园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定(精)ppt课件
实验二 花粉生活力的测定
实验二花粉生活力的测定一实验目的掌握花粉生活力鉴定的方法和原理二实验材料羽衣甘蓝、矮牵牛、三色堇等植物的花粉三仪器及药品载玻片、盖玻片、解剖针、镊子、标签、记号笔、显微镜、天平、烧杯、培养皿、玻璃棒、滴管、量筒、电炉、石棉网、烘箱蔗糖、琼脂、蒸馏水、磷酸二氢钾、磷酸二钠、TTC四实验原理花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少通常与其生活力密切相关，因此可利用花粉的形态观察过氧化物酶、脱氢酶活性的高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，主要有1 直接鉴定法2 形态观察法3 染色观察法4 培养基发芽法五实验步骤花粉生活力的测定染色观察法——TTC染色1 配置TTC染色液，称取0.5gTTC溶于100ml磷酸盐缓冲液中，装入棕色瓶2 制片：取少量花粉于载玻片上，滴入1~2滴0.5%TTC染色液，用镊子搅拌均匀，盖上盖玻片，于35~40°C条件静置15~20min。
3 观察统计：在显微镜下观察三个不同视野。
凡被染成红色或玫瑰色都是有生活力的花粉.培养基发芽法——固体培养基1 配制培养法：取1g琼脂，5g蔗糖，量94ml蒸馏水，装入烧杯，加热使琼脂溶化，配成5%浓度培养基。
同法配置10%、15%、20%浓度的培养基。
2 制片：用滴管吸取少量培养基，趁热滴在载玻片上，使放置凝固。
3播种花粉：少量的花粉均匀撒播4培养与观察：将制好的片子放在垫有湿润滤纸的培养皿内，于20—22℃温箱中培养。
待花粉萌发后于显微镜下观察，并统计发芽率，观察是每片随机取三个视野，统计花粉总数，计算平均发芽率。
六作业及思考题同种植物材料培养基法测得的花粉生活力较低染色法测得的花粉生活力较高原因：因为用染色法时，只要是有活力的花粉粒就会被染上颜色，而有活力的花粉粒却不一定会萌发。
花粉生活力测定
解决办法：通过多媒体结合案例讲解后学生动手操作，教师指导。
教学方法及手段
演示、学做
教学准备
多媒体课件、植物花粉、载玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、干燥器、TTC
教学过程及内容
讲解花粉生活力测定的原理和方法
实际操作蔗糖琼脂培养法和染色法
教学过程
教师活动
学生活动
教案设计说明
（2）发芽床的设置和播撒花粉：在盖玻片上滴一滴培养基，用棉耳棒蘸上花粉少许，均匀撒于培养基表面，但应防止花粉埋入培养基中而影响花粉发芽。播撒花粉后，要在显微镜下检查花粉是否分布均匀，再将载玻片置入用湿纱布或湿滤纸垫底以保湿的大培养皿中，盖上皿盖。在各载玻片上贴上标签，注明花粉种类、采集时间、蔗糖浓度、播粉时间和操作者，然后置于25～28℃的温箱中。
时间分配
教学内容
讲解实训原理演示实训过程，布置实训任务
观看多媒体
结合实训过程讲解
20min
教学内容
指导实训
蔗糖琼脂培养法
学生练习思考
90min
教学内容
指导实训
染色法
学生练习思考
45min
教学内容
检查实训内容的掌握
记录实训结果完成实训报告
25min
教学反思
湖北生物科技职业学院教案附页
一、花粉生活力测定的意义
②试液的配制
Ⅰ.磷酸盐缓冲液。在100ml的蒸馏水中，溶解0.832g的Na2HPO4·2H2O和0.273g的KH2PO4，调整pH值为7.17。
Ⅱ.TTC溶液。称取0.02～0.05g的TTC，溶解在10ml的磷酸盐缓冲溶液中，放入棕色滴瓶内，置于暗处。TTC为有毒性物质，操作时应注意安全。
花粉的形态观察及生活力测定
实验一花粉贮藏及花粉生活力的测定花期不遇给杂交工作造成困难，有的园林植物可通过调整花期来解决，有的则不得不进行花粉贮藏，或者从外地寄运花粉。
为了避免杂交工作失误，在使用外地寄来的花粉或经过一段时间贮藏的花粉之前，必须对花粉的生活力进行检测，以便对杂交结果进行分析与研究。
因此我们必须掌握花粉贮藏及花粉生活力测定的原理和技术一、实验目的掌握花粉贮藏及花粉生命力鉴定的方法和原理。
二、实验材料百合、金鱼草、菊花等花粉。
三、仪器及药品显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、解剖针、吸水纸、TTC（2.3.5—氯化三苯基四唑）、KI-I2、蓝墨水。
四、实验原理花粉在低温（ 0 ～ 2 ℃）、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低，花粉贮藏的原理就是要创造这样低代谢的环境条件，从而延长花粉的寿命。
花粉的形态、花粉中酶的活性以及积累淀粉的多少（淀粉质花粉）通常与其生活力密切相关，因此可以利用花粉的形态观察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀粉的含量以及在人工培养基上花粉管萌发的情况作为鉴定花粉生活力高低的标准。
鉴定花粉生活力的方法很多，概括起来主要有如下几种：1 ．直接测定法将待测花粉直接授粉，然后统计结实情况。
此法最准确，但需时较长，且实验结果易受气候条件的影响。
也可在授粉后隔一定时间切下柱头，在显微镜下压片检查花粉的萌发情况，根据萌发率的高低来鉴定花粉的生活力。
2 ．形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据品种花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
3 ．染色观察法1 ）碘－碘化钾染色法：以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察，花粉被染成蓝色者表示具有生活力，花粉呈黄褐色者不具有生活力。
2 ） TTC 染色法：使用TTC测定花粉生命力的原理，主要是无色药液进入花粉遇到活组织里的脱氢酶，接受氢离子，还原成红色三苯基甲腊TTF，还原结果使有生命力的花粉染上红色，死花粉不着色；花粉生活力强弱有异，染色深浅也有不同。
实验一 花粉生活力的测定
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO掌握用形态法、染色法、发芽 法测定花粉生活力的具体技术和方法。 2 观察花粉在人工配制的培养基上的萌 发情况，认识花粉萌发形成花粉管的 外形和伸长过程，为理解植物的生殖 过程奠定基础。
【实验原理】 花粉的生活力因植物种类不同而差异很大。在自 然条件下，大多数植物的花粉从花药散出后只能 存活几小时，几天或几个星期。一般木本植物花 粉的寿命比草本植物的长，如在干燥、凉爽的条 件下，柑桔花粉能存活40～50天，椴树45天，苹 果10～70天，樱桃30～100天，麻栎一年。而在 草本植物中，如棉属花粉采下后24小时存活只有 65％，超过24小时很少存活；多数禾本科植物的 存活时间不超过一天，如玉米1～2天，水稻花粉 在田间条件下经3分钟就有50％丧失生活力，5分 钟后几乎全部死亡，是寿命最短的例子。花粉粒 的类型和生活力也表现了相关性，通常三胞花粉 的寿命较二胞花粉短，如水稻等禾本科植物为三 胞花粉，寿命都是比较短的。
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
【实验方法与步骤】 鉴定花粉生活力的方法有很多，概括起来 不外下列几种：一是将待测花粉直接授粉， 最后计算结实数和结籽数；二是将花粉授 到柱头上，隔一定时间切下柱头，在显微 镜下观察花粉萌发情况，测定萌发率；三 是形态观察；四是染色观察；五是在人工 培养基上播种花粉，观察萌发率。
1 形态观察法 一般把具有品种典型性的花粉（指具有该 品种花粉粒的大小、形态和色泽等）作为 具有生活力的花粉，把小型的、皱缩的、 畸形的作为无生活力的花粉。 形态观察的具体方法是：首先将花粉置于 载玻片上，在显微镜下查看三个视野，要 求被检查的花粉粒总数达100粒以上，计算 正常花粉粒占总数的比率。此法简便易行 但准确性差，通常只用于测定新鲜花粉的 生活力。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 不同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
不同园艺植物花粉离体培养生活力的测定分析
3.醋酸洋红法
【原理】正常花粉呈圆球形,物质积累较多,对醋酸洋红的吸附作 用与亲和力强,通常易被染成深红色,发育不良的花粉常呈畸形, 不积累物质或积累很少,用醋酸洋红染色呈淡红色或无色。
2.氯化三苯基四氮唑（TTC）法
【原理】 具有活力的花粉呼吸作用较强，其产生的NADH2或 NADPH2可将无色的TTC（2,3,5-氯化三苯基四氮唑）还原成 红色的TTF（三苯基甲）而使其本身着色，无活力的花粉呼吸 作用较弱，TTC的颜色变化不明显，故可根据花粉吸收TTC后
的颜色变化判断花粉的生活力。
花粉贮藏的原理在于创造一定的条件，使花粉降 低代谢强度，延长花粉的寿命。花粉寿命的长短， 因植物种类不同而异。在自然条件下，大多数植 物的花粉从花药散出后只能存活几小时，几天或 几个星期。
花粉寿命的长短除了上述因种遗传性的差异 以外，还与温度、湿度有密切的关系。通常 高温高湿下花粉呼吸旺盛，会很快失去生命 力，但在极干燥的条件下，花粉失去水分， 也不利于保存。
用镊子取出花药（每个园艺植物取20个花蕾的 花药）置于培养皿（纸盒-花粉量多）中，写上 标签，进行必要的加温处理（培养箱温度25℃ 使其散粉。
（3）花粉的储藏
散粉然后将花粉收集于2ml的离心管（花粉瓶） 中，用封口膜密封盖子，写上标签置于冰箱 （-20℃）内储藏备用。（或者不同温度25℃， 5℃、0℃、-20℃、-40℃和-86℃下贮藏）。 注意采集花药开裂前后的新鲜花粉，对不成 熟的幼嫩花药的花粉，成熟过头的花粉被雨 露粘湿的花粉，有疑问的花粉杂质要除去。
植物花粉生活力测定技术
在育种工作中，有时需要将花粉保存一段时间。虽然人们已经知道，花粉保存以温度较 低（0～15℃），空气湿度稍干（不能太干）、黑暗条件下为宜。但是各种不同植物花粉寿命 长短相差悬殊，这一是由花粉本身的特征决定的，二是由贮藏条件决定的。一般来说，禾谷 类作物花粉的寿命较短，自花授粉植物花粉的寿命尤其短，如小麦在花药开裂后 30min，花 粉即由鲜黄色变为深黄色，此时已有大量花粉丧失活力。在许多特殊条件下，花粉的生活力 的测定显的很重要，如：
一、试材及用具
1．材料：几种植物的不同处理花粉；如：小麦、玉米、大白菜、黄瓜、杏、苹果等。 2．试剂：配制好的缓冲液、联苯胺液、过氧化氢液、TTC 粉、蔗糖、琼脂等； 3．用具：显微镜、载玻片、盖玻片、凹面载玻片、玻璃棒、擦镜纸、吸水纸、标签纸、 铅笔。
二、方法步骤
（一）直接检验法 每个实验小组选定同品种种株去雄。注意：选用的花蕾最好是花前 1～2d，且发育正常、 饱满。每天去雄 20 个花蕾，然后套袋隔离，连续 5d，共 100 朵花。这一实验要和花粉贮藏 实验相配合，即花粉贮藏的当天开始去雄。授粉时，每去雄一次，分别授以两种不同贮藏条 件下的花粉（各 10 朵），连续 5d，就使得贮藏期分别为当天、第二天、第三天、第四天、 第五天的花粉授到了去雄后的花蕾上。实验时，一定要挂牌标好品种、花粉贮藏期、贮藏条 件、株号、授粉日期、授粉人。等最后一个处理完后十天，检验结实率和结籽率。将得到的 结果填入表 1－6。 （二）染色鉴定法（TTC 法） TTC 即 2、3、5－三苯基四唑氯化物。主要原理在于检验花粉呼吸过程中去氧酶的活性。 具有生活力的花粉的脱氢酶，在催化去氢的过程中，把氢转移到其他的物质上去，使用 TTC 与催化过程中产生的氢结合成红色化合物，从而使具有生活力的花粉变为红色。 1．先配制下列溶液 （1）磷酸缓冲液：在 100 毫升的蒸馏水中，溶解 0.832 克的磷酸氢二钠和 0.273 克的磷 酸二氢钾，调整 PH 值为 7.17。
实验：园艺植物花粉生活力测定
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
凤梨科植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
银叶树花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
爵床属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
桤木(桦树家族成员)的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
松树的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内， 花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶中，瓶口上塞以棉 花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。 把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在相对湿度较 低（一般0～40%）、低温（0～4℃）黑暗的条件 下贮藏。 用室温、正常空气湿度贮藏的花粉作对照。
五、方法步骤：
（二）药品配制
三、说明：
父母本花期不一致时，花粉需要经过 一段时间的贮藏；从外地采集花粉做父本 时，花粉要经过运输、邮寄过程。
因此在杂交前应检验花粉的生活力， 以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作 的失败。
四、实验原理：
1.碘-碘化钾染色法
正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则
较少。正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良
花锦葵属植物的花粉
瑞士摄影师马丁-奥格里利(Martin Oeggerli) 用扫描电子显微镜拍摄的花粉照片
花粉的贮藏和生活力测定
实验三花粉的贮藏和生活力测定一、目的和要求在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
从生产上来看，在选择相互授粉的品种时，也应考虑到品种的花粉发芽能力，凡是花粉发育不全的品种，其花粉的发芽率都很低。
因此不适宜做授粉品种。
本实验的主要目的是掌握花粉贮藏和花粉生活力测定的方法。
二、花粉及用具材料：桃或苹果树的花粉。
用具：显微镜、天平、盖玻片、凹式载玻片、培养皿、干燥器、试管、滴瓶、蒸馏水、凡士林、蔗糖、氯化钙、琼脂、联苯胺、α-奈酚、碳酸钠、过氧化氢等。
三、方法（一）花粉贮藏从发育良好的植株上采下将开的花朵、取出花药放在纸上或培养皿中，放于干燥的室内，令其开裂，花药裂开后将花粉倒入小玻璃瓶或指形管中，口上塞以棉花或橡皮塞，贴上写有品种名称的标签。
再把花粉瓶放于干燥器内，使花粉在空气相对湿度较低的条件下（一般0～40%）保存；为了减少呼吸作用，可以放在低温（0～4℃）黑暗的地方贮藏。
（二）花粉生活力试验1、花粉发芽法人为的创造适合于花粉发芽的环境条件，以花粉发芽的情况来鉴定花粉生活力的强弱，此法的缺点是花粉发芽条件与实际不完全相符，所得的结果与实际有一定的差异，但操作方便，能测定出相对发芽率来。
（1）培养基的制作与接种一般采用5～20%蔗糖或葡萄糖加1～2%琼脂，溶于蒸馏水中。
加热煮沸即可，将已配制好的培养基保持在40℃温度即不凝固，用玻璃棒点一点培养基敷在载玻片的凹坑内，然后用接种针或解剖针沾以少量花粉。
轻轻振动，使花粉均匀地撒在培养基上，将载玻片放在垫有湿润棉花培养皿内或倒扣在培养皿上，并贴上标签写明处理、种类、播种日期，将培养皿放于20℃的恒温箱中培养。
（2）观察记数在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）若发现花粉已发芽时，便按一定方向，就同一视野中用记数器记录花粉粒总数和发芽数，观察记录3～5个显微镜视野的数字，求其平均数，即得出花粉发芽百分率。
花粉生活力测定
谢谢大家！
三、实验用品
1、材料 正在开花的植株花粉（大樱桃 美早）
2、器具 盖、载玻片 凹式载玻片 培养皿 滴管 镊子 吸 水纸 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜
3、药品 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 六偏磷酸钠
四、内容与方法（花粉萌发）
（一）培养法： 1、配置培养基
取100ml蒸馏水中，加1~2g（即1%~2%）琼脂煮开， 使之溶解，然后再加入一定量的蔗糖或葡萄糖和0.01g 硼酸，制成不同浓度（5%、10%、15%、20%）的蔗 糖琼脂培养基。 2、制片 用玻棒蘸少许培养基，趁热滴入凹形载玻片，放置片 刻，待凝固后，撒上少许花粉粒。注意要均匀，不可 过多，否则，在显微镜下，不易分清数目。 3、培养 将制好的玻片放于培养皿，下面垫有滤纸，加入少量 水，以保持湿度。将培养皿盖好，置于20~25℃恒温 箱中。22 ℃
4、镜检 在显微镜下隔一定时间检查一次（花粉发芽快的经过
几个小时即可观察到已经发芽，慢的需24小时以上）， 若发现花粉已发芽时，就随机地在显微镜下取5个视野， 记录花粉粒总数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入 表内。
花粉发芽的标准，以花粉管伸长超出花粉直径为准。 若花粉发芽率在5%以下，为极弱，不能采用。 （花粉发 芽率=发芽花粉总数\花粉总数）培养过程要密切观察，不 可使花粉管萌发的太长，否则难以计数。
★简便，但是一般用于要求不严格新采集的花粉
花粉发芽鉴定：配制一定浓度的蔗糖溶液
等作培养基，在人工控制条件下进行花粉发 芽试验，根据花粉发芽率的高低衡量花粉生 活力。也可以在授粉数小时后直接观察柱头 花粉萌发伸长情况。
染色鉴定：用不同的化学试剂如氯化三苯
基四氮唑（2，3，5-triphenyl tetrazolium chloride、C12H15N4Cl，简称TTC或四唑）、 联苯胺茶酚等快速鉴定花粉生活力。
花粉活力的测定 PPT
4、计算有生活力种子的百分率。
活种子 死种子
二、实验材料、试剂及用具
1.仪器设备：培养皿、刀片、烧杯、镊子。 2.试剂：5%红墨水 3.材料：小麦种子
三、实验步骤
1、浸种：将待测小麦种子在 30 ～ 35 ℃温水中浸种6 小时左右，以 增强种胚的呼吸作用。
2、染色：取已吸胀的种子100粒，沿胚的中线切为两半，将一半置于 培养皿中（不能仅取50粒），加入 5% 红墨水（以淹没种子为度 ），染色 10 ～ 15 min （温度高时间可短些）（时间不宜太长，为 什么？）。
花粉活力的测定
实验目的
1、学会运用I2-KI染色法测定花粉活力； 观察花粉管的萌发。
2、掌握用红墨水法测定种子活力的原理 和方法。
Ⅰ花粉活力的测定及花粉管萌发的观察
一、实验原理
成熟花粉粒中积累有淀粉，用I2-KI可将其染 成蓝色，而发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉， 不能被染色或着色较浅；成熟花粉具有较强的活力， 在适宜的条件下就能萌发出花粉管。多种植物花粉 能在含10％蔗糖、100ppm硼酸的花粉培养基上萌 发，在显微镜下可观察花粉管的伸长。
二、环境因素对花粉ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ萌发影响很大
例如：小麦 10℃时，传粉后2h开始受精。 20℃时，萌发最好，30 min开始受精， 30℃时，萌发率比20℃低，花粉管生长快，
只需15min就受精了。 当温度再升高时，大量花粉不萌发。
Ⅱ 种子生活力的快速测定
一、实验原理
有生活力的种子其胚细胞的原生质具有半透 性，有选择吸收外界物质能力，某些染料如红墨 水中的大红 G 不能进入细胞内，胚部不着色。而 丧失生活力的种子其胚部细胞原生质膜丧失了选 择吸收的能力，染料进入细胞内是胚部染色，所 以可根据种子胚部是否染色来判断种子的生活力。
实验一 花粉生活力的测定
【思考题】 1 用染色法计算花粉生活力（3个视野）。用 发芽法计算花粉生活力（3个视野）。 2 同一品种花粉用不同方法测定时其生活力 高低的结果分析。
通常花粉的形态、花粉中酶的活性以及积 累淀粉（淀粉质花粉）的多少与花粉生活 力密切相关，因此可以利用花粉的形态观 察、过氧化物酶、脱氢酶的活性高低、淀 扮的含量以及在人工培养基上花粉管萌发 的情况作为确定花粉生活力高低的标准。
【实验材料、主要仪器及试剂】 1 实验材料 各种园林植物的花粉。如百合、牡丹、凤仙花、 柳树、菊花、月季、凤仙花、紫茉莉等植物的花 粉。 2 主要仪器 载玻片、凹玻片、盖玻片、解剖针、毛笔、棉球、 显微镜、恒温温箱、瓷盘、镊子、培养皿、玻璃 棒、玻璃铅笔、凡士林、标签、冰箱。 3主要试剂 碘-碘化钾、氯化三苯基四氮唑、 Na2HPO4· 2H2O、KH2PO4、蔗糖或葡萄糖溶液、 H3BO3，Ca（NO3）2，MgSO4，KNO3。
（2）培养基发芽法 a．培养基的制备：在250 mL的烧杯中加 入90 mL蒸馏水，再加入1g的琼脂，在酒精 灯上加热，使之完全熔解，然后加入10g蔗 糖，制成10％的糖液（如有可能，可配置 同含糖量的培养基，进行比较试验）。 注意用玻璃棒不断搅拌，使其融化均匀， 有条件时还可加入微量柱头渗出液、维生 素等以形成花粉粒发芽的最适环境条件。
2 染色观察法 （1）碘-碘化钾染色法 先称取0.3g碘和1.3g碘化钾溶于100mL的蒸馏水 中，即成碘-碘化钾溶液。取少量花粉振播到用棉 球擦净的普通载玻片上，然后加水一滴，使花粉 散开，再加一滴碘-碘化钾溶液，盖上盖玻片，置 于显微镜下观察不同的三个视野，凡花粉粒被染 成蓝色的表示具有生活力，呈黄褐色为缺少生活 力的花粉（淀粉遇碘变蓝是淀粉的特性）。 （2）氯化三苯基四氮唑（TTC）法 凡具有生活力的花粉，在其呼吸作用过程中都有 氧化还原作用，而无生活力的花粉则无此反应， 因此当TTC渗入有生活力的花粉时，其脱氢酶在 催化去氢过程中与TTC结合，使无色的TTC变成 TTF而成红色。
第五章 植物花药和花粉培养ppt课件
花药，使小孢子游离出来（此法应用最广）。
2、雄核发育与饥饿处理 饥饿处理改变了小孢子的配子体发育方向，启动
雄核发育。
精品课件
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2--细胞花粉 3--细胞花粉
精品课件
15
四、花粉植株形态发生方式
1、胚状体发育途径 小孢子经历胚发生的各个阶段， 最后子叶展开，形成花粉植株。
2、愈伤组织发育途径 小孢子分裂数次形成愈伤， 再分化形成花粉植株。此途径产生的植株会出现变 异且倍性复杂。
愈伤组织转接种到再生培养基
愈伤组织分化形成再生植株
精品课件
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第三节 花药和花粉培养方法
精品课件
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一、花药培养
1、取材 镜检，根据花粉的发育时期，选取大小适宜的花蕾。 2、消毒 70％酒精擦洗花蕾表面，或70％酒精浸泡30-60s后在1％ 次氯酸钠溶液中浸泡10-20min或在0.1％的氯化汞溶液中消毒3-10min， 无菌水冲洗3-5次。 3、培养 固体或液体培养基均可。先进行脱分化培养，至小孢子大 量分裂形成胚或愈伤，并突破花药壁表面，形成突出物（2-3周）； 后转入分化培养基培养，形成小植株。
精品课件
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胚状体发育途径
烟草花药培养
部分花药通过胚状体途径形成小植株
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烟草花药培养
通过胚状体途径再生形成小植株
精品课件
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胚状体发育途径
芸苔属小孢子培养
a) 球形胚
d) 鱼雷形胚
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愈伤组织发育途径
水稻花药培养
接种在平板上的水稻花药
精品课件
部分花药产生愈伤组织
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水稻花药培养
精品课件
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实验四、花粉生活力的测定
实验四、花粉生活力的测定一、实验目的：通过实验掌握花粉生活力测定的具体技术和方法。
二、实验原理：花粉生活力是指在正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力。
花粉生活力测定在杂交工作中很重要，尤其亲本花期不相同需要从外地采集花粉作父本时，花粉要经过一段较长时间的贮藏运输过程，因此在杂交前应检验花粉的生活力，以免应用无生活力的花粉而造成杂交工作的失败。
三、实验材料：苹果花粉四、实验用具与试剂：指形管、显微镜、载玻片、盖玻片、凹式载玻片、滴瓶、培养皿、天平、烧杯、玻璃棒、微波炉、滤纸、水浴锅、计数器、镊子；碘化钾（KI）、碘、蓝墨水、蒸馏水、蔗糖、琼脂、硼酸等。
五、实验步骤常用的测定花粉生活力的方法：形态观察法、碘-碘化钾染色法、蓝墨水染色法和培养基发芽法。
1. 形态观察法直接在显微镜下观察花粉的形态，根据花粉的典型性（如具有正常的大小、形状、色泽等）判断花粉的生活力，即形态正常的花粉有生活力，而一些小的、皱缩的、畸形的花粉不具有生活力。
具体方法：将花粉置于载玻片上，在显微镜下观察3个不同视野，要求被检查的花粉粒总数达到100粒以上，计算正常花粉粒占总数的比率。
此法简便易行但准确性差，一般只用于测定新鲜花粉的生活力。
2. 染色法(1) 碘-碘化钾染色法①原理：正常的花粉积累淀粉较多，而不正常的花粉则少。
据此，可用化学物质染色，根据呈色反应来间接测定花粉的正常与否和花粉生活力的差别。
通常正常花粉用I-KI染色后呈蓝色，而发育不良畸形花粉则不积累淀粉，当I-KI染色时呈黄褐色。
②I-KI溶液：取2.0 g KI溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1.0 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL，贮于棕色瓶中备用。
③具体方法：取少量花粉撒于载玻片上，加一滴蒸馏水，用镊子使花粉散开，再加一滴I-KI溶液，盖上盖玻片置于显微镜下观察。
凡被染色呈蓝色表示具有生活力，呈黄褐色者为发育不良生活力弱的花粉。
为了保证实验的准确性，要求观察不同的3个视野，求其平均值，统计花粉生活力。
PPT校园植物花粉形态的观察与研究
丁香
天竺葵
扶桑
百合
收获
1、我们明白了科研的严谨， 初步体验了做科研的艰辛；
2、提高了我们的动手能力， 提升了团队合作意识；
3、更加了解微观的植物世界和尚未 成熟的孢粉学。
谢谢
致谢：帮助过我们的老师和所有在场的评委。
君 子 兰
流程图
科 木兰科
木犀科 锦葵科 芸香科
属 木兰属 玉兰亚属
种 玉兰
丁香属
丁香
木槿属 柑橘属
扶桑 柠檬
蔷薇科 蔷薇属 蔷薇亚科
十字花科 芸苔属
月季 白菜
报春花科 仙客来属 仙客来
牻牛儿苗 天竺葵属 天竺葵 科
木犀科 连翘属
连翘
科
石蒜科
属
水仙属
种
水仙
木犀科 蔷薇科 蔷薇科
蔷薇科
茉莉花属/ 素馨属
在植物开花时，使用干净的镊子或毛 笔轻轻刷几下雄蕊，直接放入载玻片 上的蒸馏水中，进行观察。
花粉采集过程
• 室内植物花粉的采集： 在植物开花时，立即使用干净的镊子，
将雄蕊放入干净的密封袋中，放入冰箱 冷冻室冷藏。到学校后进行观察。
雄 蕊
使用设备
• 显微镜： • 德国ZEISS primo
star 普瑞塞斯 • 显微照相机：
图一
图二
图三
图四
结论
经过进一步观察，发现有七种纹饰类型，但由于 能力有限，并不能清晰看出疣状纹饰、脑纹状纹 饰以及穴状纹饰，只能凭借资料得出。
颗粒状纹饰-木犀科（丁香） 瘤状纹饰-牻牛儿苗（天竺葵） 疣状纹饰-蔷薇科 脑纹状纹饰-芍药科 刺状纹饰-锦葵科（扶桑） 网状纹饰-百合科（百合） 穴状纹饰-鸢尾科
石河中 2、 研究的过程 3、 结论与收获
第六章 花药与花粉培养[可修改版ppt]
![第六章 花药与花粉培养[可修改版ppt]](https://img.taocdn.com/s3/m/c32800c755270722192ef7fb.png)
➢液体培养法
➢液体培养的培养基厚约0.5cm,若能让花药漂浮在液 面上,效果最好。
➢加入聚蔗糖(Ficoll),可使花药不下沉而漂浮在液面 上。
第四节 花粉培养
含义：
花粉培养(pollen culture)是指把花粉从花药中剥离出来，在无菌的人工环境 中，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养使其进一步生长发育的技术。
优点：
在于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的小植株都是 单倍体植株，不会因药壁、花丝、药隔等体细胞组织的干扰而形成体细胞植 株。
花粉是研究细胞分化条件、胚胎发生和形态发生机制的较为理想的材料。建 立花粉培养实验系统也可为深入开展细胞工程、遗传工程和分子生物学的研 究提供技术基础。
一、花粉培养的一般操作程序
5.接种
• 在无菌接种室或超净工作台上进行接种操作， 采用直径3cm的试管，每管接种花药30～60 粒。
• 必须注意：在操作过程中，不应使花药受到损 伤，因为损伤常常会刺激花药壁形成二倍体的 愈伤组织。损伤的花药要淘汰。
6.脱分化培养
• 根据材料不同，选取适宜的基本培养基、 适当的生长素比例和最适的温度进行培养， 经10～30天可诱导愈伤组织形成。
• 花粉培养与花药培养的一般操作程序基本相同。 • 花粉培养在材料消毒后要将花粉从花药中分离出
来，再进行接种，其基本操作程序可参照花药培 养。
二、花粉的分离方法
➢自然散落法
➢ 把花药从未开的花中在无菌条件下取出，直接插接在无菌培养 基上，当花药自动裂开时，花粉散落在培养基上，移走花药， 让花粉继续培养生长。如果是液体培养基，可接种大量花药， 经1～2天，大量花粉散落入培养基中，经离心浓缩收集，再 接种培养。
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2-2南瓜的雄花和雌花
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三、方法和步骤
（一）花粉的收集和贮藏 1.收集花粉的植株必须是健壮，并具有标准的特
征特性。 2.收集前一、二日将开放的花蕾（或花序）进行
套袋，以免其他花粉混入。
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3.采集时应该选择将开放的花朵。
4.用镊子（镊子宜先用酒精浸洗，以免不同的花 粉混入）将花药取下。
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花粉
实验二
园艺植物花粉的贮藏和生活力的测定
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一、实验目的
1.了解花粉的主要贮藏方法。 2.学习并掌握花粉生活力与发芽率的测定方法。
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二、材料与用具
1.材料：月季、南瓜正在开花的植株 2.用具： （1）染色法：碘、碘化钾、蒸馏水等化学试剂；
生物显微镜，天平，载玻片，盖玻片，滴瓶等器 具。 （2）花粉发芽试验：生物显微镜，天平，凹玻片， 量缸，烧杯，电炉，玻璃棒，冰箱，量筒，滴瓶 等器具；琼脂，蔗糖，蒸馏水等化学试剂。
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（2）方法步骤：在载玻片上放有少量测定花粉，然后在花 粉上滴一滴染色液，用玻棒将之混匀后，在显微镜下 镜检，每片观察5个视野，统计出具有生活力的花粉的 百分率
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2.培养法
（1）原理显微镜下可直接观 察计算其萌发率，以确定其活力。
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5.装入已消毒而且干燥的花粉瓶内
6.置于干燥器内（干燥器底部放入适量的碳酸钙 或氯化钙）
7.将干燥器放于冰箱内（温度接近0℃而又是黑暗 的条件）贮藏备用。
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（二）花粉生活力的测定 1.染色法—I-KI
（1）实验原理：碘遇淀粉变兰色，正常的花粉淀粉含量高 而不正常的花粉含量少，正常的染成兰色颜色较深； 生活力弱的染成淡兰色；无生活力的染色呈黄褐色
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（2）方法步骤
①将培养基熔化后，用玻棒蘸少许，涂布在凹玻 片上，放入垫有湿润试纸的培养皿中，保湿备用。
②在25℃左右的恒温箱中培养，5~10min后在显 微镜下检查5个视野，统计其萌发率。
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四、思考题
1.上述方法是否适合于所有植物花粉活力的测定？ 2.哪一种方法更能准确反映花粉的活力？
3.绘花粉发芽形态图。