玻璃器皿的清洗包扎和高压蒸汽灭菌(2)课件

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包扎试管 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。
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包扎完成
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（三）、高压蒸汽灭菌
• 加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅 最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意 水要加够，防止灭菌过程中干锅。
• 装料、加盖 ：将待灭菌物品放好后，关闭灭菌器盖，采用 对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气 。
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三、实验器材
• 器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组）， 试管18×180（10支/组），试管（15×150）（12/ 组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶 500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管
• 3、三角瓶在棉塞与瓶 口外再包以厚纸，用 棉绳以活结扎紧，以 防灭菌后瓶口被外部 杂菌所污染；
• 4、试管塞上棉花塞， 多支扎成一捆外用牛 皮纸或两层旧报纸与 细线包。
高压蒸汽灭菌锅
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（二）、干热灭菌
• 将包扎好的试管、平皿、三角锥瓶放入干燥烘箱 内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不 得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的 温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温 度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花 会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度 为120℃持续30分钟即可。温度降至60～70℃时 方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤 冷而爆裂。
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2、吸管应在管口约0.5厘米
以下的地方塞入少许长约 1.5厘米的棉花，以拉直的 曲别针一端放在棉花的中 心，轻轻捅入管口，松紧 必须适中，松紧程度以吹 气时通气顺畅而不致下滑 为准，管口外露的棉花纤 维统一通过火焰烧去。然 后，将吸管尖端放在4-5厘 米宽的长条纸的一端约与 纸条成45°角，折叠纸条， 包住吸管尖端，然后将吸 管卷入纸条内，末端剩余 纸条折叠打结，待灭菌。
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（2）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽 ？灭菌完毕后，为什么要待压力降到0时才能打开排气阀 ，开盖取物？
• 排气：打开排气口(也叫放气阀)。用电炉加热，待水煮沸 后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出 时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。
• 升压、保压和降压 ：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气 阀，压力开始上升。当压力上升至所需压力时，控制电压 以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一 般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热 ，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。注意不能过早 过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而 造成瓶内液体冲出容器之外。
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二、实验原理
（1）灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生 物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。本实 验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌 体内 蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。蛋白 质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高， 其凝固所需要的温度越低。在同一温度下，湿热的 杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下菌体吸收水 分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可 增加灭菌效力。
• 其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽 菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
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四、操作方法
（一）、玻璃器皿的清洗包扎
• 玻璃器皿在灭菌前必 须经正确包裹和加塞 ，以保证玻璃器皿于 灭菌后不被外界杂菌 所污染。
1. 将平皿用纸包扎好， 以5～8个为一包；
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（2）高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广 ，效率高，是微生物学实验中最常用的灭 菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随 着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。 当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的 温度升高到121℃，经15～30min，可全部 杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢 子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传 染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
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五、思考题 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系本人改正。
（1）吸管在灭菌前应如何处理？
答：吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许长约
1.5厘米 的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心， 轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气顺 畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧 去。然后，将吸管尖端放在4-5厘米宽的长条纸的一端约 与纸条成45°角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将吸管 卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。
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（3）干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微 生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌 的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤， 即加热至160～170℃维持1～2h。
（4）火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速 彻底。对于接种环，接种针或其它金属用 具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行 灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角 瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的 。