《食品微生物检验技术》教学课件— 培养基的制备
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培养基的配制-PPT
摆斜面：
◇ 成扎摆放，不需将每支试管单独摆放 ◇ 最好待培养基冷至60℃时摆斜面，以免形 成大量冷凝水
无菌检查：
将灭菌的培养基放在37℃温箱中培养24-48小 时，以检查灭菌是否彻底。
二 消毒与灭菌
实验目的
1、了解掌握常用消毒、灭菌方法的原理。 2、学习掌握干热灭菌和压力蒸汽灭菌操作步骤。
实验原理 干热法
压力蒸汽灭菌
实验内容及实验步骤 (continued)
1、检查水位，放入物品。
2、加盖、拧紧 对称用力 3、加热升温 4、排冷空气 等压力升至0.5kg/cm2时，打开排气 阀，排净冷空气。
5、升温、保压 等锅内压力升至所需数值（通常为
1.03kg/cm2），保持压力20-30分钟。
6、降压、取物
硝酸钾
1g
磷酸氢二钾 0.5 g
NaCl
0.5 g
硫酸镁
0.5g
硫酸亚铁 0.01克
琼脂
15-20g
水
ml
pH
7.2-7.4
马铃薯蔗糖琼脂培养基：
把马铃薯洗净去皮，取200克切成小 块，加水1000毫升，煮沸半小时后， 补足水分。在滤液中加入15克琼脂， 煮沸溶解后加蔗糖20克补足水分 pH值调到7.2～7.4
99 mL无菌水 装三角瓶 6 瓶 9 mL无菌水 试管装 12 支 1 mL 吸管 15 支 牛肉膏蛋白胨固体培养基 斜面 5支
牛肉膏蛋白胨培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 NaCl 琼脂 水 pH
3g 10g 5g 15-20g 1000ml 7.4-7.6
淀粉琼脂培养基（高氏培养基） ：
可溶性淀粉 20 g
分装：
操作步骤 (continued)
食品卫生微生物学检验培训课件
食品卫生微生物学检验
甲 乙甲 乙
4
5
丙 丁丙 丁
甲 乙甲 乙
9
10
丙 丁丙 丁
2
食品卫生微生物学检验一 实验准备
❖ 培养基制备 ❖ 高压蒸汽灭菌 ❖ 器材预算 ❖ 刻度吸管的无菌操作方法
食品卫生微生物学检验
3
培养基的制备（40人份）
组号
1+2 +3+4
5
培养基
乳糖胆盐 发酵培养基
营养琼脂
称量g 水量ml
❖ 大肠菌群并非细菌学分类命名, 而是卫生细菌领域的 用语, 它不代表某一个或某一属细菌, 而是指具有某 些特性的一组与粪便污染有关的细菌, 是评价食品卫 生质量的重要指标之一。
❖ 大肠菌群在生化及血清学方面并非完全一致, 其定义 为: 需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的 革兰阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大 肠埃希菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯菌属和肠杆菌属 等四个属的细菌。
食品卫生微生物学检验
13
器材准备
❖ 1.冰箱: 0～4℃ ❖ 2.恒温培养箱: 35～37℃ ❖ 3.恒温水浴箱: 45～47℃ ❖ 4.灭菌1ml刻度吸管: 3支×10组×2倍 ❖ 5.灭菌10ml刻度吸管: 2支×10组×2倍 ❖ 6.灭菌90mm平皿: 7个×10组×2倍 ❖ 7.灭菌70mm平皿: 4个×2×10组×2倍 ❖ 8.灭菌中试管: 2支×10组×2倍
条包住吸管向前转动几圈, 将吸管尖退入纸筒内约3～4 厘米, 把纸筒起始端压平, 打折180度 （折3～4 厘米长、纸筒壁厚度约三层纸, 不容易被管尖扎破）, 转动并压住起始端打折部分, 继 续转动。转动时, 右手将纸条向前推平, 左手将吸管向后拉紧, 同时向前转动, 吸管就能够包得 很紧。纸筒形成以后, 把末端空心纸筒压平固定, 打折, 系牢, 多余的纸撕掉。 ❖ 每10支用1/2版（宽 20cm）的报纸包成1包。 ❖ 高压蒸汽灭菌, 烤干备用。
《培养基的制备》课件
在制备培养基时，需要将 培养基中的气泡排除，以 确保培养基的质量。
3 除菌
必须对培养基进行严格的 除菌处理，以避免外源性 的微生物污染。
6. 结语
培养基的重要性
培养基是细胞培养和微生物研究的基础，对于科学 研究和产业应用具有重要意义。
经验总结
制备培养基时要注意操作规范，保持实验环境的清 洁，确保培养基的质量。
4. 培养基的贮存
1
贮存时间
不同类型的培养基有不同的贮存期限，要根据需要及时更新。
2
贮存温度
培养基应该在指定的温度下储存，避免因温度过高或过低而导致变质。
3
细菌培养
使用培养基时，必须遵循无菌操作，确保细菌的纯度和培养环境的卫生。
5. 培养基的常见问题
1 氧化
2 消泡
培养基暴露在空气中会发 生氧化反应，影响培养效 果，需在贮存时防止氧化。
《培养基的制备》PPT课 件
这是一个关于培养基制备的PPT课件，课件内容包括前言、培养基的组成、培 养基的配制、培养基的贮存、培养基的常见问题以及结语。
1. 前言
培养基是一种用于细菌、真菌和细胞培养的人工培养环境。它提供了细胞生长所需的营养物质和调节因子。
2. 培养基的组成
基Hale Waihona Puke 成分包括碳源、氮源、矿物质和生长因子等。
辅助成分
提供额外的营养物质和调节剂，如洋菜、琼脂和血清等。
酸碱度调节剂
控制培养基的酸碱度，维持适宜的生长环境。
3. 培养基的配制
1
操作步骤
按照特定的步骤和顺序，将不同成分加
器材准备
2
入适量的溶液中，并进行搅拌和消毒处 理。
准备好所需的培养皿、量杯、瓶子、搅
《食品微生物检验技术》说课课件 (二)
《食品微生物检验技术》说课课件 (二)
- 介绍《食品微生物检验技术》
- 该书的作者、出版社、出版时间等基本信息
- 该书的主要内容和特点
- 重点讲解《食品微生物检验技术》的内容
- 第一章：食品微生物学基础知识
- 食品微生物的分类和特点
- 食品微生物的生长条件和影响因素
- 食品微生物的检测方法
- 第二章：食品微生物检验技术
- 食品微生物检验的基本流程
- 常见的食品微生物检验方法
- 培养基法
- 快速检测法
- 分子生物学方法
- 第三章：食品微生物检验的质量控制
- 检验结果的可靠性评价
- 检验方法的验证和认证
- 实验室质量管理体系的建立
- 《食品微生物检验技术》在食品安全领域的应用
- 食品微生物检验的重要性和必要性
- 食品微生物检验在食品安全监管中的作用
- 食品微生物检验技术的发展趋势和前景
- 总结
- 总结本文讲解的内容
- 强调《食品微生物检验技术》在食品安全领域的重要性
- 展望食品微生物检验技术的未来发展方向。
培养基的制备-PPT课件
半合成培养基
既含有同天然成分化学成分又含 有纯化学成分
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
7)所用原料尽可能减少对发酵过程中通气搅拌的影响，利于提 高氧的利用率，降低能耗。
(8)有利于产品的分离纯化，并尽可能减少产生“三废”的物质。
注 意 的 几 个 问 题 。
根据不同微生物的营养需要 营养成分的恰当比例 渗透压 pH值 氧化还原电位
培养基中的碳氮的比例（C/N）在发酵工业中 尤为重要。
按 使 用 目 的 不 同 划 分
鉴别培养基
用于鉴别不同类型微生物的培养基
微生物产生某种代谢产物，与培养 基中的特殊化学物质发生特定的化 学反应，产生明显的特征变化
是供制备孢子用的培养基
按 用 途 不 同 划 分
孢子培养基 种子培养基
满足菌种生长的培养基
发酵培养基
满足大生产中大量菌体生长和繁殖以 及代谢产物积累的营养基质
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
牛肉膏蛋白胨培养基是最常 含有一般微生物生长繁殖所 需的基本营养物质的培养基 用的基础培养基 基础培养基 加富培养基 选择培养基
在培养基中加入相应的特殊营养物质 用来将某种或某类微生物从混杂的 或化学物质，抑制不需要的微生物的 微生物群体中分离出来的培养基 生长，有利于所需微生物的生长 特殊营养物质包括血液、血清、酵 在基础培养基中加入某些特殊营养 物质制成的一类营养丰富的培养基 母浸膏、动植物组织液等
培养基的制备-PPT课件
四、培养基成分配比的选择
培养基的组分、配比、缓冲能力、黏度、 消毒是否彻底、消毒后营养破坏的程度及 原料中杂质的含量都对菌体生长和产物形 成有影响。 理论+经验 数学分析方法
• 正交实验设计，方差分析
正交表因素水平
因素水 平
1 2 3
玉米粉 （％） A 0.5
1.0 1.5
豆饼粉 （％） B 4
③ 淀粉、糊精 使用条件：微生物必须能分泌水解淀粉、糊精的酶类 缺点：难利用、 发酵液比较稠、一般>2.0%时加入一定的α-淀粉酶 成分比较复杂，有直链淀粉和支链淀粉等等。 优点：来源广泛、价格底 难利用，可以解除葡萄糖效应
(半纤维素酶)
(1.5g麸皮)
李江华，无锡轻工大学学报，2019
二、氮源
斜面培养基
作用：这是供微生物细胞生长繁殖用的， 包括细菌，酵母等的斜面培养基以及霉菌、 放线菌生孢子培养基或麸曲培养基等。这 类培养基主要作用是供给细胞生长繁殖所 需的各类营养物质。
特点： 1.富含有机氮源，少含或不含糖分。有机氮有 利于菌体的生长繁殖，能获得更多的细胞。 2.对于放线菌或霉菌的产孢子培养基，则氮源 和碳源均不宜太丰富，否则容易长菌丝而较少 形成孢子。 3.斜面培养基中宜加少量无机盐类，供给必要 的生长因子和微量元素。
２、硫酸镁
镁是某些细菌的叶绿素的组成成分。虽不参 加任何细胞结构物质的组成，但它的离子状 态是许多重要的酶的激活剂。 硫，含硫蛋白质的组分；酶的活性基。
• 硫酸镁
２、钾盐
钾不参加细胞结构物质的组成，但它是许多 酶的激活剂。
３、微量元素
铜、锰、锌、钼、碘、溴等。 避免有害离子加入到培养基中。
《食品微生物检验》课件
详细描述
在食品储存和运输过程中，定期进行 微生物检验，以检测食品中微生物的 生长和变化，及时发现并控制潜在的 食品安全问题。
食品卫生与安全评价的微生物检验
总结词
评估食品卫生状况和食品安全性能，为消费者提供可靠的食品安全信息。
详细描述
通过微生物检验，对食品卫生状况和食品安全性能进行评价，为消费者提供可 靠的食品安全信息，保障公众健康。
提高食品安全预警能力。
智能化与自动化检测设备的研发
智能化检测设备
通过人工智能和机器学习技术，实现对食品中微生物的自动识别 、分类和计数，提高检测准确性和效率。
自动化检测设备
利用自动化技术，实现食品微生物检验的自动化流程，减少人工 操作和误差，提高检测的一致性和可靠性。
在线监测系统
研发在线监测系统，实时监测食品生产过程中的微生物状况，及 时发现和解决食品安全问题。
02
食品微生物的种类与特性
细菌
01
02
03
常见种类
大肠杆菌、沙门氏菌、志 贺氏菌等。
特性
细菌通常为单细胞微生物 ，形态多样，可在食品中 广泛分布，部分细菌可引 起食物中毒和肠道疾病。
检测方法
通过培养、分离、鉴定等 步骤进行细菌检测，常用 生化试验和免疫学方法进 行鉴定。
霉菌
常见种类
黄曲霉、毛霉、根霉等。
03
利用磁珠与微生物的结合，实现微生物的分离和富集。
分子生物学检测技术
1 2
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增微生物的DNA片段，实现快速、灵敏的 检测。
基因测序
对微生物的基因组进行测序，鉴定其属性和类型 。
3
生物芯片技术
将微生物的基因标记在芯片上，通过扫描仪进行 检测和计数。
在食品储存和运输过程中，定期进行 微生物检验，以检测食品中微生物的 生长和变化，及时发现并控制潜在的 食品安全问题。
食品卫生与安全评价的微生物检验
总结词
评估食品卫生状况和食品安全性能，为消费者提供可靠的食品安全信息。
详细描述
通过微生物检验，对食品卫生状况和食品安全性能进行评价，为消费者提供可 靠的食品安全信息，保障公众健康。
提高食品安全预警能力。
智能化与自动化检测设备的研发
智能化检测设备
通过人工智能和机器学习技术，实现对食品中微生物的自动识别 、分类和计数，提高检测准确性和效率。
自动化检测设备
利用自动化技术，实现食品微生物检验的自动化流程，减少人工 操作和误差，提高检测的一致性和可靠性。
在线监测系统
研发在线监测系统，实时监测食品生产过程中的微生物状况，及 时发现和解决食品安全问题。
02
食品微生物的种类与特性
细菌
01
02
03
常见种类
大肠杆菌、沙门氏菌、志 贺氏菌等。
特性
细菌通常为单细胞微生物 ，形态多样，可在食品中 广泛分布，部分细菌可引 起食物中毒和肠道疾病。
检测方法
通过培养、分离、鉴定等 步骤进行细菌检测，常用 生化试验和免疫学方法进 行鉴定。
霉菌
常见种类
黄曲霉、毛霉、根霉等。
03
利用磁珠与微生物的结合，实现微生物的分离和富集。
分子生物学检测技术
1 2
聚合酶链式反应（PCR）
通过扩增微生物的DNA片段，实现快速、灵敏的 检测。
基因测序
对微生物的基因组进行测序，鉴定其属性和类型 。
3
生物芯片技术
将微生物的基因标记在芯片上，通过扫描仪进行 检测和计数。
培养基的制备ppt课件
第2组:100ml （先分装7支）
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
16
六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
2.普通琼脂平板培养基
第3.4.5.6组:各100ml
每组倒7枚平板供6小组下次用
6
四、方法
1.肉膏汤培养基的配制: ⑴称样： 牛肉膏0.5g 蛋白胨1g 氯化钠0.5g
加至100ml蒸馏水 中，加热溶化
(2) 待冷至40～50℃时，矫正酸碱度为pH7.6
(3) 分装于试管内（每管约2ml）置高压蒸汽 灭菌器内灭菌(121.3-20min)。
3
三、材料 牛肉膏、蛋白胨 氯化钠、蒸馏水 琼脂，10%NaOH pH试纸、三角烧瓶 量筒，天平 酒精灯、等。
4
四、方法 培 养 基 配 制 步 骤
⑴调配成分 ⑵溶解 ⑶调节 pH ⑷ 分装 ⑸灭菌 ⑹质量检验 ⑺保存
5
各组所需要配制的培养基
1.肉膏汤培养基 3.普通斜面培养基
第1组:各100ml （ 先分装7支）
半固体斜面培养基的制备细菌培养基的制备一目的掌握培养基的制备方法二原理培养基是人工合成的一种混合营养料用以分离细菌
食品微生物学实验
实验四
1
实验项目
细菌培养基的制备
肉膏汤培养基的制备 普通琼脂平板培养基的制备 半固体斜面培养基的制备
2
一、目的
掌握培养基的制备方法 二、原理
培养基是人工合成的一种混合营养料， 用以分离细菌。基础培养基中含有大多数 常见菌生长繁殖所需要的营养物质，并可 制成液体、半固体、固体三种不同的性状 以供选用。
配制出以下培养基： 1.肉膏汤培养基 2.普通琼脂平板培养基 3.普通斜面培养基
16
六、实验报告要求 实验报告中描述本组所配制的培养基。
七、思考题
何谓培养基？ 培养基的制备过程有哪几个步骤？
培养基(食品微生物课件)
发酵生产谷氨酸： 碳氮比为4/1时：菌体大量繁殖，谷氨酸积累少； 碳氮比为3/1时：菌体繁殖受到抑制，谷氨酸产量则大量增加。
（3）物化适宜
① pH 培养基的 pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或
产生代谢产物。 通常培养条件：
细菌与放线菌：pH7~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6
氧化还原电位与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。 增加通气量（如振荡培养、搅拌）提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而 增加Ф值；在培养基中加入抗坏血酸（0.1%）、硫化氢（0.025%）、半胱氨酸 （<0.05%）、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、庖肉等还原性物质可降低Ф值。
培养基中加入氧化还原指示剂刃天青可对氧化还原电位进行间接测定：
EMB鉴别不肠道菌的结果
④选择培养基：用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分 离出来的培养基。 根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。
知识点：培养基的配制原则
情境：培养基制作技术 任务：培养基的配制原则
课程：食品微生物技术
培养基的配制原则
一、培养基的配制原则
1. 基本原则
（1）目的明确 （2）营养协调 （3）理化适宜 （4）经济节约 （5）精心设计、试验比较
2.基本原则内容
（1）目的明确
实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的配方。 例如枯草芽孢杆菌: 一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基。
（3）物化适宜
① pH 培养基的 pH必须控制在一定的范围内，以满足不同类型微生物的生长繁殖或
产生代谢产物。 通常培养条件：
细菌与放线菌：pH7~7.5 酵母菌和霉菌：pH4.5~6
氧化还原电位与氧分压和pH有关，也受某些微生物代谢产物的影响。 增加通气量（如振荡培养、搅拌）提高培养基的氧分压，或加入氧化剂，从而 增加Ф值；在培养基中加入抗坏血酸（0.1%）、硫化氢（0.025%）、半胱氨酸 （<0.05%）、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、庖肉等还原性物质可降低Ф值。
培养基中加入氧化还原指示剂刃天青可对氧化还原电位进行间接测定：
EMB鉴别不肠道菌的结果
④选择培养基：用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分 离出来的培养基。 根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不 同，在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质，抑制不需要 的微生物的生长，有利于所需微生物的生长。
知识点：培养基的配制原则
情境：培养基制作技术 任务：培养基的配制原则
课程：食品微生物技术
培养基的配制原则
一、培养基的配制原则
1. 基本原则
（1）目的明确 （2）营养协调 （3）理化适宜 （4）经济节约 （5）精心设计、试验比较
2.基本原则内容
（1）目的明确
实验室一般培养：普通常用培养基； 遗传研究：成分清楚的合成培养基； 生理、代谢研究：选用相应的配方。 例如枯草芽孢杆菌: 一般培养：肉汤培养基或LB培养基； 自然转化：基础培养基； 观察芽孢：生孢子培养基； 产蛋白酶：以玉米粉、黄豆饼粉为主的产酶培养基。
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②倒平板一般每个培养皿倒入培养基20ML左右，冷却后倒置培养皿； ③冷却前试管搁置斜面以备用。
试管1/3（半固体培养基）； 试管1/4（液体培养基）； 试管1/5（固体培养基）；
将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成的斜面的 长度不超过试管总长的一半。
实验步骤
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌
常用凝固剂 琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
分类
据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然
物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
分类
• 用途可分为 1. 基础培养基：能满足各种微生物的营养需求。 2.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离。 3.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。 4.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离。
121
112
1.40 20
126
118
1.75 25
130
124
2.10 30
134
128
不排除 空气 72 90 100 109 115 121
表4 芽孢数目和灭菌所需时间的关系
芽孢数／mL
100 000 000 75 000 000 50 000 000 25 000 000 1 000 000 100 000
15min 20min
20min
破坏(%) 破坏(%)
破坏(%)
24.00 18.15
0.60
32.10 14.30
4.73
16.04 15.32
13.46
12.32 2.26
1.35
100℃ 30min 破坏(%)
8.02 18.10 21.16 3.75
高压蒸汽灭菌锅
• 加水 • 装锅 • 加盖 • 排气 • 灭菌 • 起锅
灭菌温度（℃） 灭菌时间（分 ） 营养成分的破坏 （%）
100
400
99.3
110
30
67
115
15
50
120
4
27
130
0.5
8
140
0.08
2
150
0.01
＜1
表2 不同温度下高压灭菌对糖类的破坏
糖液 (10%)
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖
灭菌方法
121℃, 115.6-118℃ 113-115.6℃
• 启动超净工作台 提前30分钟开启紫外灯杀菌无菌 风扇，防止空气对流。
• 分装培养基 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，在启动的超净
工作台上打开三角瓶的牛皮纸，用酒精灯火焰灼烧瓶 口后，将培养基分别到入灭过菌的培养皿中备用，加 培养皿盖。
培养基的无菌分装
• 注意： ①在火焰附近能形成一个无菌区，应在火焰附近操作；
– 固体培养基 – 半固体培养基 – 液体培养基
• 根据化学成分
– 天然培养基 – 合成培养基 – 半合成培养基
• 根据用途 – 选择培养基 – 鉴别培养基
分类
• 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固 剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5% 凝固剂而成的半固体状培养基。
操作过程
影响高压蒸汽灭菌效果的主要因素
• 灭菌物体含菌量的影响 • 灭菌锅空气排除程度的影响 • 灭菌对象pH的影响 • 灭菌对象的体积
表3 空气排除度对灭菌温度的影响
压力表读数
锅内温度(℃)
Kg/cm2 磅/英寸2 纯蒸汽 排除1/2 空气
0.35 5
109
94
0.70 10
115
105
1.05 15
选择培养基
• 使混合菌中的劣势菌变为优势菌，而将其从菌群 中分离出来。
• 方法1：采用“投其所好”的策略——加富 • 加富的物质是特殊的碳源和氮源。如：
• 自生固氮菌（甘露醇）； • 酵母（较浓的糖液）； • 分解石油的微生物（石油蜡）。
选择性培养基
• 方法2：“取其所抗”——利用分离对象 对某种制菌物质的抗性。如：
工作任务四 项目三 培养基的制备和灭菌
培养基
• 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养 物质，用人工方法配制而成的营养基质。
• 一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无 机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还 得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及 氧化还原电位等。
培养基的分类
• 根据物理性质
–加入青霉素的培养基 –加入高浓度食盐的培养基 –不加氮源的无氮培养基 –不加含碳有机物的无碳培养基 –加入青霉素等抗生素的培养基
培养基制备
步骤: •计算（如含结晶水化合物用量的计算） •称量（精密电子天平） •溶化 •定容（分别溶解再混合加热，最后加琼脂） •调节pH •灭菌
培养基的灭菌
• 培养基的灭菌（分装） • 培养基的分装（灭菌） • 冷却后倒置平板或者搁置斜面
培养基的配制方法和步骤
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶
解。 • 调pH值：用 NAOH或HCL调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培
7
5
3
3
25 12 13 13
65 35 30 24
720 180 150 150
表6 不同容量的液体在加压灭菌锅内的 灭菌时间
容器(mL)
三角瓶 50 200 500
1000 2000
在121℃～123 ℃下所需灭菌时间(分)
12 ～14 12 ～15 17 ～22 20 ～25 30 ～35
培养基的无菌分装
在100℃下杀菌时间（分）
19 16 14 12 8 6
表5 pH对灭菌时间的影响源自温度 (℃)芽孢数 (个/mL)
灭菌时间(分) pH 6.1 pH5.3 pH5.0 pH4.7 pH4.5
120 10 000 8 115 10 000 25 110 10 000 70 100 10 000 740
后冷却备用
1、高压蒸汽灭菌法
将完全熔化的上述培养基趁热倒入 1000ML的三角瓶中，用牛皮纸扎紧瓶口后， 接种环、培养皿、烧杯等用牛皮纸包好一起 灭菌，置于灭菌锅中于121℃，15-30MIN。 注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，至少 留有1/3的空间，否则会影响灭菌效果。
表1 灭菌的温度和时间对营养成分的破坏
试管1/3（半固体培养基）； 试管1/4（液体培养基）； 试管1/5（固体培养基）；
将试管带棉塞的一端搁在一根木棒上，使培养基形成的斜面的 长度不超过试管总长的一半。
实验步骤
• 培养基的配制 • 分离培养微生物常用器皿的准备 • 培养基和玻璃器材的灭菌
常用凝固剂 琼脂（其次为明胶），又叫洋菜、冻粉。
分类
据组成成分可分为: 1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。 2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然
物质配制而成。 3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。
分类
• 用途可分为 1. 基础培养基：能满足各种微生物的营养需求。 2.加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质， 使其快速生长，便于分离。 3.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性。 4.选择培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目 标微生物得到富集，便于分离。
121
112
1.40 20
126
118
1.75 25
130
124
2.10 30
134
128
不排除 空气 72 90 100 109 115 121
表4 芽孢数目和灭菌所需时间的关系
芽孢数／mL
100 000 000 75 000 000 50 000 000 25 000 000 1 000 000 100 000
15min 20min
20min
破坏(%) 破坏(%)
破坏(%)
24.00 18.15
0.60
32.10 14.30
4.73
16.04 15.32
13.46
12.32 2.26
1.35
100℃ 30min 破坏(%)
8.02 18.10 21.16 3.75
高压蒸汽灭菌锅
• 加水 • 装锅 • 加盖 • 排气 • 灭菌 • 起锅
灭菌温度（℃） 灭菌时间（分 ） 营养成分的破坏 （%）
100
400
99.3
110
30
67
115
15
50
120
4
27
130
0.5
8
140
0.08
2
150
0.01
＜1
表2 不同温度下高压灭菌对糖类的破坏
糖液 (10%)
葡萄糖 乳糖 麦芽糖 蔗糖
灭菌方法
121℃, 115.6-118℃ 113-115.6℃
• 启动超净工作台 提前30分钟开启紫外灯杀菌无菌 风扇，防止空气对流。
• 分装培养基 灭菌后的培养基冷却至50℃左右，在启动的超净
工作台上打开三角瓶的牛皮纸，用酒精灯火焰灼烧瓶 口后，将培养基分别到入灭过菌的培养皿中备用，加 培养皿盖。
培养基的无菌分装
• 注意： ①在火焰附近能形成一个无菌区，应在火焰附近操作；
– 固体培养基 – 半固体培养基 – 液体培养基
• 根据化学成分
– 天然培养基 – 合成培养基 – 半合成培养基
• 根据用途 – 选择培养基 – 鉴别培养基
分类
• 从培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固 剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5% 凝固剂而成的半固体状培养基。
操作过程
影响高压蒸汽灭菌效果的主要因素
• 灭菌物体含菌量的影响 • 灭菌锅空气排除程度的影响 • 灭菌对象pH的影响 • 灭菌对象的体积
表3 空气排除度对灭菌温度的影响
压力表读数
锅内温度(℃)
Kg/cm2 磅/英寸2 纯蒸汽 排除1/2 空气
0.35 5
109
94
0.70 10
115
105
1.05 15
选择培养基
• 使混合菌中的劣势菌变为优势菌，而将其从菌群 中分离出来。
• 方法1：采用“投其所好”的策略——加富 • 加富的物质是特殊的碳源和氮源。如：
• 自生固氮菌（甘露醇）； • 酵母（较浓的糖液）； • 分解石油的微生物（石油蜡）。
选择性培养基
• 方法2：“取其所抗”——利用分离对象 对某种制菌物质的抗性。如：
工作任务四 项目三 培养基的制备和灭菌
培养基
• 培养基是按照微生物生长繁殖所需要的各种营养 物质，用人工方法配制而成的营养基质。
• 一般来说，培养基包括有水份、碳源、氮源、无 机盐类以及生长因素等五大类营养成份。此外还 得有适宜的pH值，一定的渗透压（即浓度）以及 氧化还原电位等。
培养基的分类
• 根据物理性质
–加入青霉素的培养基 –加入高浓度食盐的培养基 –不加氮源的无氮培养基 –不加含碳有机物的无碳培养基 –加入青霉素等抗生素的培养基
培养基制备
步骤: •计算（如含结晶水化合物用量的计算） •称量（精密电子天平） •溶化 •定容（分别溶解再混合加热，最后加琼脂） •调节pH •灭菌
培养基的灭菌
• 培养基的灭菌（分装） • 培养基的分装（灭菌） • 冷却后倒置平板或者搁置斜面
培养基的配制方法和步骤
• 称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。 • 溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶
解。 • 调pH值：用 NAOH或HCL调pH，用pH试纸对照。 • 加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。 • 分装：注意不要污染棉塞。 • 包扎成捆，挂上标签（必须用铅笔写），注明何种培
7
5
3
3
25 12 13 13
65 35 30 24
720 180 150 150
表6 不同容量的液体在加压灭菌锅内的 灭菌时间
容器(mL)
三角瓶 50 200 500
1000 2000
在121℃～123 ℃下所需灭菌时间(分)
12 ～14 12 ～15 17 ～22 20 ～25 30 ～35
培养基的无菌分装
在100℃下杀菌时间（分）
19 16 14 12 8 6
表5 pH对灭菌时间的影响源自温度 (℃)芽孢数 (个/mL)
灭菌时间(分) pH 6.1 pH5.3 pH5.0 pH4.7 pH4.5
120 10 000 8 115 10 000 25 110 10 000 70 100 10 000 740
后冷却备用
1、高压蒸汽灭菌法
将完全熔化的上述培养基趁热倒入 1000ML的三角瓶中，用牛皮纸扎紧瓶口后， 接种环、培养皿、烧杯等用牛皮纸包好一起 灭菌，置于灭菌锅中于121℃，15-30MIN。 注意：灭菌桶内的物品不能放得太挤，至少 留有1/3的空间，否则会影响灭菌效果。
表1 灭菌的温度和时间对营养成分的破坏