
免疫血清
Monday, November 25, 2019
Monday, November 25, 2019
分类没有严 格的界限
药物分析中国药科大学药物分
3
生化药物biochemical drugs
动植物及微生物提取、分离的天然生物活 性物质及半合成得到生命基本物质及其衍 生物等
氨基酸、Pr类 酶、辅酶类
多糖类
人纤维蛋白原 凝血酶、胰蛋白酶
肝素、玻璃酸
脂类
色谱法（HPLC法）
例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法
药物分析中国药科大学药物分
Monday, November 25, 2019
17
2）生化分析法
酶法：
酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析
酶分析法
以酶为分析工具或分析试剂
的分析方法
免疫分析法
药物分析中国药科大学药物分
第13章 生物药物分析概论
本章主要内容
药物分析 课件 生化药物和基因工程药物分析概论
基因工程药物分析方法
1 基因测序技术
基因测序技术用于确定基因工程药物的DNA序列，如Sanger测序和高通量测序。
2 基因表达分析技术
基因表达分析技术用于研究基因工程药物的表达水平和活性，如实时定量PCR和蛋白质组 学。
3 脱氧核糖核酸（DNA）芯片技术
DNA芯片技术用于高通量检测基因工程药物的表达谱和基因变异，如基因芯片和基因组测 序芯片。
基因工程药物分析概论
什么是基因工程药物？
基因工程药物是通过基因重组 技术制备的药物，如重组蛋白 和基因治疗药物。
基因工程药物的种类和 应用范围
基因工程药物分析的意 义和方法
基因工程药物包括生物类似药 物和基因疗法，用于治疗癌症、 遗传性疾病等。
基因工程药物分析可以确定药 物的纯度、稳定性和活性，并 确保其质量和疗效。
分子印迹技术在药物分析中的 应用
分子印迹技术是一种针对特定分子的选择性识别和分离方法，广泛应用于药 物分析中的药物检测和分离纯化。
药物代谢动力学分析方法
药物在体内的代谢途径
药物在体内的代谢途径包括氧化、还原、水解等，通过代谢将药物转化为代谢产物。
药物代谢动力学分析方法的种类和应用
药物代谢动力学分析方法包括药物消除速率常数和半衰期的测定，用于评估药物的代谢和排 泄。
生化药物分析可以确定药物的纯度、结构和功能，并保证药物的质量和疗效。
生化药物分适用于药物的分离和检测，如
凝胶电泳和毛细管电泳。
3
色谱法
色谱法是一种用于分离和测定药物成 分的常用分析方法，如气相色谱和液 相色谱。
光谱法
光谱法包括紫外-可见光谱、红外光谱 和核磁共振光谱等，用于药物的结构 分析。
药物分析课件
药物分析 课件 生化药物和基因工程药物分析概论
菌苗； 体内药物及其代谢产物的分析。 从动物、植物及微生物提取的，亦可用生物-化学 半合成或用现代生物技术制得的生命基本物质， 如氨基酸、蛋白质、多肽、酶、辅酶、多糖、核 苷酸和脂等，以及其衍生物、降解物及大分子的 结构修饰物等。
生化药物 的定义
(六)药用多糖 和脂类 (1) 多糖 (2) 脂类 (五)核酸及其降 解物和衍生物类 RNA、DNA、 聚肌苷酸、肌苷
定量分析法
3. 生物鉴定法
利用药物对生物体的作用以 测定其效价或生物活性的一 种方法 (1)生物效价测定 微量生理活性物质的测定
2.电泳法
(1) 纸电泳法 (2)醋酸纤维素薄膜电泳法 (3)聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (4)阳离子表面活性剂十二烷基 硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE) (5)琼脂糖凝胶电泳法
(5) 热原检查(家兔法)
安全性 试验
(4)无菌检查
(1)异常毒性试验
(2)过敏试验
(3)降压物质 检查
4. 理化法
(1)重量法(提取、挥发、沉淀法) (2)滴定法 (3)比色法 (4)UV法 1.酶法 (5)HPLC法
(1)酶活力测定法
酶催化一定化 学反应的能力
(2)酶分析法
以酶为分析工具， 分析对象可以是酶 的底物、辅酶活化 剂甚至酶的抑制剂
1 激素类及神经递质类药物
(1)人生长激素释放抑制因子 (2) 人胰岛素 (3) 人生长激素
2 细胞因子类药物
基因工程
(1) 人干扰素 (2) 人白细胞介素 (3) 集落刺激因子 (4) 促红细胞生成素
药物种类
3 酶类及凝血因子类药物
单克隆抗体、疫苗、基因治疗药物、白介 素、生长因子、内啡肽、重组可溶性受体、 人生长激素、凝血因子、促红细胞生成素、 肿瘤坏死因子等。
生化药物 的定义
(六)药用多糖 和脂类 (1) 多糖 (2) 脂类 (五)核酸及其降 解物和衍生物类 RNA、DNA、 聚肌苷酸、肌苷
定量分析法
3. 生物鉴定法
利用药物对生物体的作用以 测定其效价或生物活性的一 种方法 (1)生物效价测定 微量生理活性物质的测定
2.电泳法
(1) 纸电泳法 (2)醋酸纤维素薄膜电泳法 (3)聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (4)阳离子表面活性剂十二烷基 硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (SDS-PAGE) (5)琼脂糖凝胶电泳法
(5) 热原检查(家兔法)
安全性 试验
(4)无菌检查
(1)异常毒性试验
(2)过敏试验
(3)降压物质 检查
4. 理化法
(1)重量法(提取、挥发、沉淀法) (2)滴定法 (3)比色法 (4)UV法 1.酶法 (5)HPLC法
(1)酶活力测定法
酶催化一定化 学反应的能力
(2)酶分析法
以酶为分析工具， 分析对象可以是酶 的底物、辅酶活化 剂甚至酶的抑制剂
1 激素类及神经递质类药物
(1)人生长激素释放抑制因子 (2) 人胰岛素 (3) 人生长激素
2 细胞因子类药物
基因工程
(1) 人干扰素 (2) 人白细胞介素 (3) 集落刺激因子 (4) 促红细胞生成素
药物种类
3 酶类及凝血因子类药物
单克隆抗体、疫苗、基因治疗药物、白介 素、生长因子、内啡肽、重组可溶性受体、 人生长激素、凝血因子、促红细胞生成素、 肿瘤坏死因子等。
第十三章生化与基因工程药物分析
源自（二）生物检定法的应用范围
• 1.药物的效价测定 对一些采用理化方法不能测 定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物 可用生物检定法来控制药物质量。中国药典收载 了洋地黄、胰岛素、肝素、绒促性素、缩宫素、 硫酸鱼精蛋白等的生物测定法及各种抗生素的微 生物测定法。
• 有些天然药物、生物制品（包括生化药物）因结 构复杂，而且往往因结构类似、比例不定的多种 成份组成，很难用理化方法反映其生物活性；另 一些药物，尤其是一些激素类药物，其结构相近， 而生物活性不同；还有些药物虽可用
• PAGE与其他电泳法比较具有如下优点：①电泳 区带狭窄不易扩散，供试品用量极微，分离时间 短，设备简单，分辨率高，重复性佳，已广泛用 于酶、蛋白、聚核苷酸、多肽的分析鉴定和少量 制备。②凝胶是以丙烯酰胺和交联剂N，N—甲叉 双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成的纵链交错的有 “分子筛效应的三维网状结构”。其机械性能优 良，对热稳定，无色透明，无杂质，不溶于缓冲 液，在280nm波长处无紫外吸收。电泳时无电渗 和吸附作用，适于供试品的定量和精制。
• （4）透明 将洗净并完全干后的膜条浸于 透明液中10～15分钟，取出平铺于洁净的 玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光 度计上测定和作标本长期保存。
• （5）含量测定 未经透明处理的醋酸纤维 素薄膜电泳图可按各药品项下规定的方法 测定，一般采用洗脱法或扫描法，测定各 蛋白质组分的相对含量（％）
•
加强自身建设，增强个人的休养。2020年12月27日 下午6时 47分20.12.2720.12.27
•
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。2020年12月27日 星期日 下午6时 47分44秒18:47:4420.12.27
•
让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。2020年12月下 午6时47分20.12.2718:47December 27, 2020
• 1.药物的效价测定 对一些采用理化方法不能测 定含量或理化测定不能反映临床生物活性的药物 可用生物检定法来控制药物质量。中国药典收载 了洋地黄、胰岛素、肝素、绒促性素、缩宫素、 硫酸鱼精蛋白等的生物测定法及各种抗生素的微 生物测定法。
• 有些天然药物、生物制品（包括生化药物）因结 构复杂，而且往往因结构类似、比例不定的多种 成份组成，很难用理化方法反映其生物活性；另 一些药物，尤其是一些激素类药物，其结构相近， 而生物活性不同；还有些药物虽可用
• PAGE与其他电泳法比较具有如下优点：①电泳 区带狭窄不易扩散，供试品用量极微，分离时间 短，设备简单，分辨率高，重复性佳，已广泛用 于酶、蛋白、聚核苷酸、多肽的分析鉴定和少量 制备。②凝胶是以丙烯酰胺和交联剂N，N—甲叉 双丙烯聚酰胺（Bis）聚合而成的纵链交错的有 “分子筛效应的三维网状结构”。其机械性能优 良，对热稳定，无色透明，无杂质，不溶于缓冲 液，在280nm波长处无紫外吸收。电泳时无电渗 和吸附作用，适于供试品的定量和精制。
• （4）透明 将洗净并完全干后的膜条浸于 透明液中10～15分钟，取出平铺于洁净的 玻板上，干后即成透明薄膜，可于分光光 度计上测定和作标本长期保存。
• （5）含量测定 未经透明处理的醋酸纤维 素薄膜电泳图可按各药品项下规定的方法 测定，一般采用洗脱法或扫描法，测定各 蛋白质组分的相对含量（％）
•
加强自身建设，增强个人的休养。2020年12月27日 下午6时 47分20.12.2720.12.27
•
精益求精，追求卓越，因为相信而伟 大。2020年12月27日 星期日 下午6时 47分44秒18:47:4420.12.27
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让自己更加强大，更加专业，这才能 让自己 更好。2020年12月下 午6时47分20.12.2718:47December 27, 2020
药物分析课件生化药物和基因工程药物分析概论
生产环境
生化药物和基因工程药物的生产环 境需要符合相关法规和标准的要求 ，以确保药物的安全性和有效性。
生化药物和基因工程药物的品质评价与质量控制
品质评价
生化药物和基因工程药物的品质 评价包括对其成分、纯度、稳定
性、安全性等方面的评估。
质量控制体系
建立完善的质量控制体系是确保 生化药物和基因工程药物品质的 重要措施，包括制定严格的质量 标准、建立完善的检测方法和操
VS
详细描述
质谱检测技术通过将待测物质离子化，然 后根据离子的质量-电荷比进行分离和检 测，可以准确地测定分子量、分子式、官 能团等结构信息。在生化药物和基因工程 药物的检测中，质谱技术可以用于蛋白质 、多肽、核酸等大分子的分析，具有较高 的灵敏度和分辨率。
生化药物和基因工程药物的荧光检测技术
总结词
01
生化药物和基因工程药物 的概述
生化药物和基因工程药物的定义与分类
定义
生化药物是从生物体分离、纯化或化学合成得到的具有生物 活性的蛋白质、酶、激素等生物大分子物质。基因工程药物 则是利用基因工程技术生产的重组蛋白质药物或核酸类药物 。
分类
生化药物根据其来源和性质可分为动物来源生化药、植物来 源生化药、微生物来源生化药等；基因工程药物可分为重组 蛋白质药物和核酸类药物，如干扰素、胰岛素、生长激素等 。
生化药物和基因工程药物的理化分析方法
总结词
理化分析方法主要基于药物的化学和物理性质进行检测，具有通用性强的特点 。
详细描述
理化分析方法主要包括光谱法、质谱法、电化学法和色谱法等。这些方法通过 测定药物的分子结构、官能团、分子量等信息，对药物进行定性和定量分析。
生化药物和基因工程药物的色谱分析方法
生化药物和基因工程药物的生产环 境需要符合相关法规和标准的要求 ，以确保药物的安全性和有效性。
生化药物和基因工程药物的品质评价与质量控制
品质评价
生化药物和基因工程药物的品质 评价包括对其成分、纯度、稳定
性、安全性等方面的评估。
质量控制体系
建立完善的质量控制体系是确保 生化药物和基因工程药物品质的 重要措施，包括制定严格的质量 标准、建立完善的检测方法和操
VS
详细描述
质谱检测技术通过将待测物质离子化，然 后根据离子的质量-电荷比进行分离和检 测，可以准确地测定分子量、分子式、官 能团等结构信息。在生化药物和基因工程 药物的检测中，质谱技术可以用于蛋白质 、多肽、核酸等大分子的分析，具有较高 的灵敏度和分辨率。
生化药物和基因工程药物的荧光检测技术
总结词
01
生化药物和基因工程药物 的概述
生化药物和基因工程药物的定义与分类
定义
生化药物是从生物体分离、纯化或化学合成得到的具有生物 活性的蛋白质、酶、激素等生物大分子物质。基因工程药物 则是利用基因工程技术生产的重组蛋白质药物或核酸类药物 。
分类
生化药物根据其来源和性质可分为动物来源生化药、植物来 源生化药、微生物来源生化药等；基因工程药物可分为重组 蛋白质药物和核酸类药物，如干扰素、胰岛素、生长激素等 。
生化药物和基因工程药物的理化分析方法
总结词
理化分析方法主要基于药物的化学和物理性质进行检测，具有通用性强的特点 。
详细描述
理化分析方法主要包括光谱法、质谱法、电化学法和色谱法等。这些方法通过 测定药物的分子结构、官能团、分子量等信息，对药物进行定性和定量分析。
生化药物和基因工程药物的色谱分析方法
药物分析课件第13章B-生化药物和基因工程药物分析概念
4%,0 .6% 和 0. 8%, 峰 面 积 的 Ｒ Ｓ Ｄ 分 别 为
0 .7%,0 .8%和0 .8%。ｒｈＩＬ 11对照品
37℃酶切20ｈ后于4℃温控自动进样器连续进
样5次,结果见图1。5个色谱图完全重叠在一起,
所产生21个峰的保留时间、峰高和峰面积的Ｒ
ＳＤ均分别小于1 .0%,5 .4%和9. 8%,表明本系
2．酶活力测定法
1）基本原理： 酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶
活力测定实质上是测定一个被酶所催化的化学 反应速度。酶反应速度越快所表示的酶活力越 高。
医学ppt
1
酶反应速度可以用单位时间反应底 物的减少或产物的增加来表示。
通常酶活力测定时，先制备酶反应进 程曲线和酶浓度曲线。通过酶反应速度 的测定，求得酶的浓度或含量。
医学ppt
12
供 试 品 溶 液 + 底 物 溶 液
计 时 摇 匀
25.0。 C— +0.5。 C
测 定 ： 每 隔30s， 读 取 A， 共5min
每30s A的改变：0.015～0.018，呈 线性关系的时间不得少于3min。
医学ppt
13
A每分钟改变0.003，相当于1个胰蛋白 酶单位。
供试液的A每分钟改变
至ｒｈＩＬ 11完全酶解。按此方法摸索最佳酶
切时间,在第14针后ｒｈＩＬ 11已被完全酶切,酶
切时间在18～22ｈ范围内肽图图谱基本一致,即
确定最佳酶切条件为医3学7pp℃t 保温20ｈ。
17
2。ＨＰＬＣ系统测试
ＨＰＬＣ系统测试标准物质进样后呈3个峰,12
次 重 复 进 样 3 个 峰 保 留 时 间 的 Ｒ Ｓ Ｄ 分 别 为 0.
药物分析《生化药物和基因工程》PPT课件
的利微用生生物物、体细或胞其及组各成种部动分
物发和展人产源品的的组技织术和体体系液即等现
生物技术药从生物物生体代物分生材离物料纯技制化术备制研，得制用的的于生药人化物类基称
本物质疾，之病以。预及防用、化治学疗合和成诊、断微的生 物合成药或品现。代生物技术制得的一
生物制品类药物。
6
一、生化药物和基因工程药物的定义
21
2、分子量不是定值 除氨基酸、核苷酸、辅酶及甾体激
素等属化学结构明确的小分子化合物外， 大部分为大分子物质，其分子量一般几 千至几十万。对大分子的药物而言，即 使组分相同，往往由于分子量不同而产 生不同的生理活性。
22
3、结构确证难 在此类药物中，由于有效结构或分
子量不确定，其结构的确证很难沿用元 素分析、IR、UV、NMR、MS等方法 加以证实，往往还要用生化法如氨基酸 序列等法加以证实。
DNA（脱氧核糖核酸）、聚肌苷酸、巯 基聚胞苷酸、cAMP、AMP、肌苷。
此外，有核酪制剂，6-巯基嘌呤、 6-硫代嘌呤、5-氟尿嘧啶、阿糖胞苷、5碘苷和无环鸟苷等。
18
二、基因工程工药物的种类 1、激素类及神经递质类药物 （1）人生长激素释放抑制因子 （2）人胰岛素 （3）人生长激素 2、细胞因子类药物 （1）人干扰素
12
（3）蛋白类药物 猪或牛的纤维蛋白原、纤维蛋白、
胃膜素（糖蛋白）、水蛭素、肝细胞生 长因子；属蛋白质类激素尚有生长素、 催乳素、促甲状腺素、促泡激素 （FSH）、促黄体激素（LH）；植物来 源的蛋白类药物有植物凝集素、天花粉 蛋白、蓖麻和相思豆毒蛋白等。
13
2、酶类药物 （1）助消化酶类：胃蛋白酶、胰蛋白酶、 胰淀粉酶、麦芽淀粉酶。 （2）蛋白水解酶类：溶菌酶、胰DNA 酶、木瓜蛋白酶、胶原蛋白酶。 （3）凝血酶及抗栓酶：凝血酶（猪、 牛血）、纤溶酶、尿激酶、蛇毒凝血酶。
第十三章生化药物和基因工程药物分析概念
8.生化药物和基因工程药物生物活性质量控 制特点。
生化药物和甚因工程药物生物活性质量 控制对比
生物测定
理化测定
传统工艺生产
DNA重组技术生产
结构不明、组分变异、 产品不纯
生物测定法检测活性
结构明确、组分单一、 产品高纯
上市前的生物活性检测
常规质控 生物测定 常规质控 理化测定
第二节质量检验的基本程序与方法 一、鉴别试验 （一）理化鉴别法
生物检定法的应用范围如下：
1.药物的效价测定 2.大分子结构的测定 3.微量生理活性物质的测定
生化药物是从动物、植物及微生 物等生物体分离纯化制得的生化基本 物质，以及用化学合成、微生物合成 或现代生物技术制得的生命基本物质 及其衍生物、降解物以及大分子的结 构修饰物等，如氨基酸、多肤、蛋白 质、酶、多糖、脂质、核昔酸类等。
生物技术是利用生物体或其组 成部分发展产品的技术体系，用现 代生物技术研制的药物称为生物技 术药物（或生物工程药物）。
基因工程药物（Genetic engineering drugs）：系指先确定 对某种疾病具有预防和治疗作用的蛋 白质，然后将控制该蛋白合成过程的 基因分离、纯化或进行人工合成，利 用重组DNA技术加以改造，最后将该 基因放入可以大量生产的受体细胞中 不断繁殖，并能进行大规模生产具有 预防和治疗这种疾病的蛋白质，通过 这种方法生产的新型药物称为基因工 程药物。
(2)高效离子交换色谱法 （HPIEC )具有以下特点：
1)根据相应的离子化程度对蛋 白质、多肽进行分离
2)盐浓度梯度洗脱法 3)柱效中等并具有较高质量的 活性回收
பைடு நூலகம்
（3）高效凝胶过滤色谱法 （HPGFC）
HPGFC可用于多肽和蛋白质 等生物药物的分离及其分子量的 测定。
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5. 电泳法：以肝素鉴别为例。
O CO-O
CH 2OS3O O
O O OH
O
OS3O -
HNS3- O
与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。
6. 生物法：
利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。
利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂 量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注 50%GS，惊厥停止。
物或经水解后变成小分子的 药物。 生物效价或酶活力单位：适用于酶类、
蛋白质类药物。
含量测定方法：
理化分析法：
化学分析法：重量测定法、滴定分析法
电化学分析法
光谱分析法：比色法、紫外分光、荧光分光光法
色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、
HPGFC、
灌注色谱法、HPCE法
酶法：酶活力测定法、酶分析法
标准蛋白分子量曲线的制备：
T0 完全排阻
醛缩酶 碳酸酐酶 血清白蛋白 抑蛋白酶肽 右旋糖苷蓝 酪氨酸
完全进入填料空隙 Tt
标准蛋白分子量曲线：Kd -- lg M.W.
样品测定：
Kd =
T -T0 Tt - T0
测 定 样 品 的T 计 算 Kd 查 出
lgM.W. 计 算 M.W.
应用示例：ChP（2000）重组人胰岛素的质量控 制
最终产品 5. 生物活性检查
6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定：
理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分
的生物活性
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第二节 质量检验的基本程序与方法
生化药物和基因药物质量控制的项目：
来源与种类
纯度
性状
干燥失重或水分
鉴别
炽灼残渣
氨酸组分分析 生物活性
肽图
热源试验
糖含量Biblioteka 含量分析一、鉴别理化鉴别法：化学鉴别法 紫外分光光度法 HPLC法
生化鉴别法：酶法 电泳法 等电聚焦法
生物鉴别法：家兔惊厥试验
（一）理化鉴别法
1.化学鉴别法：
药 物 + 试 剂
颜 色 现 象
沉 淀
例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显 色
2.紫外分光光度法
溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml
判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。
3. HPLC法：
利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留
时间和肽图谱的一致性进行鉴别。
4.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块 结块溶解：气泡上升
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维 蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、 牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃ 恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内 凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块 溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以 0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小 时内不溶。
1）鉴别： 法1：在效价测定项下，供试品主峰的保留时间
应与对照品的一致。 法2：供试品与对照品分别经过酶解后，再分别
进行梯 度洗脱，供试品的肽图谱与对照品
素类盐 特点：可回收活性蛋白。
3）HPGFC
应用：蛋白质、多肽的分离及分子量测定。 示例：重组人肿瘤坏死因子衍生物的分子量
的测定 柱：Beckman Ultraspherogel SEC 3000 流动相： 0.1mmol/LKH2PO4:0.1mmol/LNa2SO4
（1:1）0.05%叠氮化钠
2．基因工程药物的种类 1）激素类及神经递质类药物： 人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、
人生长激素 2）细胞因子类药物： 人干扰素人白细胞介素、集落刺激因
子、促红细胞生成素 3）酶类及凝血因子类药物
三、特点
1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、
药物分析课件第十三章A生化药物和基因工程药物分析
DNA重组技术（基因工程）：生产过程为
天然基因
重组
内切酶 载
的遗
合成的核 连接酶 体
传物
转
苷酸序列
质
移
目的 分离纯化 宿主
到
产物
细胞
增殖、表达
二、种类
氨基酸、多肽与蛋白质类
酶类与辅酶类
1．生化药物 多糖类
脂质类 核酸及其降解物和衍生物 类药物
（二）杂质检查
一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析
生产过程中杂质的检查
1. 原料药纯度分析：
多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析，
具有一定活性的其他有关酶的检查。
例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查 选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白
酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋 白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白 酶为2500个单位和每1mg糜蛋白酶为1000单 位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5% （g/g）。 1:1000=x:50 x=0.05（mg） L=0.05/1=5%
2. 生产过程中杂质的检查
（三）安全性试验
热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组
胺、类组胺
无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
来源于宿主细胞的残留DNA，外源性杂质 致突变试验 生殖毒性试验
（四）含量测定
生化药物和基因药物的含量表示方法： 百分含量：适用于结构明确的小分子药
电泳法
生物检定法
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第三节 常用定量分析方法及其应用
1．电化学分析法
药物膜电极
生物组织膜电极
药物电极 微生物电极
离子选择性电极法
免疫电极
免疫场效应管
酶电极
2. HPLC法
1）RP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：RP—18， 柱温：48℃ 流动相：A--0.05% TFA；B--乙腈-异丙醇（4：1） 梯度洗脱 荧光检测器：ex=280nm～340nm,em=430nm
测定：
样品---肽
样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通
N2，
110℃，20h ～24h。
样品干燥：真空
样品的衍生化：丹酰氯
水解剩余的衍生化试剂：0.4mol/L NaOH
进样测定
N(C3H )2
SO2Cl
+ R-N2H
N(C3H )2 SO2NHR
2）HPIEC
测定对象：蛋白质，多肽 柱：离子交换键合相 流动相：0.3mol/L～1.0mol/L的盐的缓冲液。 梯度洗脱：盐的浓度增大。尽量避免使用卤