(优选)实验六蚕豆根尖微核检测技术学时综合性设计性

六、实验数据的统计处理和污染程度划分
将实验数据按以下步骤进行统计学分析处理： 1． 计算各测试样品（包括对照组）微核千分率（MCN‰） 如果对照本底MCN‰为10 ‰以下，可采用如下标准进行 分析以确定样品的污染程度： MCN‰在10‰以下，表示基本没有污染； MCN‰在10‰－18‰区间，则表示有轻度污染； MCN‰在18‰－30‰区间，则表示有中度污染； MCN‰在30‰以上，则表示有重度污染；
6．酸解：
从70％乙醇中取出固定好的根尖→流水冲 洗３min→吸水纸吸干→放入盛有适量1 mol/L HCl，60±0.5℃水浴保温的青霉素瓶中→解离 10min。
7．染色 改良石炭酸品红染色：
解离后材料水洗3min并吸干，挑取1个根 尖的乳白色分生组织于载玻片上夹碎捣烂，滴 加1～2滴染液，染色10～15min，压片。
4．根尖细胞恢复培养
将处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2－3min。 将洗净的种子再放入铺好滤纸或脱脂棉的白磁盘内 25℃温箱中恢复培养22－24小时。
5．固定根尖细胞及制片(参考根尖压片法)
(1)将恢复培养后的种子，从根尖顶端，切下1cm长的 幼根。用卡诺氏液固定24h，固定后如果不及时制片， 可换入70% 的乙醇中，置4℃冰箱内保存备用。
七、注意事项：
1. 各种诱发微核的处理试剂具有一定毒性，请注意 使用安全，并防止污染环境。 2.凡数值在上下限时，定为上一级污染。 3.对严重污染的水环境进行检测时，检测处理会造 成根尖死亡，应稀释后再作测试； 4.在没有空调恒温设备时，如室温超过30℃，MCN 本底可能有升高现象，但可经污染指数法数据处理， 不会影响检测结果。
利用蚕豆根尖作为实验材料进行微核测试，可准确 的显示各种处理诱发畸变的效果，并可用于污染程度的 监测。
三、实验材料
松滋青皮豆（蚕豆）种子
四、实验器具、药品试剂
实验器具：显微镜，计数器，镊子，载玻片，盖玻片， 烧杯，瓷盘等。 实验药品：6mol/L盐酸，甲醇，冰乙酸，醋酸洋红， EMS(甲基磺酸乙酯)处理液： 150, 200mmol/L 2种处理浓 度。 NaN3(叠氮钠) 处理液：0.5, 1.0, 1.5mmol/L 3种浓度。 CrO3：1.0，2.5mol/L 2种处理浓度 污水：
也可以采用“污染指数”判别：此方法可避免因实验 条件等因素带来的MCN‰本底的波动，方法如下：
污染指数在0－1.5区间为基本没有污染； 污染指数在1.5－2区间为轻度污染； 污染指数在2－3.5区间为中度污染； 污染指数在3.5以上为重度污染； 如果对照本底MCN‰为10 ‰以上，可采用t检验（被 测样品较少时）检测处理液致畸效果是否明显，或以 F检验（被测样品较多时）检测各处理之间是否具有 显著的差异。
3． 处理
每一处理选取6-8粒初生根生长良好、根长一致的 种子，放入盛有待测物溶液的培养皿中，浸没根尖。 阳性因子可采用CrO3（1.0和2.5 mol/L）、NaN3 （0.5、1.0和1.5mol/L）或EMS（150和200 mol/L）， 另取一处污水作待检测物质，用自来水作对照，共9 个处理，处理根尖6～24h(处理时间可视实验需要和 被测液浓度而定)。
五、实验方法
1．实验材料的培育 蚕豆根尖细胞的染色体大，DNA含量高，因而对
诱变因子反应敏感。松滋青皮豆是从不同蚕豆品种中 筛选出来的一种较为敏感的品种。本品种引入后在栽 培繁殖时要注意不要同其它蚕豆品种种在一起，不喷 洒农药、以保持该品种较低的本底微核值。也可用其 它蚕豆品种，但是必须设置对照组。种子成熟后，晒 干贮藏于干燥器内或4℃冰箱内备用。
8．压片 在经染色的材料上加一滴染液，盖上盖玻片，
覆一层吸水纸，用带橡皮头的铅笔垂直敲打，或以 拇指垂直紧压盖片(注意勿使盖片搓动)，使材料分 散压平，便于观察。
9．镜检及微核识别标准
首先在低倍镜下找到分生组织区细胞分散均匀，分裂 相较多的部位，再转高倍镜观察。 微核识别标准： （1）在主核大小的1/3以下，并与主核分离的小核。 （2）小核着色与主核相当或稍浅。 （3）小核形态为圆形、椭圆形或不规则型。 每一处理观察3个根尖，每个根尖计数1000个细胞中 的微核数并进行记录。
（优选）实验六蚕豆根尖微核 检测技术学时综合性设计性
由于大量新的化合物的合成，原子能应用，各种各 样工业废物的排出，使人们需要有一套高度灵敏、技术 简单的测试系统来监视环境的变化。只有真核的测试系 统更能直接推测诱变物质对人类或其它高等生物的遗传 危害，在这方面，微核测试是一种比较理想的方法。且 有研究显示以植物进行微核测试与以动物进行的一致率 可达99%以上。目前微核测试已经广泛应用于辐射损伤、 辐射防护、化学诱变剂、新药试验、染色体遗传疾病及 癌症前期诊断等各方面。
2．浸种催芽：
将实验用蚕豆种子按需要量放入盛有蒸馏水的烧 杯中，在25℃下浸泡24小时，此间至少换水两 次．所换水应25℃预温。种子吸胀后；用纱布松散 包裹置白磁盘中，保持湿度，在25℃温箱中催芽12 －24小时，待初生根长出2—3mm时，再取发芽良好 的种子，放入铺满滤纸的磁盘中，25℃继续催芽， 经约36～48小时．大部分初生根长至1～2cm左右， 根毛发育良好，这时即可用来进行检测了。
蚕豆根尖微核检测记录表
试验号
镜检日期
片号ຫໍສະໝຸດ Baidu
第一片
各自观察的细胞 细胞数 微核数 数或微核数
镜检者
第二片
第三片
细胞数 微核数 细胞数 微核数
总计 平均微核千分率