玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌
玻璃器皿的清洗包扎干热灭菌及常见培养基配置湿热灭菌玻璃器皿的清洗、包扎和干热灭菌一、目的要求掌握玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌的操作方法。
二、实验材料玻璃器皿、烘箱、牛皮纸、纱布、纱绳三、操作步骤(一)清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗涤剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同。
1. 新玻璃器皿的洗涤方法新购置的玻璃器皿含游离碱较多，应在酸溶液内先浸泡数小时，酸溶液一般用2%的盐酸或洗涤液，浸泡后用自来水冲洗干净。
2. 使用过的玻璃器皿的洗涤方法(1)试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等可用瓶刷或海绵沾上肥皂或洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后用自来水充分冲洗干净。
但是，洗衣粉和去污粉较难冲洗干净，常在器壁上附有次以上充分冲洗，或可用稀盐酸摇洗一次，再用水冲洗。
一层微小粒子，故要用水多次甚至10若内壁的水是均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则还需用洗涤液浸泡数小时，然后再用自来水充分冲洗。
(2) 装有固体培养基的器皿应先将其刮去，然后洗涤。
带菌的器皿在洗涤前先浸在2%煤酚皂溶液(来苏尔)或0.25%新洁尔灭消毒液内24小时或煮沸半小时，再用上法洗涤 (3)载玻片与盖玻片用过的载玻片与盖玻片如滴有香柏油，要先用皱纹纸擦去或浸在二甲苯内摇晃几次，使油垢溶解，再在肥皂水中煮沸5—10 min，用软布或脱脂棉花擦试，立即用自来水冲洗。
然后在稀洗涤液中浸泡0.5—2 h，自来水冲去洗涤液，最后用蒸馏水换洗数次，待干后浸于95%酒精中保存备用。
3. 洗涤液的配制与使用(1)洗涤液的配制洗涤液分浓溶液与稀溶液两种，配方如下:浓溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 150mL浓硫酸(工业用) 800mL稀溶液重铬酸钠或重铬酸钾(工业用) 50g自来水 850mL浓硫酸(工业用) 100mL配法都是将重铬酸钠或重铬酸钾先溶解于自来水中，可慢慢加温溶解，冷却后徐徐加入浓硫酸，边加边搅动。
常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术
实验五常用玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌技术一、实验目的1.熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2.掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3.了解干热灭菌、蒸汽灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌及高压蒸汽灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表2-1。
表2-1微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格名称常用规格及配套使用物品烧杯50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL，5000mL配套烧杯刷：大号，中号，小号三角瓶100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL，3000mL配套三角瓶刷：大号，中号，小号容量瓶无色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL量筒5mL，10mL，25mL，50mL，100mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL移液管1mL（分度0.01mL），2mL（分度0.02mL），5mL（分度0.05mL），10mL（分度0.1mL），20mL（分度0.1mL），50mL（分度0.5mL）配套洗耳球：大号，中号，小号培养皿35mm，75mm，90mm，120mm，150mm配套封口膜：12*12mm，16*16mm 酒精灯150mL配套：火柴漏斗60mL，80mL配套滤纸、漏斗架定性滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm 定量滤纸：7cm，9cm，11cm，12.5cm，15cm滴定管酸式滴定管：50mL碱式滴定管：50mL 配套滴定台、蝴蝶夹滴瓶（小口瓶）无色：30mL，60mL，120mL 棕色：30mL，60mL，120mL广口瓶无色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL棕色：125mL，250mL，500mL，1000mL，2000mL试管10*100mm，12*100mm，15*100mm，15*150mm，18*180mm，20*200mm 配套试管刷：大号，中号，小号配套试管架：12.5mm，15.5mm，18.5mm，20.5mm载玻片25*75mm，30*60mm，100*100mm，500*500mm，900*600mm盖玻片18*18mm，20*20mm，22*22mm，24*24mm，24*32mm，24*50mm温度计0-100℃，0-200℃，0-300℃坩埚30mL，50mL配套坩埚钳研钵80mm，100mm，120mm，150mm（二）常用玻璃器皿用途：1.烧杯：用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
实验一 玻璃器皿的清洗与包扎,棉塞的制作
实验一玻璃器皿的清洗与包扎，棉塞的制作一、玻璃仪器的清洗：洗涤玻璃器皿日常最方便的方法是用肥皂、洗涤剂等以毛刷进行清洗，然后依次用自来水、蒸馏水淋洗。
清洗干净后的玻璃器皿表面，在用蒸馏水淋洗时应布上一层薄薄的水膜；如果是挂上一个个的小水珠，则表面未清洗干净。
对于不便用毛刷清洗或清洗不干净的器皿，可配制下述清洗液进行化学清洗。
对分析某些痕量金属所使用的器皿，洗涤后还需要在一定浓度的盐酸、硝酸溶液或含络合剂的溶液中浸泡相当时间，除去表面吸附的金属离子，然后再用蒸馏水淋洗干净。
聚乙烯、聚氯乙烯、聚四氟乙烯器皿也可用同样的方式清洗，但要注意塑料制品受热易变形、易被硬物划伤及对许多有机溶剂敏感的特点。
（1）铬酸溶液：称取92g二水重铬酸钠溶于460mL水中，然后注入800mL 硫酸。
另一个配方是把1L硫酸注入35mL饱和重铬酸溶液中。
当洗液使用至变绿色后，就失去洗涤能力。
使用铬酸洗液时，被洗涤的器皿带水量应少，最好是干的，以免洗液被稀释而降低效率。
也可以用重铬酸钾代替重铬酸钠，但前者的溶解度较低。
用铬酸洗液洗涤后的容器要用清水充分冲洗，以除去可能存在的铬离子。
（2）高锰酸钾的碱性溶液：少量高锰酸钾溶于100~200g/L的氢氧化钠溶液中。
适于洗涤带油污的玻璃器皿，但余留的二氧化锰沉淀物需用盐酸或盐酸加过氧化氢洗去。
（3）氢氧化钠（钾）乙醇溶液：把约1L 95%的乙醇加到含120g氢氧化钠（钾）的120mL水溶液中，就成为一种去污力很强的洗涤剂，玻璃磨口长期暴露在这种洗液中易被损坏。
（4）硫酸及发烟硝酸混合物：适用于特别油污、肮脏的玻璃器皿。
（5）磷酸三钠溶液：将57g磷酸三钠、28g油酸钠溶于470mL水中，为除去玻璃器皿上的碳质残渣，可将器皿在此溶液里浸泡几分钟，然后用刷子除去残渣。
100~150g/L的氢氧化钠（钾）溶液也有同样作用。
（6）10g/L EDTA 的20g/L氢氧化钠溶液：用此溶液浸泡洗净的玻璃器皿，能除去容器表面吸附的一些微量金属离子。
学习情境2 微生物的接种、分离与培养及技术 子学习情境21 玻璃器皿的清洗包扎及灭菌
过滤除菌是通过机械作用滤去液体或气体中细菌的方法。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭 菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。 待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭 排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌 器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导 致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
清洗 包装 灭菌
洗涤剂、试管刷等 报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗 器皿包扎
（三）灭菌的常用方法和基本原理
实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法、 紫外线照射法和微孔滤膜法等。
干热灭菌和高压蒸汽灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋 白质凝固变性而达到灭菌的目的。
结合理论知识 和生活，在使 用紫外灭菌时 此外，为了加强紫外线灭菌效果你，应在么该打？注开意紫什外线灯以 前，可在无菌室内（或接种箱内）喷洒3—5％的石炭酸
溶液，一方面使空气中附着有微生物的尘埃降落，另一
方面也可以杀死一部分细菌。无菌室内的桌面，凳子可
用2—3％的来苏尔擦洗，然后再开紫外线灯照射，即可
增强杀菌效果，达到灭菌目的。
三、实验器材
仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、 培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸 （pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝箔）、记号笔、麻绳 和纱布等。
学习情境2 微生物的接种、分离与培养及技术 子学习情境2.1 玻璃器皿的清洗包扎及灭菌
一、目的要求
1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的 包扎方法；
无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制
无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是实验室中非常重要的技术，可以保证实验结果的准确性和可靠性。
以下是用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的一些建议和步骤：用品的清洗在进行无菌实验前，确保所有用品是干净的，没有任何污染物。
1. 使用洗碗液和温水彻底清洗所有用品，包括培养皿、试管、移液器等。
2. 用专用的刷子和洗涤剂清洗玻璃器皿，保证器皿内外表面完全清洁。
3. 用去离子水或者超纯水冲洗所有用品，以除去洗涤剂和其他杂质。
4. 沥干并摆放用品在干净的工作台上。
用品的包扎包扎是为了防止用品在操作过程中受到外界污染。
1. 在无菌环境下，将用品放在无菌纸上。
2. 使用无菌纸或箔纸将用品包裹好，封口处用无菌胶带固定。
3. 将包扎好的用品放入无菌中，并密封。
用品的灭菌灭菌是为了杀死用品上的细菌和其他微生物。
1. 使用常见的灭菌方法包括高温干热灭菌和湿热灭菌。
2. 对于耐高温的器皿，如玻璃器皿，可以选择高温干热灭菌。
将器皿放入预热至160°C的高温灭菌器中，保持30分钟。
3. 对于耐湿热的器皿，如塑料器皿，可以选择湿热灭菌。
将器皿放入预热至121°C的压力灭菌器中，保持15-20分钟。
培养基的配制培养基是进行微生物培养的基础，配制过程需要严谨操作。
1. 根据需要的培养基种类和配方，准备所需的培养基成分。
2. 使用称量器具准确称量所需成分，并将其加入无菌中。
3. 向无菌中添加适量的热蒸馏水，并搅拌混合，直到成分溶解彻底。
4. 根据需要调整pH值，并使用pH计进行测量和校准。
5. 分装培养基到无菌培养皿或试管中。
6. 对于固体培养基，添加适量琼脂糖，并将其加热至混合溶解。
然后将培养皿冷却，直到琼脂糖凝固。
以上是无菌操作技术中用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤和建议。
通过严格遵循这些步骤，可以提高实验的可靠性，并避免实验结果的污染和误差。
实验2 常用玻璃器皿的清洗及包扎
实验——常用玻璃器皿的清洗及包扎一、目的与要求（一）熟悉微生物实验所需各种常用器皿的名称和规格。
（二）学会正确的清洗玻璃器皿的方法和包扎方法。
二、原理为了保证实验顺利进行，要求把实验用器皿清洗干净，保持灭菌后无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行妥善包扎，试管和三角瓶要做棉塞。
清洗方法根据实验目的、器皿的种类、所盛放的物品、洗净剂的类别和沾污程度等的不同而有所不同，不同的器皿包扎方法也不同。
三、材料与仪器（一）常用的各种玻璃器皿。
（二）洗涤工具和去污粉、肥皂、洗涤液。
四、操作步骤（一）清洗1.新玻璃器皿的清洗新购置的玻璃器皿均含有游离碱，故应先将其浸于洗液或2%的盐酸溶液中数小时，再用自来水冲洗干净。
2.用过的玻璃器皿的清洗（1）试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯可用瓶刷或海绵沾上肥皂、洗衣粉或去污粉等洗涤剂刷洗，然后再用自来水充分冲洗干净。
经洗涤后，若内壁的水均匀分布成一薄层，表示油垢完全洗净，若挂有水珠，则需用洗涤液（或洗液）浸泡数小时，再用自来水充分冲洗，洗涤干净的气密倒置于铁丝框或有空心格子的木架上，室内晾干。
（2）玻璃习惯、滴管一般用完后立即用清水和蒸馏水浸泡（或冲洗），免得干燥后难以冲洗赶紧，如附有污物可用洗液浸泡。
（3）载玻片与盖玻片带有油污的应擦去油污后用热乙醇、丙酮、二甲苯等溶液浸泡10~15min，溶解油污然后用水冲洗，再用洗涤液浸泡、冲洗，干后置于95%乙醇中保存备用。
（4）凡是装有对人、畜有传染性或者是属于植物检疫范围内的微生物的试管，培养皿及其他容器，应先浸泡在2%煤酚皂溶液或0.25%新洁尔消毒液内24h 或煮沸0.5h，在进行洗涤。
（二）玻璃器皿的包扎1.培养皿常用旧报纸密密包紧，一般以5~10套培养皿作一包。
包好后进行干热或湿热灭菌，如将培养皿放入金属（不锈钢）筒内进行热灭菌，则不必用纸包。
2.试管和三角瓶试管管口和三角瓶都需要用棉花塞（或泡膜塑料塞），棉花塞的作用是起过滤作用，避免空气中的微生物进入试管或三角瓶。
常用玻璃器皿的洗涤、包装与灭菌
（4）细菌培养用过的试管、平皿等
须高压蒸气灭菌后，倒去内容物，用热肥皂水刷去污 物，然后用清水冲洗，最后用蒸馏水冲洗2～3次，晾干 或烘干。
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3．玻璃器皿的灭菌
常用干热灭菌法
将包装的玻璃器皿放入干燥箱内，为使空气流 通，堆放不宜太挤，也不能紧贴箱壁，以免烧焦。
一般160℃，维持2h。
也可用高压蒸汽灭菌，即121.3℃ ，103.42千帕 经30分钟。
练习（每人）：
1. 包装一包平皿（5套） 2. 包装一支吸管 3. 制作两个棉塞（试管2个）
技能训练2
2016
实验室常用玻璃器皿洗刷、 消毒和包装
一、 实训目的
认识常用玻璃器皿的名称及规格， 熟
悉各种玻璃器皿的洗刷、包装和消毒
二、 仪器材料
试管、刻度吸管、培养皿、三角 烧瓶、烧杯、量筒、量杯、漏斗、乳 钵、普通棉花、脱脂棉、纱布、牛皮 纸、旧报纸、新洁尔灭、来苏儿、石 炭酸、肥皂粉、重铬酸钾、粗硫酸、 盐酸、橡胶手套、橡胶围裙等；
（5）对污染有病原微生物的吸管
用后投入盛有消毒液（2％～3％来苏儿或5％石炭酸） 的玻璃筒内（筒底必须垫有棉花，消毒液要淹没吸管）， 经1～2d后取出，浸入2％肥皂粉液中1～2h（或煮沸）取 出，再用一根橡皮管，使一端接于自来水龙头，另一端 与吸管口相接，用自来水反复冲洗 ，最后用蒸馏水冲洗。 （6）如遇玻璃器皿用上述方法不能洗净者，可用下列清 洗 液 浸 泡 后 洗 刷 。 重 铬 酸 钾 （ 工 业 用 ） 8 0 g， 粗 硫 酸 100ml，水1000ml。
实验一 玻璃器皿的清洗与包扎
实验一玻璃器皿的清洗与包扎，棉塞的制作一、玻璃仪器的清洗：洗涤玻璃器皿日常最方便的方法是用肥皂、洗涤剂等以毛刷进行清洗，然后依次用自来水、蒸馏水淋洗。
清洗干净后的玻璃器皿表面，在用蒸馏水淋洗时应布上一层薄薄的水膜；如果是挂上一个个的小水珠，则表面未清洗干净。
对于不便用毛刷清洗或清洗不干净的器皿，可配制下述清洗液进行化学清洗。
对分析某些痕量金属所使用的器皿，洗涤后还需要在一定浓度的盐酸、硝酸溶液或含络合剂的溶液中浸泡相当时间，除去表面吸附的金属离子，然后再用蒸馏水淋洗干净。
聚乙烯、聚氯乙烯、聚四氟乙烯器皿也可用同样的方式清洗，但要注意塑料制品受热易变形、易被硬物划伤及对许多有机溶剂敏感的特点。
（1）铬酸溶液：称取92g二水重铬酸钠溶于460mL水中，然后注入800mL 硫酸。
另一个配方是把1L硫酸注入35mL饱和重铬酸溶液中。
当洗液使用至变绿色后，就失去洗涤能力。
使用铬酸洗液时，被洗涤的器皿带水量应少，最好是干的，以免洗液被稀释而降低效率。
也可以用重铬酸钾代替重铬酸钠，但前者的溶解度较低。
用铬酸洗液洗涤后的容器要用清水充分冲洗，以除去可能存在的铬离子。
（2）高锰酸钾的碱性溶液：少量高锰酸钾溶于100~200g/L的氢氧化钠溶液中。
适于洗涤带油污的玻璃器皿，但余留的二氧化锰沉淀物需用盐酸或盐酸加过氧化氢洗去。
（3）氢氧化钠（钾）乙醇溶液：把约1L 95%的乙醇加到含120g氢氧化钠（钾）的120mL水溶液中，就成为一种去污力很强的洗涤剂，玻璃磨口长期暴露在这种洗液中易被损坏。
（4）硫酸及发烟硝酸混合物：适用于特别油污、肮脏的玻璃器皿。
（5）磷酸三钠溶液：将57g磷酸三钠、28g油酸钠溶于470mL水中，为除去玻璃器皿上的碳质残渣，可将器皿在此溶液里浸泡几分钟，然后用刷子除去残渣。
100~150g/L的氢氧化钠（钾）溶液也有同样作用。
（6）10g/L EDTA 的20g/L氢氧化钠溶液：用此溶液浸泡洗净的玻璃器皿，能除去容器表面吸附的一些微量金属离子。
玻璃器皿的清洗包扎、培养基的制备及灭菌
• 清洗 • 包装 • 灭菌
洗涤剂、 洗涤剂、试管刷等
报纸、牛皮纸、专用塑料袋或器皿等 报纸、牛皮纸、
干热灭菌 湿热灭菌 紫外灭菌 过滤
玻璃器皿的清洗
器皿包扎
二、基本原理
（二）培养基简介
培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、 保存各种微生物或积累代谢产物。 保存各种微生物或积累代谢产物。 在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样， 加之实验和研究的目的不同， 加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很 多。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加 压灭菌锅内，通过加热， 压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产 生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱 生蒸汽。 尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢 然后关闭排气阀，继续加热， 出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到 而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高， 高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭 ℃的温度。 高于 菌的目的。 菌的目的。
四、操作步骤 （以配制乳糖蛋白胨液体培
养基为例） 养基为例）
实验教材 P246
蛋白质 10g 3g 5g 5g 1 ml 6g 1.8g 3g 3g 0.6 ml
计算
牛肉膏 乳糖
3× × 支 支
50ml 2 5ml 10 4
NaCl 1.6%溴甲酚紫 溴甲酚紫 蒸馏水
1000 ml 200 ml
1 × 5ml 支
三、实验器材
• 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 溶液和试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、可溶性淀粉、 KNO3、K2HPO4·3H2O、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、 葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素 的水溶液）、 KH2PO4、葡萄糖、孟加拉红（1%的水溶液）、链霉素 1%的水溶液）、1mol/L NaOH、 的水溶液）、 HCl。 （1%的水溶液）、1mol/L NaOH、1mol/L HCl。 • 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、玻 仪器和其他用品：试管、三角烧瓶、烧杯、量筒、 璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、 璃棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌 pH试纸 pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（ 试纸（ ）、棉花 锅、pH试纸（pH5.5～9.0）、棉花、牛皮纸（或铝 ）、记号笔 麻绳和纱布等。 记号笔、 箔）、记号笔、麻绳和纱布等。
器皿的洗涤包扎灭菌
玻璃器皿的洗涤、 玻璃器皿的洗涤、包扎和灭菌
指导教师： 指导教师：袁勇军 张捷 管峰
一、实验目的
1、掌握玻璃器皿的洗涤和包扎方法； 2、了解玻璃器皿的灭菌方法和原理
二、实验原理
为确保实验顺利地进行，要求把实 为确保实验顺利地进行， 验所用的玻璃器皿清洗干净。 验所用的玻璃器皿清洗干净。 为保持灭菌后和无菌状态，需要对 为保持灭菌后和无菌状态， 培养皿、吸管等进行包扎， 培养皿、吸管等进行包扎，
2、旧玻璃器皿的洗涤 试管、培养皿、三角瓶：
洗衣粉和去污粉洗刷，自来水冲洗
装有固体培养基：
刮掉，洗涤
带病原菌培养物的器皿：
先高压蒸汽灭菌，倒去培养物后再洗涤
（二）玻璃器皿的包扎
培养皿的包扎 1、培养皿的包扎 一般以5 一般以5-8套培养皿做一包 吸管的包扎 2、吸管的包扎 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 准备好干燥的吸管，在距其粗头顶端约0.5cm处 0.5cm 塞一小段1.5cm长的棉花， 1.5cm长的棉花 ，塞一小段1.5cm长的棉花，然后将吸管尖端斜放 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角， 30度角 在旧报纸条的近左端，与报纸成30度角，并将左 端多余的一段纸覆折在吸管上， 端多余的一段纸覆折在吸管上，再将整根吸管卷 入报纸，右端多余的报纸打一小结。 入报纸，右端多余的报纸打一小结。
三、实验器材 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、培养 高压蒸汽灭菌锅、试管、三角瓶、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、 皿和吸管、棉线、纱布、棉花、报纸等
四、操作步骤
）、玻璃器皿的洗涤方法 （一）、玻璃器皿的洗涤方法 1、新玻璃器皿的洗涤
在2%的盐酸溶液中浸泡数小时，用自来水冲洗干 2%的盐酸溶液中浸泡数小时 的盐酸溶液中浸泡数小时， 本次实验不要求） 净（本次实验不要求）
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌实验
玻璃器具等的清洗、烘干、包扎、灭菌一、实验目的要求1、进一步加强学习、掌握玻璃器具等器材的清洗、烘干、包扎的包扎技术。
2、为下一次的课做好器材的准备工作。
二、原理为确保实验顺利地进行，要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿、吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
灭菌原理：高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。
导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
适用于一般培养基、玻璃器皿、无菌水、金属用具。
一般培养基在121．3℃灭菌20分钟即可。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越小，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度高（160—170℃），时间长（1—2小时）。
但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烤焦，甚至引起燃烧，因而一般塑料制品不能用干热灭菌。
三、试剂和仪器（一）仪器高压蒸汽灭菌锅、电热烘箱、试管、三角瓶、培养皿和吸管、棉线、纱布、棉花、牛皮纸、报纸、硅胶塞等四、实验内容（一）玻璃器皿的清洗：l 新购的玻璃器皿的洗涤将器皿放入２％盐酸溶液中浸泡数小时，以除去游离的碱性物质，最后用流水冲净。
对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上晾干，即可使用。
l 常用旧玻璃器皿的洗涤确实无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用前后，可按常规用洗衣粉水进行刷洗；吸取过化学试剂的吸管，先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。
实验室安全实验室玻璃器皿的清洁与消
实验室安全实验室玻璃器皿的清洁与消毒实验室安全是实验室工作的基本要求之一，而实验室玻璃器皿的清洁与消毒则是确保实验室环境卫生的重要步骤。
本文将介绍一些常见的实验室玻璃器皿清洁与消毒方法，以及在实验室操作中需要注意的相关安全事项。
一、实验室玻璃器皿清洁方法实验室玻璃器皿的清洁主要包括机械清洗和化学清洗两种方法。
1. 机械清洗方法机械清洗方法主要是使用清洗剂和清洗设备进行清洗。
首先，将使用过的实验室玻璃器皿浸泡在温水中，去除其中的残留物质。
然后，使用刷子或者清洗布等辅助工具将器皿表面的污垢清除干净。
在清洗过程中，要注意使用中性清洗剂，并避免使用有色或腐蚀性的清洗剂，以免对玻璃器皿造成损坏。
2. 化学清洗方法化学清洗方法主要是使用溶液对玻璃器皿进行清洗。
常用的化学清洗剂包括稀盐酸、稀硝酸等。
在使用化学清洗剂时，应注意安全防护措施，如佩戴防护手套、护目镜等。
将玻璃器皿置于溶液中浸泡一段时间，以去除附着在器皿表面的污垢。
然后，使用去离子水或纯净水彻底冲洗器皿，以避免残留的化学物质对实验产生干扰。
二、实验室玻璃器皿的消毒方法实验室玻璃器皿的消毒是为了杀灭其中可能存在的微生物，以防止交叉感染和实验结果的误差。
1. 热气消毒热气消毒是常见的玻璃器皿消毒方法之一，主要采用高温烘箱或灭菌锅进行。
先将器皿置于烘箱或灭菌锅中，设定合适的温度和时间进行消毒。
消毒过程中要注意安全操作，避免烫伤和烫眼等意外事故的发生。
2. 化学消毒化学消毒是利用消毒液对玻璃器皿进行消毒。
常用的消毒液有酒精、过氧化氢等。
将待消毒的器皿浸泡在消毒液中，一般建议浸泡时间不少于30分钟。
消毒结束后，要使用去离子水或纯净水彻底冲洗器皿，以避免化学残留对实验产生影响。
三、实验室玻璃器皿的安全注意事项在实验室操作中，使用实验室玻璃器皿时需要注意以下几点安全事项：1. 戴好个人防护装备在清洁和消毒实验室玻璃器皿时，要戴上防护手套、实验室大衣、眼镜等个人防护装备，确保自身安全。
实验九玻璃器皿的清洗包扎培养基的制备及灭菌
对实验结果的个人见解和展望
见解1
本实验中，玻璃器皿的清洗、包扎和培养基的制备及灭菌是微生物培养的关键步骤，任 何一个环节的失误都可能导致实验失败。因此，每个步骤都需要认真对待。
见解2
通过本实验，我深刻认识到实验操作的规范性和细节的重要性。在未来的实验中，我会 更加注重操作的规范性和细节的处理。
展望
技巧
掌握正确的清洗和包扎技 巧，确保玻璃器皿干净、 干燥、无菌。
学会制备培养基
了解培养基的成分
根据实验需要，了解培养 基所需的成分，如营养物 质、水、pH调节剂等。
配置培养基
按照规定的比例和顺序， 将各成分加入到容器中， 搅拌均匀。
灭菌
将配置好的培养基进行高 温灭菌，以杀死其中的微 生物。
了解灭菌的重要性及操作方法
包扎不严密。
• 解决方法
使用足够的纱布和胶带，确保玻璃 器皿的封口严密，防止培养基泄漏 。
对实验过程的改进建议
建议1
在清洗玻璃器皿时，可以先用清水冲洗一遍，再用清洗剂清洗，最 后用清水冲洗干净。这样可以确保器皿清洗得更彻底。
建议2
在制备培养基时，可以加入适量的抗凝剂，以防止培养基凝固。
建议3
在灭菌过程中，可以增加灭菌次数或延长灭菌时间，以确保培养基完 全灭菌。
培养基的制备
准备原料
01
根据实验需要，准备好所需的原料，如牛肉膏、蛋白胨、氯化
钠等。
配置培养基
02
按照配方比例将原料加入到水中，加热搅拌至溶解，调节pH值
至备好的培养基进行高温灭菌，以杀死其中的微生物。
灭菌操作
灭菌前准备
确保灭菌锅已经清洗干净，并按照要求摆放好待 灭菌的物品。
培养皿
玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌课件
准备工具
准备清洗工具，如刷子、 洗涤剂、水桶等。
手工清洗步骤
01
02
03
04
浸泡
将玻璃器皿放入装满洗涤剂和 水的混合液中浸泡一段时间，
以松解残留物。
刷洗
使用刷子轻轻刷洗玻璃器皿表 面，注意不要划伤器皿。
冲洗
用清水彻底冲洗玻璃器皿，确 保洗涤剂和残留物被完全冲走
。
晾干
将玻璃器皿放置在干净的地方 晾干，避免直接阳光照射。
情况应及时处理。
灭菌完成后，应先关闭灭菌器 ，再打开排气阀，避免蒸汽喷
出烫伤操作人员。
灭菌过程中的防护措施
操作人员应穿戴防护服、手套 、口罩等个人防护用品。
在灭菌过程中，应保持室内通 风良好，避免室内温度过高。
对于易燃、易爆、易腐蚀的物 品，应单独存放并采取相应的 安全措施。
意外情况的应急处理
如发生意外情况，如灭菌器故障、泄漏等，应立即停止使用，并采取相应的应急措 施。
根据物品的形状、大 小和重量选择合适的 包扎材料和方法。
03
高压蒸汽灭菌原理
微生物的耐热性
微生物的耐热性
不同微生物对热的敏感程度不同，有些微生物在高温下容 易死亡，而有些则具有较高的耐热性。了解微生物的耐热 性对于确定高压蒸汽灭菌的条件非常重要。
微生物的致死温度
在一定的时间内，高于某个温度微生物会死亡。致死温度 是杀灭90%微生物所需达到的温度。
包扎玻璃器皿
为了避免在灭菌过程中破裂和污染，需要对玻璃器皿进行适当的包 扎。
装载物品
将清洗干净的玻璃器皿放入灭菌器内 ，尽量将大小不同的器皿分开摆放， 以免小的器皿被大的器皿遮挡而影响 灭菌效果。
将装有玻璃器皿的灭菌篮或灭菌盘放 入灭菌器内，并确保其放置稳定。
食品微生物—常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎
玻璃器皿的包扎
• 微生物学实验用的玻璃器皿大多数需要灭菌后才能使用，玻 璃器皿在灭菌前要先用牛皮纸或报纸包扎起来，以保护玻璃器皿 在灭菌后一段时间内仍能保持无菌状态。否则，玻璃器皿灭菌后 暴露在空气中，空气的微生物很容易进入玻璃器皿内，造成染菌 ，影响实验效果甚至导致实验失败。
玻璃器皿的包扎
1. 培养皿：洗净的培养皿烘干后每6-8套（或根据需要而定） 叠在一起，用牢固的纸卷成一筒，或装入特制的铁桶中，然后 进行灭菌。
2.移液管：
塞入棉花的作用：以免使用时将杂菌吹入其中，或不 慎将微生物吸出管外。
3.试管和锥形瓶：试管和三角瓶都需要做合适的棉塞， 棉塞可起过滤作用，避免空气中的微生物进入容器。
棉塞制作
1、注意所有包好的器皿，只有灭菌后使用时才可 打开包装，以免被空气中的杂菌污染。 2、如使用干热灭菌，温度不可高于180℃，以防纸 张和棉花烤焦。
为什么玻璃器皿要塞棉花？
实训一 常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌
实训一常用玻璃器皿的清洗、包扎及干热灭菌一、实验目的1、熟悉微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品；2、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗和包扎方法；3、了解干热灭菌原理，掌握玻璃器皿干热灭菌操作技术。
二、实验原理（一）微生物常用器皿、物品微生物实验常用玻璃器皿的名称、规格及配套使用物品介绍，见表1-1。
表1-1 微生物实验常用玻璃器皿的名称和规格接上表1-1常用玻璃器皿用途：1、烧杯用于盛装、转移、配制、加热培养基及试剂。
2、三角瓶用于贮盛生理盐水或培养基，底大口小，以便加塞，并能平稳放置。
3、容量瓶用于准确地配制一定浓度的溶液。
4、量筒用于量取液体培养基、蒸馏水等。
5、移液管用于吸取试剂、培养液和生理盐水等。
6、培养皿主要用于细菌分离和培养，由底、盖两部分组成，底、盖大小应合适，不宜过紧或过松，皿盖高度较皿底稍低，皿底应平正。
7、漏斗分为长颈和短颈两种，常用口径为60-150mm，用于分装培养基、溶液或过滤。
8、滴定管分为酸式和碱式两种，用于准确量取或滴定酸性/碱性溶液。
9、试剂瓶分为广口和小口两种，用于贮备试剂，有棕色和无色两种，前者盛避光试剂。
10、试管用于盛平板用的培养基和稀释用的无菌水、做斜面培养基用以及用于各种生理生化鉴定试验。
不同规格试管的用途，没有严格的划分，以便于工作、节省材料为原则。
11、载玻片和盖玻片用于微生物涂片观察及标本制备。
12、坩埚用于固体物质的灼烧，溶液的蒸发、浓缩或结晶。
13、研钵用于研磨固体物质或进行粉末状固体物质的混合。
14、玻璃棒直径3-5mm，用于搅拌液体。
15、玻璃珠常用中性硬质玻璃制成，直径3-4mm和5-6mm，用于打碎组织、样品和菌落等。
其他微生物实验常用物品名称、常用规格、型号介绍见表1-2。
表1-2 其他微生物常用物品名称、常用规格、型号接上表1-2（二）微生物常用玻璃器皿清洁清洁的玻璃器皿是得到正确实验结果的重要条件之一。
清洗的目的就在于除去玻璃器皿上的污垢（灰尘、油垢、无机盐类等物质），使其不能妨碍得到正确的实验结果。
玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌
实验一、玻璃器皿的洗涤、包扎、干燥及灭菌一、目的要求1、掌握实验室常用玻璃器皿的清洗、干燥和包扎方法。
2、了解湿热和干热灭菌的原理,并掌握有关的操作技术。
二、原理为确保实验顺利地进行,要求把实验所用的玻璃器皿清洗干净并干燥，微生物实验还要进行灭菌。
为保持灭菌后和无菌状态，需要对培养皿，吸管等进行包扎，对试管和三角瓶等加塞棉塞。
这些工作看起来很普通简单，但如操作不当或不安操作规定去做，则会影响实验结果，甚至会导致试验的失败。
1、玻璃器皿的清洗①不能用有腐蚀作用的化学试剂，也不能使用比玻璃硬度大的物品来擦拭玻璃器皿；新的玻璃器皿应用2%的盐酸溶液浸泡数小时，用水充分洗干净。
②用过的器皿应立即洗涤。
③强酸，强碱，琼脂等能腐蚀，阻塞管道的物质不能直接倒在洗涤槽内，必须到在废物缸内。
一般的器皿都可用去污粉，肥皂或配成5%的热肥皂水来清洗。
油脂很重的器皿应先将油脂擦去。
沾有煤膏，焦油及树脂一类物质，可用浓硫酸或40%氢氧化钠或用洗液浸泡；沾有蜡或油漆物，可加热使之熔融后揩去，或用有机溶剂(苯，二甲苯，汽油，丙酮，松节油等)揩去。
④洗涤后的器皿应达到玻璃壁能被水均匀湿润而无条纹和水珠。
2、器皿包扎为了灭菌后仍保持无菌状态，各种玻璃器皿均需包扎。
3、干燥做实验应经常要用到的仪器应在每次实验完毕后洗净干燥备用。
用于不同实验对干燥有不同的要求，一般定量分析用的烧杯、锥形瓶等仪器细净即可使用，而用于精密分析的仪器很多要求是干燥的，有的要求无水痕，有的要求无水。
应根据不同要求进行干燥仪器。
（1）、烘干洗净的仪器控去水分，放在烘箱内烘干，烘箱温度为105~110℃烘1小时左右。
也可放在红外灯干燥箱中烘干。
此法适用于一般仪器。
称量瓶等在烘干后要放在干燥器中冷却和保存。
带实心玻璃塞的及厚壁仪器烘干时要注意慢慢升温并且温度不可过高，以免破裂。
量器不可放于烘箱中烘。
硬质试管可用酒精灯加热烘干，要从底部烤起，把管口向下，以免水珠倒流把试管炸裂，烘到无水珠后把试管口向上赶净水气。
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实验玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌
一、目的要求
1、了解高压蒸汽灭菌的基本原理。
2、学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理
灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物，灭菌的方法分物理和化学灭菌法两大类。
本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。
加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。
通过加热使菌体内?蛋白质凝固变性，从而达到杀菌目的。
蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。
在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。
高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭菌方法。
这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。
当蒸汽压力达到1.05kg/cm2时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～30min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。
一般培养基、玻璃器皿以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。
干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。
一般是把待灭菌的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至160～170℃维持1～2h。
火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。
对于接种环，接种针或其它金属用具，可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。
此外，在接种过程中，试管或三角瓶口，也采用通过火焰而达到灭菌的目的。
三、实验器材
1、器皿：平皿（10个/组），1ml吸管（9支/组），试管18×180（10支/组），试管（15×150）（12/组），三角锥瓶500ml（3个/组）、三角锥瓶500ml（内装蒸馏水250ml），10ml吸管
2、其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽菌锅，电烘箱，线绳,毛刷等
四、操作方法
（一）玻璃器皿的清洗包扎
玻璃器皿在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂菌所污染。
1、将平皿用纸包扎好，以5～8个为一包；
2、吸管应在管口约0.5厘米以下的地方塞入少许长约1.5厘米的棉花，以拉直的曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去。
然后，将吸管尖端放在4-5厘米宽的长条纸的一端约与纸条成45°角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将吸管卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。
3、三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；
4、试管塞上棉花塞，多支扎成一捆外用牛皮纸或两层旧报纸与细线包扎好。
（二）干热灭菌
将包扎好的试管、平皿、三角锥瓶放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。
将烘箱的温度升至160～170℃并恒温1～2h，注意勿使温度过高，超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。
如果是为了烤干玻璃器皿，温度为120℃持续30分钟即可。
温度降至60～70℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。
（三）高压蒸汽灭菌
1、加水：打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。
立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。
注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。
2、装料、加盖：将待灭菌物品放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。
3、排气：打开排气口(也叫放气阀)。
用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持5min，使锅内冷空气完全排净。
4、升压、保压和降压：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。
当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到要求（一般培养基和器皿灭菌控制在121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近“0”时，打开放气阀。
注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。
五、思考题
1、吸管在灭菌前应如何处理？
2、高压蒸汽灭菌开始之前，为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后，为什么要待压
力降到0时才能打开排气阀，开盖取物？。