实验1__玻璃器皿的包扎及灭菌
11.实验一 常用玻璃仪器的洗涤、包扎及灭菌技术
拓展知识学习
1.布置课前预习，要求学生基本掌握常见玻璃仪器的洗涤、包扎及灭菌要点。
2.在课程教学平台上对学生预习情况进行检查、评价
1.统计、点评
2.根据统计确定重点解决问题：为玻璃仪器的包扎进行精准示范；如何根据实验条件合理安排实验进程。
参与学生操作指导，小组讨论实验安排，并总结点评
课堂小结微生物实验常用玻璃仪器的洗涤、包扎及灭菌要点，树立学生合理利用实验资源合理安排实验进程的实验观念
课前：学生通过上网查找资料，进行知识的自主学习。
课内：以问题为主线进行教学。教师根据课前在线学习情况统计和学生在平台上讨论的主要问题，确定本次课需解决的问题为：为玻璃仪器的包扎进行精准示范；如何根据实验条件合理安排实验进程。
课后：学生完成实验报告，借助互联网进行拓展知识学习。
教学过程
环节
内容
活动
技术
课题名称
实验一 常用玻璃仪器的洗涤、包扎及灭菌技术
课时数
2课时
授课班级
18高职水产养殖技术
授课时间
授课地点
实验室
授课形式
实验
学情分析
本次课面向的是高职水产养殖技术专业三年级学生，从往届学生学习情况统计可以看出：学生对水产微生物研究中可能使用到的玻璃仪器洗涤的必要性及方法有确切的概念，但对玻璃仪器的包扎及灭菌很陌生。
教学目标
知识目标：掌握水产微生物实验室常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术。
能力目标：能熟练包扎并合理安排实验进程。
素质目标：培养个人独立思考与团队协作解决问题的能力
教学重点
掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法
掌握高压蒸汽灭菌的操作方法
了解无菌操作的注意事项
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
实验一 玻璃器皿的清洗与包扎,棉塞的制作
实验一玻璃器皿的清洗与包扎，棉塞的制作一、玻璃仪器的清洗：洗涤玻璃器皿日常最方便的方法是用肥皂、洗涤剂等以毛刷进行清洗，然后依次用自来水、蒸馏水淋洗。
清洗干净后的玻璃器皿表面，在用蒸馏水淋洗时应布上一层薄薄的水膜；如果是挂上一个个的小水珠，则表面未清洗干净。
对于不便用毛刷清洗或清洗不干净的器皿，可配制下述清洗液进行化学清洗。
对分析某些痕量金属所使用的器皿，洗涤后还需要在一定浓度的盐酸、硝酸溶液或含络合剂的溶液中浸泡相当时间，除去表面吸附的金属离子，然后再用蒸馏水淋洗干净。
聚乙烯、聚氯乙烯、聚四氟乙烯器皿也可用同样的方式清洗，但要注意塑料制品受热易变形、易被硬物划伤及对许多有机溶剂敏感的特点。
（1）铬酸溶液：称取92g二水重铬酸钠溶于460mL水中，然后注入800mL 硫酸。
另一个配方是把1L硫酸注入35mL饱和重铬酸溶液中。
当洗液使用至变绿色后，就失去洗涤能力。
使用铬酸洗液时，被洗涤的器皿带水量应少，最好是干的，以免洗液被稀释而降低效率。
也可以用重铬酸钾代替重铬酸钠，但前者的溶解度较低。
用铬酸洗液洗涤后的容器要用清水充分冲洗，以除去可能存在的铬离子。
（2）高锰酸钾的碱性溶液：少量高锰酸钾溶于100~200g/L的氢氧化钠溶液中。
适于洗涤带油污的玻璃器皿，但余留的二氧化锰沉淀物需用盐酸或盐酸加过氧化氢洗去。
（3）氢氧化钠（钾）乙醇溶液：把约1L 95%的乙醇加到含120g氢氧化钠（钾）的120mL水溶液中，就成为一种去污力很强的洗涤剂，玻璃磨口长期暴露在这种洗液中易被损坏。
（4）硫酸及发烟硝酸混合物：适用于特别油污、肮脏的玻璃器皿。
（5）磷酸三钠溶液：将57g磷酸三钠、28g油酸钠溶于470mL水中，为除去玻璃器皿上的碳质残渣，可将器皿在此溶液里浸泡几分钟，然后用刷子除去残渣。
100~150g/L的氢氧化钠（钾）溶液也有同样作用。
（6）10g/L EDTA 的20g/L氢氧化钠溶液：用此溶液浸泡洗净的玻璃器皿，能除去容器表面吸附的一些微量金属离子。
组培实验器皿和器械的灭菌方法
1 玻璃器皿的灭菌湿热灭菌法（蒸汽灭菌），即将玻璃器皿包扎好后，置入蒸汽灭菌器中，进行高温高压灭菌。
灭菌的温度为121℃，维持20-30分钟。
一般玻璃培养容器常常与培养基一起灭菌。
干热灭菌法，即在烘箱内对器皿进行杀菌处理，是一种彻底杀死微生物的方法。
灭菌时间为150℃/40分钟或120℃/120分钟；若发现芽孢杆菌，则应为160℃/90-120分钟。
干热灭菌的缺点是热空气循环不良和穿透很慢，因此，干热灭菌时，玻璃容器在烘箱内不应堆放太满、太挤，以妨碍空气流通，造成温度不均匀，而影响灭菌效果。
灭菌后冷却速度不能太快，以防玻璃容器因温度骤变而破碎，应等到温度下降到50℃左右时，方能打开烘箱门取出玻璃容器；否则外部的冷空气就会被吸入烘箱，使里面的玻璃器皿受到微生物污染，甚至有可能发生炸裂的危险；也可将玻璃器皿直接存放在烘箱内待用。
此外，还可把玻璃器皿放入水中进行煮沸灭菌。
2 金属器械的灭菌对于无菌操作所用的各种器械，如镊子、解剖刀、解剖针和接种铲等金属器械，一般用火焰灭菌法；即把金属器械放在95%的酒精中浸一下，然后放在火焰上燃烧灭菌，待冷却后再使用。
这一步骤应当在无菌操作过程中反复进行，以免交叉污染。
金属器械也可以用干热灭菌法灭菌，即将拭净或烘干的金属器械用纸包好，盛在金属盒内，放于烘箱中在120℃的温度下灭菌2小时，或用布包好后放在高压灭菌器内灭菌。
3 布质制品的灭菌工作服。
口罩。
帽子等布质品均用湿热灭菌法，即将洗净晾干的布质品用牛皮纸包好，放入高压灭菌器中，在压力为1.1Mpa、温度为121℃的情况下，灭菌20-30分钟。
4 塑料器皿和器械有些类型的塑料器皿也可以静心高温灭菌，如聚丙烯、聚甲基戊烯、同质异晶聚合物等可121℃下可反复进行高压蒸汽灭菌。
玻璃器皿的包扎的实训报告
一、实验背景玻璃器皿是实验室中常用的实验器材，其清洁、干燥、包扎及灭菌是保证实验结果准确性的关键步骤。
包扎作为灭菌前的重要环节，对于防止玻璃器皿在灭菌过程中受到污染具有重要作用。
本实训旨在通过实际操作，使学生掌握玻璃器皿的包扎方法，提高实验技能。
二、实验目的1. 熟悉玻璃器皿的名称、规格及用途。
2. 掌握玻璃器皿的清洗、干燥、包扎及灭菌方法。
3. 培养学生严谨、细致的实验操作习惯。
三、实验原理玻璃器皿的包扎是灭菌前的重要环节，其主要目的是防止灭菌过程中玻璃器皿受到污染。
包扎材料应具有一定的透气性，以便在灭菌过程中蒸汽能够穿透，达到灭菌效果。
同时，包扎材料应具有一定的阻隔性，防止空气中的微生物进入玻璃器皿。
四、实验材料与仪器1. 实验材料：玻璃器皿（试管、培养皿、三角瓶等）、棉塞、牛皮纸、剪刀、镊子、酒精灯等。
2. 实验仪器：高压蒸汽灭菌锅、烘箱、天平等。
五、实验步骤1. 清洗玻璃器皿：将玻璃器皿用去污粉或洗涤液刷洗，然后用自来水冲洗干净，倒置晾干。
2. 制作棉塞：将棉线剪成长约10cm的棉线，用镊子将其穿过试管口，使棉线两端分别位于试管两端，用橡皮筋固定。
3. 包扎玻璃器皿：将洗净、晾干的玻璃器皿放入牛皮纸中，用剪刀将牛皮纸剪成适当大小，将玻璃器皿包裹住，用橡皮筋固定。
4. 灭菌：将包扎好的玻璃器皿放入高压蒸汽灭菌锅中，按照实验要求设置温度、压力和时间，进行灭菌。
5. 冷却：灭菌完成后，关闭电源，待压力降至0时，打开灭菌锅盖，取出玻璃器皿。
6. 验证灭菌效果：将灭菌后的玻璃器皿进行微生物检测，确保无微生物污染。
六、实验结果与分析通过本次实训，学生掌握了玻璃器皿的清洗、干燥、包扎及灭菌方法。
实验过程中，学生认真操作，确保了实验结果的准确性。
1. 清洗：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的清洗方法，确保了玻璃器皿的清洁。
2. 干燥：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的干燥方法，确保了玻璃器皿的干燥。
3. 包扎：实验过程中，学生掌握了玻璃器皿的包扎方法，确保了玻璃器皿在灭菌过程中不受污染。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、 洗涤剂、试管刷等
报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 报纸、牛皮纸、
干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗
器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。 保存各种微生物或积累代谢产物。 在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加 压灭菌锅内，通过加热， 压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产 生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱 生蒸汽。 尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢 然后关闭排气阀，继续加热， 出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到 而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高， 高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭 ℃的温度。 高于 菌的目的。 菌的目的。
四、操作步骤 （以配制乳糖蛋白胨液体培
养基为例） 养基为例）
实验教材 P246
蛋白质 10g 3g 5g 5g 1 ml 6g 1.8g 3g 3g 0.6 ml
计算
牛肉膏 乳糖
3× × 支 支
50ml 2 5ml 10 4
NaCl 1.6%溴甲酚紫 溴甲酚紫 蒸馏水
1000 ml 200 ml
1 × 5ml 支
三、实验器材
• 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、 葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素 的水溶液）、 KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素 1%的水溶液）、1mol/L NaOH、 的水溶液）、 HCl。 （1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 • 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、 璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、 璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌 pH试纸 pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（ 试纸（ ）、棉花 锅、pH试纸（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝 ）、记号笔 麻绳和纱布等。 记号笔、 箔）、记号笔、麻绳和纱布等。
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。
2、为下一次的课做好器材的准备工作。
二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容（一）玻璃器皿的清洗：l 新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
l 常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
6.玻璃器皿的包扎
加塞后，将全部试管用棉绳捆好，再在棉塞
外包一层报纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉 塞，最后用棉绳扎好。同时用记号笔注明培 养基名称、配制日期、组别。
3、试管和锥形瓶的包扎
2.试管的包扎
三、实验任务
1、每人包扎10mL和1mL移液管各1支。 2、每人包扎5个培养皿。
3、每人包扎1个装有200mL水的250mL锥形瓶。
4、每人包扎4支装有2/3水的试管。
玻璃器皿的包扎
一、玻璃器皿为何要包扎？
微生物实验讲求无菌操作。为了保证实验的准确性和可靠性
进行，实验前均要求把实验器皿清洗干净，清洗后还需要对器皿 进行灭菌处理。为保持灭菌后器皿的无菌状态，需要对培养皿、 吸量管、试管、锥形瓶等进行妥善包扎。 这些工作看来很普通，如操作不当或不按规定要求去做，会 导致实验的失败。因此应看作是微生物实验的基本操作。
1.移液管的包扎
2、移液管的包扎方法
①
③
④
② ⑤
二、玻璃器皿如何包扎？
3、试管和锥形瓶的包扎
试管和三角瓶都要作合适的棉花塞或硅胶塞。 棉花塞或硅胶塞的作用是起过滤作用，避免空气中的 微生物进入试管或三角瓶。棉花塞的制作要求使棉花塞紧 贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过松，过紧易挤破管口 和不易塞入，过松易掉落和污染。棉花塞的长度不少于管 口直径的二倍，约2/3塞进管口。 若干支试管用两层旧报纸或牛皮纸包裹，再用绳扎紧。 三角瓶每个单独用两层旧报纸或牛皮纸包裹，再用绳扎紧。
二、玻璃器皿如何包扎？
1、培养皿的包扎纸将其包紧（边包扎边把纸张 往里折叠，以免包扎后松散），然后进行灭菌。 使用时在无菌室中才打开取出培养皿。
1、培养皿的包扎
二、玻璃器皿如何包扎？
微生物实验
微生物实验实验一常用玻璃器皿的清洗及包扎一.目的与要求（一）熟悉微生物实验所需各种常用器皿的名称和规格。
（二）学会正确的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法二.原理为了包装实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净，保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎，试管和三角瓶要做棉塞。
清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗净剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。
三.材料与仪器（一）常用的各种玻璃器皿。
（二）洗涤工具和去污粉、肥皂、洗涤液。
四.操作步骤（一）清洗1.新玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿均含有游离碱，故应先将其浸于洗液或2%的盐酸溶液中数小时，再用自来水冲洗干净。
2.用过的玻璃器皿的清洗（1）试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯可用瓶刷或海绵沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后在用自来水充分冲洗干净。
经洗涤后，若内壁的水均匀分布在一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则需用洗涤液（或洗液）浸泡数小时，再用自来水充分冲洗，洗涤干净的器皿倒置与铁丝框内或有空心格子木架上，室内晾干。
（2）玻璃吸管、滴管一般用完后应立即用清水和蒸馏水浸泡（或冲洗），免得干燥后难以冲洗干净，如附有污物可用洗液浸泡。
（3）载玻片与盖玻片带有油污的应擦去有无后用热乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡10~15min，溶液油垢然后用水冲洗，再用洗涤液浸泡、冲洗，干后置于95%乙醇中保存备用。
（二）玻璃器皿的包扎1.培养皿常用旧报纸或牛皮纸包紧，一般以5~10套培养皿作一包。
包好后进行干热或湿热灭菌，如将培养皿放入金属（不锈钢）筒内进行热灭，则不必用纸包。
2.试管和三角瓶试管管口和三角瓶都需要塞以棉花塞（或泡膜塑料塞），棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。
棉花塞的制作要求使用棉花塞紧贴玻璃壁，没有皱纹和缝隙，不能过紧也不能过松，长度不少于管口直径的二倍，约2/3塞进管口。
若干支试管用绳扎在一起，在棉塞部分外包裹牛皮纸或2层旧报纸，再扎好。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
对实验结果的个人见解和展望
见解1
本实验中，玻璃器皿的清洗、包扎和培养基的制备及灭菌是微生物培养的关键步骤，任 何一个环节的失误都可能导致实验失败。因此，每个步骤都需要认真对待。
见解2
通过本实验，我深刻认识到实验操作的规范性和细节的重要性。在未来的实验中，我会 更加注重操作的规范性和细节的处理。
展望
技巧
掌握正确的清洗和包扎技 巧，确保玻璃器皿干净、 干燥、无菌。
学会制备培养基
了解培养基的成分
根据实验需要，了解培养 基所需的成分，如营养物 质、水、pH调节剂等。
配置培养基
按照规定的比例和顺序， 将各成分加入到容器中， 搅拌均匀。
灭菌
将配置好的培养基进行高 温灭菌，以杀死其中的微 生物。
了解灭菌的重要性及操作方法
包扎不严密。
• 解决方法
使用足够的纱布和胶带，确保玻璃 器皿的封口严密，防止培养基泄漏 。
对实验过程的改进建议
建议1
在清洗玻璃器皿时，可以先用清水冲洗一遍，再用清洗剂清洗，最 后用清水冲洗干净。这样可以确保器皿清洗得更彻底。
建议2
在制备培养基时，可以加入适量的抗凝剂，以防止培养基凝固。
建议3
在灭菌过程中，可以增加灭菌次数或延长灭菌时间，以确保培养基完 全灭菌。
培养基的制备
准备原料
01
根据实验需要，准备好所需的原料，如牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠等。
配置培养基
02
按照配方比例将原料加入到水中，加热搅拌至溶解，调节pH值
至备好的培养基进行高温灭菌，以杀死其中的微生物。
灭菌操作
灭菌前准备
确保灭菌锅已经清洗干净，并按照要求摆放好待 灭菌的物品。
培养皿
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌一、实验目的1、熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3、了解干热灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表1-1。
表1-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称烧杯常用规格及配套使用物品50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），移液管10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm150mL配套：火柴60mL，80mL漏斗配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm三角瓶容量瓶量筒酒精灯接上表1-1称号酸式滴定管：50mL滴定管碱式滴定管：50mL配套滴定台、胡蝶夹滴瓶无色：30mL，60mL，120mL常用规格及配套使用物品（小口瓶）棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm试管配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片盖玻片温度计坩埚研钵25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm0-100℃，0-200℃，0-300℃30mL，50mL配套坩埚钳80mm，100mm，120mm，150mm常用玻璃器皿用途：1、烧杯用于盛装、转移、配制、加热造就基及试剂。
实验一玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌
实验一、玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌一、目的要求1、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2、了解湿热和干热灭菌的原理并掌握有关的操作技术。
二、原理为确保实验顺利地进行要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净并干燥，微生物实验还要进行灭菌。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿，吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
1、玻璃器皿的清洗①不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
②用过的器皿应立即洗涤。
③强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等揩去。
④洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。
3、干燥做实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。
用于不同实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于精密分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。
应根据不同要求进行干燥仪器。
（1）、烘干洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105110℃烘1 小时左右。
也可放在红外灯干燥箱中烘干。
此法适用于一般仪器。
称量瓶等在烘干后要放在干燥器中冷却和保存。
带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要注意慢慢升温并且温度不可过高，以免破裂。
量器不可放于烘箱中烘。
硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。
实验玻璃器皿的包扎及灭菌ppt课件
上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用
1）打开电源与开关，检 查水位显示灯；
2）加灭菌物品； 3）盖紧； 4）设定温度和时间； 5）查看排气（水）阀旋
至排气处；
6）排气； 7）结束后取物。
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移液管的包装
• 作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不 慎将微生物吸出管外。
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试管和三角瓶的包装
实验结果
• 记录自己制作的实验用品（含无菌水）名 称的规格与数量。
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Central Labor，熟悉实验室平面布局图，了解实 验仪器用品摆放规律及用途。
• 试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞； • 用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更
好），进行干热或湿热灭菌。 • 试管较多时，一般7个或10个一组，再用双
层报纸包扎。
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2. 制备无菌水时，试管装水量要超过试管高 度的1/5，三角瓶装水量不要超过规格容量 的1/2（装量过多，灭菌过程中易喷出或润 湿棉塞）；
3. 灭菌锅的操作安全。
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌课件
准备工具
准备清洗工具，如刷子、 洗涤剂、水桶等。
手工清洗步骤
01
02
03
04
浸泡
将玻璃器皿放入装满洗涤剂和 水的混合液中浸泡一段时间，
以松解残留物。
刷洗
使用刷子轻轻刷洗玻璃器皿表 面，注意不要划伤器皿。
冲洗
用清水彻底冲洗玻璃器皿，确 保洗涤剂和残留物被完全冲走
。
晾干
将玻璃器皿放置在干净的地方 晾干，避免直接阳光照射。
情况应及时处理。
灭菌完成后，应先关闭灭菌器 ，再打开排气阀，避免蒸汽喷
出烫伤操作人员。
灭菌过程中的防护措施
操作人员应穿戴防护服、手套 、口罩等个人防护用品。
在灭菌过程中，应保持室内通 风良好，避免室内温度过高。
对于易燃、易爆、易腐蚀的物 品，应单独存放并采取相应的 安全措施。
意外情况的应急处理
如发生意外情况，如灭菌器故障、泄漏等，应立即停止使用，并采取相应的应急措 施。
根据物品的形状、大 小和重量选择合适的 包扎材料和方法。
03
高压蒸汽灭菌原理
微生物的耐热性
微生物的耐热性
不同微生物对热的敏感程度不同，有些微生物在高温下容 易死亡，而有些则具有较高的耐热性。了解微生物的耐热 性对于确定高压蒸汽灭菌的条件非常重要。
微生物的致死温度
在一定的时间内，高于某个温度微生物会死亡。致死温度 是杀灭90%微生物所需达到的温度。
包扎玻璃器皿
为了避免在灭菌过程中破裂和污染，需要对玻璃器皿进行适当的包 扎。
装载物品
将清洗干净的玻璃器皿放入灭菌器内 ，尽量将大小不同的器皿分开摆放， 以免小的器皿被大的器皿遮挡而影响 灭菌效果。
将装有玻璃器皿的灭菌篮或灭菌盘放 入灭菌器内，并确保其放置稳定。
食品微生物—常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎
玻璃器皿的包扎
• 微生物学实验用的玻璃器皿大多数需要灭菌后才能使用，玻 璃器皿在灭菌前要先用牛皮纸或报纸包扎起来，以保护玻璃器皿 在灭菌后一段时间内仍能保持无菌状态。否则，玻璃器皿灭菌后 暴露在空气中，空气的微生物很容易进入玻璃器皿内，造成染菌 ，影响实验效果甚至导致实验失败。
玻璃器皿的包扎
1. 培养皿：洗净的培养皿烘干后每6-8套（或根据需要而定） 叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后 进行灭菌。
2.移液管：
塞入棉花的作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不 慎将微生物吸出管外。
3.试管和锥形瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞， 棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。
棉塞制作
1、注意所有包好的器皿，只有灭菌后使用时才可 打开包装，以免被空气中的杂菌污染。 2、如使用干热灭菌，温度不可高于180℃，以防纸 张和棉花烤焦。
为什么玻璃器皿要塞棉花？
实验一 常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌
实验一常用器皿包扎与培养基的配制和灭菌一、实验目的1 学会常用器皿包扎方法2 学习和掌握配制培养基的一般方法和步骤3 学会实验室灭菌锅的使用方法二、常用器具和仪器试管（test tube），德汉氏小管（Durham tube），玻璃吸管（glass pipette），吸器，微量加样器（micropipette），吸嘴（tip），培养皿（petri dish），三角瓶（erlenmeyer flask），接种铲（inoculating shovel），玻璃涂布器（glass spreader），接种环（inoculating loop），接种钩（inoculating hook），接种针（inoculating needle），小塑料离心管（Eppendorf tube），滴瓶（dropper bottle），双层瓶（double bottle），酒精灯(alcohol burner），煤气喷头（coal gas sprinkler head），试剂瓶，量筒，烧杯，温度计，石棉网，漏斗，烘箱，卧式灭菌锅，手提式灭菌锅，无菌操作台/室，过滤除菌设备，厌氧操作设备，小型发酵罐，离心机，培养箱/摇床，冷冻干燥机，蒸馏水器，超声波清洗仪，磁力搅拌器。
三、玻璃器皿的包装1、培养皿的包装方法一：用旧报纸密密包紧，一般以5-8套培养皿作一包。
包好后用干热或湿热灭菌（见无菌操作技术）。
方法二：将培养皿放入金属（不锈钢）筒内，干热灭菌。
金属筒配有盖子，内部还有一个可以放培养皿的带底框架。
框架可以从筒内提出，以便装取培养皿。
包好的培养皿金属筒和内部的框架塑料培养皿架2、吸管的包装准备好干燥的吸管，在粗头端塞入一小段棉花，以免使用时将杂菌吹入或不慎将微生物吸出。
将吸管尖端斜放在旧报纸的近左端，与报纸成45°角，左端多余的一段覆折在尖头上，再将整根吸管卷入报纸，右端多余的报纸打个小结。
包好的吸管再用一张大报纸包好，干热灭菌。
实训一 常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌一、实验目的1、熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3、了解干热灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表1-1。
表1-1 微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格接上表1-1常用玻璃器皿用途：1、烧杯用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
2、三角瓶用于贮盛生理盐水或培养基，底大口小，以便加塞，并能平稳放置。
3、容量瓶用于准确地配制一定浓度的溶液。
4、量筒用于量取液体培养基、蒸馏水等。
5、移液管用于吸取试剂、培养液和生理盐水等。
6、培养皿主要用于细菌分离和培养，由底、盖两部分组成，底、盖大小应合适，不宜过紧或过松，皿盖高度较皿底稍低，皿底应平正。
7、漏斗分为长颈和短颈两种，常用口径为60-150mm，用于分装培养基、溶液或过滤。
8、滴定管分为酸式和碱式两种，用于准确量取或滴定酸性/碱性溶液。
9、试剂瓶分为广口和小口两种，用于贮备试剂，有棕色和无色两种，前者盛避光试剂。
10、试管用于盛平板用的培养基和稀释用的无菌水、做斜面培养基用以及用于各种生理生化鉴定试验。
不同规格试管的用途，没有严格的划分，以便于工作、节省材料为原则。
11、载玻片和盖玻片用于微生物涂片观察及标本制备。
12、坩埚用于固体物质的灼烧，溶液的蒸发、浓缩或结晶。
13、研钵用于研磨固体物质或进行粉末状固体物质的混合。
14、玻璃棒直径3-5mm，用于搅拌液体。
15、玻璃珠常用中性硬质玻璃制成，直径3-4mm和5-6mm，用于打碎组织、样品和菌落等。
其他微生物实验常用物品名称、常用规格、型号介绍见表1-2。
表1-2 其他微生物常用物品名称、常用规格、型号接上表1-2（二）微生物常用玻璃器皿清洁清洁的玻璃器皿是得到正确实验结果的重要条件之一。
清洗的目的就在于除去玻璃器皿上的污垢（灰尘、油垢、无机盐类等物质），使其不能妨碍得到正确的实验结果。
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棉塞的制作
• 棉塞的作用有二：一是防止杂菌污染，二 是保证通气良好。 • 形状，大小，Sciences, Hubei Normal University
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上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用
1）打开电源与开关，检 查水位显示灯； 2）加灭菌物品； 3）盖紧； 4）设定温度和时间； 5）查看排气（水）阀旋 至排气处； 6）排气； 7）结束后取物。
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注意事项
1. 实验前，熟悉实验室平面布局图，了解实 验仪器用品摆放规律及用途。 2. 制备无菌水时，试管装水量要超过试管高 度的1/5，三角瓶装水量不要超过规格容量 的1/2（装量过多，灭菌过程中易喷出或润 湿棉塞）； 3. 灭菌锅的操作安全。
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方法步骤
1. 熟悉微生物学实验的结构与功能。 2. 清洗试管、三角瓶，培养皿等玻璃器具， 烘干。 3. 制作试管棉塞及三角瓶棉塞（参照微生物 学实验基本操作技术）。 4. 用量筒或吸管取适量自来水于三角瓶和试 管中，包装好以制备无菌水。 5. 包装空培养皿，移液管。 6. 灭菌（参照Ⅰ）。
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培养皿的包装
• 培养皿常用旧报纸紧紧包裹，一包7～10套 ，包好后干热或湿热灭菌。 • 也可用金属筒包装。
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实验用品
• 棉花，试管，培养皿，纱布，三角瓶，橡 皮筋，量筒，牛皮纸（或旧报纸），LDZX50KBS立式高压蒸气灭菌锅等。
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实验报告
1. 高压蒸气灭菌开始之前，为什么要将锅内 冷空气排尽灭菌完毕后，为什么待压力降 低“0”时才能打开排气阀，开盖取物。 2. 在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，怎样杜绝 一切不安全的因素。 3. 灭菌在微生物实验操作中有何重要意义。
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生 物 学 实 验 教 学 中 心
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基本原理
• 高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个 密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌 锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。 • 待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀 中驱尽，关闭排气阀，继续加热，此时由 于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压 力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温 度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌 的目的。
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微生物学实验
实验一 玻璃器皿的包扎及灭菌
2009
课前预习与目的要求
【课前预习】 1. 高压蒸汽灭菌原理。 2. 上海申安LDZX-50KBS灭菌锅的使用方 法。 【目的要求】 1. 学习并掌握玻璃器皿的包扎方法。 2. 掌握高压蒸汽灭菌的基本原理及操作方 法。
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实验结果
• 记录自己制作的实验用品（含无菌水）名 称的规格与数量。
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移液管的包装
• 作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不 慎将微生物吸出管外。
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试管和三角瓶的包装
• 试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞； • 用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更 好），进行干热或湿热灭菌。 • 试管较多时，一般7个或10个一组，再用双 层报纸包扎。
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玻璃器皿清洗方法
玻璃器皿在使用过程中确保干净，用过的 器皿应及时清洗。 器皿一般可以用去污粉、肥皂或洗洁净清 洗。 琼脂培养基的器皿应先将培养基刮去。 琼脂和固体物不能丢弃到水池中，以免堵 塞管道。 清洗方法详见Ⅰ。
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基本原理
• 微生物学实验所用的器皿，大多数要进行 消毒、灭菌，才能用来培养微生物。 • 玻璃器皿的包装方法正确合理，在使用过 程中才能有效防止杂菌的污染。 • 玻璃器皿包装好后，一般用高压蒸气灭菌 法进行灭菌。