实验九 玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
【报告】培养基制备实验报告
【关键字】报告培养基制备实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
细菌培养实验报告(新)
篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
塞入此小段棉花应距管口约0.5cm 左右，棉花自身长度约1~1.5cm。
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
细菌培养实验报告
细菌培养实验报告文件编码（008-TTIG-UTITD-GKBTT-PUUTI-WYTUI-8256）篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1.掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2.掌握培养基的配置原则和方法。
3.掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1.药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。
2.仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3.其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
玻璃器皿的包扎实验总结
玻璃器皿的包扎实验总结
微生物学实验所用的器皿，大多数要进行消毒、灭菌，才能用来培养微生物。
玻璃器皿的包装方法正确合理，在使用过程中才能有效防止杂菌的污染。
玻璃器皿包装好后，一般用高压蒸气灭菌法进行灭菌。
高压蒸气灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。
待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
棉花，试管，培养皿，纱布，三角瓶，橡皮筋，量筒，牛皮纸（或旧报纸），LDZX-50KBS立式高压蒸气灭菌锅等。
1.熟悉微生物学实验的结构与功能。
2.清洗试管、三角瓶，培养皿等玻璃器具，烘干。
3.制作试管棉塞及三角瓶棉塞（参照微生物学实验基本操作技术）。
4.用量筒或吸管取适量自来水于三角瓶和试管中，包装好以制备无菌水。
5.包装空培养皿，移液管。
6.灭菌（参照Ⅰ）。
玻璃器皿在使用过程中确保干净，用过的器皿应及时清洗。
器皿一般可以用去污粉、肥皂或洗洁净清洗。
琼脂培养基的器皿应先将培养基刮去。
琼脂和固体物不能丢弃到水池中，以免堵塞管道。
清洗方法详见Ⅰ。
试管口和三角瓶瓶口塞棉花塞或硅胶塞;用二层报纸包扎好（如有牛皮纸，效果更好），进行干热或湿热灭菌。
试管较多时，一般7个或10个一组，再用双层报纸包扎。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌 18页PPT文档
基本原理
（一）实验室中使用的玻璃器皿简介
微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌 和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一 定的要求。玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高 温和短暂灼烧而不致破坏；玻璃器皿的游离碱含量要少，否 则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的性状和包装方法的 要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也 会影响实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿 （如培养皿、吸管等）已被一次性塑料制品所代替，但玻璃 器皿仍是重要的实验室用具。
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
培养基的成分和pH
不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、 氮源、无机盐和生长因子等。不同微生物对pH要求 不一样，霉菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性的， 而细菌和放线菌培养基的pH一般为中性或微碱性的 （嗜碱细菌和嗜酸细菌例外）。所以配制培养基时， 都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适 的范围。
此外，为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外线 灯以前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％ 的石炭酸溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘 埃降落，另一方面也可以杀死一部分细菌。无菌室 内的桌面，凳子可用2—3％的来苏尔擦洗，然后再 开紫外线灯照射，即可增强杀菌效果，达到灭菌目 的。
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
培养基的配制与灭菌实验报告
培养基的配制与灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。
2. 掌握培养基的配置原则和方法。
3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。
二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。
高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。
将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。
待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。
此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。
三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。
2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。
3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。
四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。
将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。
移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。
洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。
2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。
包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。
（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。
器皿的洗涤包扎灭菌
玻璃器皿的洗涤、 玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌
指导教师： 指导教师：袁勇军 张捷 管峰
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法； 2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实 为确保实验顺利地进行， 验所用的玻璃器皿清洗干净。 验所用的玻璃器皿清洗干净。 为保持灭菌后和无菌状态，需要对 为保持灭菌后和无菌状态， 培养皿、吸管等进行包扎， 培养皿、吸管等进行包扎，
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
（二）玻璃器皿的包扎
培养皿的包扎 1、培养皿的包扎 一般以5 一般以5-8套培养皿做一包 吸管的包扎 2、吸管的包扎 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 0.5cm 塞一小段1.5cm长的棉花， 1.5cm长的棉花 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜放 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角， 30度角 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将左 端多余的一段纸覆折在吸管上， 端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷 入报纸，右端多余的报纸打一小结。 入报纸，右端多余的报纸打一小结。
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
）、玻璃器皿的洗涤方法 （一）、玻璃器皿的洗涤方法 1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 2%的盐酸溶液中浸泡数小时 的盐酸溶液中浸泡数小时， 本次实验不要求） 净（本次实验不要求）
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。
2、为下一次的课做好器材的准备工作。
二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容（一）玻璃器皿的清洗：l 新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
l 常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
实验九 培养器皿的清洗和消毒
实验九培养器皿的清洗和消毒【实验目的】掌握细胞培养所需器械、器皿的清洗和消毒方法；掌握细胞培养常用器材的包装要领和要求；掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作；了解化学消毒法的使用方法。
【实验原理】清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。
体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。
细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。
清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。
如有毒的化学物质，哪怕残留0.1单位，也可能影响细胞生长。
灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。
假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。
以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。
【器材与试剂】1、玻璃器皿：移液管、离心管、培养瓶、玻璃瓶、培养皿、大橡皮塞、培养瓶盖。
2、实验器械：眼科剪、眼科镊。
3、仪器：超净工作台、干燥箱、高压蒸汽消毒锅，过滤器，过滤泵。
4、试剂：75%酒精、0.2%新洁尔灭、高锰酸钾、重铬酸钾、浓硫酸。
5、材料：无臭氧型紫外灯，微孔滤膜：孔径为0.22“m。
【实验步骤】一、清洗1、玻璃器皿的清洗玻璃器皿清洗后不仅要求透明、无污迹，而且不能残留任何物质。
某些化学物质仅残留百万分之一毫克，就会对细胞产生毒性作用。
因此清洗质量的好坏直接影响到细胞培养成功与否,必须严格按照清洗的程序进行，以保证达到清洗的目的。
一般玻璃器皿清洗的程序包括：浸泡、刷洗、浸酸和冲洗四个步骤。
（1）浸泡初次使用和培养用后的玻璃器皿都需先用清水浸泡，以使附着物软化或溶解。
新的玻璃器皿使用前应先用自来水简单刷洗，然后用5%稀盐酸溶液浸泡过夜，以中和其中的碱性物质。
用过的玻璃器皿往往粘有大量蛋白质，干燥后不易刷洗掉，故用后立即浸入清水中刷洗。
（2）刷洗将浸泡后的玻璃器皿放到洗涤剂（不用含沙粒的洗衣粉）水中，用软毛刷反复刷洗，注意不留死角，洗后晾干备浸酸。
培养基的灭菌
玻璃器皿的洗涤和包装玻璃器皿的洗涤和包装1. 玻璃器皿的洗刷：玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。
锥形瓶、试管、培养皿等浸入水中洗涤，用毛刷和洗衣粉洗刷，然后再用水冲净。
移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗。
洗刷干净的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后备用。
2. 玻璃器皿灭菌前的准备工作：（1）培养皿又称双碟或平皿，由一底一盖组成一套。
可以每套单独使用纸包装，也可将几套一起用纸包装；（2）移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花（约1-1.5厘米长）；以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹入管内。
棉花要塞的松紧适宜。
炊时以能通气但不使棉花滑下为准。
塞好棉花的移液管尖端，放在4-5厘米宽的长条纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，右手将移液管压紧，在桌上向前搓转，以螺旋式包扎起来。
上端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
3. 棉塞的制作为了过滤空气，避免污染，试管或锥形瓶口需用棉花堵塞（脱脂棉易吸水，勿用）。
为了节省棉花或节省时间，在配置实验临时所用的无菌水和培养基时，也可以用金属试管帽代替棉塞。
装液体培养基的锥形瓶口，可包扎6-8层纱布以代替棉花。
制作棉塞时，应选用大小、厚薄适中的普通棉花一块，铺展于左手拇指和食指扣成的圆孔上，用右手食指将棉花从中央压入圆孔中制成棉塞，然后直接压入试管或锥形瓶口。
也可借用玻璃棒塞入，也可以用折叠卷塞法制作棉塞（见图2-2）。
制作的棉塞应紧贴管壁，不留缝隙，以防外界微生物沿缝隙浸入。
棉塞不宜过紧或过松，塞好后以手提棉塞，以瓶、管不下落为准。
图2-2 棉塞的制作过程实验培养基的制备与灭菌棉塞的2/3应在管内，上端露出1/3，便于提拔。
如制作时不慎沾上培养基，则不可再用。
在棉塞和平口外要包以厚纸，或将塞好后的试管集中放在铁丝筐内，上面盖以厚纸，用线绳扎好，准备灭菌，避免灭菌后冷水淋湿棉塞，并防止接种前培养基水分散失。
上面配制好的各种培养基，分装于锥形瓶内和试管中，分别加以捆扎，做好标记。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
对实验结果的个人见解和展望
见解1
本实验中，玻璃器皿的清洗、包扎和培养基的制备及灭菌是微生物培养的关键步骤，任 何一个环节的失误都可能导致实验失败。因此，每个步骤都需要认真对待。
见解2
通过本实验，我深刻认识到实验操作的规范性和细节的重要性。在未来的实验中，我会 更加注重操作的规范性和细节的处理。
展望
技巧
掌握正确的清洗和包扎技 巧，确保玻璃器皿干净、 干燥、无菌。
学会制备培养基
了解培养基的成分
根据实验需要，了解培养 基所需的成分，如营养物 质、水、pH调节剂等。
配置培养基
按照规定的比例和顺序， 将各成分加入到容器中， 搅拌均匀。
灭菌
将配置好的培养基进行高 温灭菌，以杀死其中的微 生物。
了解灭菌的重要性及操作方法
包扎不严密。
• 解决方法
使用足够的纱布和胶带，确保玻璃 器皿的封口严密，防止培养基泄漏 。
对实验过程的改进建议
建议1
在清洗玻璃器皿时，可以先用清水冲洗一遍，再用清洗剂清洗，最 后用清水冲洗干净。这样可以确保器皿清洗得更彻底。
建议2
在制备培养基时，可以加入适量的抗凝剂，以防止培养基凝固。
建议3
在灭菌过程中，可以增加灭菌次数或延长灭菌时间，以确保培养基完 全灭菌。
培养基的制备
准备原料
01
根据实验需要，准备好所需的原料，如牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠等。
配置培养基
02
按照配方比例将原料加入到水中，加热搅拌至溶解，调节pH值
至备好的培养基进行高温灭菌，以杀死其中的微生物。
灭菌操作
灭菌前准备
确保灭菌锅已经清洗干净，并按照要求摆放好待 灭菌的物品。
培养皿
环境微生物课件(实训部分)—培养基的配制及玻璃器皿的包扎
方法同于牛肉膏蛋白胨培养基。
3、高压蒸气灭菌的操作过程
（1）加水 立式锅是直接加水至锅内底部隔板以下1/3处。有加水口
者由加水口加入至止水线处。 （2）装锅
把需灭菌的器物放入锅内（请注意：器物不要装得太 满，否则灭菌不彻底），加盖时将盖上的排气软管插入内层 锅的排气槽内。关严锅盖（对角式均匀拧紧螺旋）。 （3）加热
空的玻璃器皿一般用干热灭菌，若用湿热灭菌，则要多用几层报纸 包扎，外面最好加一层牛皮纸或铝箔。
3、灭菌——干热灭菌法
培养皿、移液管、试管及其他玻璃器皿可用干热 灭菌。先将已包装好的上述物品放入恒温箱中，将温 度调至160 oC后维持2小时，把恒温箱的调节旋扭调 回零处，待温度降到50oC左右，才可将物品取出。
用电源或煤气加热，同时打开排气阀，使水沸腾以排出 锅内的冷空气。待冷空气完全排出后关上排气阀。让锅内温 度随蒸汽压力增加而逐渐上升，当锅内压力升到所需压力 时，控制热源，维持压力至所需时间。
（4）中断热源
达到灭菌时间要求后停止加热，任其自然降压，当指针回 到0时，打开排气阀（请注意，排气阀不能过早打开，否则 培养基因压力突降，内外压力不平衡而翻腾冲到棉塞处，既 损失培养基又玷污了棉塞）。
2、仪器或其他用具
pH试纸、培养基分装器、高压蒸气灭菌锅、玻璃棒、天平、牛角 匙、记号笔。试管、移液管、锥形瓶、烧杯、量简纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）、电烤 箱。
三、方法与步骤
（一）培养基的配置 1、牛肉膏蛋白胨培养基的配制
其配方法如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂 20g，水1000mL，pH7.4~7.6。
（5）揭开锅盖，
取出器物，排掉锅内剩余水。 灭菌需待培养基冷却后置于37 oC恒温箱内培养24小时， 若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存备用。
玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌
实验一、玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌一、目的要求1、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2、了解湿热和干热灭菌的原理,并掌握有关的操作技术。
二、原理为确保实验顺利地进行,要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净并干燥，微生物实验还要进行灭菌。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿，吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
1、玻璃器皿的清洗①不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
②用过的器皿应立即洗涤。
③强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂(苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等)揩去。
④洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。
3、干燥做实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。
用于不同实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于精密分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。
应根据不同要求进行干燥仪器。
（1）、烘干洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105~110℃烘1小时左右。
也可放在红外灯干燥箱中烘干。
此法适用于一般仪器。
称量瓶等在烘干后要放在干燥器中冷却和保存。
带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要注意慢慢升温并且温度不可过高，以免破裂。
量器不可放于烘箱中烘。
硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。
无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。
一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。
生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。
一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、司班和吐温类：司班-80和吐温-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。
常用于核酸的提取。
C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类居多。
D．天然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。
E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则呈现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。
（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。
其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml水，尽量使其溶解。
然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。
②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其溶解。
然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。
冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。
（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。
（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。
（5）1mol/LKOH溶液。
（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。
（7）10-3mol/LEDTA溶液用于除去塑料容器内壁污染的金属离子。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
四、操作步骤
一、称量 准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错
药瓶盖 二、溶化 水的加法、加热搅拌 三、调pH 忌调过头后来回调
培养基的制备
四、过滤
五、分装
1、液体分装：试管高度的1/4左右
三角瓶容积的1/2
2、固体分装：试管高度的1/5左右（制斜面）
由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性， 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下：
牛肉膏 3g 蛋白胨 10g
NaCl 5g 琼脂15～20g
水
1000ml pH 7．4～7．6
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
器皿包扎
六、思考题
（1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？为 什么？ （2）在配制培养基的操作过程中应注意些什么问 题？为什么？图Ⅴ—5通气塞
A．配制时纱布塞法；B．灭菌时包牛皮纸； C．培养时纱布翻出 （3）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何 检查灭菌后的培养基是无菌的？
（4）干热灭菌完毕后，在什么情况下才能 开箱取物？为什么？
三、器材
牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5～9．0）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
培养皿，试管，吸管，电烘箱等。
牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包）， 手提式高压蒸汽菌锅等。
配方：
KH2PO4
1.0g 另加孟加拉红和链霉素
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四、操作步骤
一、称量 准确、迅速，一种药品一把药勺，勿盖错 药瓶盖 二、溶化 水的加法、加热搅拌 三、调pH 忌调过头后来回调
培养基的制备
四、过滤 五、分装 1、液体分装：试管高度的1/4左右 三角瓶容积的1/2 2、固体分装：试管高度的1/5左右（制斜面） 半固体：1/3左右（垂直穿 刺） 马丁氏培养基——定容；瓶口棉塞
培养基的制备
六、加塞 七、包扎 八、灭菌 一般15磅（121℃）20分钟 九、摆斜面 温度、斜面长度（试管的1/2） 十、无菌检查 37℃培养24—48小时
常用培养基
一、牛肉膏蛋白胨培养基 应用最广泛的细菌基础培养基。 配方： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 水 1000ml pH 7.4-7.6
摆斜面实物图
五、实验报告
结果 检查培养基灭菌是否彻底。试管清洁如何， 培养基制备的合不合理。
玻璃器皿的清洗
器皿包扎
器皿包扎
六、思考题
（1）培养微生物的培养基应具备哪些条件？为 什么？ （2）在配制培养基的操作过程中应注意些什么问 题？为什么？图Ⅴ—5通气塞 A．配制时纱布塞法；B．灭菌时包牛皮纸； C．培养时纱布翻出 （3）培养基配好后，为什么必须立即灭菌？如何 用于培养、观察放线菌形态特征； 加入适量的抗菌物质（抗生素、酚）用于 分离放线菌（选择性培养基）。
常用培养基
高氏Ⅰ号培养基配方： 可溶性淀粉 20g 按配方顺序依次溶解否则 NaCl 0.5g 产生沉淀 KNO3 1.0g K2HPO4.3H2O 0.5g 抗生素现用现加,温度不宜 MgSO4.7H2O 0.5g 过高否则易分解 FeSO4.7H2O 0.01g 琼脂 15-25g 水 1000ml pH 7.4-7.6
实验九
玻璃器皿的清洗包扎，
培养基的配制及灭菌
一、目的要求
1、明确培养基的配制原理。 2、通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制 培养基的一般方法和步骤。 3、了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围 4、了解干热灭菌的原理和应用范围。 5、了解紫外线灭菌的原理和方法。 6、玻璃器皿的清洗包扎要熟练操作。
由于这种培养基多用于培养细菌，因此， 要用稀酸或稀碱将其pH调至中性或微碱性， 以利于细菌的生长繁殖。牛肉膏蛋白胨培 养基的配方如下： 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaCl 5g 琼脂15～20g 水 1000ml pH 7．4～7．6
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
二、基本原理
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普 通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。 它含有牛肉膏、蛋白胨和NaCl。其中牛肉膏为 微生物提供碳源和能源，磷酸盐、蛋白胨主要 提供氮源，而NaCl提供无机盐。在配制固体培 养基时还要加入一定量琼脂作凝固剂。琼脂在 常用浓度下96℃时溶化，一般实际应用时在沸 水浴中或下面垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂 烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物分 解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的 质量和气温的不同而有所不同。
紫外线灭菌是用紫外线灯进行的，波长 为200—300nm的紫外线都有杀菌能力， 其中以260nm的杀菌力最强。 为了加强紫外线灭菌效果，在打开紫外 线灯以前，可在无菌室内（或接种箱内） 喷洒3—5％的石炭酸溶液，一方面使空 气中附着有微生物的尘埃降落，另一方 面也可以杀死一部分细菌。
超净工作台内紫外灯（线）灭菌
三、器材
牛肉膏，蛋白胨， NaCl，琼脂； 1mol/L NaOH， 1mol/L HCl； 试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培 养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸 汽灭菌锅，pH试纸（ pH 5．5～9．0）， 棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
培养皿，试管，吸管，电烘箱等。 牛肉膏蛋白胨培养基，培养皿（6套一包）， 手提式高压蒸汽菌锅等。 紫外线灯，3～5％石炭酸或2～3％来苏尔 溶液，牛肉膏蛋白胨平板 。
（4）干热灭菌完毕后，在什么情况下才能 开箱取物？为什么？ （5）高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将 锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待 压力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？ 紫外线杀菌的原理是什么？
全自动高压蒸汽灭菌锅
常用培养基
三、马丁氏培养基 用于分离真菌的选择性培养基 配方： KH2PO4 1.0g 另加孟加拉红和链霉素 MgSO4.7H2O 0.5g 抑制细菌、放线菌生长 蛋白胨 5g 葡萄糖 10g 琼脂 10-20g 水 1000ml pH 自然
试管分装
摆斜面