《食品微生物检验技术》教学课件— 培养基的制备
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②倒平板一般每个培养皿倒入培养基20ML左右，冷却后倒置培养皿； ③冷却前试管搁置斜面以备用。
试管1/3（半固体培养基）； 试管1/4（液体培养基）； 试管1/5（固体培养基）；
将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成的斜面的 长度不超过试管总长的一半。
实验步骤
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌
灭菌温度（℃） 灭菌时间（分 ） 营养成分的破坏 （%）
100
400
99.3
110
30
67
115
15
50
120
4
27
130
0.5
8
140
0.08
2
150
0.01
＜1
表2 不同温度下高压灭菌对糖类的破坏
糖液 (10%)
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖
灭菌方法
121℃, 115.6-118℃ 113-115.6℃
121
112
1.40 20
126
118
1.75 25
130
124
2.10 30
134
128
不排除 空气 72 90 100 109 115 121
表4 芽孢数目和灭菌所需时间的关系
芽孢数／mL
100 000 000 75 000 000 50 000 000 25 000 000 1 000 000 100 000
选择培养基
• 使混合菌中的劣势菌变为优势菌，而将其从菌群 中分离出来。
• 方法1：采用“投其所好”的策略——加富 • 加富的物质是特殊的碳源和氮源。如：
• 自生固氮菌（甘露醇）； • 酵母（较浓的糖液）； • 分解石油的微生物（石油蜡）。
选择性培养基
• 方法2：“取其所抗”——利用分离对象 对某种制菌物质的抗性。如：
源自文库
操作过程
影响高压蒸汽灭菌效果的主要因素
• 灭菌物体含菌量的影响 • 灭菌锅空气排除程度的影响 • 灭菌对象pH的影响 • 灭菌对象的体积
表3 空气排除度对灭菌温度的影响
压力表读数
锅内温度(℃)
Kg/cm2 磅/英寸2 纯蒸汽 排除1/2 空气
0.35 5
109
94
0.70 10
115
105
1.05 15
– 固体培养基 – 半固体培养基 – 液体培养基
• 根据化学成分
– 天然培养基 – 合成培养基 – 半合成培养基
• 根据用途 – 选择培养基 – 鉴别培养基
分类
• 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固 剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5% 凝固剂而成的半固体状培养基。
7
5
3
3
25 12 13 13
65 35 30 24
720 180 150 150
表6 不同容量的液体在加压灭菌锅内的 灭菌时间
容器(mL)
三角瓶 50 200 500
1000 2000
在121℃～123 ℃下所需灭菌时间(分)
12 ～14 12 ～15 17 ～22 20 ～25 30 ～35
培养基的无菌分装
• 启动超净工作台 提前30分钟开启紫外灯杀菌无菌 风扇，防止空气对流。
• 分装培养基 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，在启动的超净
工作台上打开三角瓶的牛皮纸，用酒精灯火焰灼烧瓶 口后，将培养基分别到入灭过菌的培养皿中备用，加 培养皿盖。
培养基的无菌分装
• 注意： ①在火焰附近能形成一个无菌区，应在火焰附近操作；
常用凝固剂 琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
分类
据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然
物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
分类
• 用途可分为 1. 基础培养基：能满足各种微生物的营养需求。 2.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离。 3.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。 4.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离。
在100℃下杀菌时间（分）
19 16 14 12 8 6
表5 pH对灭菌时间的影响
温度 (℃)
芽孢数 (个/mL)
灭菌时间(分) pH 6.1 pH5.3 pH5.0 pH4.7 pH4.5
120 10 000 8 115 10 000 25 110 10 000 70 100 10 000 740
–加入青霉素的培养基 –加入高浓度食盐的培养基 –不加氮源的无氮培养基 –不加含碳有机物的无碳培养基 –加入青霉素等抗生素的培养基
培养基制备
步骤: •计算（如含结晶水化合物用量的计算） •称量（精密电子天平） •溶化 •定容（分别溶解再混合加热，最后加琼脂） •调节pH •灭菌
培养基的灭菌
• 培养基的灭菌（分装） • 培养基的分装（灭菌） • 冷却后倒置平板或者搁置斜面
后冷却备用
1、高压蒸汽灭菌法
将完全熔化的上述培养基趁热倒入 1000ML的三角瓶中，用牛皮纸扎紧瓶口后， 接种环、培养皿、烧杯等用牛皮纸包好一起 灭菌，置于灭菌锅中于121℃，15-30MIN。 注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，至少 留有1/3的空间，否则会影响灭菌效果。
表1 灭菌的温度和时间对营养成分的破坏
15min 20min
20min
破坏(%) 破坏(%)
破坏(%)
24.00 18.15
0.60
32.10 14.30
4.73
16.04 15.32
13.46
12.32 2.26
1.35
100℃ 30min 破坏(%)
8.02 18.10 21.16 3.75
高压蒸汽灭菌锅
• 加水 • 装锅 • 加盖 • 排气 • 灭菌 • 起锅
培养基的配制方法和步骤
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶
解。 • 调pH值：用 NAOH或HCL调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培
工作任务四 项目三 培养基的制备和灭菌
培养基
• 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养 物质，用人工方法配制而成的营养基质。
• 一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无 机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还 得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及 氧化还原电位等。
培养基的分类
• 根据物理性质
试管1/3（半固体培养基）； 试管1/4（液体培养基）； 试管1/5（固体培养基）；
将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成的斜面的 长度不超过试管总长的一半。
实验步骤
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌
灭菌温度（℃） 灭菌时间（分 ） 营养成分的破坏 （%）
100
400
99.3
110
30
67
115
15
50
120
4
27
130
0.5
8
140
0.08
2
150
0.01
＜1
表2 不同温度下高压灭菌对糖类的破坏
糖液 (10%)
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖
灭菌方法
121℃, 115.6-118℃ 113-115.6℃
121
112
1.40 20
126
118
1.75 25
130
124
2.10 30
134
128
不排除 空气 72 90 100 109 115 121
表4 芽孢数目和灭菌所需时间的关系
芽孢数／mL
100 000 000 75 000 000 50 000 000 25 000 000 1 000 000 100 000
选择培养基
• 使混合菌中的劣势菌变为优势菌，而将其从菌群 中分离出来。
• 方法1：采用“投其所好”的策略——加富 • 加富的物质是特殊的碳源和氮源。如：
• 自生固氮菌（甘露醇）； • 酵母（较浓的糖液）； • 分解石油的微生物（石油蜡）。
选择性培养基
• 方法2：“取其所抗”——利用分离对象 对某种制菌物质的抗性。如：
源自文库
操作过程
影响高压蒸汽灭菌效果的主要因素
• 灭菌物体含菌量的影响 • 灭菌锅空气排除程度的影响 • 灭菌对象pH的影响 • 灭菌对象的体积
表3 空气排除度对灭菌温度的影响
压力表读数
锅内温度(℃)
Kg/cm2 磅/英寸2 纯蒸汽 排除1/2 空气
0.35 5
109
94
0.70 10
115
105
1.05 15
– 固体培养基 – 半固体培养基 – 液体培养基
• 根据化学成分
– 天然培养基 – 合成培养基 – 半合成培养基
• 根据用途 – 选择培养基 – 鉴别培养基
分类
• 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固 剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5% 凝固剂而成的半固体状培养基。
7
5
3
3
25 12 13 13
65 35 30 24
720 180 150 150
表6 不同容量的液体在加压灭菌锅内的 灭菌时间
容器(mL)
三角瓶 50 200 500
1000 2000
在121℃～123 ℃下所需灭菌时间(分)
12 ～14 12 ～15 17 ～22 20 ～25 30 ～35
培养基的无菌分装
• 启动超净工作台 提前30分钟开启紫外灯杀菌无菌 风扇，防止空气对流。
• 分装培养基 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，在启动的超净
工作台上打开三角瓶的牛皮纸，用酒精灯火焰灼烧瓶 口后，将培养基分别到入灭过菌的培养皿中备用，加 培养皿盖。
培养基的无菌分装
• 注意： ①在火焰附近能形成一个无菌区，应在火焰附近操作；
常用凝固剂 琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
分类
据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然
物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
分类
• 用途可分为 1. 基础培养基：能满足各种微生物的营养需求。 2.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离。 3.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。 4.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离。
在100℃下杀菌时间（分）
19 16 14 12 8 6
表5 pH对灭菌时间的影响
温度 (℃)
芽孢数 (个/mL)
灭菌时间(分) pH 6.1 pH5.3 pH5.0 pH4.7 pH4.5
120 10 000 8 115 10 000 25 110 10 000 70 100 10 000 740
–加入青霉素的培养基 –加入高浓度食盐的培养基 –不加氮源的无氮培养基 –不加含碳有机物的无碳培养基 –加入青霉素等抗生素的培养基
培养基制备
步骤: •计算（如含结晶水化合物用量的计算） •称量（精密电子天平） •溶化 •定容（分别溶解再混合加热，最后加琼脂） •调节pH •灭菌
培养基的灭菌
• 培养基的灭菌（分装） • 培养基的分装（灭菌） • 冷却后倒置平板或者搁置斜面
后冷却备用
1、高压蒸汽灭菌法
将完全熔化的上述培养基趁热倒入 1000ML的三角瓶中，用牛皮纸扎紧瓶口后， 接种环、培养皿、烧杯等用牛皮纸包好一起 灭菌，置于灭菌锅中于121℃，15-30MIN。 注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，至少 留有1/3的空间，否则会影响灭菌效果。
表1 灭菌的温度和时间对营养成分的破坏
15min 20min
20min
破坏(%) 破坏(%)
破坏(%)
24.00 18.15
0.60
32.10 14.30
4.73
16.04 15.32
13.46
12.32 2.26
1.35
100℃ 30min 破坏(%)
8.02 18.10 21.16 3.75
高压蒸汽灭菌锅
• 加水 • 装锅 • 加盖 • 排气 • 灭菌 • 起锅
培养基的配制方法和步骤
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶
解。 • 调pH值：用 NAOH或HCL调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培
工作任务四 项目三 培养基的制备和灭菌
培养基
• 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养 物质，用人工方法配制而成的营养基质。
• 一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无 机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还 得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及 氧化还原电位等。
培养基的分类
• 根据物理性质