斑马鱼的发育历程

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模式动物斑马鱼

模式动物斑马鱼斑马鱼（Danio rerio）属于辐鳍亚纲（Actinopterygii）鲤科（Cyprinidae）短担尼鱼属（Danio）的一种硬骨鱼，原产于南亚，是一种常见的热带观赏鱼，因其体侧具有斑马一样暗蓝与银色相间的纹条而得名。

斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。

可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。

斑马鱼发育迅速，在28.5℃培养条件下受精后约40min完成第一次有丝分裂，之后大约每隔15min分裂一次，24h后主要器官原基形成，相当于28d的人类胚胎，幼鱼孵出后约3个月达到性成熟。

雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。

胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。

受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。

一、斑马鱼的品系经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。

目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。

AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。

Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。

WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。

此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。

这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。

二、斑马鱼突变品系的筛选斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。

ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。

射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。

研究斑马鱼的胚胎发育及其关键期发育

研究斑马鱼的胚胎发育及其关键期发育斑马鱼作为实验室中常用的模式生物之一，其相对简单的生殖和发育过程使得它成为了人们研究胚胎发育的重要对象之一。

斑马鱼的生殖过程非常规律，整个胚胎发育周期为24小时左右，孵化出的幼鱼期只有3天时间，因此研究斑马鱼胚胎发育的关键期是极为重要的。

1.斑马鱼的繁殖周期按照斑马鱼的繁殖周期，胚胎发育可分为四个阶段：受精卵期、原肠胚期、中胚层期和胚胎期。

在受精卵期，由于胚胎的细胞数量较少，细胞分化还未开始，因此对于实验研究比较有利。

而原肠胚期则是胚胎细胞分化的关键时期，不同类型的细胞开始出现，胚胎的体轴形成也在这一时期完成。

中胚层期则是各个器官的形成时期，器官原基逐渐形成并开始发育。

胚胎期则是细胞分化和器官形成的阶段，各种器官开始具备其特定的功能。

2.斑马鱼的胚胎发育与研究方法在研究斑马鱼的胚胎发育过程中，有两种经典的实验方法：一种是观察胚胎的形态，另一种则是分子遗传学方法。

观察胚胎形态的方法包括显微镜观察、形态学分析、各种染色法和微剖检查等。

分子遗传学方法则包括DNA微注射、利用Tol2系统进行基因转染、利用Morphant植入进行基因敲除和利用各种转录因子进行基因表达调控等。

这些方法能够全面深入地研究斑马鱼发育过程中的各个细节，为发育生物学研究提供了成熟的基础。

3.斑马鱼的胚胎发育关键期胚胎发育关键期即是指在这些时期，斑马鱼胚胎发育过程中出现了大量的关键分化事件，从而对胚胎发育产生了决定性的影响。

比如，在受精卵期，精卵和精子合并形成的原始受精卵很快分裂成数千个相同大小的细胞，进入囊胚阶段，随后囊胚开始对细胞进行分化。

在这个时期，实验研究可以利用形态和分子生物技术，来全面了解斑马鱼胚胎发育基本的细胞分化过程。

原肠胚期则是一个重要的发育关键期，这时各个器官开始发育，形成胃肠道和脊髓，并且产生了一些重要的基因表达调控。

中胚层期和胚胎期是一个比较综合和复杂的发育时期，不同器官之间紧密联系和相互影响，分化程度和细胞命运已经初步确定，此时的特定基因已经被表达并进入各个器官的形态调控中。

模式动物斑马鱼

斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。

可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。

雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。

胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。

受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。

一、斑马鱼的品系经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。

目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。

AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。

Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。

WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。

此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。

这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。

二、斑马鱼突变品系的筛选斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。

ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。

射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。

模式动物斑马鱼

斑马鱼个体小，易于饲养，成体长4-5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。

可在有限空间里养殖相当大的群体，可满足样本需求量大的研究。

雌雄鱼通过调控光周期控制14:10（光照:黑暗）产卵时间，成熟鱼每周可产卵一次，一尾雌鱼每次可产卵100-300枚。

胚胎体外受精，体外发育，胚体透明，易于观察。

受精卵直径约1mm，易于进行显微注射和细胞移植等操作。

一、斑马鱼的品系经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼基因数据库-ZFIN （http://zfin/org）里有相关的资料可供查询和下载。

目前研究中常用的斑马鱼野生型品系主要为AB 品系、Tuebingen（Tu）品系、WIK 品系，斑马鱼基因组计划所用品系是Tu。

AB 品系是实验室常用的斑马鱼品系，由单倍体细胞经早期加压法获得。

Tu品系斑马鱼具有胚胎致死突变基因，用于基因组测序前敲除该致死突变基因。

WIK品系较Tu品系具有更多的形态多样性。

此外，还保存有3000多个突变品系和100多个转基因品系。

这些品系资源对于利用斑马鱼开展各种科学研究起着很大的推动作用。

二、斑马鱼突变品系的筛选斑马鱼突变的方法主要有三种：已基亚硝脲（ENU）化学诱导、γ或χ射线照射和插入诱变。

ENU是一种DNA烃基化试剂，在生殖细胞减数分裂前诱导碱基对的替换，诱导产生的突变率为0.1%-0.2%，涉及单个基因的突变。

射线照射导致染色体大片段的缺失或染色体重排，产生突变率达1%。

关于斑马鱼的发育历程课件

关于斑马鱼的发育历程
合子期卵裂期囊胚期原肠期早幼期孵化期咽囊期体节期
合子期（0-0.75h）
新受精的卵子直至其第一次卵裂发生，称合子期（图3），约受精后 40分钟。受精时形成的合子直径约0.7mm。合子期只含有一个分期，但其间也发生很多变化，可以很容易划分这一时期（见 Hisaoka and Battle,1958）。
=250μm
束时卵黄消失处。比例尺
头示尾芽，尾芽腹侧（即此图左侧）的显著区域显示外包结
9h 10h
J 90%K 90%L
C
F 70%75%-
8.4h
G
）增大为小膨出（箭头所示）；；：：尾芽期（外包期腹
侧）观，，箭前头侧示脊小索膨前出板，（短对箭比
层期在（其一侧）；背：侧观
，外包期（箭头示轴中），在一些胚胎中可见尾芽胚层与中线边界，近轴中胚
5.7h
H I 80%-
8h
；外：包期（外包），期（箭头示腹），侧：薄的排外泄包区ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ；腹：侧观
内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。

斑马鱼的发育历程ppt课件

内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。
1.25 h）；D：16-细胞期(1.5 h)；E：32-细胞期（1.75 h）；F：64-细胞期（
2 h）。比例尺=250μm
ppt课件
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囊胚期（2.25-5.25h）
囊胚期指从128-细胞期或第8次止这一段时期。此期
有很多重要事件发生：胚胎进入囊胚中期转变（ midblastula transition, MBT）、卵黄合胞体层（the yolk syncytial layer, YSL）形成、外包（epiboly）开始。外包将一直持续到原肠期。
）
C
F 70%8h
5.25h B
A 50%-
体节期（10-24h）
此期发生了一些有趣的形态学变化：体节发生、器官原基可见、尾芽更为显著、胚体延长（图15）、AP和DV轴变得明确、第一次出现细胞发生形态分化以及胚体开始运动。此期可称“尾芽期”，因为在此整个时期，尾芽一直存在于不断伸长的胚轴末端。
ppt课件
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囊胚期胚胎正面观。A：256-细胞期（2.5h）；B：高囊胚期（3.3h）；C：高

斑马鱼在发育生物学中的研究进展

斑马鱼在发育生物学中的研究进展斑马鱼（Danio rerio）是一种常见的小型热带淡水鱼类，也是一种重要的生物模型，因为它们易于繁殖和维护，具有透明胚胎，容易观察和操纵发育过程的特点。

在过去的几十年里，许多生物学家使用斑马鱼进行发育生物学研究，探寻分子机制、细胞过程、组织发生、器官形成和行为等方面的问题。

本文将介绍斑马鱼在发育生物学中的研究进展及其应用。

1. 斑马鱼的发育过程斑马鱼的发育过程可分为四个主要阶段：受精、分裂、胚胎发育和幼鱼期。

受精后，卵细胞形成受精卵，随后通过有丝分裂发育成为多个细胞，其中包括前期胚胎、球胚和盘胚。

在这些早期阶段，斑马鱼的胚胎透明，发育过程可以通过显微镜直接观察。

在幼鱼期，斑马鱼游泳、摄食和生长，逐渐成为成年鱼。

2. 斑马鱼的发育成因对于斑马鱼的发育成因的研究可以通过突变体筛选、遗传分析、基因克隆等方法进行。

许多突变体显示了不同的发育缺陷，例如胃肠道畸形、神经系统缺陷、鳍/肢体畸形等。

通过对这些突变体的遗传分析和基因克隆，科学家发现了很多与斑马鱼发育相关的基因，如sonic hedgehog、hox等。

另外，近年来，利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，科学家可以精确地改变斑马鱼基因组中的某些位点，以研究特定基因功能或疾病模型等方面的问题。

这种方法加速了斑马鱼发育生物学的研究和应用。

3. 斑马鱼的组织和器官形成斑马鱼的器官发生过程是发育生物学的热点研究之一。

在胚胎发育过程中，骨骼、肌肉、心脏、肝脏、胰腺等组织和器官的形成令人印象深刻。

例如，斑马鱼心脏的发育非常相似于人类的心脏发育过程。

斑马鱼心脏发育的详细解剖和功能特征使得我们可以更好地理解人类心脏疾病，包括先天性心脏缺陷和心肌病等。

在肌肉结构和功能方面，斑马鱼是一种适应游泳的生物模型。

它们的鱼体非常透明，我们可以观察和操纵它们的鱼肌和鱼晶体肌的发育和生理功能。

研究斑马鱼肌肉发育和运动调节机制有助于解决人类运动性疾病诊断和治疗的问题。

斑马鱼的发育历程参考幻灯片

正因为囊胚期没有囊胚腔，原肠期既没有消化道（archenteron），也没有胚孔（blastopore）。DEL细胞在胚层边缘进行内卷，因而发挥了胚孔的作用。内卷通过将胚层向后折叠形成胚环。因此，胚环内由两个胚层：位于上方的称上胚层（epiblast），在整个原肠期继续给位于下方的下胚层（hypoblast ）提供细胞。注意到上、下胚层这些术语可同样描述鸟类胚层结构，但所命名的胚层在这两种脊椎动物中似乎完全不同。
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囊胚期胚胎正面观。A：256-细胞期（2.5h）；B：高囊胚期（3.3h）；C：高囊胚期和椭形期之间的转变（3.5h）；D：椭形期和球形期之间的转变（3.8h ）；E：穹顶期（4.3h）；F：30%-外包期（4.7h）。比例尺=250μm
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原肠期 (5.25-10h)
外包运动的继续，以及形态发生细胞的内卷（ involution ）、集合（ convergence）和延伸（extension）运动的发生，产生了原始胚层和胚轴。
此期用“实囊胚”（ “stereoblastula”）称之可能更准确，因为这一
术语意味着胚胎还没有形成囊胚腔（blastocoele），而事实正是如此（图8），仅在胚盘深层细胞之间存在不规则的间隙。卵裂取向不确定，比卵裂期亦更不规则。此后卵裂产生的子细胞从整齐的细胞面伸出，不论从侧面还是从顶面观都是如此，因而确定此期分期用细胞大小判断比用细胞位置判断更为有效。从动物极观，胚盘呈轻度椭球形（尤在早期）。
C
F 70%8h
包期（），箭头示腹侧薄的排泄区；：
外包期（
：
外包期（
），：
外包期腹侧观，：

斑马鱼遗传和发育生物学

斑马鱼遗传和发育生物学斑马鱼是一种常见的实验动物，在遗传和发育生物学研究中被广泛使用。

它们的透明胚胎和易于培养的特点使得科学家们可以轻松地观察胚胎发育过程并进行基因操作。

本文将介绍斑马鱼的遗传和发育生物学方面的研究进展。

一、斑马鱼基因组斑马鱼基因组已经被完整测序，包括四组染色体，共有约2.7亿个碱基对。

与人类基因组相比，斑马鱼有很多基因是双倍体，这使得它们成为研究基因功能和基因互作的理想实验动物。

另外，斑马鱼的基因序列也为研究同源基因在不同物种之间的保守性提供了便利。

在斑马鱼基因组中，有很多基因与人类疾病相关。

例如，斑马鱼中的缺氧诱导因子1α基因与心脏病相关。

通过研究这些基因，我们可以更好地理解这些疾病的发病机制和猝死风险等问题。

二、斑马鱼的发育过程斑马鱼的发育过程可以分为四个阶段：受精、卵裂、胚胎形态发生和器官发育。

斑马鱼的卵精细胞很大，并且在受精后会形成球形胚胎。

在接下来的几天里，胚胎会不断分裂，最终形成一个长约2毫米的斑马鱼幼虫。

斑马鱼的发育速度非常快，只需要两天就可以从受精卵变成成熟的斑马鱼。

这使得科学家们可以在短时间内观察多代斑马鱼的发育过程，从而更好地理解发育中的生物学问题，例如细胞分裂、组织形态、器官发育等。

三、斑马鱼的基因操作技术基因编辑技术是现代生命科学的核心工具之一。

通过基因编辑技术，科学家们可以精准地改变一个或多个基因，从而研究基因在发育和疾病中的功能。

斑马鱼是一个理想的基因编辑模型，因为它们的受精卵非常透明，可以轻松地将DNA和RNA注入卵细胞内，或通过转基因方法将外源基因导入受精卵。

目前，常用的斑马鱼基因编辑技术包括CRISPR/Cas9系统和锌指核酸技术。

这些技术已经成功地用于改变斑马鱼基因，包括使其发生突变、生成新的融合蛋白和标记蛋白等。

四、斑马鱼的疾病模型斑马鱼可以被用作人类疾病的研究模型，例如癌症、心脏病、神经疾病等。

斑马鱼和人类之间有很多相似之处，例如生命早期阶段的肌肉和神经系统的形成、免疫系统的发育等。

斑马鱼性腺促熟及早期发育模式

斑马鱼性腺促熟和早期发育模式XXX,YYY,ZZZ一、目的与要求：1、掌握斑马鱼性腺促熟和产卵调控技术。

2、加深硬骨鱼早期形态发育模式的理解。

二、实验内容：（一）斑马鱼性腺促熟和产卵调控。

1、斑马鱼特性：斑马鱼一般4月龄性成熟，5月龄鱼繁殖较好；繁殖周期短，一般7天左右。

雌雄分辨：雌性（偏银灰色，体形丰满，腹部膨大、松软，仰腹可见有明显的卵巢轮廓，手摸富有弹性）；雄性（偏柠檬色，腹部扁平，身材显得修长）。

【如图一、图二】图一：雄鱼图二：雌鱼精、卵体外受精，体外发育，且速度快。

发育速度与温度密切相关：在25℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需36h；在28℃的培养条件下，从受精卵到孵化约需24h，即胚胎发育成熟。

2、斑马鱼繁殖准备：将亲鱼雌、雄分开饲喂2～3天（要在饲养箱中加一玻璃隔板，将雌、雄分开，但同时相互之间又要能够看到），繁殖时将雌、雄按1：1或2∶1比例放入产卵池中进行产卵受精。

在此过程中一般采用10h光照，14h黑暗的光周期。

斑马鱼一般在混合的次日凌晨产卵，为防止亲鱼吞噬鱼卵，可用网孔2～3mm的网将亲鱼限制在产卵池的上半部活动，以防止亲鱼吞吃鱼卵。

每条雌鱼可产卵300～1000粒。

（二）斑马鱼早期发育观察：斑马鱼早期胚胎发育主要有以下七个时期（附有相应的时间）：（1）合子期Zygote Period(0-0.75h)（2）卵裂期Cleavage Period(0.75-2.2h)（3）囊胚期Blastula Period(2.25-5.25h)（4）原肠胚期Gastrula Period(5.3-10h)（5）体节期Segmentation Period(10-24h)（6）咽期Pharyngula Period(24-48h)（7）孵化期Hatching Period(48-72h)斑马鱼各时期的特征及图片如下：（1）合子期：特征：卵质由植物极向动物极一端流动，最后在卵的动物端形成一个充满卵质的“帽子”这标志着胚的形成。

刘永飞--斑马鱼的胚胎发育

Three: Blastula Period (2.25-5.25h)
We use the term blastula to refer to the period when the blastodisc begins to look ball-like, at the 128-cell stage, or eighth zygotic cell cycle, and until the time of onset of gastrulation,ca. cycle 14.
斑马鱼的特点
• • • • • • 成年鱼个体小，易于饲养发育快速、性成熟期短、繁殖力强胚胎体外发育，易于观察和操作较完善的胚胎和遗传学操作技术基因组序列的注释已经完成品系资源丰富
Stages of Embryonic Development of the Zebrafish
Seven Broad Zygote Cleavage Blastula Gastrula Segmentation Pharyngula Hatching
Stages During the Cleavage Period
Two-cell stage (0.75h) Four-cell stage (1 h) Eight-cell stage (1.25h) Sixteen-cell stage (1.5h) Thirty two-cell stage (1.75h) Sixty four-cell stage (2 h)
Stages During the Zygote Period
One-cell stage
The zygote period. A:a few minutes after fertilization. B:about 10 min after fertil-i zation.

斑马鱼的发育历程

原肠期发育。A：50%-外包期（5.25h）；B：胚环期（5.7h ）；C：动物极观胚环期 D：胚盾期（6h），胚盾标志背侧，是胚环左侧增厚区域；E：动物极观胚盾期，箭头指示胚盾；F：70%-外包期（7.7h），G：70%-外包期腹侧观，H： 75%-外包期（8h），箭头示腹侧薄的排泄区；I：80%-外包期（8.4h）背侧观，箭头示轴中胚层与中线边界，近轴中胚层在其一侧；J：90%-外包期（9h），在一些胚胎中可见尾芽（箭头所示）；K：90%-外包期腹侧观，前侧脊索前板（对比G）增大为小膨出；L：尾芽期（10h），箭头示小膨出，短箭头示尾芽，尾芽腹侧（即此图左侧）的显著区域显示外包结束时卵黄消失处。比例尺=250μm
此期用“实囊胚”（ “stereoblastula”）称之可能更准确，因为这
一术语意味着胚胎还没有形成囊胚腔（blastocoele），而事实正是如此（图8），仅在胚盘深层细胞之间存在不规则的间隙。卵裂取向不确定，比卵裂期亦更不规则。此后卵裂产生的子细胞从整齐的细胞面伸出，不论从侧面还是从顶面观都是如此，因而确定此期分期用细胞大小判断比用细胞位置判断更为有效。从动物极观，胚盘呈轻度椭球形（尤在早期）。
此期的命名注意到了咽弓原基，其早期存在但不易分辨出。咽弓在此第二天从耳囊腹侧可见约耳囊两倍长的原基区域迅速发育。七个咽弓均由此原基发育，其间一个显著的边界（图31箭头）出现于咽弓2和3之间。此边界甚为重要，因为随后其前面的咽弓（颚（mandibular）、舌（hyoid）弓）将形成下颌（jaws）和腮盖（operculum），而其后面的咽弓（腮（branchial）弓）将形成腮（gills ）。
内卷运动的开始意味着原肠期的开始，目前可以说是发生于50%-外包时（图 11A）。结果在达到50%-外包后的数分钟内出现了一个增厚的外围区域，称作胚环（germ ring），几乎与此同时完全包围了囊胚边缘（图11B，及C箭头所指）。随后集合运动几乎同样快速地沿胚环产生一个局部的堆积，称胚盾（ embryonic shield , 图11D，及E箭头所指）。在发生这些事件期间，外包暂时中止，但胚盾形成后外包又继续。胚层边缘沿卵黄细胞延伸直至将其完全包绕（图11F-L）。其延伸近乎恒定速度进行，约每小时包绕卵黄细胞的15% ，这也提供了大部分原肠期分期的有用指标（图12）。

斑马鱼的软骨发育及其矿化过程

清华大学毕业设计论文摘要斑马鱼，作为发育生物学研究的最佳脊椎动物模型，为人类的相关研究提供了重要的参考依据。

本文主要讨论了斑马鱼幼体的软骨，特别是脊椎软骨的发育过程及其软骨的超微结构特点。

为转基因、基因突变鱼类的研究提供了对比依据。

本文主要讨论了斑马鱼脊椎软骨的发育进程，以及软骨细胞特别是脊索旁软骨的排列，形貌，大小及其显微结构特点和中胚层分化的显微形貌。

斑马鱼脊椎软骨在配卵后2～3天开始发育，围绕在脊索周围，并逐渐向神经管和血管方向延伸。

斑马鱼脊椎软骨沿体节发育，腹部以前的体节在6天已基本分化为软骨细胞，并且随着时间的推移，沿体节向尾部方向的生骨节逐步分化为软骨细胞，在1个半月左右的时间，软骨组织的分化基本完成。

斑马鱼的软骨组织排列整齐，大多数细胞大小在5－20μm范围内。

斑马鱼的软骨组织为透明软骨，胶原纤维为II型胶原，没有典型的周期结构，含量很少。

在TEM的观察中发现，斑马鱼的肌肉组织分化较早，在3天已基本分化完成。

而体干部的脊索旁仍为中胚层的间叶细胞，为软骨细胞的原基，在分化成软骨细胞的过程中，首先是在形状和排列上趋于整齐和规则。

斑马鱼的骨化方式为软骨骨化。

软骨细胞的细胞质中富含大量的线粒体和内质网。

在细胞质中还有大量直径为100-400nm的囊泡，紧密排列在一起，起传输物质的作用。

此外，脊髓处的细胞，其细胞核较大，细胞质很少，有别于软骨细胞。

并且该处细胞有部分已死亡，被其它细胞所代替。

关键词：软骨细胞，发育，显微结构- 1 -清华大学毕业设计论文AbstractZebrafish provides an important referenced foundation for the relative research as the best pattern of vertebrate in developing biology. In this paper the process of development and the ultrastructure of the cartilage especially the parachordal cartilage in zebrafish larva are investigated . And that supply the contradistinctive basis for the research about transgenic and gene mutation fishes.Here we investigate the developing process of parachordal cartilage and chondrocyte arrangements,shapes ,size,and ultrastrcture .In zebrafish parachordal cartilage begin to form at 2-3 days postfertilization ,and surround the notochord and extend gradually to spinal cord and dorsal aorta. Parachordal cartilage develop along somite and at 6 days postfertilization the somite before venter have differentiated and all accomplish differentation on the whole about at one and a half month postfertilization .The chontrocytes arrange regular .The size of chontrocytes is between 5-20μm mostly. In zebrafish the cartilage is hyaline cartilage and the collagen fibrils is predominantly II type fibrils. And that are relatively thin and do not display the characteristic 67nm banding.We discovered that the differentiation of musculature is more earlier than cartilage by TEM and that accomplished basically at 3 days postfertilization. During the differentiation of cartilage the shape and arrangement of mesenchymal cell in mesoblast go to orderliness and regular gradually at first. With the electron microscope ,the active cartilage cell is seen to contain numerous slick endoplasmic reticulum,mitochondria and vesicles which arrange together in order and the diameter of these vesicles is about 100-400nm, transmitting the substance. Furthermore, the nucleolus of spinal cord cells is more larger and we also can observe that some cells have dead.Keywords : cartilage ,development, ultrastrcture- 2 -清华大学毕业设计论文第一章. 前言由于软骨细胞所致的成骨活动发生较早，所以对斑马鱼软骨发育的研究在骨损伤修复过程中对骨力学功能恢复有较大意义。

斑马鱼实验报告

斑马鱼胚胎发育实验报告斑马鱼(zebra fish)，体长约4公分，具暗蓝与银色纵条纹，由于其基因与人类87%相似，因此广泛应用与生命科学的研究。

对水质要求不高，孵出后约3个月达到性成熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。

卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。

发育温度要求在25-31℃之间。

斑马鱼的繁殖周期约7天左右，受精卵经2-3天可孵出仔鱼，一年可连续繁殖6-7次，而且产卵量高。

斑马鱼的胚胎发育分为7个阶段：1.合子期；2。

分裂期；3.囊胚期；4.原肠胚期；5.体节期；6.咽囊期；7.孵化期。

1.合子期：合子是一个包括卵黄和细胞质的半透明混合物，在动物极存在一个小的清晰的细胞质断层，即细胞泡的残余。

2.卵裂期:该时期的特点是细胞分裂间期短；细胞变小；不等裂。

斑马鱼的受精卵为端黄卵，卵裂局限于胚盘部分，为不完全卵裂。

斑马鱼受精后40分左右卵裂开始，平均约每隔15分卵裂一次。

3.囊胚期：从第八次卵裂开始，就进入囊胚期，与其他真骨鱼不同的是，斑马鱼的囊胚期不形成囊胚期腔，只在胚盘的下层细胞的一些小的细胞形成一些细胞外间隙；同时细胞分裂周期开始延长，标志着中胚囊转换开始。

4.原肠胚期：原肠作用是指囊胚细胞有规则的移动，在此时期斑马鱼的生殖层开始形成，斑马鱼的原肠运动主要为外包。

5.体节期：最显著的特征是近轴中胚层节律性分节形成体节。

此外，还有眼原基和耳原基开始出现：脑神经外胚层变厚；脊索细胞开始延展到胚胎尾部6.咽囊期：体轴从原来的弯曲变为伸直；鳍条开始发育7.孵化期：完成基本器官系统的快速形态发生。

以下是对各时期鱼卵的观察记录：左上和左下示未分裂情况合子期右下示1细胞时期示1细胞时期示64至1000细胞时期示。

斑马鱼的发育历程

1.25 h）；D：16-细胞期(1.5 h)；E：32-细胞期（1.75 h）；F：64-细胞期（
2 h）。比例尺=250μm
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6
囊胚期（2.25-5.25h）
囊胚期指从128-细胞期或第8次合子细胞分裂开始形成球形胚盘直到第14次卵裂开始原肠期为止这一段时期。此期
有很多重要事件发生：胚胎进入囊胚中期转变（ midblastula transition, MBT）、卵黄合胞体层（the yolk syncytial layer, YSL）形成、外包（epiboly）开始。外包将一直持续到原肠期。
正因为囊胚期没有囊胚腔，原肠期既没有消化道（archenteron），也没有胚孔（blastopore）。DEL细胞在胚层边缘进行内卷，因而发挥了胚孔的作用。内卷通过将胚层向后折叠形成胚环。因此，胚环内由两个胚层：位于上方的称上胚层（epiblast），在整个原肠期继续给位于下方的下胚层（hypoblast ）提供细胞。注意到上、下胚层这些术语可同样描述鸟类胚层结构，但所命
因其高度可折射的胞质颗粒，孵化腺细胞是整个咽囊期心包区域的重要特征。
咽囊期前几小时，胚胎继续始于15h的快速伸长，但随后伸长速度突然下降。这一变化的发生时间约在31-32h，大约和上文讨论过的尾部形态伸直的结束有关。新的伸长速度一直保持到余下的胚胎发生时间。
斑马鱼的发育历程
刘婷婷
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1
合子期卵裂期囊胚期原肠期
早幼期孵化期咽囊期体节期
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2
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3
合子期（0-0.75h）
新受精的卵子直至其第一次卵裂发生，称合子期（图3），约受精后 40分钟。受精时形成的合子直径约0.7mm。合子期只含有一个分期，但其间也发生很多变化，可以很容易划分这一时期（见 Hisaoka and Battle,1958）。