草莓的花药培养

合集下载

草莓的植物组织培养

1、通过本文的学习，掌握花药培养的基本方法 2、掌握植物组织培养的方法、步骤。
谢谢
观察几个视野，若多数花粉只有一个核并被挤向一侧，
即为单核靠边期，表明此时花药适合作外植体。
通常花粉单核靠边期的草莓花蕾形态是：未开放，
花萼略长于花冠或花冠刚露白，花冠白色或淡绿色且不
松动，花药微黄而充实。
（二）材料预处理
将从田间采集的花蕾，用湿纱布包好放塑料袋中，扎好袋口，置4℃左右冷藏箱
中放置24～48小时。
草莓花药离体培养的过程
任务1
采集草莓花蕾、检查花粉的发育时期
配制草莓花药培养的培养基
任务3
任务2
花蕾表面消毒、花药培养
任务4 任务5
诱导试管苗、鉴定并增殖培养试管苗移栽和管理
采集草莓花蕾、检查花粉的发育时期一、检查花粉的发育时期（材料选择）
单核靠边期的花药。方法：从田间采集花蕾数个，从每花蕾1～2枚花药于载玻片上，加醋酸洋红1～2滴，用玻棒或镊子将花药压碎，剔除碎片，加盖盖玻片镜检（压片染色法）。
草莓的》的学习，我们已经了解到大多绿色开花植物都是靠种子来繁殖的。那么，有没有不用种子来培育植物的方法呢？扦插
营养繁殖
嫁接
压条
组织培养
植物组织培养简介
植物组织培养是二十世纪发展起来的新技术，近三十年来由于组织培养基础理论研究的深入，发展极为迅速，发表的文献浩如烟海，几乎以植物为研究对象的各个分支学科都在广泛进行组织培养。
植物组织培养的基本过程
组织培养是指在人工培养基上，
离体培养植物的器官、组织、细胞和原生质体，并使其生长、增殖、分化以及再生植株的技术。
思考： 1、植物组织培养的原理是什么？

草莓繁育新品种方法

草莓繁育新品种方法
草莓繁育新品种的方法可以分为自交和杂交两种。

自交法是指将同一个品种的花粉授粉给同一个品种的雌蕊，使其自身进行授粉和结实。

具体步骤包括：
1. 选择优良的母本和父本作为育种材料。

2. 在开花期，将雄蕊和雌蕊分开，然后将雄蕊的花粉撒在同品系的雌蕊上，进行授粉。

3. 结果后，选择优良的母本子代进行筛选，即培育出新的品种。

杂交法是指将不同品种或种属的花粉授粉给另一品种或种属的雌蕊，使其杂交后形成新的品种。

具体步骤包括：
1. 选择具有不同特征的父本和母本作为杂交材料。

2. 在开花期，将雄蕊的花粉撒在雌蕊上，进行授粉。

3. 结果后，选择优良的杂种进行筛选和繁育，即培育出新的品种。

无论是自交法还是杂交法，都需要根据所需的遗传特性进行选择和筛选，包括植株形态、果实品质、抗病虫害性等。

在进行繁育工作时，还需要注意控制授粉的时间、适当施肥和管理等环境条件，以提高育种效果和繁育新品种的成功率。

草莓花药培养研究进展

直到８Ｏ年代，国内外仅有两例经花药培养获得单
倍体植株的报道，即国内薛光荣等通过改变培养基成分等措施，培养东方草莓的花药，首次成功得到单倍体植株；Ｎｃｉｗｃｚｚｔ等利用激动素代替ｉｒｉＳｃｙｍｏａｔＢＡ，从八倍体 “ ｅｇｕｔｔ品种获得了ｌＲｄａｎｅ” ｌ５个单
呈黄白色或红色（量为黄绿色）少，而丰香的大部分愈伤组织是褐色的。即使在同一种内，同一方
织阶段。西・大泽等由花药愈伤组织分化出不定芽形成植株，认为发现了育成单倍体植株的途径，但
草莓（ｒｇｒｎ。，Ｄｃ）是蔷薇科草Ｆａａｉ。ａｕｈ莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一。我
国草莓生产近年来发展很快，栽培面积也不断扩
织形成的研究中，获得１５个无性系植株中，其中０有９２株为八倍体，２株为七倍体，７株为十六倍体，４株为混倍体，未获得希望的单倍体，同时他还指出不能从动态上区分愈伤组织是起源于体细胞
是所得植株仍为八倍体。Ｒｓｔ由凤梨草莓４个品ｏａｉ
种的花药培养出植株，但染色体仍为５。庄子孝６
一
法，不同的材料间也有很大差别。有的材料对某些
培养基根本无反应。有关控制草莓花药培养胚发生

草莓组织培养研究进展

草莓组织培养[摘要] 从草莓组织培养类型（草莓茎尖组织培养、草莓花药培养、草莓叶片、叶柄组织培养）开始，介绍了近几十年国内外草莓组培的研究现状和进展。

[关键词]草莓;组织培养;草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，是世界上七大水果之一，素有“水果皇后”的美称。

草莓果实色泽艳丽，芳香多汁，酸甜适度，鲜美可口，营养丰富，每百克果实内含有蛋白质1g，脂肪0.6g，糖4～12g，酸0.8～2g，无机盐0.6g，粗纤维1.5g，Vc45～120mg，比苹果和葡萄高10多倍，并含有丰富的磷、钙、铁、锌等矿物质，其中锌的含量是香蕉的4倍以上，比柑橘高6倍以上，比苹果高40倍以上。

另外食用草莓对肠胃病和贫血病有一定的疗效，对促进智力发育有重要作用。

深受国内外消费者的喜爱。

草莓作为一种栽培周期短、结果早、见效快的经济作物，近15年来在我国发展迅猛，中国园艺学会草莓分会统计2003年底，我国草莓总面积和总产量均跃居世界第一位。

在浆果中，草莓的总产量和总面积仅次于葡萄，成为我国发展农村经济，促进农民增收的重要经济作物。

随着草莓在国内栽培面积的扩大和种植年限的延长，草莓的病毒病严重影响草莓的生产。

作为高级浆果的草莓，在我国目前的生产栽培上多沿用无性繁殖种苗：主要方法是匍匐茎繁殖和分株繁殖，但这两种方法效率低、种苗易退化、易造成病毒蔓延。

王国平（1988）等调查，我国栽培草莓带病毒植株率过80%以上，戴子林（1995）等调查，我国长江流域感染大面积植株感染率在50%以上；感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形、品质差、生长缓慢，一般减产30%-80%，并逐年加重；严重影响草莓的长势、品质和产量，对病毒病目前还没有药剂可以防治。

通过草莓组织培养扩繁草莓脱毒苗，可以解决上述问题。

近年来在草莓种苗生产中，有关草莓组培快繁技术的研究备受人们的重视，本文就草莓组织培养研究与应用作一综述。

一、常见草莓组织培养类型目前，国内外在草莓品种快速繁殖上已有不少报道：常用的外植体主要有：茎尖（Adam，1972；庆子孝，1972；谭兰英等，1981）、腋芽（Boxus，1974、1977；杨乃博，1981）、叶片、叶柄、茎段，花药（Quak,1977；大泽，1972）。

草莓脱毒步骤

草莓脱毒步骤
给草莓脱毒的方法有茎尖培养、热处理法、花药培养法等，其中花药培养法的步骤非常简单，在花粉到单核期时，就将花蕾剥取花药接种。

先清洗消毒，使用专业化学溶剂培养，草莓原种病毒20%以内的感染率才能算作合格。

1、茎尖培养
茎尖培养脱毒法是在短期内加速繁殖草莓优良品种以供商品化生产，挽救严重感染病毒的草莓，并结合辐射诱变进行草莓品种的改良和选育，是目前较为常用的脱毒法。

茎尖越小，脱毒越简单，去掉病毒的几率也就越高。

2、热处理法
热处理法是使病毒不活化、去除母株病毒为目的。

将草莓放在温度38℃环境下的高温中，处理11~13天，基本就能够脱毒。

对于皱缩病毒，则需要50天以上才能够达到脱毒目的。

在叶片喷洒多效唑溶
液可以提升草莓耐热性。

3、花药培养法
花药培养脱毒的有点在于操作简单，可繁殖量较大。

花粉到单核期时，采集花蕾剥取花药接种，经过消毒后使用专业的化学溶液进行培养。

将培养温度稳定在22～28℃，每天光照12～14小时，直到生根后，叶片3~4片时再移植。

4、脱毒生产
栽种出来的脱毒草莓原种，经过定植后，隔离在专门的无菌环境下，继续繁殖脱毒的草莓生产用苗。

这类操作一般会有专业的人工流程，对草莓原种病毒检测，不超过20%感染率才能算是合格。

草莓根尖染色体观察技术简介

草莓根尖染色体观察技术简介李富恒,韩雪梅利用花药培养方法培育草莓新品种是一种利用生物技术育种的新方法。

经过几年研究,已筛选出适宜草莓花药培养的培养基并摸索出一整套提高花药苗诱导率和成活率的方法。

从理论上讲,利用花药培养出的单倍体植株经秋水仙素加倍后成为双倍体植株,经过田间试验筛选出综合性状优良的,就可成为一个新的品种。

但由于通过花药培养诱导出的再生植株,可能是由花粉发育而来的单倍体植株,也可能是由药壁或药隔诱导成的双倍体植株,且由于草莓是同源多倍体(2n=8x=5b),在花药培养过程中由于激素等化学物质的作用,染色体常发生畸变,染色体数目会出现多种复杂情况,因此对花药培养再生植株进行染色体观察很有必要。

下面介绍一下草莓根尖染色体制片的操作步骤和在实践中作者的一些体会。

1草莓根尖染色体制片的操作步骤1.1取材根尖的取材最为方便,分生组织区又易于识别和截取,最适于进行染色体观察。

最好在雨后第2天取材,也可以头天浇水第2天取材,以上午9时前后取材为宜,此时分裂相较多,也有利于下步工作的进行。

1.2清洗用自来水把试材冲洗干净,剪下2cm备用。

场也没有完全打开,这在一定程度上制约了沙棘油的市场开发。

总结开发利用的教训,今后我们要在增加资源的基础上,以科技为依托、以市场为导向,以开发利用为突破口,加大开发力度、努力提高产品质量,积极开拓国内外市场,做到资源建设和经济收入双增长。

4强化市场开发,多方协作,大力发展沙棘产业无论在国内市场还是国际市场,沙棘产业都可以说是一个/朝阳产业0,市场经济条件下,科学研究要针对市场,如何将科研成果转化成生产力,沙棘的经济效益和社会效益充分发挥出来,必须在系列产品开发方面加大力度,走科研、生产、销售一条龙的道路。

我们可以借鉴其它果业开发成功模式,科研单位出技术成果,农民出土地,企业凭资金和设备,进行最佳组合,通过政府部门的宏观调控和市场经济牵动,充分发挥科技优势、企业优势和土地优势,加大产品的开发力度,增加产品的科技含量,使沙棘真正形成一个特色产业。

影响草莓花药培养因素的分析

影响草莓花药培养因素的分析查中萍1,2,柳俊13,刘定富2　(1.华中农业大学生命科学技术学院,湖北武汉430070;2.湖北省农业科学院,湖北武汉430070)摘要　以草莓“丰香”为材料,研究了不同花序花药的培养效果,预处理温度、培养温度对愈伤组织诱导的影响及不同激素配比对花芽分化的影响。

结果表明,草莓第1花序的花药具有较好的培养效果;4℃低温预处理花蕾有利于花药愈伤组织的形成;20℃条件下培养所形成的愈伤组织状态好,有利于芽分化。

草莓分化需要较高浓度的细胞分裂素,在MS+NAA0.2m g/L+BA0.5m g/L+ZT2.0m g/L分化培养基中,不定芽分化率为9.47%。

关键词　草莓;花药培养;因素中图分类号　S668.4 文献标识码　A 文章编号　0517-6611(2006)01-0024-01 草莓花药培养起始于20世纪70年代初,日本学者西・大泽等首先报道了草莓花药愈伤组织分化出不定芽形成植株,此后国内外有许多关于草莓花药培养再生植株的报道[1]。

目前草莓花药的研究多集中在花药植株的倍性鉴定、激素对花药培养的影响等方面[2],对于其他影响因素则报道较少。

笔者针对草莓不同花序的花蕾和预处理及培养温度对花药培养的影响进行研究,为提高草莓花药培养效率提供技术基础。

1　材料与方法以湖北省大面积栽培的草莓品种“丰香”为试验材料,取花药发育处于单核靠边期(约4～6mm)的花蕾,置于4℃低温条件下预处理3、5d或不经低温预处理后,用70%的乙醇表面消毒10～15s,再经2%的“84”消毒液灭菌15min,无菌水清洗3～4次,每次4～5min,用无菌试纸吸干花蕾表面水分后,剥取花药接种于诱导培养基上。

诱导培养基为MS+BA 0.5mg/L+NAA2.0mg/L+K T0.1mg/L;分化培养基为MS添加不同配比的NAA、BA、ZT。

所有培养基的蔗糖浓度均为30 g/L,灭菌前pH值调至5.8。

2　结果与分析2.1　预处理温度对愈伤组织诱导的影响　在花药接种前,将花蕾经过一段时间的低温处理,能提高花粉愈伤组织的诱导频率,是植物花药培养广泛采用的方法,但不同植物的适宜处理时间和低温条件有一定差异。

草莓花药不同类型愈伤再生能力比较

有待发展。
１材料与方法
１１供试材料以促成栽培草莓丰香的适龄期花蕾为材．
料。
１２接种方法和培养条件．
ｓｗ，ｒｅ，ｎｌｒａｅＴｐ１ｃｌｓａｏｒｈｆｓｌｇｅｎｒｕａｔ．ｙ１ａｌｓｆｕｉ，ｅｈ— ｗｉａｄｗｐ．Ｔｐｌｅｂｏｎｃｃｌｓａｏｎｆｓｏａｓｔｕｗｌｓｌｈｔｎｓａｙｙｅｎ（ｍｒｉ）ａｕｓｗｉｌｈｅｅｌｗｇｒｅ
应用生物技术是草莓品种改良和种质创新的重要手段，生物技术应用于草莓育种研究经过了一个发展过将
（４—６ｍ）将采取的新鲜花药放在８的低温中预处哂ａｒ， ℃
理１— ｄ３。
程。在草莓的生物技术研究中，草莓的花药培养在育种工
—
ｙｌｗ，ｎｒｓａｅＴｐａｌｓｗｓｉｄｃｄｆｏＦｍｅｉｍ．ＴｐＩｃｌｓｗａｂａｎｄｆｍｙｅＩｃｌｓｃｌｒｄｅｌａｄｃｉｔｔ．ｙｅＩｃｌｕａｎｕｅｒｍｄｕｏｓｙｅＩａｕｓｏｔｉｅｒｔｐａｌｕｔｅｌｏｕｕ
关键词：草莓；花药培养；生能力再
中图分类号Ｑ３３— ３文献标识码Ａ文章编号１０７３（０８２３００７— ７１２０）３— ５— ２
ＸｉａｎｇＦａｙｔｔｒｅｃｌｎｔｅｐｏｅｓｏｎｈｒｃｌｓｉｄｃｉｎａｄｓｂ—ｃｌｒＵｓｒｗｂｒ．Ｔｐａｌｓｗｓｓｒｃ：ｅｅｗｒｈｅａｌｉｈｒｃｓｆａｔｅａｌｎｕｔｎｕｉｕｏｕｔｅｉｔｕａｅｒｙｙｅＩｃｌａｕ

草莓的组织培养

草莓的组织培养草莓( Fr agaria ananassa Duch)是蔷薇科草莓属宿根性多年生草本植物,为世界性水果,其栽培面积和产量在世界浆果类水果生产中仅次于葡萄.草莓具有适应性广、栽培容易、结果早、产量高、收益好等优点,是一种经济价值较高的天然高档食品,除供鲜食外,还可加工成罐头、酱、酒、饮料等制品,并有较高的医疗保健作用.因此,全国各地都在积极引种.一、茎尖组织培养1.文章概述: 何欢乐, 阳静, 蔡润, 潘俊松等人以草莓匍匐茎为材料,截取3~4cm长的顶端.在双筒解剖镜下由外向内逐层剥去幼叶,直至闪亮半圆球的顶端分生组织充分暴露出来.切取 1.0mm的茎尖接种到MS培养基（3%蔗糖,8%琼脂,pH值为5.6）上,培养容器为100ml的玻璃瓶.培养基放30~40ml/瓶.茎尖培养通常先形成愈伤组织,再长出不定芽,经不定芽增殖形成植株.2.结论(1) 发生途径:选生长不久的草莓茎尖——材料处理及消毒——接种——培养——继代培养——生根.(2) 灭菌方法:自田间选取健壮草莓母株上生长充实而小叶尚为展开的匍匐茎顶端约3~4cm长的顶芽,用自来水冲洗2~3h后,在超净台上进行灭菌处理,先用小镊子将匍匐茎的外部大叶摘除,再用70%酒精快速处理30s,用饱和漂白精液浸泡15min,然后用无菌水冲洗3~5遍.(3) 培养基: 诱导草莓茎尖成活与生长的最适培养基为+BA 0.5mg/L.丛生芽的增殖,最优的增殖培养基以MS+BA 0.5mg/L为好.草莓是比较容易在培养基上生根的植物,其生根不需要任何激素刺激,只需1/2 MS 就可达到最好的生根效果.(4) 条件:光照31.25umol/m2/s,14 h/d,温度25±2℃.二、草莓叶片培养草莓品种改良多采用常规杂交育种技术,由于草莓的高杂合性和多倍性,使得杂交育种工作周期长、工作量大,而且目标性状常与不良性状连锁,造成育种效率低.生物技术作为现今植物改良的有效手段极大地推动了草莓育种工作的进程.自1990年以来关于草莓基因的研究进展很快,草莓成为继核桃、苹果之后第3个获得转基因植株的果树.为了实现基因操作、获得转基因植株,最基础的研究就是建立高效、稳定的再生体系,为后续的草莓遗传转化研究和新品种选育工作提供技术支持.目前已在丰香、全明星等很多草莓品种上建立了叶片离体再生体系.1. 文章概述: 董莉, 晁慧娟，董清华，金宝燕，高遐虹等人以草莓( Fragaria ×ananassa Duch‘Benihoppe’)组培苗为材料进行叶片离体再生研究,建立了一个高效的叶片再生体系.暗培养10天是叶片诱导愈伤组织最适合的暗培养时间.适宜的叶片诱导愈伤培养基为MS+TDZ2.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L,出愈率95.0%; 适宜的愈伤诱导分化培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L +NAA 0.1 mg/L,分化率90.0%; 最适宜的生根培养基为1/2 MS,生根率为100%.2. 结论（1）发生途径: 叶片愈伤组织的诱导培养——暗培养对愈伤组织的诱导——叶片不定芽的分化培养——再生植株的生根培养.（2）灭菌方法: 1. 用自来水反复冲洗5分钟.2. 7 5 % 乙醇消毒l分钟.3. 2 %次氯酸钠消毒1 0分钟.4. 1 % 氯化汞消毒1分钟.5. 无菌蒸馏水反复漂洗5次以上。

草莓花药脱毒培养技术研究

根据（１）表中三种激素三水平正交试验结果可以看出，草莓花药愈伤组织形成率在不同激素浓度配比的ＨＳ培养基上有较
明显的差异。由极差分析结果可以看出，一Ａ浓度对愈伤诱导率６Ｂ
１材料和方法
１１试验材料．
以宁夏永宁县温室栽培的草莓品种 “ 卡麦罗莎 ” 的花药为供
洗２次，～３在超净工作台上先用２次氯酸钠浸泡８ｉ，％ｍｎ无菌
水冲洗后用Ｏ１％升汞浸泡ｌｍｎ用无菌水冲洗３～４次，．ｉ。２然后
将花蕾放入装有无菌滤纸的培养皿中备用。
１．花药愈伤组织的诱导，２２
作用大小依次其次为６Ｂ－Ａ—ＫＮＡ在以ＨＡ，Ｓ基本培养基进行
维普资讯
１０
２０第６０７年期
宁夏农林科技
草莓花药脱毒培养技术研究
马洪爱，生虎，郭王敬东，高晓原
（夏农林科学院农业生物技术重点实验室，夏银川７００）宁宁５０２
摘要：以草莓新品种“ 卡麦罗莎” 的花药为供试材料，系统地筛选了花药脱毒苗培养过程中各阶段的最适培养基，
打开瓶口，在室温下炼苗３～５天后，出小苗，取洗去根部残留的
培养基，植在已经灭菌处理过的基质中，持合适的温度、栽保湿
度即可。
２结果与分析
２１不同激素浓度配比对花药愈伤组织诱导率的影响．
３～４月份，采集刚露白的花蕾，取花粉单核靠边期的花蕾选

草莓的植物组织培养

草莓的形态特征和生物学特性草莓（Fragaria spp．）为重要的浆果植物，•栽培分布很广，其总产量在浆果类中仅次于葡萄，居世界第二位。

草莓果实柔软多汁，含丰富的糖、酸、矿物质，维生素等。

•草莓可鲜食，也可加工成果酱，果酒等。

其颜色鲜艳，是良好的配餐食品。

草莓繁殖容易，结果早，收效快。

尤其是近年的促成栽培，利用塑料大棚、日光温室，使草莓的成熟期大大缩短，从每年的11月份到次年的6月份，都有新鲜草莓上市，填补了水果的淡季市场。

（1）形态特征草莓属多年生草本植物，•植株矮小，呈半平卧丛状生长，根系为须根系，在土壤中分布较浅。

草莓的茎呈短缩状，分地上和地下部分，地上短缩茎节间极短，节密集，其上密集轮生叶片，叶腋部位着生腋芽。

地下短缩茎为多年生，•是贮存营养物质的器官，也可发育成不定根。

匍匐茎是草莓的特殊地上茎，•是其营养繁殖器官，茎细，节间长，一般座果后期发生。

•叶属于基生三出复叶，呈螺旋状排列，在当年生新茎上总叶柄部与新茎连接部分，有两片托叶顶端膨大，圆锥形且肉质化。

离生雄蕊20～35枚。

雌蕊离生，呈螺旋状排列在花托上，数目从60～600不等。

•花序为二歧聚伞花序至多歧聚伞花序。

果实为假果，主要是花托膨大肉质化形成，瘦果以聚合果形式生于花托上。

果实成熟时果肉红色，粉红色或白色。

（2）生物学特性草莓根系在土壤温度达到2℃时开始活动，在10℃时开始形成新根，根系生长的最适温度为15～20℃，秋季温度降低到7～8℃时生长减弱。

春季气温达5℃时植株开始萌芽，茎叶开始生长。

草莓是喜光植物，但又比较耐荫。

光照充足，植物生长旺盛，叶片颜色深，花芽发育好，能获得较高的产量。

相反光照不良，植株生长势弱，叶柄及花序柄细。

叶片色浅，花朵小，果实小，着色不良。

草莓的根系分布较浅，加上植株矮小，而叶片则较大，因此蒸发量大。

在整个生长季节，叶片几乎都在不断地进行老叶死亡、新叶发生的过程，叶片更新频繁。

这些特点，决定了草莓对水分要求较高。

草莓生物技术研究进展

ｔｏｉｎ．
ＫｅｗｏｄＳｒｗｅｒ，ｉ－ｃｎｑｅｎｈｒｃｌｒ，Ｓｅａｅｕｔｒ，ＬａｄｅｌｃｌｙｒｓｔｂｒＢｏｔｈｉｕ，Ａｔｅｕｔｅｔａｙｅｕｍｐｘｃｌｅｅｆｎｄｉｕａｕ— ｔｒ，ｍｎｏｍｔｎｕｅＴ￣ｒａｉｏ
目前，已建立了草莓茎尖培养繁殖技术；花药培养无毒苗程序；不同外植体再生植株实验体系；草莓的遗传转化已获得了转基因植株。
１花药培养
草莓花药培养是获得无毒苗的途径之一，利用植物花药或未传粉子房培养单倍体植株，经染色体加倍形成纯台二倍体，用生物技术进行新品种选育的一种方法。草莓再是应
的花药培养通常先诱导出愈伤组织，再转入分化培养，形成分化植株。西・大泽（９２由１７）花药愈伤组织分化出不定芽形成植株，发现了育成单倍体植株的过程，所得到的植株为但
０山西省财政厅资助项目。作者简介｝程林梅．，女尉研究且主要从事作翱生物技术研究工作，以第一作者发表学木论文ｌ篇。６收稿日期：０－１６２１．接受日：０４－责任编辑：００２期２１）２０５７姜联合
（口－－１ｇ嘶，｛。・岛曲矗，，ａｕ０３）Ｔｉａ００１ｙｎ￣ｉｎ
ＡｈｄＯｌｉｌｄａ。ｓｗｒｍａｅｉｈｉ－ｅｈｒｓａｃｆｓ【Ｉ＝，ｗБайду номын сангаасｉｈｂｎｙｌｔｔｅ丑ｖＩｅｅｅ１ｄｎｔｅＢｏｔｅｅｒｈｏ劬ｗ捌Ｉｃｙｈｃｅ

实验六：草莓花药离体培养

实验六：草莓花药离体培养一、实验目的了解草莓花药离体培养的原理，初步掌握花药离体培养的方法。

二、实验器材和用具材料：草莓花瓣试剂：V/V为70%的酒精、无菌水、0.1%的氯化汞溶液、醋酸洋红试剂器具：显微镜、胶头滴管、吸水纸、培养皿等草莓花药培养基配方1 刘浩，阮玉妹，陈丽君MS＋6-BA 2mg/L＋NAA 0.2mg/L＋糖30g/L+琼脂8%2 李丕海，蒋英军MS+2,4-D 2mg/L+6-BA 0.2mg/L +蔗糖30g/L+琼脂8%3 廖璐莎，施洁燕MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂8%4 黄健，黄忠，梁幸MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L+糖30g/L+琼脂8％5 谢蜜蜜，林珍珍MS+KT 1.5mg/L+6-BA 0.2mg/L+NAA 1.5mg/L+糖25g/L+琼脂8%6 梁嘉麟梁新榜MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/L +蔗糖30g/L+琼脂8%7 覃佳，林秋萍，陈甘霖MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.2mg/L+糖30g/L+琼脂8％三、实验步骤1、材料的选取用醋酸洋红法确定花粉发育时期，通过镜检来确定其中的花粉是否处于单核期。

注：花粉细胞核内有染色体，染色体主要由DNA和蛋白质组成，醋酸洋红为碱性染色剂，色体容易被染色。

通过染色，可以确定细胞核为单核期还是双核期，是单核居中期还是单核靠边期。

一般单核靠边期的花药培养成功率最高。

2、材料的消毒1、花蕾用V/V为70%的酒精浸泡30秒2、无菌水清洗3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2~4分钟（也可质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）5、无菌水冲洗3~5次用于培养花药，实际上多数未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或颖片保护，通常处于无菌状态，所以只要将整个花蕾或幼穗消毒即。

3、接种和培养灭菌后花蕾，要在无菌条件下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。

草莓的组织培养研究进展

草莓的组织培养研究进展作者：李美林，张勇，朱丽君，王建鹏，袁云香来源：《饮食科学》 2014年第7期李美林，张勇，朱丽君，王建鹏，袁云香（渭南师范学院化学与生命科学学院，陕西渭南714000）摘要：在草莓的组织培养过程中，不同的外植体、消毒方法、不同种类不同浓度的植物生长调节物质对草莓的组织培养影响很大。

本文从草莓的外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、再分化及生根等方面进行了综述。

关键词：草莓；组织培养；再分化中图分类号：S668.4 文献标识码：A 文章编号： 1674-0432（2013）-08-14-2草莓是蔷薇科草莓属多年生草本植物，原产地南美。

草莓果肉含有大量蛋白质、糖类及果胶等营养物质，其维生素C含量高于苹果、葡萄等水果，口味酸甜，味道鲜美，是深受人们喜爱的绿色保健食品[1]。

我国从20世纪80年代开始致力于草莓引种及种植，草莓的传统繁殖方法主要有分株繁殖和匍匐茎繁殖，但这种方法致使草莓苗容易感染病毒，导致品质劣化、产量降低等退化现象。

为解决这一问题，研究者采取组织培养培养技术对草莓进行组织培养快繁，以期优化草莓质量[2]。

目前，关于草莓的组织培养较多，本文从草莓的外植体消毒、愈伤组织诱导、增殖、再分化及生根等方面进行综述，以期为草莓优良品种选育奠定理论基础。

1外植体选择草莓的组织培养常用的外植体主要有花药、茎、及叶等，其中花药最为常见。

如张慧琴等[3]以花药为外植体进行了辐照，对草莓花药愈伤组织诱导和分化的影响的研究。

晁慧娟[2]等选用花药作外植体进行了草莓脱毒培养的试验，张敏等[4]选用花药为外植体对“法兰地”草莓作了花药的组织培养研究。

1.1草莓的外植体消毒草莓外植体的消毒试剂常见的有酒精、升汞，酒精常与升汞联合使用，消毒前先用大量清水冲洗外植体，然后用70%～75%酒精浸泡外植体30s以内[5]，再以0.1%升汞处理8～15min，最后用无菌水冲洗干净。

此外，次氯酸钠也可用作外植体消毒剂[6]，一般是酒精处理后再用10%的次氯酸钠浸泡外植体10min，最后用升汞和无菌水处理。

草莓花药组织培养脱毒快繁技术研究

ｎｈｒｉｉｅｅｔｖｌａｔｅｎｄｆｒｎｅｅｏｍｅｔｅｏｓ『ｅｕｔＴｅｉｄｃｉｎｒｔｆｎｈｒｎｔｅｕｉｕｌａｅｓａｅｗｓｕｏ７．％ａｄｔａｎｔｅｌｔｓｄｐｎｒｄ．ｓｌｈｎｕｔａｅｏｔｅｈｎｎｃｅｔｔｇａｐｔ８９ｐｉＲ１ｏａｉｎｈｔｈｅｉａ
ＭＥＧＩ－ｉｇ（ｉｇｎｎｅｓｙＨｂｉｒｉｉａｏａｒｏｏｉａｅｏｉｒｇｎａｔＣｎｏＸａｇｎＨｂｉ３００ＮＺＩｑｎＸａａｉｒｔｕｅＰｏｎａＬｂｒｔｙｆｒｐｓｓｎｏｎｄｆｙｏｔｌｉａ，ｕｅ４２０）ｉｏＵｖｉ，ｖｃｌｏＣＤｅＭｔｉａＳｅｒ，ｏＡｂｔａｔ【ｂｃｖ】ｈｕｐｓｏｉｒｅｒａｕｙｔｒｓｒｎｐｄｐｏａａｏｃｎｌｙｎｉｕｕｕｒｗｅｙｓｃＯｊｔｅＴｅｒｏｅｆｈｓｅａｃｗｓｏｔｅｖｕ－ｅａｄｒｉｒｐｇｔｎｅｈｏｇｓｅｌｒｏｓａｂｒｒｅｉｐｔｓｈｔｓｄｈｉｆｅａｉｔｏｉｔｓｃｔｅｆｔｒ
维普资讯 ห้องสมุดไป่ตู้
安徽农业科学，ｕｎｌｆｎｕＡｒＳｉ２０，６２：０４１ＪｒａｏＡｈｉｇ．ｃ０８３（）４ — ４ｏ１．４
责任编辑金琼琼责任校对王淼
草莓花药组织培养脱毒快繁技术研究
ａｔｅ８ｔａｉｅｔｅｖｒｓｆｅｕｔａｉｎｏｒｗｅｒ．ｔｏ１．，．，．ａｄ２０ｍｇＬ６Ｂｎｅｅａｄｄｉｔａｉｍｄａｔｎｈｒｏ８ｒｌｚｉ－ｅｃｌｖｔｆｔｂｒ［ｈｄ５１１５ｎ．／一ＡａｄＫＴｗｒｄｅｎｏｂｓｅｉｓｏｅｈｕｒｉｏｓａｙＭｅ００ｃｏ

草莓的花药培养

工成果浆、果汁、果酒、糖水罐头及各种冷饮和速冻食品，深受广大消费者欢迎。由于传统繁殖方法病毒感染严重，产量低下，而且繁殖
系数低、度慢，能满足大规模生产的需求。采用组织速不而
数量增多，病加重。发与果树、花、类等邻近或间套种的棉瓜草莓，受到草莓传毒昆虫的侵袭而加重发病回易。
２草莓花药培养的一般钙铁及大量维生素和有机酸。除鲜食外，还可加
２２预处理．
要方法有热处理法、尖培养法和花药培养法等。中花药茎其
培养法脱毒率可达１００％。利用花药组培再生植株，要基于植株在形成性器官、主
将采取的新鲜花药放在２４的低温中储藏２ｈ～℃ ４。
２４培养基．
ＭＳＢ．／＋，一．ｍｇＬ＋Ａ１０ｍｇＬ２４Ｄ０５／（）１
草莓感染病毒后，别是感染单种病毒，多症状不显特大
著或者难以看出症状，为隐症。要表现为长势衰弱、称主退化，如新叶展开不充分，片小型化、叶无光泽，绿变黄，失叶缘部位失绿更严重，片皱缩、曲、叶扭群体矮化、果少、坐果型小、量低。莓病毒种类繁多，约有２产草现８种．国产区我普遍存在有４种，草莓斑驳病毒（Ｍｏ、莓皱缩病毒即ＳＶ）草

草莓花药培养中诱导不定芽情况研究

是：开放，萼略长于花冠或花冠刚露白，冠白未花花
色或淡绿且不松动，花药微黄而充实ｒ。３］
１２方法．
１２１基本培养基及添加成分基本培养基均．．采用ＭＳ，细胞分裂素采用０５ｍｇＩ．・，６Ｂ。的一Ａ，附加１０ｍｇＩ的Ｌ琼脂用量为７ｇＬ蔗糖０・Ｈ，・～，
１２２材料处理（）种：田间采集的花蕾，．．１接从用湿润纱布包好放塑料袋中，扎好袋口，于４置 ℃ 左右冷藏箱中放置２￣４。接种前将花蕾置于４８ｈ高压灭菌的广口瓶中，７乙醇浸泡３，用Ｏ／９６０Ｓ再用０１ＨｇＩ泡消毒７ｎ倾出Ｈｇ１，无．Ｃ浸～８ｍｉ，Ｃ用菌水洗涤４次。接种时在超净工作台上用长柄～５镊子刺破花蕾外壳，出花药放人消过毒垫有滤纸取的培养皿中，用接种环粘取花药转入愈伤组织诱导培养基上，均匀摆放在培养基表面［。（）５］２芽诱导：花药接种１～２５０ｄ后开始发生愈伤组织。待愈伤组织长至４ｍｍ大小，超净工作台内即可转在入４种芽诱导培养基上，陆续会分化出不定芽。１２３培养条件培养室温度２ ℃ 左右，强．．８光２００ｌ，日光照１。０ｘ每４ｈ
芽分。以．Ｌ－
关键词：养基；素配比；药；培激花草莓
中图分类号：６８４￥６．文献标识码：Ａ文章编号：０２２６（０１１—０３０１０ —７７２１）１０１—２

草莓的花药培养

草莓的花药培养摘要草莓传统繁殖易受病毒感染，使产量大幅度下降。

而利用组织培养中的花药培养技术使其脱毒率可达100%。

概述了草莓花药培养的一般方法，影响草莓花药培养的各种因素，如基因型、培养基成分、培养方式和环境、预处理等；还探讨了各种因素的最佳应用。

关键词草莓花药培养；发病症状；影响因素草莓（Fragari aananassa Duch）是蔷薇科草莓属多年生草本植物，果实鲜艳美丽、芳香浓郁、柔软多汁，且富含糖、蛋白质、磷、钙、铁及大量维生素和有机酸。

除鲜食外，还可加工成果浆、果汁、果酒、糖水罐头及各种冷饮和速冻食品，深受广大消费者欢迎。

由于传统繁殖方法病毒感染严重，产量低下，而且繁殖系数低、速度慢，不能满足大规模生产的需求。

而采用组织培养方法，既可快速繁殖，满足大规模生产的需求，又可以减少病毒、恢复种性、提高产量等。

培育草莓无病毒苗的主要方法有热处理法、茎尖培养法和花药培养法等。

其中花药培养法脱毒率可达100%。

利用花药组培再生植株，主要基于植株在形成性器官、性细胞时，部分或全部病毒被脱离。

其优点是从愈伤组织形成到分化出茎叶过程中，可以脱除病毒，并且脱毒率比较高。

国内外研究表明，草莓花药培养所获植株不带病毒，其生长发育表现优于母株，可省去病毒鉴定程序，可以在病毒种类不清和缺乏指示植物鉴定条件下使用[1]。

1草莓病毒病的症状及发病条件1.1症状及为害情况草莓感染病毒后，特别是感染单种病毒，大多症状不显著或者难以看出症状，称为隐症。

主要表现为长势衰弱、退化，如新叶展开不充分，叶片小型化、无光泽，失绿变黄，叶缘部位失绿更严重，叶片皱缩、扭曲、群体矮化、坐果少、果型小、产量低。

草莓病毒种类繁多，现约有28种，我国产区普遍存在有4种，即草莓斑驳病毒（SMoV）、草莓皱缩病毒（SCrV）、草莓轻型黄边病毒（SMYEV）和草莓镶脉病毒（SVBV）。

我国草莓产区这4种病毒单一品种带毒率在80%以上，2种病毒复合感染率在20%～30%，3种病毒复合感染率也有3%左右，单一病毒感染植株可使草莓减产20%～30%，2种病毒复合感染减产可达50%，栽培年限越长，感染病毒种类越多，发病受害程度越重。

11.6 花粉和花药培养的比较

花粉和花药培养的比较花药和花粉培养：指在合成培养基上，改变花粉的发育途径，使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂、分化、最终发育成完整植株。

该发育途径被称为“花粉孢子体发育途径”或“雄核发育”。

小麦花药胚状体发生一、植物花药和花粉培养的概念（一）花药培养通过无菌操作技术，把发育到一定阶段的花药，接种在人工培养基上，进行诱导、分化，最终形成完整植株的技术。

草莓花药愈伤组织,花药植株（二）花粉培养将处于一定发育阶段的花粉从花药中分离出来，再加以离体培养，也叫小孢子培养。

1964年：Guha&Maheshwari南洋金花花药培养发育成胚；1967年：Bourgin&Nitsch花药培养获得烟草植株；1973年：我国首次报道了小麦花药培养获得再生植株；目前：许多农作物及经济植物通过花粉培养都能诱导成植株。

二、花药培养历史通过花药培养育成的甜椒新品种：海花三号相同点：培养目的相同，均获得小孢子植株。

不同点：（一）花药培养离体操作技术简单，而且，药壁组织有时可作为条件因子促进小孢子的发育。

辣椒花药吊竹花粉粒三、两者的异同点花粉培养没有药壁组织干扰；可计数小孢子产胚率；可观察雄核发育的全过程；单倍体产量高。

但技术更复杂。

（二）花药培养属于组织培养；而花粉培养属于细胞培养。

1.花药培养容易受药壁、花丝、药隔等体细胞组织的影响，再生的植株中会出现不同倍性的个体，所以花药培养在诱导单倍体方面有一定的局限性，而分离的花粉粒培养可以克服这一不足。

2.由于去除了药壁和其它连接组织的干扰，因此能更好地调节控制雄核发育的各种因子，而且能直接从单细胞开始观察整个雄核发育的过程。

四、花粉培养的优点3.花粉是真正的单细胞单倍体，均能匀质地接受各种化学的、物理的因子处理，是突变体筛选及外源基因导入研究的有用材料，对育种有很大的意义。

4.一个花药中就有成千上万个小孢子，从花粉培养能得到更多的花粉植株。

七叶树花粉粒思考题1.简述花粉和花药培养的概念；2.花粉培养的特点是什么？3.花药培养的特点是什么？参考文献与网站Thank You!。