药理学 蛋白抑制剂
药理学蛋白抑制剂PPT医学课件
Macrolide Antibiotics
.
1
大环内酯类抗生素
学习目标：
1、掌握大环内酯类药物的分类和代表药的抗菌
.
谱和临床用途。 2、熟悉林可霉素类抗生素、多肽类抗生素的抗 菌谱和临床用途、不良反应。
3、掌握红霉素的不良反应。
2
大环内酯类抗生素
按化学结构分为： 14元（碳）大环内酯类:红霉素、罗红霉素……
■厌氧菌感染
23
林可霉素类
【不良反应】
胃肠道反应 :胃纳差，恶心、呕吐、胃部不适和腹泻，
以腹泻最多见，发生率为25%，也有假膜性肠炎
.
假膜性肠炎:用万古霉素、甲硝唑治疗。
过敏反应: 10% ,偶见皮疹、瘙痒、药疹等
肝毒性:黄疸、血清转氨酶升高 骨髓抑制:白细胞、血小板减少
24
伪膜性肠炎 部位：小肠和结肠 急性纤维素渗出性炎症
.
② 对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌的抗 菌活性较弱。 ③ 不良反应发生率较低，有胃肠道反应；
偶可见肝功能异常与外周白细胞下降等。
主要用于呼吸道感染、衣原体引起的泌尿道 感染和宫颈炎等。
17
AZITHROMYCIN
主要用于呼吸道感染、衣原体引起的泌 尿道感染和宫颈炎等。
急性咽炎、急性扁桃体炎：化脓性链球菌
肠，甚至危及生命。
该病病情重，治疗不及时病死率高。
由于广谱抗生素和免疫抑制剂的广泛应用，该病发病
率有上升的趋势。
26
四环素 土霉素 氯霉素 强力霉素 氨苄青霉素 林可霉素
27
.
多肽类
VANCOMYCIN
仅对G+菌有强大杀菌作用
蛋白酶抑制剂
相互作用
相互作用
该品可与利托那韦结合使用以提高药效，用于治疗用其他抗逆转录病毒疗法治疗无效的HⅣ。
毒副作用
毒副作用
美国疾病控制和预防中心Hoimberg等报告，使用蛋白酶抑制剂可增加HⅣ－1感染者的心肌梗死发病危险， 尽管发生率并不高。蛋白酶抑制剂治疗HⅣ－1感染有效，但可增加高脂血症和高血糖危险，并可导致胰岛素抵抗。 因此，有人担心，长期应用蛋白酶抑制剂会增加心肌梗死、心绞痛和脑血管意外发病危险。Hoimberg等在1993年 1月至2002年1月期间对美国8个城市9个HⅣ诊所的5672例HⅣ－1感染患者进行了长期观察（17712．4人年）。病 人平均年龄为42．6岁，其中男性占82%。Lancet 2002?360?1747 结果显示，1996年开始应用蛋白酶抑制剂， 数年后心肌梗死发病率有所增高（趋势检验，P=0．0125）。在3247例应用蛋白酶抑制剂的患者中，发生心肌梗 死19例（1．42/1000人年），而在2425例未用蛋白酶抑制剂的患者中，只发生2例（0．046/1000人年）?比值比 为7．1，95%CI为1．6～44．3；Cox比例危险模型—校正后危险率比为6．5，95%CI为0．9～47．8 。使用蛋白 酶抑制剂种类对心肌梗死发病率无显著影响。共发生15例心绞痛，其中11例用蛋白酶抑制剂（比值比为1．93， 95%CI为1．63～5．95）。发生脑血管意外14例，每组7例。研究者认为，蛋白酶抑制剂可增加心肌梗死发病危险， 但心肌梗死发病率并不高，并且通常发生在有其他心血管病危险因素的患者中，不要因此而给HⅣ－1感染患者停 用蛋白酶抑制剂。及早戒烟、诊断和治疗高脂血症、改善胰岛素抵抗和降压治疗都可减少蛋白酶抑制剂的这一并 发症。
蛋白质合成的抑制剂
蛋白质合成的抑制剂第四节蛋白质合成的抑制剂影响蛋白质生物合成的物质非常多，它们可以作用于DNA复制和RNA转录，对蛋白质的生物合成起间接作用，本节主要讨论抑制蛋白质生物合成翻译过程的阻断剂。
（一）抗生素类阻断剂：许多抗生素都是以直接抑制细菌细胞内蛋白质合成而对人体副作用最小为目的而设计的，它们可作用于蛋白质合成的各个环节，包括抑制起始因子，延长因子及核糖核蛋白体的作用等等。
1、链霉素、卡那霉素、新霉素等：这类抗生素属于基甙类，它们主要抑制革兰氏阴性细菌蛋白质合成的三个阶段：①S起始复合物的形成，使氨基酰tRNA从复合物中脱落；②在肽链延伸阶段，使氨基酰tRNA与mRNA错配；③在终止阶段，阻碍终止因了与核蛋白体结合，使已合成的多肽链无法释放，而且还抑制70S核糖体的介离。
2、四环素和土霉素：①作用于细菌内30S小亚基，抑制起始复合物的形成，②抑制氨西藏酰tRNA进入核糖体的A位，阻滞肽链的延伸；③影响终止因子与核糖体的结合，使已合成的多肽链不能脱落离核糖体。
四环素类抗生素除对菌体70S核糖体有抑制作用外，对人体细胞的80S核糖体也有抑制作用，但对70S核糖体的敏感性更高，故对细菌蛋白质合成抑制作用更强。
3、氯霉素：属于广谱抗生素。
①氯霉素与核糖体上的A位紧密结合，因此阻碍氨基酰tRNA进入A位，②抑制转肽酶活性，使肽链延伸受到影响，菌体蛋白质不能合成，因此有较哟的抑菌作用。
4、嘌呤霉素（Puromycin）结构与酪氨酰-tRNA相似，从而取代一些氨基酰tRNA进入核糖体的A位，当延长中的肽转入此异常A位时，容易脱落，终止肽链合成。
由于嘌呤霉素对原核和真核生物的翻译过程均有干扰干扰作用，故难于用做抗菌药物，有人试用于肿瘤治疗（图18-22）。
图18-22 嘌呤霉素（左）与tyr-tRNAtyr（右）5、白喉霉素（diphtheria toxin）由白喉杆菌所产生的白喉霉素是真核细胞蛋白质合成抑制剂。
蛋白酶抑制剂
蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种常用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对不同蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
常用抑制剂PMSF PMSF即Phenylmethanesulfonyl fluoride，中文名为苯甲基磺酰氟。
分子式为C7H7FO2S，分子量为174.19，纯度>99%。
常用生化试剂，用于抑制蛋白酶.【配制方法】用异丙醇溶解PMSF成 1.74mg/ml（10mmol/L），分装成小份贮存于-20℃。
如有必要可配成浓度高达17.4mg/ml的贮存液（100mmol/L）。
【注意】PMSF严重损害呼吸道粘膜、眼睛及皮肤，吸入、吞进或通过皮肤吸收后有致命危险。
一旦眼睛或皮肤接触了PMSF，应立即用大量水冲洗之。
凡被PMSF污染的衣物应予丢弃。
PMSF在水溶液中不稳定。
应在使用前从贮存液中现用现加于裂解缓冲液中。
PMSF在水溶液中的活性丧失速率随pH值的升高而加快，且25℃的失活速率高于4℃。
pH值为8.0时，20μmmol/l PMSF水溶液的半寿期大约为85min，这表明将PMSF溶液调节为碱性（pH>8.6）并在室温放置数小时后，可安全地予以丢弃。
蛋白水解酶抑制剂啊实验室常用的啊主要用于组织匀浆时用!!1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保存一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步骤中加入新鲜的PMSF。
常见蛋白酶抑制剂
之袁州冬雪创作当前位置：生物帮> 实验技巧> 生物化学技术> 正文蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全日期：2012-06-13 来历：互联网标签：相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新停顿摘要 : 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解.在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解.以下罗列了5种常常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！Ibidi细胞灌流培养系统-摹拟血管血液活动状态下的细胞培养系统广州赛诚生物基因表达调控专题蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解.在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解.以下罗列了5种常常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度.由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀.在宝灵曼公司的目次上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表.常常使用抑制剂PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保管一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每分离和纯化步调中加入新鲜的PMSF.EDTA1)抑制金属蛋白水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;3)溶液在4℃稳定六个月以上;4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解.胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管严重肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解.亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制丝氨酸和巯基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血浆酶和组织蛋白酶B;2)lOmg/ml溶于水;3)储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;4)工作浓度0.5mg/ml.胰蛋白酶抑制剂(aprotinin)1)抑制丝氨酸蛋白酶，如血浆酶，血管舒缓素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;2)lOmg/ml溶于水，pH7~83}储存液4℃稳定一周，-20℃稳定6个月;4)工作浓度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);5)防止反复冻融:6)在pH>12.8时失活.蛋白酶抑制剂混合使用35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂0.3mg/ml EDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂0.7ug/ml胃蛋白酶抑制剂(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………广谱蛋白酶抑制剂常常使用蛋白酶抑制剂表作者：青岚点击：次来历于-生物秀知道首页实验实验中心常常使用蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度常常使用蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度2014-06-09 23:01:02 来历：阅读次数：119 网友评论0 条[常常使用蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度] 在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步即是蛋白质的提取.蛋白质的提取过程中，我们要常常加和蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)以防止蛋白质的降解.别的在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不成少的，本文总结了常常使用的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂(proteas [蛋白酶抑制剂分子量溶解性磷酸酶抑制剂工作浓度贮存液胰蛋白酶丝氨酸]在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步即是蛋白质的提取.蛋白质的提取过程中，我们要常常加和蛋白酶抑制剂(pr otease inhibitor)以防止蛋白质的降解.别的在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不成少的，本文总结了常常使用的蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)PMSF，Le upeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4 原矾酸钠，BETA-glycerophosph ate甘油磷酸钠，Na2P2O4 焦磷酸钠等.对这些蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保管都做了详细的说明.蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)PMSF：特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面处理）.使用：贮存浓度：200mM，工作浓度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B溶解性：高度溶于水（1mg/ml）.4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月使用：贮存浓度：1mg/ml，工作浓度0.5 ug/ml (1mM) Aprotinin抑肽酶特性：丝氨酸蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)，抑制纤维蛋白溶酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性.不抑制凝血酶或因子X.溶解性：易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，0.1 M，pH8.0）.pH约7-8的溶液在4℃可保管1周，分装保管在-20℃可至少保管6个月.防止反复冻融, pH>12.8的碱性环境可以使其灭活.分子量：6,512使用：贮存浓度:1mg/ml, 工作浓度：0.06–2.0 ug/ml(0.0 1–0.3 uM)Pepstatin胃蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，肾素，组织蛋白酶D，凝乳酶，许多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇约1mg/ml；可溶于乙醇，过夜溶解可达到1 mg/ml；在6当量乙酸中溶解度为300ug/ml.4℃稳定一周，分装储存于-20℃时可保管1个月使用：贮存浓度：1mg/ml，使用浓度：0.7 μg/ml(1 μM) EDTA-Na2特性：金属蛋白酶抑制剂(protease inhibitor)使用：工作浓度：0.2–0.5 mg/ml(0.5–1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8-9时再加入.磷酸酶抑制剂NaF氟化钠溶解性：溶于水使用：贮存液：5M 工作浓度：10-20mMNa3VO4 原矾酸钠溶解性：溶于水，我们购买过来的是原矾酸钠.原矾酸钠需要颠末处理以后才干成为激活的矾酸钠,激活的矾酸钠才具有抑制去磷酸化的作用.原矾酸钠变成激活的矾酸钠的过程是:100mM原矾酸钠激活储存液配制(1).取0.183克的原矾酸钠溶解于10ml的双蒸水中,加酸调节PH至10(颜色变黄)(2).煮至无色(3).室温冷却(4).重调PH至10(5)重复（１）（２）（３）（４）直至溶液坚持无色，而且ＰＨ稳定于10,分装100ul/管,每10ml裂解液加一管.(终浓度为1mM),-20度保管.使用：贮存液：100mM 工作浓度：1mMBETA-glycerophosphate 甘油磷酸钠溶解性：溶于水使用：贮存液：100mM 工作浓度：25mMNa2P2O4 焦磷酸钠溶解性：溶于水贮存液：100mM, 工作浓度：1-2 mM关键词：蛋白酶抑制剂分子量溶解性磷酸酶抑制剂工作浓度贮存液胰蛋白酶丝氨酸。
常见蛋白酶抑制剂
之巴公井开创作当前位置：生物帮> 实验技巧> 生物化学技术> 正文蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全日期：2012-06-13 来源：互联网标签：相关专题：解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展摘要 : 破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度恩必美生物新一轮2-5折生物试剂大促销！Ibidi细胞灌流培养系统-模拟血管血液流动状态下的细胞培养系统广州赛诚生物基因表达调控专题蛋白酶抑制剂破碎细胞提取蛋白质的同时可释放出蛋白酶，这些蛋白酶需要迅速的被抑制以坚持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中，需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解。
以下列举了5种经常使用的蛋白酶抑制剂和他们各自的作用特点，因为各种蛋白酶对分歧蛋白质的敏感性各不相同，因此需要调整各种蛋白酶的浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低，尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
在宝灵曼公司的目录上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制剂表。
经常使用抑制剂PMSF1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于异丙醇中;3)在室温下可保管一年;4)工作浓度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);5)在水液体溶液中不稳定，必须在每一分离和纯化步调中加入新鲜的PMSF。
EDTA1)抑制金属蛋白水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;3)溶液在4℃稳定六个月以上;4)工作浓度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);5)加入NaOH调节溶液的pH值，否则EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(pepstantin)l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管紧张肽原酶，组织蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3}储存液在4℃一周内稳定，-20℃稳定6个月;4)1作浓度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解。
蛋白酶抑制剂的研究进展
蛋白酶抑制剂的研究进展郭川微生物专业，200326031摘要：自然界共发现四大类蛋白酶抑制剂:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂，本文就各大类蛋白酶抑制剂的结构特点，活性部位的研究概况及其在各领域应用的原理及进展。
关键词：蛋白酶抑制剂；结构；应用天然的蛋白酶抑制剂(ＰＩ)是对蛋白水解酶有抑制活性的一种小分子蛋白质,由于其分子量较小,所以在生物中普遍存在。
它能与蛋白酶的活性部位和变构部位结合,抑制酶的催化活性或阻止酶原转化有活性的酶。
在一系列重要的生理、病理过程中:如凝血、纤溶、补体活化、感染、细胞迁移等，PI发挥着关键性的调控作用,是生物体内免疫系统的重要组成部分。
从Ｋｕｎｉｔｚ等最早分离纯化出一种ＰＩ至今,已有多种ＰＩ被发现,根据其作用的蛋白酶主要分以下几类:抑制胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶等的丝氨酸蛋白酶抑制剂,抑制木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶等的巯基蛋白酶抑制剂,抑制胃蛋白酶、组织蛋白酶Ｄ等的羧基蛋白酶抑制剂、抑制胶原酶、氨肽酶等的金属蛋白酶抑制剂等。
而根据作用于酶的活性基团不同及其氨基酸序列的同源性,可将自然界发现的PI分为四大类:丝氨酸蛋白酶抑制剂、巯基蛋白酶抑制剂(半胱氨酸蛋白酶抑制剂)、金属蛋白酶抑制剂和酸性蛋白酶抑制剂[1]。
1 结构与功能1.1丝氨酸蛋白酶抑制剂（Serine Protease Inhibitor,Serpin）丝氨酸蛋白酶抑制剂是一族由古代抑制剂趋异进化5亿年演变而来的结构序列同源的蛋白酶抑制剂。
Sepin为单一肽链蛋白质。
各种serpin大约有30％的同源序列，疏水区同源性高达70％。
血浆中的serpin多被糖基化，糖链经天东酰胺的酰胺基与主链相连。
位于抑制性serpin表面、距C端30～40个氨基酸处的环状结构区RSL（reactive site loop）中，存在能被靶酶的底物识别位点识别的氨基酸P1[2]；近C端与P1相邻的氨基酸为P1’，依此类推，即肽链结构表示为N端-P15～P9～P1-P1’～P9’～P15’-C端。
蛋白合成抑制剂PPT课件
5’
3’
30S subunit mRNA
Aminoglycoside-treated bacterial cell
Drug(block of Drug(miscoded Drug(block of
initiation
peptide chain) translocation)
❖ 迅速产生抗药性
❖ 抗药的细菌其毒力也减弱
❖ 无交叉抗药性
.
30
Inhibit Nucleic Acid Synthesis
Pteridine +
p-Aminobenzoic acid
- Dihydropteroate
synthetase
Dihydropteroic acid
Sulphonamides
complex)
5’
3’
.
4
【药理作用】
❖ 链霉素 streptomycin ➢ 杀菌: 结核杆菌、链球菌等G+菌和G-杆菌 ➢ 鼠疫和兔热病的首选药 ➢ 粪链球菌或草绿色链球菌---细菌性心内膜
炎（与penicillin或vancomycin合用） ➢ 二线抗结核药物 ➢ 急性布鲁氏病（与四环素（tetracycline）
的inhA基因发生错义突变(missense mutation)
.
29
利福平(rifampin)
地中海链丝菌(Streptomyces mediterranei) 产生的利福霉素(rifamycin )的半合成品
【抗菌作用】 ❖ 抗结核杆菌作用强大
❖ 加强链霉素和isoniazid的抗菌活性
❖ 对繁殖期和静止期的结核杆菌均有作用
蛋白酶抑制剂技术原理和选择指南
蛋白酶抑制剂技术原理和选择指南当细胞破碎的时候，蛋白水解酶就会被释放出来或被激活，使电泳结果复杂化，影响最终结果分析。
为了避免这些情况的出现，建议在样品制备时尽可能在低温下进行。
此外，许多蛋白酶在PH9以上就失活了，因此Tris碱，碳酸钠或碱性载体两性电解质往往能抑制蛋白水解。
但是有些蛋白酶在上述条件下仍然保持着活性，此时应当使用蛋白酶抑制剂。
因此对于我们想要研究的蛋白来说，选择性和有效的抑制这些蛋白酶对于蛋白纯化路线设计来说显得尤为重要。
蛋白酶抑制剂与蛋白酶一样，都是纷繁复杂的，通常使用许多化学物质作为蛋白酶抑制剂，如PMSF 和leupeptin。
而且由于一种蛋白酶抑制剂只对某一类蛋白酶起作用，因此通常建议复合使用蛋白酶抑制剂，如广谱蛋白酶抑制剂“鸡尾酒”，见下表（来自《蛋白质电泳实验技术》）。
蛋白酶抑制剂有效抑制的酶PMSF(Pheylmethylsulfonylfluoride)是很常见的抑制剂，使用浓度为1mmol/L不可逆抑制丝氨酸水解酶和一些半胱氨酸水解酶。
AEBSF 丝氨酸抑制剂，使用浓度为4mmol/L AEBSF的抑制活性与PMSF相近，但它更易溶于水而且毒性低EDTA，EGTA，使用浓度为1mmol/L 通过鳌合蛋白酶维持活性所必需的金属离子来抑制金属蛋白酶。
多肽蛋白酶抑制剂，使用浓度为2-20ug/ml 亮肽素（Leupeptin）能抑制多种丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶；抑肽素（pepstatin）抑制天冬氨酸蛋白酶；抑肽酶（aprotinin）能抑制许多丝氨酸蛋白酶；苯丁抑制剂（bestatin）能抑制氨基酸多肽酶TLCk，TPCK，使用浓度为0.1-0.5mmol/L不可逆的抑制丝氨酸和半胱氨酸的蛋白酶苄脒（Benzamidine）使用浓度为1-3mmol/L抑制丝氨酸蛋白酶但是这样配置溶液进行处理，有时也是颇为麻烦，而且效果可能并不好，目前有一些厂家试剂在简便操作，和抑制效果方面有不俗的表现，可以考虑在实验中选用，节约时间和便于结果分析。
常用蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的贮存与工作液浓度
在与蛋白相关的检测中，首先最关键的一步便是蛋白质的提取。蛋白质的提取过程中，我们要经常加和蛋白酶抑制剂以防止蛋白质的降解。另外在磷酸化蛋白的研究过程中，磷酸酶抑制剂也是必不可少的，本文总结了常用的蛋白酶抑制剂PMSF，Leupeptin亮肽素，Aprotin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制剂，EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠，Na3VO4原矾酸钠，BETA-glycerophosphate甘油磷酸钠，Na2P2O4焦磷酸钠等。对这些蛋白酶抑制剂的溶解配制，贮存液与工作液浓度，保存都做了详细的说明。
Leupeptin亮肽素
特性：
抑制丝氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，纤溶酶，和组织蛋白酶B溶解性：
高度溶于水（1mg/ml）。4℃一周稳定,分成小份冷冻在-20℃至少6个月
分子量：
使用：
贮存浓度：1mg/ml，工作浓度
0.5 ug/ml (1mM)
Aprotin抑肽酶
特性：
丝氨酸蛋白酶抑制剂，抑制纤维蛋白溶酶，激肽释放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。
685.9
使用：
贮存浓度：1mg/ml，使用浓度：
0.7 μg/ml(1 μM)
EDTA-Na2
特性：
金属蛋白酶抑制剂
溶解性：
溶于水至
0.5M，在pH8-9的条件下，4℃稳定至少6个月
分子量:
372.24
使用：
工作浓度：
0.2–
0.5 mg/ml(
0.5–
1.3 mM)，不需现用现配，在溶液pH值调至8-9时再加入。
溶解性：
易溶于水（10mg/ml）或缓冲液（例如，tris，
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
氨基糖苷类抗生素的共性
三、抗菌作用机制相同
阻碍细菌蛋白质合成（影响全过程） 影响膜通透性 使细菌胞膜通透性增高
氨基糖苷类抗生素的共性
四、不良反应相同 1、第八对脑神经损害： 表现：前庭功能损害和耳蜗神经损害 眩晕、恶心、呕吐、 眼球震颤、共济失调、耳鸣、 氨基糖苷类抗生素的共性 听力减退
新霉素>卡那霉素>庆大霉素>奈替米星（毒性最小）
依托红霉素或乙琥红霉素易引起
（转氨酶升高、肝肿大、胆汁郁积型黄疸）
停药可恢复，肝功能不良者禁用
阿齐霉素
Azithromycin
◆ 抗菌谱广 ◆ 口服吸收快 ◆组织分布广 ◆ 血浆蛋白结合率低 ◆ t1/2长，大多原型粪便排出
阿奇霉素
与红霉素：
① 对肺炎支原体的作用最强，抗流感杆菌和淋 球菌、弯曲菌也有效。 ② 对金黄色葡萄球菌、肺炎球菌、链球菌的抗 菌活性较弱。
15元大环内酯类:阿奇霉素
16元大环内酯类:麦迪霉素，交沙霉素，
螺旋霉素，罗他霉素……
大环内酯类抗生素
◆14~16碳大环内酯环 第一代：红霉素、螺旋霉素、麦迪霉素、 交沙霉素；
第二代：罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素等。
第三代药物：不易耐药的酮基大环内酯类
大环内酯类抗生素
抗菌谱较窄
◆ 对G+菌和部分G-菌有抗菌作用；
敏感的革兰氏阴性菌:流感嗜血杆菌、脑膜炎球
菌、布鲁氏菌、巴斯德氏菌等
不敏感:
大多为肠道杆菌 如大肠杆菌、沙门氏菌等。
布鲁氏菌
[抗菌机制]
与细菌核蛋白体 50s 亚基结合，抑制 转肽作用和抑制 mRNA 移位，而阻碍蛋白 质合成。
临床应用
1.军团菌病、空肠弯曲菌所致败血症或肠炎、
白喉带菌者、支原体肺炎等首选。
四环素类与氯霉素类
■广谱抗生素
■对G+菌和G-菌、 ■立克次体、衣原体、支原体、 螺旋体、阿米巴原虫等均有抑制 作用。
【四环素类分类】
•天然四环素类： 四环素(tetracycline） 土霉素（oxytetracycline） 地美环素、金霉素 •半合成四环素：多西环素(doxycycline） 强力霉素 米诺环素 （minocycline，二甲胺四环素）
酰基转移酶 (两者互相竞争结合部位，而呈拮 抗作用，故不宜合用)。
林可霉素类
■敏感菌引起的急、慢性骨髓炎的首选药。 ■青霉素无效或青霉素过敏的G+球菌感染，
呼吸道、软组织感染、败血症
■厌氧菌感染
林可霉素类
【不良反应】
胃肠道反应 :胃纳差，恶心、呕吐、胃部不适和腹泻， 以腹泻最多见，发生率为25%，也有假膜性肠炎 假膜性肠炎:用万古霉素、甲硝唑治疗。 过敏反应: 10% ,偶见皮疹、瘙痒、药疹等
护理注意事项： ①用药期间询问有无耳鸣、眩晕等早期症状 ②长期用药的病人要定期做听力监测 ③肾功能低下或老年人要适当减量使用 ④最好不与其他有耳毒性的药物合用
氨基糖苷类抗生素的共性
2、肾毒性 表现 ：主要损害近曲小管上皮细胞，可见蛋白尿、 管型尿、少尿、无尿、尿中红细胞、甚至肾功能 下降。 发生原因 氨基糖苷类主要经肾排泄并在肾脏蓄积 卡那霉素>庆大霉素>链霉素 肾毒性的后果 可造成药物本身排泄减少 而加重其他不良反应。
性发作：敏感细菌
肺炎:
链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体
尿道炎和宫颈炎：多种耐药淋病奈瑟菌
皮肤软组织感染：敏感细菌
新大环内酯类药物 克拉霉素 Clarithromycin
◆抗菌活性强 ◆口服吸收好、不受食物影响 ◆分布广泛、组织浓度＞血浓度
不能通过血脑屏障 不适用于中枢神经系统感染 ◆不良反应轻、发生率低
组织分布广泛，并能沉积于骨及牙组
织内。
■排泄 主要：以原形经肾小球滤过排泄
部分：胆汁排泄，有肝肠循环
【作用机制】
(1)抑制细菌蛋白质合成。 与细菌核蛋白体30s亚基A位结合，阻止 tRNA的联结，而阻止肽链延伸。 (2)改变细菌细胞膜通透性，使胞内重要物
质（核苷酸等）外漏，抑制DNA复制。
【药理作用】
红霉素（erythromycin）
【体内过程】 ■红霉素不耐酸，口服吸收少 ■肠溶片或酯化物 （依托红霉素/无味红霉素） 其抗酸，口服吸收好 ■乳糖红霉素iv
[抗菌作用] 抗菌谱近似青霉素
1. 对G+菌、G-菌和厌氧菌敏感；
2.对军团菌、螺旋体、肺炎支原体
及螺杆菌、立克次体、衣原体有抑制作用。
3.对β-内酰胺类及氨基糖苷类的耐药菌 也有效。
2. 耐药金葡菌感染及对青霉素过敏者。
3. G+球菌感染：如大叶肺炎、扁桃体炎、猩红热、 丹毒、急性中耳炎或鼻窦炎等.（疗效不及P-G）。
[耐药性]
金葡菌对红霉素易产生耐药
性，且与其他大环内酯类药物有 完全交叉耐药性。
【不良反应】
1. 消化道反应及伪膜性肠炎 2. 血栓性静脉炎：iv其乳糖酸盐常见 3. 肝脏损害：
林克胺类 Lincosamides
林可霉素类
林可霉素(lincomycin) 克林霉素(clindamycin)
■分布广、渗透性强，易渗入骨及关节 （但不渗入脑脊液） ■G+菌(除外肠球菌，但包括产酶菌株) 各类厌氧菌 G-菌：如脑膜炎球菌、淋球菌 人型支原体、衣原体、放线菌等
林可霉素类
作用部位同红霉素（50S亚基），抑制肽
【临床应用】 严重G-杆菌感染的首选药
绿脓杆菌感染：庆大霉素+羧苄西林（协同作用）
G-杆菌混合感染：与广谱半合成青霉素类合用 金葡菌
及耐药性金葡菌感染
口服用于肠道感染或结肠手术术前准备
卡那霉素 kanamycin
抗菌谱与链霉素相似，只是稍强。
对多数常见的G-菌及结核菌有效。
对绿脓杆菌无效。
卡那霉素毒性较大，尤其耳毒性，可引起不可逆性耳 聋，发生率较高，对肾脏损害也较明显。 只在抗结核时使用或作为庆大霉素等的替代药。
肝毒性:黄疸、血清转氨酶升高
骨髓抑制:白细胞、血小板减少
伪膜性肠炎
部位：小肠和结肠 急性纤维素渗出性炎症 受累粘膜表面覆有黄白或黄绿色伪膜
多系在应用抗生素后导致正常肠道菌群失
调，难辨梭状厌氧芽胞杆菌大量繁殖，产生毒 素而致病 。
“抗生素相关性肠炎” 多发生于老年人、重症患者、免疫功能低下及外科大
◆ 对某些螺旋体、衣原体、支原体及立克
次体有良好效果；
◆对产生‐内酰胺酶的葡萄球菌和耐药金
葡菌有一定的抗菌活性。
◆通常为抑菌药，高浓度时杀菌。
作用机制： 不可逆地结合到
细菌核糖体50S亚基
的靶位上，抑制细菌 蛋白质合成。
（二）耐药机制
1.产生灭活酶 2.靶位的结构改变 3.摄入减少,外排增多 （三）药代动力学 1.吸收:不耐酸，用肠衣片或酯化物 2.分布:除脑脊液外各处均有 3.代谢 ：肝经P450酶灭活 4.排泄 ：主要胆道、肝肠循环
四环素类
吸收
—
—
受高价阳离子影响（如Mg2+、Ca2+、Al3+及Fe2+等）
形成难溶、难吸收的络合物，如抗酸药、乳制品
、抗贫血药或食物中的Ca2+、Mg2+、Al3+、Fe2+等金
属阳离子发生络合而妨碍其吸收。
—
吸收量有一定限度，服药量超过0.5g，血药浓度
不再随剂量增加而提高
■分布
口服易吸收但不完全，吸收后各
③ 不良反应发生率较低，有胃肠道反应；
偶可见肝功能异常与外周白细胞下降等。
主要用于呼吸道感染、衣原体引起的泌尿道 感染和宫颈炎等。
AZITHROMYCIN
主要用于呼吸道感染、衣原体引起的泌 尿道感染和宫颈炎等。
急性咽炎、急性扁桃体炎：化脓性链球菌 鼻窦炎、中耳炎、急性支气管炎、慢性支气管炎急
万古霉素
VANCOMYCIN
仅对G+菌有强大杀菌作用
（包括耐药菌株） 抗菌机制 ：阻碍细菌细胞壁合成
耐药性 :细菌对其不易产生耐药性，
且与其他抗生素无交叉耐药性。
万古霉素
VANCOMYCIN
▲其他抗生素治疗无效的严重感染，
如：耐青霉素金葡菌引起的严重感染
▲ 广谱抗生素引起的假膜性肠炎
[不良反应 ]
氨基糖苷类抗生素的共性
1)性质稳定，有效期长，水溶性好。
药物呈碱性，在碱性环境中作用较强，
2)抗菌作用强，有杀菌作用
3)与β-内酰胺类有协同作用
并可与多种抗生素联合应用 4)有明显的PAE
氨基糖苷类抗生素的共性
一 、体内过程相似
1. 脂溶性小，在胃肠道不吸收或极少吸收 ( ＜ 1％ ) 。 2. 主要分布于细胞外液，组织中药物含量较 低，但肾皮质内药物浓度较高，有肾毒性。 可进入内耳淋巴液，浓度与用药量成正比， 因此有耳毒性。 3、 约90％以原形经肾排出，尿中浓度高， 可用于尿路感染。
丁胺卡那霉素（amikacin，阿米卡星) 【特点】 抗菌谱最广，对绿脓杆菌有效 对细菌所产生的钝化酶稳定 耳毒性、肾毒性有，但发生率低 【应用 】 用于庆大霉素等耐药的各种敏感菌感染 与羧苄西林或头孢噻吩合用 治疗中性粒细胞减少或其他免疫缺陷病引起的感染 二线抗结核药物
四环素类与氯霉素类
学习目标： 1、掌握四环素类抗生素的作用特点和用途、 不良反应。 2、 掌握氯霉素类抗生素的作用特点及用途、 不良反应。
氨基糖苷类抗生素的共性
4、过敏反应相同 常见皮疹、药疹、发热等过敏症状， 也可以引起嗜酸粒细胞增多 偶有过敏休克（链霉素）
抢救：以葡萄糖酸钙为首选药， 并注射肾上腺素、皮质激素等 急性毒性 ：表现为注射后出现口周、面 部、指端麻木感 。一般不须停药，也不 需什么处理可自行消失。