吲哚乙酸氧化酶活性的测定
吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定
吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定吲哚乙酸IAA检测方法及氧化酶活性的测定一、原理1、吲哚乙酸产品概述:吲哚乙酸可占植物体内吲哚乙酸的50-90%，可能是生长素在植物组织中的一种储藏形式，它们经水解可以产生游离吲哚乙酸。
吲哚乙酸可刺激形成层细胞分裂;吲哚乙酸刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长;促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。
吲哚乙酸在器官和整株水平上，吲哚乙酸从幼苗到果实成熟都起作用。
吲哚乙酸控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制;当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性;当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性;吲哚乙酸造成顶端优势;延缓叶片衰老;施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落;吲哚乙酸促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。
2、试验原理:吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。
植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。
吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
二、准备仪器及药品T6新悦型分光光度计离心机恒温水浴锅天平研钵试管移液管烧杯20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0(见附表2)。
1mmol/L2，4—二氯酚:称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。
1mmol/L氯化锰:称取MnCl?4HO 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。
221mmol/L吲哚乙酸:称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。
吲哚乙酸试剂A或B(任备其中之一):试剂A:15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸(比重为1.84)，500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。
用时1ml样品中加入试剂4ml。
试剂B:10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。
吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书 微量法
吲哚乙酸氧化酶活性检测试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号：BC4105规格：100T/48S产品内容：提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入5mL蒸馏水备用。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入3mL蒸馏水备用。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加入5.71mL50%乙醇（乙醇（V）：HO（V）=1：1）溶解备用。
2可以分装后-20℃保存，避免反复冻融。
试剂四：液体30mL×1瓶，4℃保存。
试剂五：粉剂×1瓶，4℃保存。
临用前加入15mL试剂四溶解。
O（V）标准品：粉剂×1支，-20℃保存，10mg吲哚乙酸。
临用前加入1.14mL50%乙醇（乙醇（V）：H2=1：1）溶解制成50μmol/mL的标准溶液。
可分装后-20℃保存。
产品说明：吲哚乙酸（IAA）在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。
IAA氧化酶能调节植物体内吲哚乙酸的的水平，从而影响植物的生长。
作用生成红色产物，在530nm下有最大吸收峰。
酶活力的大小可用破坏IAA IAA在无机酸条件下与FeCl3的速率表示。
自备实验用品及仪器：可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、乙醇、冰和蒸馏水。
测定操作：1、样本处理：第1页，共3页（1）组织：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆。
12000g4℃离心15分钟，取上清，置冰上待测。
（2）细胞或微生物样品的制备：先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。
12000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
2、操作步骤：（1）可见分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至530nm。
套袋对梨幼果生长发育的影响
・
８ ２・
山西师范大学学报 （ 自然科学版 ） 表 １ 不 同时期果实过氧化物酶（ Ｏ 的活性 （ Ｏ）０ ｍｎ・ ｇ Ｐ Ｄ） Ａ Ｉ７ ｉ ｍ ） ４／
Ｔ ｂ Ｔ ｅ ａ ｔ ｉ ｆＰ Ｄ ｎ ｔ ｅ ｆ ｉ ｏ ｅ ｒ ａ ｈ ｉ ｅｅ ｔ ｉ ａ ．１ ｈ ｃｉ ｔ ｏ Ｏ ｉ ｈ ｒ ｔ ｆｐ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒｎ ｍｅ ｖｙ ｕ ｔ ｆ ｔ
参 照 黄群声 等 的改进 方法 ．
２ 结 果 与 分 析
２ １ 套袋 对 果实 过氧化 物 酶 （ Ｏ 活性 的 影响 ． Ｐ Ｄ）
以愈 创木 酚作 为过 氧化 物酶 的底 物 ， 在有过 氧 化氢存 在 的条 件下 ， 氧化 物 酶 能使 愈 创 木 酚 氧化 ， 过 生 成茶褐色物质． 本实验采用比色法用分光光度计测量生成物 的含量． 测得过氧化物酶 的活性大小 ， 以每分 钟 Ｏ Ｄ变 化值表 示 ， Ａ Ｄ ｍｎ・ 即 Ｏ ／ ｉ ｇ鲜重 ． 结果 见表 １ ． 三 次连 续跟 踪 测 定 的 结 果 表 明 ，０天 后 过 氧 化 物 酶 （ Ｏ 活 性 较 ２ ３ Ｐ Ｄ） ０天 后 增 强 ， 袋 果 增 加 了 套 ６ ． ％ ， 照 果增加 了 ６ ．％ ．０天后 过 氧化物 酶 （ Ｏ 的活性 较 ３ ０４ 对 ３６ ４ Ｐ Ｄ） ０天后 减弱 ， 套袋 果 减弱 了 １ ．％ ， ７４ 对
指 标 的研 究 ， 了解 套袋对 酥 梨果 实初 期生 长发 育 的影 响．
１ 材料与方法
幼嫩 酥梨 果实 ， 采于 临汾 市襄 汾县 的鄢 里村 ， 实袋 为 单 层 塑 膜袋 ， 果 于幼 果 出现期 （ ５月 ６日） 在供 试
树上随机给单果套袋． 间隔一定天数 ， 分别采样．
植物生理学实验讲义最新
实验一植物组织渗透势的测定（质壁分离法）一、实验目的植物细胞的渗透势主要取决于溶液的溶质浓度，因此又称溶质势。
渗透势与植物水分代谢、生长及抗性密切相关。
在干旱、盐渍等条件下，一些植物常在细胞内主动积累溶质，以降低其渗透势，增加吸水能力，在一定程度上保持膨压，保持细胞的生长和气孔的开放，这种现象称为渗透调节作用。
渗透调节能力的大小可以用逆境条件下细胞的渗透势的降低值来表示，在水分生理与抗性生理研究中经常需要测定。
掌握质壁分离法测定植物细胞渗透势的原理和方法。
二、实验原理当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势，该溶液的浓度称为等渗浓度。
当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离时，细胞的等渗浓度将介于刚刚引起初始质壁分离的浓度和尚不能引起质壁分离的浓度之间的溶液浓度。
带入公式即可计算出其渗透势。
三、实验材料、仪器设备和试剂1. 实验材料洋葱鳞茎（最好是紫色洋葱）2. 仪器设备光学显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、刀片、干净的小培养皿、滴瓶、吸水纸。
3. 试剂（1）1 mol/L蔗糖溶液，（2）蔗糖系列标准液以1 mol/L蔗糖溶液作为母液，配置梯度溶液: 0.20、0.30、0.35、0.40、0.45、0.5、0.55、0.60、0.65、0.70 mol/L的蔗糖溶液。
四、实验步骤1. 取10套干燥洁净的小培养皿，编号，将配制好的不同浓度的蔗糖溶液按顺序倒入各个培养皿中使成一薄层，盖好皿盖。
2. 用刀片在洋葱鳞片外表皮或其它带有色素的组织表皮上纵横划成0.5cm2左右的小块，用镊子将表皮小块轻轻撕下，依次迅速投入各浓度蔗糖溶液中，每个培养皿中放材料3个左右，使其完全浸没，并立即盖好皿盖。
浸泡10～15分钟。
3. 从0.70 mol/L 蔗糖溶液开始依次取出表皮薄片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上载玻片，于显微镜下观察，如果所有细胞都产生质壁分离的现象，则取低浓度溶液中的表皮做制片，进行同样观察，并记录质壁分离的相对程度。
酶的测定
一、过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚比色法测定）酶液的制取称取0.5g鲜重叶片，加入1ml磷酸缓冲液（PH=7.8,0.05mol/L），冰浴研磨，研磨后再加入4ml磷酸缓冲液。
将研磨液倒入离心管中，平衡。
12000r/min、0-4℃下离心20min，上清液即为酶提取液。
离心后冷藏保存。
POD: 取上清液20微升加入比色杯中（对照加20微升磷酸），加3ml反应液，马上读470nm 下的OD值并计时，每隔1min读一次（读0，1，2min的OD值）。
反应液：PH＝6.0的磷酸缓冲液50ml，加入愈创木酚28微升，于磁力搅拌器上加热溶解，加入30％H2O219微升混合保存于冰箱中。
POD活性=ΔA470*V/（a*W）V-酶液总体积（ml）；a-测定时酶液体积（ml）；W-样品重（g）可溶性蛋白含量的测定取上清夜20微升（对照加20微升水），加3ml考马斯亮蓝，放置2min后，马上于595mn 下比色。
样品蛋白质含量（mg/g鲜重）=（C*V/a）/(W*1000)C-查标准曲线所得每管蛋白质含量（mg）；V-提取液总体积（ml）；a-测定所取提取液体积（ml）；W-取样量（g）。
可溶性蛋白含量（ug）：y=0.0061x－0.0359（R2=0.9563）二、多酚氧化酶（PPO）活性测定（比色法测定）PPO活性的测定参照李焕秀（1994）的方法进行改进。
一、原理：多酚氧化酶是一种含铜的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化生成醌。
多酚氧化酶活性可以用氧电极测量反应耗氧的速度，或用比色法测量产物的形成，常用的底物如邻苯二酚（儿茶酚）和多巴。
二、材料：树皮韧皮部（分别在压条育苗前期、愈伤组织形成期、根原基形成期和不定根生长期进行取样）三、仪器与用具：高速低温台式离心机；分光光度计；1mL 、5mL的移液管；5mL离心管；研钵；试管数支；10mL容量瓶；秒表；水浴锅；四、试剂：1、0.1mol·L-1，pH 6.0的磷酸柠檬酸缓冲液；2、1%（10g/L）的邻苯二酚（1g用蒸馏水定容至100 mL）；3、0.1%(1/L)的脯氨酸（0.1g（0.05）用蒸馏水定容至100 mL（50））；4、石英砂；五、方法步骤1、酶液提取取鲜样0. 5－1.0g, 加1 mL 磷酸柠檬酸缓冲液（0.1mol·L-1，pH 6.0），加少量石英砂，在冰浴中研磨成匀浆,加缓冲液9mL稀释（按100mg鲜重材料加1mL提取液的比例），使终体积为10mL（研完冰盘放回冰箱）。
酶活性测定方法
一、过氧化物酶（POD）活性的测定POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。
测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。
然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。
在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。
以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。
△470 ×V TPOD活性=0.01×t×Vs×W式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）t----反应的时间（min）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）W----样品鲜重（g）二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。
PPO活性测定：反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol／L的邻苯二酚。
混匀后于30℃保温10 min，迅速加入2 mL质量分数为20％的三氯乙酸终止反应，立即于525nm下测定其吸光度值，计算酶活。
PPO活性= O D×V T0.01×t×0.5g×V s= O D×V T0.005OD——反应时间内吸光值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）T———反应时间(min)；三、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的测定参照张志良等(1990)人的方法并稍作改动。
吲哚乙酸氧化酶活性测定
吲哚乙酸氧化酶活性的测定一实验原理吲哚乙酸氧化酶能调节植物体内IAA的水平，从而影响植物的生长。
生长素分布在生长旺盛的部位，IAA氧化酶分布在生长不旺盛的部位。
IAA氧化酶是一种含Fe的血红蛋白，以二价锰离子和一元酚为辅因子。
降解产物包括CO2和3-亚甲基羟吲哚等。
酶活力的大小可以用破坏IAA的速率表示，即：IAA氧化酶活力= IAA减少的速率。
在无机酸存在下，IAA能与FeCl3作用，生成红色的螯合物。
该物质在530nm处有最大光吸收峰。
二实验材料与试剂1、材料：玉米幼苗的胚根、胚芽。
2、试剂：20mmol/L的磷酸缓冲液（pH6.0)；1mmol/L的2、4-二氯酚；1mmol/L的氯化锰；200ug/mL 的吲哚乙酸（少量乙醇溶解后定容）；试剂B：0.5mol/LFeCl3-35%过氯酸(V:V=1:50)，(使用前混合，避光保存）。
三实验步骤1、提取IAA氧化酶：称取0.3g玉米幼苗的胚根、胚芽，加入预冷的磷酸缓冲液（pH6.0）1.5mL，冰浴研磨，4000rpm离心10分钟，取上清液，即为粗酶液。
2、IAA氧化酶与IAA的反应：两管分别混匀，25 ℃水浴保温30min。
3、IAA氧化酶活性测定混合试剂B：0.5mol/LFeCl3+35%过氯酸(V:V=1:50)30min后另取2支试管，每支加入试剂B 4mL，再按表加入反应液或对照溶液各2mL 。
2支试管于40 ℃下保温30min，使反应液呈红色。
530nm处测OD值，分别记为OD实验、OD对照。
4、制作标准曲线：同时，配制IAA梯度浓度溶液各10mL另取7支试管，每支加入试剂B 2mL，再按表加入IAA的梯度浓度溶液各1mL 。
以0管溶液调零，分别测定530nm处吸光值。
5、结果计算：以0~6管的IAA浓度为横坐标，以相应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
根据实验、对照管的OD值，在标准曲线上查出相应的IAA浓度。
IAA氧化酶活性（ugIAA/g FW.h) =(C对照-C实验)*V T*V/W.t.V1VT：酶液总体积（即上清液体积）；V：步骤2所得反应液体积（即5ml）；V1：反应所用酶液体积（即1ml）。
植物生理学实验指导
实验1 植物组织渗透势的测定（质壁分离法）原理当植物组织细胞内的汁液与其周围的某种溶液处于渗透平衡状态，植物细胞内的压力势为零时，细胞汁液的渗透势就等于该溶液的渗透势。
该溶液的浓度称为等渗浓度。
当用一系列梯度浓度溶液观察细胞质壁分离现象时，细胞的等渗浓度将介于刚刚引起初始质壁分离的浓度和尚不能引起质壁分离的浓度之间的深液浓度。
代入公式即可计算出春渗透势。
仪器药品显微镜载玻片及盖玻片镊子刀片配成0.5—0.1mol/L梯度浓度的蔗糖溶液各50ml。
称34.23g蔗糖用蒸馏水配成100ml，其浓度为1m0le/L（母液）。
再配制成下列各种浓度：0.50mol/L：吸母液25ml+水25ml0.45mol/L：吸母液22.5ml+水27.5ml0.40mol/L：吸母液20.0ml+水30.0ml0.35mol/L：吸母液17.5ml+水32.5ml0.30mol/L：吸母液15.0ml+水35.0ml0.25mol/L：吸母液12.5ml+水37.5ml0.20mol/L：吸母液10.0ml+水40.0ml0.15mol/L：吸母液7.5ml+水42.5ml0.10mol/L：吸母液5.0ml+水45.0ml操作步骤将带有色素的植物组织（叶片），一般选用有色素的洋葱鳞片的外表皮、紫鸭跖草、苔藓、红甘蓝或黑藻、丝状藻等水生植物，也可用蚕豆、玉米、小麦等作物叶的表皮。
撕取下表皮，迅速分别投入各种浓度的蔗糖溶液中，使其完全浸入，5—10分钟后，从0.5mol/L开始依次取出表皮薄片放在滴有同样溶液的载玻片上，盖上盖玻片，于低倍显微镜下观察，如果所有细胞都产生质壁分离的现象，则取低浓度溶液中的制片作同样观察，并记录质壁分离的相对程度。
实验中必须确定一个引起半数以上细胞原生质刚刚从细胞壁的角隅上分离的浓度，和不引起质壁分离的最高浓度。
在找到上述浓度极限时，用新的溶液和新鲜的叶片重复进行几次，直至有把握确定为止。
植物生理学实验指导
2、选用有色素的洋葱鳞茎外表皮实验效果较好
2021/10/10
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实验二 植物组织水势的测定 (3学时)
（小液流法、压力室法）
[目的要求]
１、掌握压力室法、小液流法测定植物水势的原理及要点；
２、了解植物水势测定的几种方法，并比较其优缺点；
３、了解水势测定的实际应用意义。
[实验方法]
小液流法、压力室法
2021/10/10
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[实验操作方法] 1、提取叶绿素 2、叶绿素含量测定 3、结果计算
[实验要点] 1、提取干材料中的色素要用80％丙酮。 2、为了避免叶绿素的光分解，操作应在弱光下进行；
研磨时间尽可能短些，以不超过两分钟为宜。 3、过滤时必须将滤纸及叶片残渣洗至无绿色为止。 4、比色时提取液不能混浊。2021/10/104二、植物生理学实验的目录
实验九 小筐子法(广口瓶法)测定植物呼吸速率---------3学时
附: 微量定容测压法测定种子的呼吸速率(示范)
实验十 过氧化物酶活性的测定-----------------------------3学时
实验十一 吲哚乙酸氧化酶活性的测定--------------------3学时
2021/10/10
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实验九 小蓝子法测定植物的呼吸速率(3学时) 附: 微量定容测压法测定种子的呼吸速率
[目的要求] 1、了解呼吸强度测定的几种方法及用途，
并比较其优缺点；
２、掌握经典测定方法及现代高档仪器测
定法原理及要点；
３、学会根据材料选择不同的测试方法。
[实验方法] 广口瓶法、微量呼吸检压法
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实验六 叶绿体色素的提取、分离和理化性质 (３学时)
[目的要求] １、掌握提取、分离叶绿体色素的方法、原理； ２、了解叶绿体色素的种类及其理化性质；
植物中过氧化物酶的鉴定及其在抗氧化作用中的应用
植物中过氧化物酶的鉴定及其在抗氧化作用中的应用植物是生命的源头，其生命活动极其复杂且繁忙。
在这个过程中，植物需要应对各种外界环境压力，包括氧化压力。
氧化压力是体内存在的一种现象，与许多疾病的发生有关。
植物中的过氧化物酶（POD）是非常重要的一种酶，在氧化压力中发挥着重要作用。
因此，本文将介绍如何鉴定植物中的POD以及它在抗氧化作用中的应用。
一、过氧化物酶的鉴定POD是一种酸性酶，存在于植物细胞的各个部位，如细胞壁、叶绿体、线粒体、高尔基体等。
鉴定POD的方法有很多，其中主要有以下几种方法：1、活性测定法POD酶的活性可以通过检测其催化的底物的降解速度来测定。
常见的检测底物有过氧化氢、苯酚等，检测方法包括光度法、荧光法等。
这种方法简单易行，较为常用，但无法准确区分不同的POD等级。
2、免疫印迹法免疫印迹法可以测定特定POD蛋白的存在和表达水平。
该方法通过电泳将蛋白分离并转移到固体载体上，再使用特异性抗体与POD结合，然后用荧光素二磷酸酯显色，最后用胶片等媒介记录。
与活性测定法不同，免疫印迹法可以区分不同的POD等级。
3、PCR法PCR法是通过扩增特定的POD基因序列进行鉴定。
通过PCR扩增出的目的产物可以直接克隆到表达载体中，然后进行蛋白表达测定。
这种方法准确度高，但需要PCR技术的支持。
二、POD在抗氧化中的应用氧化作用是许多疾病和老化的修补过程，但如果氧化作用过度，则会产生有害的自由基，对细胞造成严重的损害。
植物中的POD可以将过氧化氢转化为水和氧，从而减轻氧化压力。
POD的应用也成为了目前研究的热点领域。
1、抗菌过氧化物酶在植物病害中起到了很大的作用。
POD能够作为抗病机制的一部分。
吲哚乙酸是一种有效的植物生长调节剂，可以提高POD的活性，从而增加植物抵抗菌虫的能力。
2、抗氧化POD是植物细胞内重要的抗氧化酶之一，能够清除氧化物质，维持细胞稳态。
然而，在氧化环境下，POD的活性会降低或失去，导致过氧化氢等有害物的累积，从而引发细胞损伤。
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒（IAA比色法）
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒（IAA比色法）吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)简介：植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内IAA的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。
植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化IAA使其失去活性，从而调节体内IAA的水平，影响植物的生长。
Leagene吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与FeCl3作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示。
通过比色法(分光光度计)测定吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、恒温箱或水浴锅2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、浓硫酸6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE051350TStorage试剂(A):IAA标准(200μg/ml)25ml4℃避光试剂(B):IAA Lysis buffer250ml RT试剂(C):IAA Assay buffer60ml4℃避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于30℃中避光萌发3-4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料。
取胚轴，称重，按每100mg加入适量预冷的IAA Lysis buffer的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心,留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液。
短期4℃保存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
吲哚乙酸实验报告
一、实验目的1. 了解吲哚乙酸氧化酶（Indole-3-acetic acid oxidase，IAAO）的基本性质和功能。
2. 掌握吲哚乙酸氧化酶活性的测定方法，包括样品制备、比色法测定吲哚乙酸含量等。
3. 分析不同处理材料对吲哚乙酸氧化酶活性的影响。
二、实验原理吲哚乙酸（Indole-3-acetic acid，IAA）是植物体内的一种内源生长素，广泛参与植物生长发育、果实成熟等生理过程。
吲哚乙酸氧化酶（IAAO）是一种将吲哚乙酸氧化为吲哚乙酸醛的酶，其活性大小可通过破坏吲哚乙酸的速度表示。
本实验采用比色法测定吲哚乙酸的含量，进而计算吲哚乙酸氧化酶的活力。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：不同处理材料（如不同植物品种、不同生长阶段等）的叶片。
2. 仪器：电子天平、研钵、恒温水浴锅、离心机、分光光度计、比色皿等。
四、实验方法1. 样品制备（1）称取约0.5 g的新鲜植物样品，液氮研磨至粉碎。
（2）加入5 mL异丙醇/盐酸缓冲液，震荡30 min。
（3）加入10 mL二氯甲烷，震荡30 min。
（4）4℃，13,000 rpm离心5 min，取下层有机相。
（5）避光，氮气吹干有机相，用250-500 L甲醇（0.1%甲酸）溶解。
（6）0.45 μm的微孔滤膜过滤，备用。
2. 吲哚乙酸氧化酶活性的测定（1）将吲哚乙酸氧化酶酶液与底物吲哚乙酸混合，置于恒温水浴锅中。
（2）在一定时间间隔内，用分光光度计测定酶反应混合物的吸光度。
（3）根据吸光度变化计算吲哚乙酸氧化酶的活力。
五、实验结果与分析1. 不同处理材料对吲哚乙酸氧化酶活性的影响通过实验结果分析，我们可以得出以下结论：（1）不同植物品种的叶片中，吲哚乙酸氧化酶活性存在差异。
（2）不同生长阶段的叶片中，吲哚乙酸氧化酶活性存在差异。
（3）处理条件（如光照、温度、施肥等）对吲哚乙酸氧化酶活性有显著影响。
2. 吲哚乙酸氧化酶活力与吲哚乙酸含量的关系通过实验结果分析，我们可以得出以下结论：（1）吲哚乙酸氧化酶活力与吲哚乙酸含量呈正相关关系。
酶活性测定方法
酶活性测定方法一、过氧化物酶（POD）活性的测定POD测定参照李合生等（2003）的愈创木酚法方法进行测定，略加改动。
测定：称取样品0.5g，加入5mL 1／15mol／L PH=7.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成匀浆，4℃条件下12000r/min离心15min，上清液为粗酶液。
然后在试管中加pH 7.0的磷酸缓冲液2 ml，愈创木酚（0.2%）0.5ml，浓度为0.15%的H2O2 0.5ml，取0.3ml的酶提取液加入到试管中，空白以缓冲液代替。
在470nm下测定其吸光度，加入酶液时开始计时，每隔30s读数一次，连续记录5分钟。
以每分钟每克鲜重增加0.1的酶量作为一个酶活性单位。
△470 ×V TPOD活性=0.01×t×Vs×W式中：△470----反应时间内吸光度值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）t----反应的时间（min）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）W----样品鲜重（g）二、多酚氧化酶（PPO）活性的测定多酚氧化酶活性测定参照朱广廉等(1990)的方法，略加改动。
酶液制备：称取样品0.5g，加入5mL 0.1mol／L PH=6.0的磷酸缓冲溶液，冰浴研磨成浆，4℃条件下12000r/min离心15min后上清液即为粗酶液。
PPO活性测定：反应试管中分别加入0.1 mL酶液+3.9 mL磷酸缓冲液+ 1 mL 1m mol／L的邻苯二酚。
混匀后于30℃保温10 min，迅速加入2 mL质量分数为20％的三氯乙酸终止反应，立即于525nm 下测定其吸光度值，计算酶活。
PPO活性= O D×V T0.01×t×0.5g×V s= O D×V T0.005OD——反应时间内吸光值的变化；V T ----提取酶液的总体积（ml）Vs ----测定时取用酶液体积（ml）T———反应时间(min)；三、吲哚乙酸氧化酶（IAAO）活性的测定参照张志良等(1990)人的方法并稍作改动。
植物吲哚乙酸IAA酶联免疫分析
植物吲哚乙酸（IAA）酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T2 pmol/L -48 pmol/L使用目的：本试剂盒用于测定植物相关样本中吲哚乙酸（IAA）含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物吲哚乙酸（IAA）水平。
用纯化的植物吲哚乙酸（IAA）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入植物吲哚乙酸（IAA），再与HRP 标记的吲哚乙酸（IAA）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的植物吲哚乙酸（IAA）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中植物吲哚乙酸（IAA）浓度。
试剂盒组成1 30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶6ml×1瓶12孔×8条6ml×1瓶6ml×1瓶6ml×1/瓶789终止液6ml×1瓶2 酶标试剂标准品（96pmol/L）0.5ml×1瓶3 酶标包被板4 样品稀释液5 显色剂A液6 显色剂B液标准品稀释液 1.5ml×1瓶1份10 说明书11 封板膜12 密封袋2张1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
48pmol/L 24pmol/L 12pmol/L 6pg/ml 5号标准品4号标准品3号标准品2号标准品1号标准品150µl的原倍标准品加入150µl标准品稀释液150µl的5号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的4号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的3号标准品加入150µl标准品稀释液150µl的2号标准品加入150µl标准品稀释液3pg/ml2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)
吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)简介：植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸(IAA)是植物体内普遍存在的一种生长素，植物体内IAA的含量，对于植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。
植物体内存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se)，该酶是植物体内一种氧化分解吲哚乙酸的酶，吲哚乙酸氧化酶能够氧化IAA使其失去活性，从而调节体内IAA的水平，影响植物的生长。
Leagene吲哚乙酸氧化酶检测试剂盒(IAA比色法)检测原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛，使体系中吲哚乙酸含量减少，剩余的吲哚乙酸在无机酸存在下与FeCl3作用生成红色螯合物，吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破坏吲哚乙酸的速度表示。
通过比色法(分光光度计)测定吸光度，根据对照与待测样品中吲哚乙酸含量的差值，计算出吲哚乙酸氧化酶活性水平。
该试剂盒主要用于检测植物样本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性，尤其适用于定量测定植物样本吲哚乙酸氧化酶活性。
该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、恒温箱或水浴锅2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、低温离心机5、浓硫酸6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TE051350TStorage试剂(A):IAA标准(200μg/ml)25ml4℃避光试剂(B):IAA Lysis buffer250ml RT试剂(C):IAA Assay buffer60ml4℃避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：将大豆或绿豆等种子置于30℃中避光萌发3-4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶和根，留下胚轴作为材料。
取胚轴，称重，按每100mg加入适量预冷的IAA Lysis buffer的比例，冰浴情况下充分匀浆或研磨。
离心,留取上清液即为吲哚乙酸氧化酶粗提液。
短期4℃保存待用。
②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，保存，用于吲哚乙酸氧化酶的检测。
高效毛细管电泳法测定吲哚乙酸氧化酶的活力
时， 吲哚 乙酸 氧化酶 的活 力最 高。 关键 词 高效毛 细管 电泳 ； 吲哚 乙酸氧化 酶 ； 山石 斛 霍 中图分类 号 Ｑ ５ 文 献标识 码 Ａ ５４ 文 章编 号 ０ １—６ １２０ ）８ ００５ ０ ５７ ６ １（０ ８０— ３７ —２
Ｓｔ ｙ ｏ ｈｅＤｅ ｅ ｍ ｉ ｔｏ ｆＩ Ａ ｕｄ ｎｔ ｔ ｒ ｎａ ｉｎ ｏ Ａ Ｏｘｉ ｓ ｔｖ ｔ ｙ Ｈｉ ｒ ｏ ｍ ａｎ ｅＣａ ｌ ｒ ｅ ｔｏ ｄａ ｅＡｃｉｉｙｂ ｇｈＰｅ ｆ ｒ ｃ ｐｉｌ ｙＥｌｃｒ ｐｈｏ ｅ ｉ ａ ｒ ｓｓ
ｔｅｏｔ ｍ ｏ ｄｔ ｎ ｒ ｅｅｍｉｉｇｔｅａｔ ｉ ｆｎ ｏｅｃ ｔ ｃｄ（ ） ｘｄ ｓ ｅｅｓｕ ｉｄｂ ｉｈｐ ｒ ｒ ｎ ｅｃｐｌ ｒ ｌｃｒｐ ｏｅｉ ｈ ｐｉ ｍｕ ｃｎ ｉｏ ｓ ｔｒ ｎｎ ｃｉ ｔ ｏ ｄｌａｅｉ ａ ｉ Ｉ ｉ ｆ ｄ ｏ ｈ ｖｙ ｉ ｃ ＡＡ ｏ ｉａｅｗ ｒ ｄｅ ｙｈｇ ｅｆ ｍａｃ ａ ｉａｙｅｅｔ ｈ ｒｓ ｔ ｏ ｌ ｏ ｓ
ｅ ｚ ｍｅｗａ ｎ ｒ ａ ｅ ｔ ｈ ｒ ａ ｉｇｏ ｈ ｕ ｓｒｔ ｏ ｃ ． ｈ ｎ ｔｅｓ ｂ ｔａｅｃ ｎ ｎ． ｓｍｏ ｅｔａ ０ ｍｇＬ．ｈ ｎ ｙ ｃｉｉ ｓｎｏ ｎ ｙ ｓｉ ｃｅ ｓｄｗｉｈｔｅｉ ｅ ｓ ｆ ｅｓ ｂ ｔａｅｃ ｎ ｎ Ｗ ｅ ｈ ｕ ｓｒ ｔ ｏ ｃ ｗａ ｒ ｈ ｎ２ ／ ｔｅｅ ｚ ｍｅａ ｔｖｔ ｗａ ｔ ｎｃ ｔ ｙ
吲哚乙酸氧化酶活性测定
吲哚乙酸氧化酶活性的测定一、原理吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧化破坏失去活性。
植物体内吲哚乙酸氧化酶活力的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平，起着重要的作用，而影响植物的生长。
酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表示之。
吲哚乙酸的含量可用比色法测定。
二、仪器及药品T6新悦型分光光度计离心机恒温水浴锅天平研钵试管移液管烧杯20mmol/L磷酸缓冲液，pH6.0（见附表2）。
1mmol/L2，4—二氯酚：称取二氯酚16.3mg用蒸馏水配制成100ml。
1mmol/L氯化锰：称取MnCl2·4H2O 19.8mg用蒸馏水配制成100ml。
1mmol/L吲哚乙酸：称取IAA 17.5mg用少量乙醇溶解，然后将其倒于盛有约90ml蒸馏水的容量瓶中(100ml)，稀释至刻度。
吲哚乙酸试剂A或B（任备其中之一）：试剂A：15ml 0.5mol/L FeCl3，300ml浓硫酸（比重为1.84），500ml蒸馏水，使用前混合之即成，避光保存。
用时1ml样品中加入试剂4ml。
试剂B：10ml 0.5mol/L FeCl3,500ml 35%过氯酸，使用前混合之即成，避光保存。
用时于样品中加入试剂。
试剂B较试剂A灵敏。
三、操作步骤1．将大豆或绿豆种子于30℃温箱中萌发3梍4天，选取生长一致的幼苗，除去子叶，留下胚轴作材料。
2．取0.5g下胚轴，置研钵中，加入预冷的磷酸缓冲液5ml，置冰浴中研磨成匀浆。
再按100mg鲜重材料加0.5ml磷酸缓冲液的比例，用磷酸缓冲液洗涤研钵。
离心（4000r/min）10分钟，所得上清液即为粗酶液。
3．取试管2支，于一试管中加入氯化锰1ml，二氯酚1ml，IAA2ml，酶液1ml，磷酸缓冲液5ml，混合均匀。
另一试管中除酶液用磷酸缓冲液代替外，其余成分相同。
一起置于30℃恒温水浴中，保温30分钟。
处理MnCl22、4-二氯酚IAA(175ug/mL)酶液磷酸缓冲液(pH6.0)实验组对照组1111221564．吸取反应混合液2ml，加入吲哚乙酸试剂B 4ml，摇匀，置于30℃的黑暗处保温30分钟，使显色。
吲哚乙酸氧化酶活性的测定
→
红色螯合物
实验材料
绿豆芽的下胚轴 。
取 材 部 位
下 胚 轴
上胚轴:子叶到第1片真叶之间的部分 下胚轴:子叶与根之间的一部分
方法步骤
IAA氧化酶需要两个辅助因子： 一元酚和二价离子 Mn
标准曲线的绘制。 IAA含量的测定 ①称取 1g下胚轴，置于研钵中，加入预冷的磷 酸缓冲液 (pH=6.1)1ml ，研磨成匀浆，再用 9ml 分 2 次 冲 洗 ， 总 体 积 为 10ml 。 离 心 4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。 ②处理：在试管中加入：MnCl2 1ml +2，4-二 氯酚1ml + IAA 2 ml+酶液1 ml+磷酸缓冲液5ml 对照：在试管中加入：MnCl2 1 ml +2,4-二氯 酚1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液6ml
20
平均叶 片数 （个/株）
2
增值系数
2
MS+NAA 0.02 +6-BA0.2 MS+NAA0.02 +6-BA0.5
12*3
15
4
4
14*3
10
5
5
简述IAA 氧化酶活力测定的原理。
制备酶液时，为何加入pH 6.1 的磷酸缓冲液。
酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。
比色时，为何要选在530nm波长处？ 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸 光度值为 A1，绿豆芽的吸光度值为 A2，且 A1>A2， 试比较这两种材料下胚轴中哪个 IAA 氧化酶活力 大，为什么？
实
验
（设计性实验）
结果总结
不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响
实验26吲哚乙酸含量与吲哚乙酸氧化酶活性的测定
实验26吲哚乙酸含量与吲哚乙酸氧化酶活性的测定植物体内生长素的种类很多，其中吲哚乙酸（ 1AA ）是植物体内普遍存在的一种生长素。
于不同的生育期测定不同器官中 IAA 的含量以及 IAA 氧化酶的活性，对于研究植物的生长、发育、衰老、脱落等均有重要意义。
Ⅰ 吲哚乙酸含量的测定一、原理1947 年，我国植物生理学家汤玉玮等发现，在无机酸存在下，吲哚乙酸能与 FeCl 3 作用，生成红色的鳌合物。
该物质在 530 nm 有最大吸收峰，由此引出 IAA 的比色定量测定，此法可测出μg 量级的 IAA 。
二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料玉米种子。
（二）试剂1. IAA 标准溶液：精确称取 IAA （ A.R. ） 10 mg ，先用少量乙醇溶解，后用蒸馏水定容至 100 mL （其浓度为 100 μg/mL ）作为贮备液；然后用贮备液配成 0 （空白）、 0.5 、 1.0 、 5.0 、10.0 、 15.0 、 20.0 、 25.0 μg/mL 的系列浓度标准溶液，作为工作液（现用现配）。
2. 试剂 A ：内含 0.5 mol/L FeCl 3 溶液 15 mL 、浓 H 2 SO 4 （比重 1.84 ） 300 mL 、蒸馏水 500 mL ，于使用前混合摇匀，避光保存， l mL 试液需加此试剂 4 mL 。
3. 试剂 B ：内含 0.5 mol/L FeCl 3 溶液 10 mL 、 35 ％高氯酸 500 mL ，于使用前混合摇匀，避光保存， l mL 试液应加此试剂 2 mL 。
试剂 A 与试剂 B 可任选一种（试剂 B 比试剂 A 灵敏）。
4. 0.1 mol/L NaOH 溶液。
5. 甲醇。
（三）仪器设备分光光度计，离心机，粉碎机，天平，水浴锅，移液管，大试管，烧杯。
三、实验步骤1. 标准曲线绘制取干洁大试管 8 支（ 0 ～ 7 号），依次加入 IAA 系列浓度工作液 2 mL ，分别加入试剂 B 4 mL （或试剂 A 8 mL ），于40 ℃温箱中暗保温 30 min （加速显色反应）；于 530 nm 下比色，以 OD 值为纵坐标，以 IAA 浓度（μg/mL ）为横坐标，绘出一条标准曲线。
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结果总结
不同培养基对怀地黄愈伤组织生长情况的影响
培养基 接种数 (瓶*片） 瓶片
13*3
最早出愈 时间 （d） ）
18
出愈率 （%） ）
97.43
污染率 （%） ）
7.69
愈伤生长 情况
切口处较多出 愈，黄色颗粒 状，偶见灰白 色愈伤 切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄色透 愈伤， 明，较湿润 切口及与培养 基接触处生长 愈伤，黄白色， 愈伤，黄白色， 湿润
简述IAA 氧化酶活力测定的原理。 简述IAA 氧化酶活力测定的原理。 制备酶液时，为何加入pH 制备酶液时，为何加入pH 6.1 的磷酸缓冲液。 的磷酸缓冲液。 酶促反应时，为何要加入MnCl 酶促反应时，为何要加入MnCl2和2，4-二氯酚。 二氯酚。 比色时，为何要选在530nm波长处 比色时，为何要选在530nm波长处？ 波长处？ 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料， 现有黄豆芽、绿豆芽两种材料，测定黄豆芽的吸 光度值为A 绿豆芽的吸光度值为A 光度值为 A1， 绿豆芽的吸光度值为 A2， 且 A1>A2， 试比较这两种材料下胚轴中哪个IAA 氧化酶活力 试比较这两种材料下胚轴中哪个 IAA氧化酶活力 为什么？ 大，为什么？
P144
实验目的
熟悉运用比色法测定吲哚乙酸 氧化酶活力的方法，并掌握测定酶 氧化酶活力的方法， 活力的基本要求。 活力的基本要求。
实验原理
吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下， 吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶的作用下，被氧 化破坏失去活力。 化破坏失去活力。植物体内吲哚乙酸氧化酶活力 的大小， 的大小，对调节体内吲哚乙酸的水平起着重要的 作用，从而影响植物的生长。 作用，从而影响植物的生长。 酶活力的大小可以其破坏吲哚乙酸的速度表 示。吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 吲哚乙酸的含量可用比色法测定。 IAA +FeCl3
保温： ℃温箱中30min； 保温：30℃温箱中 ； 显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、 显色：三支试管中分别加入处理液、对照液、 蒸馏水各2ml后，再分别加入试剂 蒸馏水各 后 再分别加入试剂A8ml，摇匀， ，摇匀， 40℃黑暗处 ℃黑暗处30min(15-20min)； ； 用分光光度计在530nm波长处测 值； 波长处测A值 用分光光度计在 波长处测 查标准曲线； 查标准曲线； 计算 对照—处理 对照 处理(µg/ml) 处理 IAA氧化酶活力 = 氧化酶活力 时间(h) 时间 (µg·IAA/h·ml) × 10
→
红色螯合物
实验材料 绿豆芽的下胚轴 。
取 材 部 位
下 胚 轴
上胚轴:子叶到第 片真叶之间的部分 上胚轴 子叶到第1片真叶之间的部分 子叶到第 下胚轴:子叶与根之间的一部分 下胚轴 子叶与根之间的一部分
方法步骤
IAA氧化酶需要两个辅助因子： 氧化酶需要两个辅助因子： 氧化酶需要两个辅助因子 一元酚和二价离子 Mn
标准曲线的绘制。 标准曲线的绘制。 IAA含量的测定 含量的测定 称取1g下胚轴 置于研钵中， 下胚轴， ① 称取 下胚轴 ， 置于研钵中 ， 加入预冷的磷 酸缓冲液(pH=6.1)1ml， 研磨成匀浆 ， 再用 酸缓冲液 ， 研磨成匀浆， 再用9ml 分 2 次 冲 洗 ， 总 体 积 为 10ml 。 离 心 4000rpm 10min，所得的上清夜即为粗酶液。 ，所得的上清夜即为粗酶液。 ②处理：在试管中加入：MnCl2 1ml +2，4-二 处理：在试管中加入： ， 二 氯酚1ml + IAA 2 ml+酶液 ml+磷酸缓冲液 酶液1 磷酸缓冲液5ml 氯酚 酶液 磷酸缓冲液 对照：在试管中加入： 对照：在试管中加入：MnCl2 1 ml +2,4-二氯 二氯 磷酸缓冲液6ml 酚1ml + IAA 2 ml+ 磷酸缓冲液
13*3
出芽时间 (d)
20
平均叶 片数 （个/株） 株
2
增值系数
2
MS+NAA 0.02 +6-BA0.2 MS+NAA0.02 +6-BA0.5
12*3
15
4
4
14*3
10
5
5
MS+2,4-D1.0
MS+2,4-D1.0 +6-BA0.4 MS+2,4-D1.0 +6-BA1.0
12*3
17
100
0
12*3
16
100
0
结果总结
I型愈伤组织 型愈伤组织
Ⅱ型愈伤组织
Ⅲ型愈伤组织
不同培养基对怀地黄试管苗生长情况的影响
培养基 （mg/L)
MS+NAA 0.02
接种数 （瓶*株） 株