实验八玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
常用玻璃器皿的洗涤、包装及灭菌
2016
三角烧瓶
常用器具
100 ml 250 ml 500 ml 1000 ml
• 盛无菌水、培养基 • 振荡培养微生物
载玻片与盖玻片
常用器具
75 mm × 25 mm
接种工具
• 接种环 • 接种针 • 接种钩
• 接种铲
常用器具
微量吸管
常用器具
试管
• 大试管
18mm×180mm
• 中试管
技能训练2
2016
实验室常用玻璃器皿洗刷、 消毒和包装
一、 实训目的Leabharlann 认识常用玻璃器皿的名称及规格， 熟
悉各种玻璃器皿的洗刷、包装和消毒
二、 仪器材料
试管、刻度吸管、培养皿、三角 烧瓶、烧杯、量筒、量杯、漏斗、乳 钵、普通棉花、脱脂棉、纱布、牛皮 纸、旧报纸、新洁尔灭、来苏儿、石 炭酸、肥皂粉、重铬酸钾、粗硫酸、 盐酸、橡胶手套、橡胶围裙等；
（3）载玻片 : 用后立即浸泡于消毒液中，经1～2d取出， 用洗衣粉液煮沸5min，再用毛刷刷去油脂及污垢，然后用 清水冲洗，晾干或将洗净的玻片用蒸馏水煮沸，趁热把玻 片摊放在干毛巾或干纱布上，稍等片刻，玻片即干，保存 备用或浸泡于95％酒精中备用。
（4）细菌培养用过的试管、平皿等
须高压蒸气灭菌后，倒去内容物，用热肥皂水刷去污 物，然后用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干 或烘干。
一般160℃，维持2h。
也可用高压蒸汽灭菌，即121.3℃ ，103.42千帕 经30分钟。
练习（每人）：
1. 包装一包平皿（5套） 2. 包装一支吸管 3. 制作两个棉塞（试管2个）
课后作业
写出实习报告
13~15mm×100~180mm
实验九玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
一、目的要求
1、明确培养基的配制原理。 2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制
培养基的一般方法和步骤。 3、了解高压蒸汽灭菌的根本原理及应用范围 4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。
器皿包扎
六、思考题
〔1〕培养微生物的培养基应具备哪些条件？ 为什么？ 〔2〕在配制培养基的操作过程中应注意些 什么问题？为什么？图Ⅴ—5通气塞
A．配制时纱布塞法；B．灭菌时包牛皮 纸；C．培养时纱布翻出 〔3〕培养基配好后，为什么必须立即灭菌？ 如何检查灭菌后的培养基是无菌的？
〔4〕干热灭菌完毕后，在什么情况下才能 开箱取物？为什么？
二、根本原理
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌根底培养基，有时又称为普通培养基。 它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为 微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要 提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培 养基时还要参加一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸 水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂 烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分 解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的 质量和气温的不同而有所不同。
NaCl
0.5g
产生沉淀
KNO3
1.0g
K2HPO4.3H2O 0.5g 不宜
抗生素现用现加,温度
MgSO4.7H2O 0.5g
过高否那么易分解
FeSO4.7H2O 0.01g
琼脂
15-25g
水
1000ml
pH
7.4-7.6
常用培养基
常用玻璃器皿的洗涤、包装及灭菌
2016
三角烧瓶
常用器具
100 ml 250 ml 500 ml 1000 ml
• 盛无菌水、培养基 • 振荡培养微生物
载玻片与盖玻片
常用器具
75 mm × 25 mm
接种工具
• 接种环 • 接种针 • 接种钩
• 接种铲
常用器具
微量吸管
常用器具
试管
• 大试管
18mm×180mm
• 中试管
（5）对污染有病原微生物的吸管
用后投入盛有消毒液（2％～3％来苏儿或5％石炭酸） 的玻璃筒内（筒底必须垫有棉花，消毒液要淹没吸管）， 经1～2d后取出，浸入2％肥皂粉液中1～2h（或煮沸）取 出，再用一根橡皮管，使一端接于自来水龙头，另一端 与吸管口相接，用自来水反复冲洗 ，最后用蒸馏水冲洗。 （6）如遇玻璃器皿用上述方法不能洗净者，可用下列清 洗 液 浸 泡 后 洗 刷 。 重 铬 酸 钾 （ 工 业 用 ） 8 0 g， 粗 硫 酸 100ml，水1000ml。
（3）载玻片 : 用后立即浸泡于消毒液中，经1～2d取出， 用洗衣粉液煮沸5min，再用毛刷刷去油脂及污垢，然后用 清水冲洗，晾干或将洗净的玻片用蒸馏水煮沸，趁热把玻 片摊放在干毛巾或干纱布上，稍等片刻，玻片即干，保存 备用或浸泡于95％酒精中备用。
（4）细菌培养用过的试管、平皿等
须高压蒸气灭菌后，倒去内容物，用热肥皂水刷去污 物，然后用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干 或烘干。
三、方法步骤
1．玻璃器皿的洗刷 2．玻璃器皿的包装 3．玻璃器皿的灭菌
1．玻璃器皿的洗刷
（1）新购入的玻璃器皿: 用1％～2％盐酸溶液浸泡数小时 或过夜,再用清水反复冲刷，最后用蒸馏水冲洗2～3次， 倒立使之自然干燥或烘干。
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。
一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。
生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。
一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。
常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。
其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。
然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。
②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。
然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。
冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。
（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。
（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。
（5）1mol/LKOH溶液。
（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。
（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。
常用培养用器皿的清洗、包装和灭菌操作流程
常用培养用器皿的清洗、包装和灭菌操作流程以下将在高压蒸汽灭菌的前提下，分离描述各种常用器皿的洗消流程。
详细实施时，可按照试验室管理人员或指导老师的要求举行适当的处置，如自来水清洗的次数与所用洗涤剂的种类、清洗手法或清洗办法等有关，有些时候某些试验室制订的洗消规章中会要求自来水清洗20-30次。
（一）玻璃瓶的清洗、灭菌、干燥与存放 1．清洗前预备清洗者须穿戴橡胶手套。
分拣100-250ml试剂瓶，当总数达到10个或以上时，拆卸盖子，如有废弃物先倾倒，记号笔标识用酒精擦拭整洁，然后用自来水分离清洗。
如是新购玻璃试剂瓶，检查去除破损者。
2．清洗 (1)浸泡新购玻璃试剂瓶用lmol/LHC1溶液浸泡6h以上或浸泡过夜，取出用自来水灌洗15-20次。
灌洗是强调清洗的一种形式，就是使瓶内弥漫水后再倾倒的洗涤手法。
(2）刷洗配制玻璃清洗剂洗涤液适量，置于塑料水盆（周转箱）内，放入上述试剂瓶及盖子浸泡润湿。
用法合适瓶刷，分离充分刷洗试剂瓶内壁、盖子内侧。
注重试剂瓶外壁有刻度标识部分不得着力刷洗。
(3）自来水清洗在水槽边用自来水反复荡洗刷洗后的试剂瓶内表面，淋洗瓶身外表面均需10-15次。
荡洗的办法是，用法不超过1/5体积量的水润洗内壁，然后倾倒。
每次荡洗后需甩掉多余水，即瓶壁内表面没有大的水滴。
用整洁的500m1烧杯或l000ml 烧杯，装RO水灌洗刷洗后的试剂瓶盖子。
盖子随机放入，注重盖子积累所占体积控制在烧杯容量的1/3以内，弥漫清洗用水，用手遮拦烧杯口摇摆若干次后倾倒清洗用水，15-20次。
(4)RO水清洗荡洗全部试剂瓶内壁3-5次，淋洗外壁1-3次，灌洗盖子3-5次，每次荡洗或灌洗后需倾倒去除多余水分。
(5)高纯水清洗荡洗全部试剂瓶内壁1-3次，淋洗外壁1-3次，灌洗盖子1-3次，每次荡洗或灌洗后需倾倒去除多余水分。
3．包装将上述试剂瓶及盖子沥干水分。
配套旋好试剂瓶盖子，使盖子保持一定的疏松通气状态。
培养基的制备与灭菌实验报告
xx师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
掌握培养基的配置原则和方法。
掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。
塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。
无菌操作技术—器械的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术—器械的清洗、包扎、灭菌
及培养基的配制
清洗器械
- 确保清洗环境干净整洁，并佩戴防护手套和口罩。
- 将使用过的器械放入洗涤溶液中，浸泡一段时间以去除污垢。
- 用清水冲洗器械，确保洗涤溶液彻底清除。
- 确保器械表面干燥后，放置在干净的中备用。
包扎器械
- 在无菌环境下，将清洗干净的器械放置在无菌器皿中。
- 使用无菌器皿盖子或无菌纱布将器械包扎，确保包裹紧密。
- 确保器械表面无菌后，放置在干净的中备用。
灭菌器械
- 选择适当的灭菌方法，如高温高压灭菌或化学灭菌。
- 将待灭菌的器械包装好，确保包装完好无损。
- 按照灭菌设备的说明，进行灭菌操作。
- 灭菌后，将器械取出，放置在干净的中备用。
培养基配制
- 准备所需的培养基成分和培养皿。
- 按照所需的比例将每个成分加入无菌烧杯中。
- 搅拌混合，直到所有成分完全溶解。
- 倒入无菌培养皿中，并用无菌棉球将其封闭。
- 放置在适当的温度和环境中，等待培养基凝固。
以上是关于无菌操作技术中器械的清洗、包扎、灭菌及培养基
的配制的简要介绍。
在进行任何无菌操作前，请确保操作环境无菌，并密切遵循相关的操作规程和安全措施，以确保操作的成功和安全性。
器皿的洗涤包扎灭菌
玻璃器皿的洗涤、 玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌
指导教师： 指导教师：袁勇军 张捷 管峰
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法； 2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实 为确保实验顺利地进行， 验所用的玻璃器皿清洗干净。 验所用的玻璃器皿清洗干净。 为保持灭菌后和无菌状态，需要对 为保持灭菌后和无菌状态， 培养皿、吸管等进行包扎， 培养皿、吸管等进行包扎，
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
（二）玻璃器皿的包扎
培养皿的包扎 1、培养皿的包扎 一般以5 一般以5-8套培养皿做一包 吸管的包扎 2、吸管的包扎 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 0.5cm 塞一小段1.5cm长的棉花， 1.5cm长的棉花 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜放 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角， 30度角 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将左 端多余的一段纸覆折在吸管上， 端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷 入报纸，右端多余的报纸打一小结。 入报纸，右端多余的报纸打一小结。
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
）、玻璃器皿的洗涤方法 （一）、玻璃器皿的洗涤方法 1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 2%的盐酸溶液中浸泡数小时 的盐酸溶液中浸泡数小时， 本次实验不要求） 净（本次实验不要求）
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。
2、为下一次的课做好器材的准备工作。
二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容（一）玻璃器皿的清洗：l 新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
l 常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
食品微生物—常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎
玻璃器皿的包扎
• 微生物学实验用的玻璃器皿大多数需要灭菌后才能使用，玻 璃器皿在灭菌前要先用牛皮纸或报纸包扎起来，以保护玻璃器皿 在灭菌后一段时间内仍能保持无菌状态。否则，玻璃器皿灭菌后 暴露在空气中，空气的微生物很容易进入玻璃器皿内，造成染菌 ，影响实验效果甚至导致实验失败。
玻璃器皿的包扎
1. 培养皿：洗净的培养皿烘干后每6-8套（或根据需要而定） 叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后 进行灭菌。
2.移液管：
塞入棉花的作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不 慎将微生物吸出管外。
3.试管和锥形瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞， 棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。
棉塞制作
1、注意所有包好的器皿，只有灭菌后使用时才可 打开包装，以免被空气中的杂菌污染。 2、如使用干热灭菌，温度不可高于180℃，以防纸 张和棉花烤焦。
为什么玻璃器皿要塞棉花？
实验八 玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌课件
皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻 绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期；
将上述培养基以115℃，20min高压蒸汽灭菌。 （操作演示）
将灭菌培养基放入37℃的温室中培养24～48h，以 检查灭菌是否彻底。
分装
按实验要求，可将配制的培养基分装入 试管内或三角烧瓶内。
分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上， 以免沾污棉塞而引起污染。
三、实验器材
溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、 KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素 （1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。
仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻 璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌 锅、pH试纸（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝 箔）、记号笔、麻绳和纱布等。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。
培养基的成分和pH
配制培养基 的原则是什
么？
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮
源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求不一
样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的，而细
菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的（嗜碱
紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的 形成和DNA链的交联，从而抑制了DNA的复制。
过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长为200—300nm的紫外 线都有杀菌能力，其中以260nm的杀菌力最强。在波长一定的条件下， 紫外线的杀菌效率与强度和时间的乘积成正比。紫外线杀菌机制主要是 因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成，从而抑制了DNA的复制。另一 方面，由于辐射能使空气中的氧电离成[O]，再使O2氧化生成臭氧 （O3）或使水（H2O）氧化生成过氧化氢（H2O2），O3和H2O2均有 杀菌作用。紫外线穿透力不大，所以，只适用于无菌室、接种箱、手术 室内的空气及物体表面的灭菌。紫外线灯距照射物以不超过1．2m为 宜。
器皿的包扎与灭菌
实验八器皿的包扎与灭菌一、目的要求1．掌握高压蒸汽和干热灭菌方法和原理。
2．掌握器皿的包扎方法。
二、基本原理干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，其原因有三：一是湿热中细菌菌体吸收水分，蛋白质较易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低（表Ⅵ-2），二是湿热的穿透力比干热大；三是湿热的蒸汽有潜热存在，每1克水在100℃时，由气态变为液态时可放出2．26kJ（千焦）的热量。
这种潜热，能迅速提高被灭菌物体的温度，从而增加灭菌效力。
在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，灭菌锅内冷空气的排除是否完全极为重要，因为空气的膨胀压大于水蒸汽的膨胀压，所以，当水蒸汽中含有空气时，在同一压力下，含空气蒸汽的温度低于饱和蒸汽的温度。
灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温度的关系见表Ⅵ-4。
一般培养基用1．05kg /cm2，121．3℃15—30分钟可达到彻底灭菌的目的。
灭菌的温度及维持的时间随灭菌物品的性质和容量等具体情况而有所改变。
例如含糖培养基用0．56kg/cm2（8磅/英寸2），112．6℃灭菌15分钟，但为了保证效果，可将其他成分先行121．3℃，20分钟灭菌，然后以无菌操作手续加入灭菌的糖溶液。
玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌
实验一、玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌一、目的要求1、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2、了解湿热和干热灭菌的原理,并掌握有关的操作技术。
二、原理为确保实验顺利地进行,要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净并干燥，微生物实验还要进行灭菌。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿，吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
1、玻璃器皿的清洗①不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
②用过的器皿应立即洗涤。
③强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂(苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等)揩去。
④洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。
3、干燥做实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。
用于不同实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于精密分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。
应根据不同要求进行干燥仪器。
（1）、烘干洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105~110℃烘1小时左右。
也可放在红外灯干燥箱中烘干。
此法适用于一般仪器。
称量瓶等在烘干后要放在干燥器中冷却和保存。
带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要注意慢慢升温并且温度不可过高，以免破裂。
量器不可放于烘箱中烘。
硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。
无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。
一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。
生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。
一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。
常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。
其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。
然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。
②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。
然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。
冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。
（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。
（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。
（5）1mol/LKOH溶液。
（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。
（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。