实验室检测畜禽主要病毒性疾病样品的采集_运输及选择

存，如需长期保存则置于－２０ ℃以下。 ２．１．４ 乳汁样品 的 保 存。 用 作 血 清 学 检 测 的 乳 汁 样品不可冻 藏、加 热 或 者 是 剧 烈 振 荡，不 能 及 时 送 达实验室的可加入 防 腐 剂，但 要 进 行 病 毒 中 和 试 验
病死动物；并 发 症 明 显 的，采 集 有 并 发 症 的 动 物 样 的乳汁样 品 在 保 存 时 不 可 添 加 防 腐 剂。 乳 汁 样 品
在流行病学调 查 过 程 中，现 有 的 技 术 和 手 段 均 根据不同使用目的 选 择 性 加 入 复 合 抗 生 素，冷 藏 保
不可能对整个养殖 群 体 进 行 操 作，所 以 检 测 的 直 接 对象是具体 的 送 检 样 品，送 检 样 品 的 质 量、代 表 性 或是否满 足 检 测 要 求 等 方 面 直 接 关 系 到 检 测 结 果 的可靠性。如病毒学检测应采自具有普遍特征的
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《上 海 畜 牧 兽 医 通 讯 》 ２０１４ 年 第 ６ 期
实验室检测畜禽主要病毒性疾病样品的采集、运输及选择
杨 德 全１ 李 宝 龙２ 鞠 厚 斌１ 葛 菲 菲１ 刘 健１ 周 锦 萍１
（１ 上海市动物疫病预防控制中心 上海 ２０１１０３ ２ 上海市嘉定区农产品检测中心 上海 ２０１８００ ）
３．１ 主要 家 畜 病 毒 性 疾 病 进 行 分 子 生 物 学 检测时样品的选取
３．１．１ 口蹄疫病 毒。 口 蹄 疫 病 毒 在 病 畜 的 水 疱 皮 内及其淋巴液中含量最高 。 〔５〕 一般采取猪、牛、羊 的 水疱皮 或 水 疱 液 为 病 料，对 于 病 死 猪 也 可 选 取 心 脏。对健康及康复牛可取 Ｏ－Ｐ 液进行检测。 ３．１．２ 猪繁殖与 呼 吸 综 合 征 病 毒。 猪 繁 殖 与 呼 吸 综合征病 毒 最 大 的 危 害 是 侵 害 呼 吸 系 统 和 免 疫 系 统，造成免 疫 抑 制，因 此，在 实 验 室 检 测 中，必 须 包 括淋巴结和肺脏样本。在发病高热期的猪血液中 也能检测到病毒。 ３．１．３ 猪瘟病毒。 猪 瘟 病 毒 在 扁 桃 体 （靶 器 官）中 的含量是最 高 的，因 此 扁 桃 体 是 首 选 病 料，其 次 是 脾、肾和回肠远端 。 〔５〕 也可取其他重要淋巴结，必 要 时可以取部分肺脏。 ３．１．４ 猪圆环病 毒 Ⅱ 型。 猪 圆 环 病 毒 在 临 床 上 的 危害，主要 表 现 为 免 疫 抑 制，还 能 引 起 肠 炎 和 繁 殖 障碍。首选 淋 巴 结、肺，其 次 可 选 脾、肾，流 产 胎 儿 的心肌细胞中也可检测到病毒。 ３．１．５ 伪狂犬病 毒。 伪 狂 犬 病 病 毒 可 危 害 呼 吸 系 统、繁殖系 统 或 中 枢 神 经 系 统，最 好 能 够 采 集 神 经 系统的样品。可选 活 体 动 物 的 鼻 液、扁 桃 体 组 织 或 死 后 动 物 的 脑 组 织 、扁 桃 体 。 ３．１．６ 猪细小病 毒。 猪 细 小 病 毒 主 要 引 起 猪 的 繁 殖障碍性疾病，可 取 木 乃 伊 胎 的 肺 脏。 可 选 公 猪 精 液 ，也 可 选 取 扁 桃 体 。 ３．１．７ 猪 流 感 病 毒。 一 般 采 取 鼻 腔 拭 子，可 置 ４ ℃、４８ｈ 内 完 成 检 测，如 果 样 本 长 时 间 保 存，则 应 放到－８０ ℃冰箱。此外，也可取急性病死猪或扑杀 猪的肺脏进行检测。 ３．１．８ 日本乙型 脑 炎 病 毒。 乙 型 脑 炎 病 毒 主 要 感 染繁殖系统和中枢神经系统。在胎猪和新生仔猪 的脑、肝、脾、肺、胎 盘 中 能 分 离 到 病 毒。 送 检 样 品 时首选死胎或新生仔猪的脑组织。 ３．１．９ 传染性胃 肠 炎 病 毒。 小 肠 是 传 染 性 胃 肠 炎 的靶器官。因此，需 要 采 集 空 肠、回 肠 段 为 病 料，也 可 取 病 猪 的 肛 拭 、粪 便 、肠 内 容 物 样 品 。 ３．１．１０ 流 行 性 腹 泻 病 毒。 需 要 采 集 小 肠 或 肠 内 容物样品，也 可 取 病 猪 的 肛 拭、粪 便。 最 新 研 究 表 明，母猪的乳汁也可检测到该病毒 。 〔６〕
在畜禽疫病监 测 工 作 中，采 集 畜 禽 样 品 进 行 实 验室检测 是 开 展 畜 禽 疫 病 监 测 的 一 种 主 要 的 有 效 方法，样品的采集和 选 择 是 疫 病 监 测 诊 断 工 作 的 前 提和基础，采 集 样 品 的 时 机、处 理、保 存、运 送 等 均 影响到对疫病监测与诊断结果的准确性和可靠性。 因此，用 于 病 毒 性 病 原 检 测 的 样 品：（１）要 无 菌 操 作，避免人 为 污 染 样 品；（２）最 好 冷 冻 保 存，并 保 证 整个运输 过 程 的 低 温 保 存；（３）不 同 疑 似 病 例 的 病 料采集方 法 有 所 不 同；（４）根 据 检 测 项 目 选 择 样 品 的种类。样品质量是影响检测结果的最关键因素， 因此在采集、制备、贮 存、运 输 过 程 中 应 尽 可 能 地 缩 短 时 间 ，最 大 限 度 地 减 少 从 样 品 采 集 到 检 测 的 时 间 。
１ 样 品 采 集 的 原 则 １．１ 采 集 的 样 品 一 定 要 具 有 代 表 性
２ 样 品 的 保 存 和 运 输
样品正确的保 存 和 运 输 方 法，是 保 持 样 品 新 鲜 或接近新鲜状态的 根 本 保 证，是 保 证 检 测 结 果 准 确 无误的重要条件。
２．１ 样 品 的 保 存 〔２〕
DOI:10.14170/j.cnki.cn31-1278/s.2014.06.029 混合感染已经成为当前畜禽传染性疾病流行
采样过程中要 避 免 人 为 污 染 样 品，并 避 免 其 他
的最主要特征之一，导 致 发 病 率 和 死 亡 率 的 显 著 上 细菌和病毒的污 染，干 扰 检 测 结 果。 必 须 保 证 不 同
重要依据，也 是 分 析 样 品 检 测 结 果 的 重 要 参 考，因 才可把样品冷冻，并 以 此 状 态 运 送。 根 据 试 验 需 要
此应该准确、详 细 地 记 录 样 品 的 背 景 资 料，如 果 畜 决定送 往 实 验 室 的 样 品 是 否 放 在 保 存 液 中 运 送。
禽的背景资 料 不 准 确、不 真 实，往 往 会 出 现 检 测 项 所有样品都要贴上详细标签。各种样品到达实验室
景 资 料 〔１〕
塞试管。
采集样品有时 间 要 求，要 根 据 实 际 情 况 确 定 采 ２．２ 样品的运输〔２～３〕
样时间。作病原分 离 的 样 品，必 须 在 病 初 发 热 期 或 症状典型时采样，对 于 病 死 的 应 立 即 进 行 采 集。 样
样 品 应 置 于 保 温 容 器 中 运 输，保 温 容 器 应 密 封，防 止 渗 漏。 应 以 最 快 最 直 接 的 途 径 送 往 实 验
《上 海 畜 牧 兽 医 通 讯 》 ２０１４ 年 第 ６ 期
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采样人员以及实验室检测人员应对不同病毒 感染畜禽后其在机 体 的 分 布 情 况 进 行 充 分 了 解，否 则送检的样品不 合 适，导 致 实 验 室 误 诊。 如 猪 蓝 耳 病毒的检测，不少猪 场 选 用 流 产 死 胎 送 实 验 室 进 行 ＲＴ－ＰＣＲ 病原检测，结果多数为阴性，但这不能说明 没有猪蓝耳病病毒 感 染，只 是 猪 蓝 耳 病 病 毒 本 身 就 很难在流产死胎中用 ＲＴ－ＰＣＲ 方法检测到〔４〕。
品的量要足够，如 果 样 品 的 量 不 够，重 新 采 样，会 费 室。如果样品能在采集后２４ｈ内送抵实验室，则可
时费力且贻误最 佳 采 样 时 机，影 响 检 测 效 果。 样 品 放在４ ℃ 左 右 的 容 器 中 运 送。 只 有 在 ２４ｈ 内 不 能
的准确背景资料是 检 测 人 员 选 择 检 测 项 目、方 法 的 将样品送往实验室 并 不 致 影 响 检 验 结 果 的 情 况 下，
２．１．１ 血 清 样 品 的 保 存 。 血 清 的 保 存 条 件 以 不 影 响 血清的免疫学与生物 学 特 性 为 原 则。１ 周 内 进 行 检 测的血清样品可置于 ４ ℃ 作短期保存。１ 周 后 进 行 检测或检测后需要留样的血清样品作冷冻长期保存。 ２．１．２ 组织器官 样 品 的 保 存。 用 作 病 毒 检 测 的 组 织器官采 集 后 应 尽 快 冷 藏。 不 能 马 上 进 行 检 验 的 样 品 ，要 低 温 保 存 。 ２．１．３ 鼻腔拭 子、咽 喉／泄 殖 腔 拭 子 和 直 肠 拭 子 的 保存。将拭子放入含磷酸盐缓冲液的灭菌容器中，
升，带来巨 大 的 经 济 损 失，同 时 也 造 成 了 临 床 症 状 样品之 间 不 发 生 交 叉 污 染，并 且 保 证 样 品 便 于 采
的不典型，给 诊 断 带 来 了 极 大 的 难 度。 临 床 上，我 样、运送等。
们很难简 单 地 将 几 个 症 状 组 合 起 来 就 能 判 定 是 什 么疾病。而正确判 断 畜 禽 疫 病 需 根 据 流 行 情 况、临 床症状、剖检和实 验 室 病 原 检 测 来 确 诊。 病 原 检 测 是确诊的主要依据，而 要 做 好 实 验 室 检 测，采、送 样 品是关键。 规 范 的 采 集、保 存 和 运 送 样 品，是 实 现 实验室准确诊断 的 前 提。 临 床 上，往 往 由 于 样 品 的 采集方法、保 存 和 运 输 方 式 及 选 择 不 正 确，导 致 送 到实验 室 的 样 品 无 法 进 行 检 测，或 检 测 结 果 不 准 确，最后延 误 了 疫 病 的 诊 断，甚 至 造 成 误 诊。 本 文 主要介绍了送检样 品 的 采 集、保 存 和 运 输 方 法 以 及 实验室检测时样品 的 选 择，为 临 床 采 样 及 实 验 室 检 测时样品的选择提供参考。
目选择错误、结 果 无 法 分 析 等 情 况，直 接 影 响 着 对 后，应按有关规定 冷 藏 或 冷 冻 保 存。 长 期 保 存 的 样
检测结果的正确判断。
品应超低温冷冻（以－７０ ℃或以下为宜）保存，尽量
பைடு நூலகம்
１．３ 用于病原学检测的样品应无菌操作，采 避免反复冻融。
样用具和容器要高压灭菌处理
３ 样 品 的 选 择
品。这样的 检 测 结 果 才 能 客 观 反 映 一 个 动 物 群 体 的实际情况 。 〔１〕
１．２ 样 品 要 适 时 、足 量 采 集 并 且 准 确 记 录 背
用作细菌检测时可冷藏。 ２．１．５ 粪便样品 的 保 存。 直 接 采 集 的 粪 便 样 品 应 置于灭菌的螺盖试 管 或 塑 料 样 品 袋 中，不 可 使 用 胶
３．２ 主要 禽 病 毒 性 疾 病 进 行 分 子 生 物 学 检 测时样品的选取
３．２．１ 禽 流 感 病 毒。 一 般 采 集 活 禽 喉、泄 殖 腔 拭 子 ，病 死 禽 或 扑 杀 禽 可 取 肺 、脾 、脑 等 。 ３．２．２ 新 城 疫 病 毒。 一 般 采 集 活 禽 喉、泄 殖 腔 拭 子，病死禽 或 扑 杀 禽 可 取 肺 脏、淋 巴 结、胸 腺、法 氏 囊 、脾 脏 。 ３．２．３ 传染性法 氏 囊 病 毒。 传 染 性 法 氏 囊 病 病 毒 主要侵害体液免疫中 枢 器 官 － 法 氏 囊，导 致 免 疫 抑 制。法氏囊中的病毒 含 量 最 高，其 次 是 脾 和 肾。 因 此 ，通 常 取 法 氏 囊 和 脾 。 ３．２．４ 传 染 性 支 气 管 炎 病 毒。 肺、支 气 管 和 气 管 是病毒增殖 的 最 初 部 位，因 此 可 取 肺、气 管 及 喉 头 拭子。 ３．２．５ 传染性喉 气 管 炎 病 毒。 病 毒 大 量 存 在 于 病 鸡的气管组织及 其 渗 出 物 中。 肝、脾 脏 和 血 液 中 较 少见。 ３．２．６ 鸭 瘟 病 毒。 活 鸭 采 泄 殖 腔 拭 子，病 死 鸭 取 肝 、脾 、脑 等 组 织 样 品 。 ３．２．７ 鸭肝炎病 毒。 鸭 病 毒 性 肝 炎 病 主 要 病 变 在 肝 脏 ，其 次 是 脾 、肾 。