Bouin固定液使用说明
固定液
1．经过固定的组织可保持在10%福尔马林或70%乙醇中。
2．染色前脱掉组织中的苦味酸①自来水冲洗②50%乙醇③或70%乙醇饱和碳酸锂
乙醇BOUIN’S液（DUBOSCQ-BRAZIL FLUID）
用途：用于固定肾活检，组织学制备固定液。
试剂：
乙醇Bouin’s贮存液:
80%乙醇750.0ml
甲醛300.0ml
步骤：
1．活检标本要立即放入Hollande’s固定剂中，标本容器上注明时间。
2．标本完成固定后保持在70%乙醇中。
3．不能让Hollande’s液固定的标本与磷酸缓冲福尔马林接触，否则会出现蓝色沉淀。
ORTH’S液
用途：用于证实肾上腺胞浆中嗜络微粒，这种证明可能对嗜络细胞瘤的诊断很重要。不是一种好的多用途的固定剂。
苦味酸5.0g
充分混合，液体稳定性2年，标明配制日期。
工作液：
贮存液70.0ml14.0ml
醋酸5.0ml10.0ml
使用前加醋酸。
固定时间：1～4小时。
步骤：
1．把新鲜组织标本放进乙醇Bouin’s工作液中。
2．充分固定后把组织移到70%的乙醇中。
HOLLANDE’S固定液
用途：作为胃肠和前列腺活检基本固定剂，这种固定剂让H.E染色更清晰，它“软化”组织避免切片脆裂。苦味酸会溶解掉红细胞。
ZENKER’S液
用途：Zenker’s液是一种核固定剂。该液是细胞学及病理学常用的固定剂，对细胞核固定最好，最适合于造血和网状内皮组织的固定。也常作为三色染色的组织固定剂，在三色染色中还作为媒染剂使用。但对于含血量较多的组织标本尽量不要选Zenker’s液固定。
试剂：
Zenker’s贮备液：
Bouin固定液配制及使用方法
Bouin固定液Bouin氏液是组织化学中最常用的混合型固定液之一，由苦味酸饱和液（1.22%）、甲醛和冰醋酸按15:5:1的比例混合而成。
此固定液对大多数组织固定效果良好。
它具有下列特点：1.其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，染色效果好。
2.适用范围广，特别适合于富含结缔组织的标本和胚胎标本。
能够软化皮肤角质，并可以用于植物组织的固定。
3.因为本产品含有苦味酸，会溶解火棉胶，所以如果用于火棉胶包埋，必须进行洗脱苦味酸处理。
标本尺寸不可太大，一般窄边不大于5 mm。
使用方法：1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。
2固定后用70%-80%乙醇洗涤。
Bouin氏液是常用的混合固定液配方：苦味酸饱和液（1.22%）75ml福尔马林25ml冰醋酸5mlBouin固定液使用方法1.标本修块，厚度一般不超过5 mm，置入本产品内固定8 ~ 24 h（根据样品材料、大小不同，固定时间可能会有较大差异）。
2.固定后用70%-80%乙醇洗涤。
Bouin固定液关联产品Zenker固定液；Helly固定液；Carnoy固定液；Karnovsky固定液此液一般在临床用时配制，对皮肤及肌腱有软化作用。
没有很好的固定就无法染色，所以，一种好的固定液是细胞观察的重点。
当前国内外基本上都还是要用甲醛来固定组织。
从免疫组织化学的角度来说，甲醛固定的组织大部分都可以用免疫组化的手段来检测，据多人认为，它对lgA ，lgM，J链，K链和λ链的标记效果较好，且背景清晰。
但美中不足的是：经它固定的组织，可与蛋白形成醛交联蛋白，这种醛键可封闭抗原。
固此，在免疫组化实际检测中，应根据不同的要求和需要，采用酶消化或者其它抗原修复如微波、高压等的方法，以便破坏醛键重新暴露抗原。
组织固定液的使用
作者: liza3(站内联系TA)发布: 2013-01-11当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定分歧的组织成分起着分歧的作用，因此我们在使用时应该了解分歧固定剂的效能，才干合理的固定组织。
根据Bencroft的分类法，将分歧的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。
下面根据使用的需要，将着重介绍几种经常使用的固定剂。
（1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。
它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。
甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有很多的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。
甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。
甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。
介入甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。
甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种分歧的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。
甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。
甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保管固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保管脂肪及脂类物质.5. 成本较低.虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不成能十全十美的,它也有许多缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可发生福尔马林色素,影响观察.4. 不克不及固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不成能除去的.因为临床活检不成能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操纵中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想法子除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
组织固定液的使用
谈谈固定液得使用作者: ｌiza3(站内联系TA)发布:２013-01-11当前,应用于固定试剂得种类较多,它们对于固定不同得组织成分起着不同得作用,因此我们在使用时应该了解不同固定剂得效能,才能合理得固定组织。
根据Bｅncroft得分类法,将不同得固定剂分为四种类型:ﻫⅠ类:醛类,甲醛,戊二醛,多聚甲醛,丙烯醛,已二醛,丙二醛等。
ﻫⅡ类:氧化剂类,四氧化锇(奥酸),高锰酸钾,重铬酸钾等、Ⅲ类:蛋白变性类,甲醇,乙醇,醋酸等。
Ⅳ类:其她,氯化汞,苦味酸等。
上述四种类型得固定剂,最常使用得就是甲醛,其余得也在其它病理技术方面中用到。
下面根据使用得需要,将着重介绍几种常用得固定剂。
ﻫ(1)甲醛ﻫ甲醛商品名为福尔马林,一般市售得含甲醛３7—4 0%,由甲醛气体饱与于水而成,比重为1。
12。
它也可以稳定得固体形式存在,它得成分为高分子量得聚合体,称为多聚甲醛。
ﻫ甲醛溶液较难纯化,在每批市售商品中,都含有不少得杂质如甲醇,这种在组织化学方法当中,能使酶钝化,影响其反应。
甲酸,它可使固定液变酸,在陈列标本或长时间固定得组织,由于酸得作用,往往细胞核染色欠佳。
ﻫ甲醛有效固定作用得要点就是,在蛋白质末端基团之间形成交联链。
参与甲醛固定蛋白质得基团,主要为氨基,亚氨基及酰氨基,肽,胍基,羟基,SH与芳香环。
甲醛与组织蛋白类得反应就是多样与复杂得,因为它能与多种不同得功能基团结合,在多数情况下在其间形成桥键、甲醛有这种交联得功能,也就是它得缺点,在用甲醛固定过得组织中,需要做免疫组化得,往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联得醛键断裂开,以利于后来得染色。
甲醛可配成简单得或混合得固定液,最简单与最容易掌握得方法,就就是取10ml甲醛液,加水9０ml,这就就是10％得福尔马林、当然,现在使用得固定液要求较为严格些,最好就是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来得免疫组化染色得需要。
1。
组织收缩较少,损伤少,保存从组织学得观点来说,甲醛就是一种良好得固定剂,它有很多得优点:ﻫ固有物质好、2。
实验室中固定液
实验室中固定液、缓冲液配置一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。
但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。
某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。
因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500～800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2～24h。
另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB液：Na2HPO4·2H2O16.88g蒸馏水300mlC液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%～1%。
免疫组化的经验总结3
免疫组化的经验总结（3）－操作要点和技巧 生物谷网站1．固定：最好用4%的多聚甲醛固定液。
对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。
有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。
Bouin S固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。
PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。
适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2．组织脱水，透明：时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
3．切片时展片：有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4．烤片：60℃ 30分钟或37℃ 过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
5．蜡块及切片的保存：最好在4℃保存6．脱片问题： Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。
如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。
在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1：50 丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。
7．灭活内源性酶：HRP系统：3%双氧水灭活；AP系统：3%HAc灭活。
8．暴露抗原：对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书)。
对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。
胶原还可以用胃蛋白酶消化等。
9．封闭：在山羊血清封闭，非特异性染色仍然较强时，可延长封闭时间或用浓缩血清封闭10．抗体稀释：应遵循“现用现配”的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。
用Bouin液作固定剂制作石蜡组织切片标本的方法
包埋 将浸蜡后的组织包埋于石蜡 中 , 并使它凝固成蜡块 , 这一 过程成称为包埋。包埋的关键是用温镊子 轻轻夹取组织块使 其欲切片面朝向盒底并 放正位置。 7 切片 切片前 , 先用刀片将蜡块修整成正方形或梯形 , 将组织块 以外的多余石蜡修 去但 让组织 四周 留有 2 mm 石蜡 , 以免 切 除的 蜡 带 弯 曲 不 直。切 片 的 第 一 步 需 粗 切 , 粗 切 厚 度 为 20 m 左右 , 粗切使组织全 部暴露 后 , 再 进行细 切。细切至 组 织面表面均匀一致 , 无白点。切片时要用力均匀 , 不可时快时 慢 , 防止机器震动太厉害 , 以致切 片厚薄不均 [ 2] 。切片厚度为 5~ 6 m, 切下的蜡片大 小形状应与组织块上的组织大小形状 一致。 8 贴片与烤片 用小玻棒蘸取一点 ( 绿豆大小 ) 蛋白甘 油于一干净的载玻 片上 , 用手指涂匀 , 并加几滴蒸馏 水于载玻片上。用小镊子将 蜡片轻放在载玻片的水面上 , 如蜡片皱褶无法摊平 , 把载玻片 放在温度为 45 左右的 展片台 上 , 蜡 片受热 后即慢 慢展开 , 完全展平后立即从展片台上移开 , 用解剖针将蜡片位置拨正 , 倾去载玻片上的余水后 , 将其放在烤片盒中置于 50 左右恒 温箱内烤干 , 并使切片与载玻片牢固粘贴 , 温度过高会引起切 片的组织细胞收缩。 9 脱蜡 、 复水 、 染色 脱蜡也相当重要 , 脱蜡时间与室温高低有一定关系 , 如果 脱蜡不干净 , 切片不易着 色 , 或 者着色 不均 , 所以切 片在脱 蜡 剂二甲苯 、 溶液中各历时 7~ 8 min, 脱蜡 干净后 , 经 下行 梯度酒精和蒸馏水洗去 二甲苯 , 在各液中停留 3~ 4 min, 染色 按常规 HE 染色。苏木精染液配 好后最 好停留 6 W 再用 , 染 色时间 20~ 30 min 。染色结果 : 胞 核为苏木 精染液 所染成 鲜 明的蓝色 , 胞浆为伊红所染呈桃红色 , 其他如核仁、 肌纤维、 胶 原纤维等也为伊红所染 , 红细胞染成朱红色 , 染色好的切片应 该是红蓝相映色彩鲜明 。 10 脱水 、 透明 、 封固 切片脱水依次采用上行梯度 酒精 , 为防止尹红褪色 , 故在 各液中停留 2 min, 切片经 二甲苯 透明 , 用中性 塑胶封 片。准 备封片时动作要快 , 封藏剂容易吸入水份 , 同时也要避免口鼻 呼出的气体接触到 玻片上 的封藏 剂 , 以 免影响 切片质 量。盖 玻片时防止气泡出现。 参 考 文 献 6
病理组织的固定
病理组织的固定㈠凡需要进行病理组织学检查的标本（器官或组织），于离体（活体或尸体）后，应尽快置放（浸泡）于装有足够量固定液的容器中固定。
固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。
置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定，应适当大一些。
临床科室切取的标本置放于容器中固定后，应尽快送交病理科继续固定。
未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
㈡常规固定液为4%中性甲醛（10%中性福尔马林），应预先多量配制贮存，以备随时使用。
小标本的固定时间为4~6小时，大标本为18~24小时或更久。
㈢根据病理学特殊检查（特殊染色和组织化学染色、免疫组织化学染色和原位核酸分子杂交染色、电镜观察等）的需要，应选用其他适宜的固定液进行固定［参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”］。
㈣器官、组织固定的基本方法1．食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官：依规范方法剪开后，按其自然状态平铺于硬纸板上（重点暴露黏膜面或内表面的病变处），并用大头针将标本边缘处固定于纸板上，然后放入4%中性甲醛中固定（黏膜面或内表面朝向容器的液面，并覆盖薄层脱脂棉）。
2．肝、脾：由器官背面，沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开，切成数片。
将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中，容器底面衬以脱脂棉。
应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3．肺叶：放入固定液中的肺叶漂浮于液面，需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。
必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4．肾：沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面（深达于肾盏），再行固定。
5．淋巴结：先用4%中性甲醛固定1小时后，再沿其长轴切成数片（厚 2 ~3mm），继续固定。
6．骨组织：先锯成小片（若是长骨应作横向锯片），在4%中性甲醛中固定24小时后，再进行脱钙。
7．微小组织或液体沉淀物：先用拭纸或滤纸妥为包裹（需用大头针扎牢），然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定，以防检材遗失。
8．凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号（病理号）。
组织固定液的使用
谈谈固定液的使用作者: liza3(站内联系TA)发布: 2013-01-11当前，应用于固定试剂的种类较多，它们对于固定不同的组织成分起着不同的作用，因此我们在使用时应该了解不同固定剂的效能，才能合理的固定组织。
根据Bencroft的分类法，将不同的固定剂分为四种类型：Ⅰ类：醛类，甲醛，戊二醛，多聚甲醛，丙烯醛，已二醛，丙二醛等。
Ⅱ类：氧化剂类，四氧化锇（奥酸），高锰酸钾，重铬酸钾等。
Ⅲ类：蛋白变性类，甲醇，乙醇，醋酸等。
Ⅳ类：其他，氯化汞，苦味酸等。
上述四种类型的固定剂，最常使用的是甲醛，其余的也在其它病理技术方面中用到。
下面根据使用的需要，将着重介绍几种常用的固定剂。
（1）甲醛甲醛商品名为福尔马林，一般市售的含甲醛37—40%，由甲醛气体饱和于水而成，比重为1.12。
它也可以稳定的固体形式存在，它的成分为高分子量的聚合体，称为多聚甲醛。
甲醛溶液较难纯化，在每批市售商品中，都含有不少的杂质如甲醇，这种在组织化学方法当中，能使酶钝化，影响其反应。
甲酸，它可使固定液变酸，在陈列标本或长时间固定的组织，由于酸的作用，往往细胞核染色欠佳。
甲醛有效固定作用的要点是，在蛋白质末端基团之间形成交联链。
参与甲醛固定蛋白质的基团，主要为氨基，亚氨基及酰氨基，肽，胍基，羟基，SH和芳香环。
甲醛与组织蛋白类的反应是多样和复杂的，因为它能和多种不同的功能基团结合，在多数情况下在其间形成桥键。
甲醛有这种交联的功能，也是它的缺点，在用甲醛固定过的组织中，需要做免疫组化的，往往提倡用酶消化或热抗原修复法来使蛋白与甲醛交联的醛键断裂开，以利于后来的染色。
甲醛可配成简单的或混合的固定液，最简单和最容易掌握的方法，就是取10ml甲醛液，加水90ml，这就是10%的福尔马林.当然,现在使用的固定液要求较为严格些,最好是使用缓冲福尔马林固定液,这将有利于后来的免疫组化染色的需要.从组织学的观点来说,甲醛是一种良好的固定剂,它有很多的优点:1. 组织收缩较少,损伤少,保存固有物质好.2. 固定均匀,穿透力强.3. 能使组织硬化,增进组织弹性,有利于切片.4. 能保存脂肪及脂类物质.5. 成本较低.虽然甲醛有上述的优点,但这都是相对而言,任何物质都不可能十全十美的,它也有许多缺点:1. 杂质含量较多,如甲醇,可钝化酶类,影响反应.2. 含有微量甲酸,导致固定液酸变,影响染色.3. 可产生福尔马林色素,影响观察.4. 不能固定尿酸和糖类物质.5. 容易挥发,污染环境,可导致标本干涸.6. 可长期存在于固定过的组织上.有人做过实验,组织用甲醛固定后在流水中冲洗5小时后,仍留有相当多的甲醛与蛋白质相结合,但需要经过长时间的流水冲洗(24天的冲洗)方能除去.可见存在于组织上的甲醛是不可能除去的.因为临床活检不可能有这么长的时间来冲洗组织.因此要特别指出的是,在其后的各种技术操作中,要特别注意到甲醛的存在,必须要想办法除去它,否则将会给各种染色造成影响,甚至导致失败。
大体标本常用的固定液
大体标本常用的固定液
固定液是生物组织或细胞学研究中不可或缺的一部分，它可以帮助保存和稳定组织和细胞，使它们能够在后续的样品处理和分析中保持完整。
一般来说，固定液包括多种化学成分，不同的固定液适用于不同的组织和细胞类型。
以下是最常用的固定液：
1. 10% 福尔马林（Formaldehyde）
福尔马林是最常用的固定液之一，它可以作为一种信标分子，标记细胞蛋白。
福尔马林具有良好的渗透性，能够迅速渗透到组织中，提供良好的固定效果。
2. 十二烷基硫酸钠-10%EDTA浸液（SDS-EDTA Buffer）
SDS-EDTA浸液是常用的细胞质微管结构和线粒体固定液。
该固定液是一种离子池化学固定液，能够特异性地固定蛋白质，适用于研究细胞骨架和线粒体。
3. Bouin液
Bouin液是一种精细的组织学固定液，不过使用比较少。
该固定液包括福尔马林、酯化醛和乙酸，可以用于特异性地固定肝脏和其他含脂肪的组织。
4. Carnoy液
Carnoy液是一种比较强的组织学固定液，由95%的乙醇、氯仿和冰醋酸组成。
该固定液可以用于稳定核质和细胞膜，适用于肝脏和小肠等组织。
5. 4%多聚甲醛（Paraformaldehyde）
4%多聚甲醛是一种可以在室温下固定细胞和组织的固定液，可以优先固定蛋白质和核酸。
多聚甲醛很便宜，但其固定效果不及福尔马林。
需要注意的是，不同的固定液会对研究结果产生不同的影响。
因此，选择固定液前需考虑组织或细胞类型、后续的实验目的和预期结果等因素，才能选择最合适的固定液。
同时，固定液使用时需要注意安全，防止吸入和接触固定液。
常用的组织固定液及配制
常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1甲醛（formal dehyd e）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formal in）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。
3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。
此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。
4 AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。
也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。
此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。
以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。
yzbaiwrote:（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。
对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。
能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。
经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。
（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。
Bouin's脱钙液
Bouin's脱钙液货号：G2530规格：100mL/500mL保存：4℃保存，12个月有效。
产品说明：在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋切片。
这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。
对含钙组织最好固定之后，再进行脱钙或二者同时进行。
然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。
用于脱钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。
EDTA是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经EDTA脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色。
但是该法脱钙速度太慢，一般脱需要数周至数月。
Bouin's脱钙液可用于固定，亦可用于脱钙。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料：1、PBS2、蒸馏水3、加热装置或微波炉注意事项：1、厚度5mm的骨组织块脱钙时间一般脱钙10~30天即可，大多数在14～60天即可。
2、适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松散解体，尤其不可大于60℃。
3、脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。
脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。
4、脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。
第1页，共2页5、骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的损伤程度。
6、每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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(完整版)常用的组织固定液及配制
常用固定液及其配制固定液分单纯固定液和混合固定液。
1甲醛（formaldehyde）是无色气体，易溶于水成为甲醛溶液。
易挥发，且有强烈刺激气味，常用得是37％～40％得甲醛溶液，商品名为福尔马林（formalin）。
用作固定的浓度习惯为10％福尔马林（即1份甲醛溶液加9份水配制而成），实际含甲醛4％。
10％福尔马林渗透力强，固定均匀，对组织收缩少。
对脂肪、神经及髓鞘、糖等固定效果好，是最常用的固定剂。
经福尔马林固定时间长的组织，易产生黑色的沉淀，称福尔马林色素。
2 乙醇无色液体，易溶于水，它除可作为固定剂外，还可作为脱水剂，对组织有硬化作用。
固定用一般是80%~95%浓度，乙醇渗透力校弱，它能溶解脂肪，核蛋白被沉淀后，仍能溶于水，因此核的着色不良。
3 中性甲醛液（混合固定液）甲醛（浓）120ml，加蒸馏水880ml,磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）4g，磷酸氢二纳（Na2HPO4）13g。
此液固定效果比单纯10％福尔马林要好。
4 AF液（混合固定液）95％乙醇90ml，甲醛(浓)10ml。
也有配方是95％乙醇85ml，甲醛（浓）10ml，冰醋酸5ml。
此液除有固定作用外，兼有脱水作用，因此，固定后可直接入95％乙醇脱水。
以上4种固定液中，以中性甲醛为首选，其次为10％福尔马林，乙醇应尽量不用。
yzbai wrote:（1）10%甲醛：对组织渗透性强，固定均匀。
对组织膨胀约5%，经酒精脱水时有较大的收缩。
能保存脂肪，不能沉淀核蛋白及白蛋白，长期用其固定的组织使组织变为酸性，不利于染色，特别是细胞核的着色。
经自来水冲洗6~24小时后，可以使其酸碱中和，并减少结晶。
（2）4%多聚甲醛：对组织穿透性好，组织收缩小，对大多数抗原物质保存较好，特别是对脂肪和各种酶的固定效果更好。
固定的时间不宜太长，以24小时以内为宜，适用于免疫组织化学染色。
几种细胞固定方法选择最佳固定液标准是：（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。
Bouin's固定液使用说明
仅供科研版本号：180725Bouin's固定液【产品组成】【保存条件】室温,避光,12个月【产品概述】固定的目的在于保存细胞和组织的原有形态结构，固定剂能阻止内源性溶酶体酶对自身组织和细胞的自溶、抑制细菌和霉菌的生长。
固定剂通过凝固、生成添加化合物等使蛋白质内部结构发生改变，从而使酶失活。
固定液主要分为醛类固定液、汞类固定液、醇类固定液、氧化剂类固定液、苦味酸盐类固定液等，较常用的是醛类中的福尔马林、醇类中的乙醇。
Bouin's固定液(Bouin's Fluid)主要由PA、甲醛、乙酸混合而成，PA可沉淀蛋白引起组织收缩，但不会使组织硬化,其与甲醛和乙酸混合后，穿透速度加快，固定均匀，组织收缩轻微，对细胞的微细结构显示的很清晰，为一种良好的固定液。
尤其对Masson三色法等的结缔组织和肌纤维染色有媒染作用，经其固定后的组织着色鲜艳。
该固定液也可能软化皮肤和肌腱，以利于切片。
【使用方法】1、一般仅需固定30～60min。
如果组织块大，可适当延长固定时间，但不宜超过24h。
2、用Bouin固定液固定后，组织可稍微流水冲洗或不冲洗直接转入70%的乙醇脱水，经乙醇脱水时可除去大部分PA，组织留有一点黄色，对染色也无影响。
【注意事项】1、Bouin's固定液对人体有一定的损害，请在通风好的环境下小心操作，避免吸入。
2、组织取材的厚度不同，固定时间也不同，对组织恰当的选材有利于固定液的渗透。
常规活检组织比较适合的厚度为2～4mm，一般不超过6mm。
3、固定液的容量应足够，一般固定液与组织块的体积比率应大于10:1。
如果容积不够大，可以在固定期间更换1～3次固定液。
4、温度对固定的影响很明显，提高温度可以加速固定作用，但温度不宜过高。
5、取出新鲜组织后，应及时固定，无法及时固定时，应保存于生理盐水中及时送检。
南京森贝伽生物科技有限公司网址：/第1页。
一些固定液及方法介绍
一些固定液及方法介绍前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛最为常用。
在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1.4%多聚甲醛-O.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）试剂：多聚甲醛40g0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500〜800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer 以下简称PB）,加热至60C左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，最后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，最好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2〜24h。
另外, 该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠试剂：A液：多聚甲醛40g蒸馏水400mlB 液: Na2HPO4?2H2O 16.88g蒸馏水300mlC 液：NaOH 3.86g蒸馏水200m配制方法：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。
注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。
B液和C液配制好后，将B液倒入C液中, 混合后再加入A液，以1N NaOH或1N HCl将pH调至7.2〜7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4 C冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%〜1%。
该固定剂较温和，适于组织的长期保存。
组织标本于该固定液中，4 C冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3. Bouin's 液及改良Bouin's 液试剂：饱和苦味酸40% 甲醛250ml冰醋酸50ml配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），最后加入冰醋酸，混合后存于4 C冰箱中备用。
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Bouin固定液
Bouin Fixative Solution
编号名称规格单位
北京华越洋WG07113Bouin固定液250ml，500ml瓶
Bouin固定液说明：
Bouin固定液是常用的混合型固定液，其渗透能力强，固定均匀，组织收缩小，不会使组织变硬变脆。
适用于绝大部分组织，特别适用于睾丸活检组织的固定。
固定时间一般需要12-24小时。
保存条件：4℃避光保存，有效期半年。
一般固定液固定时的注意事项：
(1)固定液量：20倍于材料的体积，以免固定液被稀释。
(2)选择合适的固定液：渗透力强的固定液既可以迅速进入组织中，又不使组织过度收缩或膨胀。
(3)固定的时间要合适：
与材料的大小和温度有关：材料大则时间长，材料小则时间短；温度高则时间短，温度低则时间长。
经固定的材料如不及时使用，可以经过90%酒精换到70%酒精中各半小时，再换入一次70%酒精，在0-4℃冰箱内可保存半年。
经过较长时间保存的材料进行观察前可以换新的固定液再处理一次，效果较好。
一般固定液具有的特点：
(1)迅速渗入组织，杀死原生质。
在杀死的短时期中，细胞形态不致有所变化。
(2)必须具有渗透力，对组织各部分的渗透力相等，可使组织内外完全固定。
(3)尽可能避免使组织膨胀或收缩。
(4)使细胞内的成分凝固或沉淀。
(5)增加细胞内含物的折光程度，易于鉴别。
(6)增加媒染作用和染色能力。
(7)使组织变硬，具有一定的硬度。
(8)固定以后能起到保存的作用。
(9)在凝固原生质以后，增加细胞对于各种穿透的抵抗力，不致于因以后的处理而使固定的原生质变形。
华越洋Bouin固定液其他相关固定液：
通用组织细胞固定液
Champy固定液
Helly固定液
AAF固定液
Bouin固定液
戊二醛固定液
Zetterqvist固定液
B-5固定液
Bouin固定液
Dafano固定液
Gendre固定液
Methacarn固定液
A-F固定液。