链霉亲和素琼脂糖凝胶6FF使用说明

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Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂)说明书

Ni-琼脂糖凝胶6FF(His标签纯化树脂）说明书货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年产品说明：Ni-NTA琼脂糖凝胶6FF是用于纯化6×His标签重组蛋白的一种纯化介质，它是由6%交联的Sepharose 耦连了一种四齿螯合剂NTA而得.它可用于在非变性或变性条件下纯化任何表达系统表达的6×His标签重组蛋白。

NTA，含有四个螯合区，较一般的三齿螯合剂能更好的结合Ni2+。

6×His可与Ni2+螯合，从而使His 标签蛋白结合在Ni-NTA纯化介质上，未结合的蛋白被洗涤下去，结合在介质上的蛋白经过一定浓度的咪唑或低pH缓冲液的温和洗脱下来，从而得到高纯度的目的蛋白。

该纯化介质与His标签蛋白具有极高的亲和力，可达5-20mg/mL。

可在非变性和变性条件下纯化任何表达系统所得的His标签蛋白。

纯化程序简单，所得的蛋白纯度可高达95%。

Ni-NTA可再生4-6次，重复使用。

本产品悬浮液为20%乙醇，已螯合Ni2+。

操作方法：A.非变性条件下抽提His标签蛋白1)准备细胞，接种，诱导表达。

收集细胞，置于-70°C或立即进行步骤2操作。

2)加入1/20细胞生长体积的NTA-0Buffer和PMSF。

PMSF使用的工作浓度为1mM现用现加。

3)将细胞悬浮起来，加入溶菌酶，混匀，冰上放置30分钟，超声或匀浆破碎细胞。

该步骤冰上操作。

4)加入10%Triton X-100,使终浓度为0.05%，充分混匀，冰上放置15分钟。

5)12000rpm/min(20,000×g以上)，4°C离心15分钟以上。

取上清，置于冰上备用或-20°C保存。

6)将NTA树脂装入合适的层析柱，层析用10倍NTA体积的NTA-0Buffer洗。

7)将样品加至NTA层析柱中，流速在15mL/h左右，收集穿透部分，用SDS/PAGE分析蛋白的结合情况。

ProteinG琼脂糖凝胶说明书

Version 11302010ProteinG-Sepharose Protein G 琼脂糖凝胶Cat. No. CW0012保存：2-8 ℃组分说明CW0012 CW0012A Cat.No.Volume 1 ml 5 mlose 本产品具有广谱IgG 结合、高Fc 段结合活性、高抗体吸附量和性，可重复多次使用。

左右），以利于维持抗体的生物活性，避免抗脱5-10个柱床体积，可洗脱脂类和疏水性较强的蛋白质，避免使亲和介质的载量下降、干扰亲和介质的应用效果。

产品简介本产品为Protein G 与Sephar 偶联后产物，可从血清，腹水，细胞培养上清和细胞抽提物中分离和纯化多种哺乳动物不同亚型的抗体或包含抗体Fc 片段的基因工程重组蛋白。

Protein G 是链球菌(group C 和G)细胞表面蛋白。

它与Protein A 类似，通过与免疫球蛋白的Fc 区相互作用，可结合大多数哺乳动物的IgG。

但两者结合特异性有所不同。

Protein G 对人IgG3，小鼠IgG1，大鼠IgG2a 等具有高亲和力。

天然Protein G 具有白蛋白和细胞表面结合域。

重组Protein G 去除了白蛋白和细胞表面结合域，以减少非特异性结合。

能稳定等特点注意事项1. 凝胶从冷室或冰箱中取出后在室温下缓慢振摇恢复到室温，装柱，避免产生气泡影响柱效。

2. 装柱时尽可能维持凝胶长径比为5：3-2：1，长径比过大将导致洗脱峰拖尾，洗脱体积增大；长径比过小将导致样品与填料接触时间短，吸附不充分，填料吸附蛋白量小。

3. 若上样液中抗体浓度过高，应使用平衡缓冲液稀释至1-2mg/ml，以免上样浓度过高影响柱效。

4. 可以采用降低上样时的流速来增加样品与填料接触时间从而提高纯化抗体量。

5. 凝胶用低 pH 缓冲液洗脱时间应尽可能短，洗脱后用中性缓冲液尽快中和至 pH 中性，以延长亲和介质的使用寿命。

6. 洗脱后，应立刻用如中和缓冲液将收集到的抗体溶液中和到中性（pH7.4体失活。

BeaverBeadsTM Streptavidin 链霉亲和素磁珠说明书

链霉亲和素磁珠（BeaverBeads TM Streptavidin ）产品简介链霉亲和素-生物素（SA-Biotin ）系统具有极高的结合亲和力（Kd=10^-15），在生物领域具有广泛的应用。

BeaverBeads TM Streptavidin 采用海狸专利的蛋白偶联技术将SA 共价连接于固相载体表面，可高效结合生物素化抗体、核酸、蛋白等配体分子。

本产品采用超顺磁性微球，粒径均一、形貌规整，有利于方便、快捷地捕获目标分子以及实现磁性分离。

本产品可配套自动化设备进行高通量操作。

产品信息产品信息 SA 磁珠（300 nm ）生物素化IgG 结合性能 20μg/mg 磁珠磁珠浓度 10 mg/mL 磁珠表面亲水基团保存溶液 1×PBS ，含0.1%（w/v ）BSA ，0.1%（v/v ）proclin-300 保存条件 2-8 ℃ 保质期2年产品应用范围适用于体外诊断体系磁微粒化学发光免疫诊断操作流程（本操作以两步双抗体夹心CLIA 法为例）1. 使用前准备1.1. 检测试剂：包括捕获抗体、待测物标准品、待测样品、酶标记抗体、底物液等，使用前平衡至室温1.2. Washing buffer ：用户根据需求配制洗液，使用时平衡至室温 1.3. 化学发光96孔平底微孔板1.4. 96孔平底微孔板磁性分离器：可选用海狸磁性分离器，Cat.No.60302 1.5. 漩涡振荡器 1.6. 真空吸液泵 1.7. 化学发光仪 1.8. 移液器2. 磁微粒化学发光免疫诊断操作流程2.1.调整磁珠至合适浓度（建议0.8mg/ml ），将磁珠置于漩涡振荡器上20 s ，振荡重悬磁珠。

用移液器移取50 μL 磁珠至96孔板中，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

2.2. 每孔加入100 μL 生物素化捕获抗体，充分震荡重悬磁珠，37℃恒温箱中孵育15min 后，磁性分离，用移液器吸去上清液，从磁性分离器上取下96孔板。

琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程

琼脂糖凝胶电泳注意事项及操作流程凝胶电泳操作注意事项：1. 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA 变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。

长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。

2. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。

3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。

倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。

4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5ug的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。

5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。

6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。

7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。

采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。

小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。

琼脂糖加样时候注意事项：1、用移液抢将样品加至点样孔。

每孔点样的体积一般少于25ul，因此吸取每一个样品时，操作要稳当且细心。

2、常加一定量的蔗糖来增加样品的浓度，以使每个样品停留在各自的点样孔中。

3、在样品中加入水溶性的阴离子追踪染料（如溴酚蓝），用以看出样品移动的距离。

4、在一个或几个孔中加入标准分子质量样品，电泳结束后，根据已知分子质量的带的相应位置可用来做出标准曲线。

5、电泳一般是在追踪染料泳动到胶的80%部位时停止。

注意电泳期间，电泳槽盖要安全盖好，以防止液体蒸发，又可以降低电击的可能性。

Q-琼脂糖凝胶HP的使用方法说明

Q-琼脂糖凝胶HP的使用方法说明产品简介Q-琼脂糖凝胶HP是将季铵基团键合在琼脂糖微球上形成的一种强阴离子交换介质。

具有高分辨率，高载量，回收率高和再生能力强等特点。

化学稳定性好，可用氢氧化钠在位清洗。

基质的亲水特性保证在洗脱过程中减少细胞衍生杂质的非特异性吸附。

可用于蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

产品参数产品名称：Q-琼脂糖凝胶HP (Q- Sepharose High Performance)货号：S9200基质：6% 交联琼脂糖凝胶配基：季铵交换基团：- N+(CH3)3离子容量：0.14-0.20 mmolCl-/mL颗粒大小：34μm蛋白载量：10mg lgG，24mg HAS/mL工作pH：1~14(短时间，在位清洗)；2~12(长时间)化学稳定性：在以下溶液中稳定- 1mol/L NaOH；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；30%异丙醇；70%乙醇；30%SDS，30%乙腈；使用方法1.装柱（1）将所有的试剂和填料达到室温.配制初始缓冲液(平衡液)和缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需凝胶的量，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3:1比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液体（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意不要使用气泡。

打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

（5）打开蠕动泵，让缓冲液用使用时流速的1.33倍的流速流过，使柱床稳定。

用2-3倍柱体积的缓冲液平衡柱子。

2.平衡让平衡缓冲液以一定流速流过柱子，到流出液电导和pH不变。

平衡缓冲液一般是高盐浓度的缓冲液，如：Tris、PBS等。

3.上样（1）样品用平衡液配制，浑浊的样品要离心、过滤后上柱；（2）一般情况是让目标产品结合在柱子上，用平衡洗液洗去杂质，再选择一种洗脱液洗下目标产品。

（3）介质对样品组分吸附的程度取决于样品的带电性质、流动相的离子强度和pH值。

硼酸琼脂糖凝胶 FF使用说明

硼酸琼脂糖凝胶FF使用说明货号：CS-A08-01简介硼酸琼脂糖凝胶FF将硼酸类化合物偶联到交联及活化的琼脂糖凝胶上，该填料具有很高的化学稳定性。

硼酸能和1，2顺式二醇结合，所以硼酸琼脂糖凝胶可以用于糖类、核苷、核苷酸、核酸、肽及酶类的分离纯化，特别适合糖蛋白的分离纯化。

硼酸琼脂糖凝胶FF稳定性好，基团脱落少，使用寿命长，使用方便，应用广泛。

亲和填料特性：特点基团脱落少，结合特异性强基质4%的交联琼脂糖凝胶配基硼酸盐配基密度20μmol/ml吸附载量10mg亲和填料的颗粒大小45-165μm最大流速300cm/hpH范围3-10，在位清洗时pH范围可到2-13使用温度4℃~常温保存温度+4~8℃保存液体20%乙醇适用范围硼酸琼脂糖凝胶用于各种糖类、核苷、核苷酸、核酸、肽及酶类的分离纯化，特别适合糖蛋白的分离纯化。

亲和填料应用的注意事项：1、该凝胶从冷室或冰箱中取出后最好在室温下缓慢振摇恢复到室温，然后再装柱，以免产生气泡影响柱效。

2、吸附：pH8.5-10为避免离子交换的干扰，盐浓度10mM-500mM,缓冲液或者样品中不能有Tris及三乙醇胺类的物质，一些二价阳离子可以增加目标物质的吸附力。

一些非离子表面活性剂也可以加目标物质和填料的作用力。

3、洗脱：可以用pH4-6的缓冲液洗脱，也可以用1-100mM糖类竞争线性或阶段洗脱，例如用山梨醇、甘露醇等，其中Tris最有效4、上样样品必须与平衡柱子的缓冲液的pH、电导相同。

5、硼酸琼脂糖凝胶FF亲和填料的再生处理方法：先用0.1M Tris-HClpH5.0缓冲液洗3个柱床体积，然后用0.5M NaOH含2M NaCl流洗3个床体积,最后用20%乙醇洗3个床体积即可。

6、该亲和填料保存条件为20%乙醇，+4~8℃。

CM- 琼脂糖凝胶 FF使用说明

CM-琼脂糖凝胶FF使用说明货号：S8781规格：50ml保存：4℃~25℃，有效期5年。

一、简介CM-琼脂糖凝胶FF是将羧甲基键合在高流速琼脂糖凝胶上形成的一种弱阳离子交换介质。

广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

本品为白色球状凝胶,无嗅、无味、无肉眼可见杂质。

亲和填料特性项目指标离子交换基团-O-CH₂COO¯离子交换类型弱阳离子，可交换离子Na﹢基质6%交联琼脂糖蛋白质吸附容量60mg溶菌酶/ml介质总离子交换量0.09-0.13mmol/ml介质形状球形粒径45~165μm流速300~600cm/h；最大流速750cm/h工作温度4~40℃耐压0.3MPa耐热pH7水中120℃30minpH值稳定性2~14(短时间，在位清洗) 4~13(长时间)pH工作范围6~10化学稳定性在以下液体中稳定:所有常用的水相缓冲液；1mol/L氢氧化钠；8mol/L尿素；6mol/L盐酸胍；70%乙醇*检测条件：层析柱10mm×300mm*柱床高15cm，25℃，流动相为0.1mol/LNaCl。

.三、适用范围本产品具有高化学稳定性、高流速、高载量、好的机械性能、可在位清洗、多次重复使用等特点，非特异性吸附低，回收率高，适用于工业规模生产，适用于在pH工作范围内可形成正离子的生物大分子的分离纯化，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的离子交换制备。

四、操作说明1装柱（1）让所有的材料和试剂达到室温。

配制初始缓冲液（平衡液）和洗脱缓冲液。

（2）根据柱子大小取所需量的凝胶，清洗掉20%乙醇，抽干，用初始缓冲液（按凝胶：缓冲液=3：1的比例）配成匀浆。

（3）将柱内及柱子底端用水或缓冲液润湿并保持一小段液位（液面略高于滤膜），务必使底端无气泡。

（4）用玻璃棒引导匀浆沿着柱内壁一次性倒入柱内，注意勿使产生气泡。

打开柱子出液口，使凝胶在柱内自由沉降，连结好柱子顶端柱头。

链酶亲和素

实用标准文案链霉亲和素商品化应用简介一、链霉亲和素性质streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，）是由链霉菌streptavidin，SA链霉亲和素（条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨4分子量为65kD。

链霉亲和素分子由链霉亲和素是一种稍而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；酸的含量较大，）的蛋白质，并且不带任何糖基。

偏酸性（pH6.0链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素）亦为个生物素分子，二者亲和常数（K分子也能结合4间断裂，和Ｃ端19-2112N端10～L10／mol。

在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在15链霉亲和素的活性单位也是以结形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。

18U。

生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达μ合1g二、亲和素和链霉亲和素的比较相同点14~18U：，SA生物素结合能力：、AV：13~15U1两个位点有110-111和懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70-2、活性中心依赖于色氨酸懒氨两个位点含有色氨酸-120-121-色氨酸懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和酸。

不同点：AV=66KD, SA=54KD分子量：、1精彩文档．实用标准文案带正电较多，非特异性结合较强。

等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV2、深，位阻效应较强，长臂生物素更适合。

SA的生物素结合位点较AV3、位阻效应：协同结合。

随机结合，SA4、生物素的结合：AV SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二硫键。

10%氨基酸序列：AV 含二硫键和糖，5、ELISA中的应用三、链霉亲和素在）可用于测定抗原，，ELISA酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标也可用于测定抗体。

在这种测定方法中有3可根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，记的抗原或抗体，③酶作用的底物。

链酶亲和素

链霉亲和素商品化应用简介一、链霉亲和素性质链霉亲和素（streptavidin，SA）是由链霉菌streptomyces avidinii分泌的一种蛋白质，分子量为65kD。

链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成，其氨基酸组成中，甘氨酸和丙氨酸的含量较大，而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基；链霉亲和素是一种稍偏酸性（pH6.0）的蛋白质，并且不带任何糖基。

链霉亲和素分子中每条肽链都能结合一个生物素，因此与亲和素一样，一个链霉亲和素分子也能结合4个生物素分子，二者亲和常数（K）亦为1015L／mol。

在蛋白水解酶作用下，链霉亲和素可在N端10～12和Ｃ端19-21间断裂，形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。

链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示，１mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

二、亲和素和链霉亲和素的比较相同点1、生物素结合能力：AV：13~15U，SA：14~18U2、活性中心依赖于色氨酸-懒氨酸：亲和素在氨基酸序列的70-70和110-111两个位点有色氨酸-懒氨酸，链霉亲和素在氨基酸序列的79-80和120-121两个位点含有色氨酸-懒氨酸。

不同点：1、分子量：AV=66KD, SA=54KD2、等电点：AV=10.5, SA=6.0, AV带正电较多，非特异性结合较强。

3、位阻效应：SA的生物素结合位点较AV深，位阻效应较强，长臂生物素更适合。

4、生物素的结合：AV随机结合，SA协同结合。

5、氨基酸序列：AV含二硫键和10%糖，SA含甘氨酸丙氨酸较多，无糖和二硫键。

三、链霉亲和素在ELISA中的应用酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）可用于测定抗原，也可用于测定抗体。

在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。

根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

链霉亲和素包被微孔板（黑板）说明书

链霉亲和素包被微孔板（⿊板）说明书链霉亲和素包被微孔板（⿊板）说明书产品编号产品名称规格ELS2236链霉亲和素包被微孔板（⿊板）96T保存条件：2-8℃避光⼲燥保存1.产品简介：本产品采⽤Frdbio⽣物共价包被技术，使链酶亲和素( Streptavidin，SA)⾼密度定向共价偶联到酶标板微孔内，排列均匀，稳定性⾼，不易脱落，这种板称为SA Bioconjugate微孔板。

此微孔板的Biotin最⼤结合量达到每孔6pmol，使⽤Biotin-IgG(Rabbit)的最低检测限低⾄0.5 ng。

本产品可⼴泛⽤于化学发光免疫分析、免疫沉淀及各类核酸、蛋⽩质杂交反应。

2.产品信息：1）灵敏度：0.5ng/well（Rabbit Biotin-IgG）2）包被体积：100uL3）Biotin最⼤结合量：5pmol/well4）保质期：短期内可2-8℃保存，长期使⽤请放置-20℃保存（2年左右）3.产品应⽤范围：1）化学发光免疫分析(chemiluminescence immunoassay,CLIA)：酶标板可特异性地结合Biotin标记蛋⽩（抗原、抗体），可⼴泛应⽤于夹⼼法、竟争法或间接法化学发光ELISA实验。

2）核酸杂交实验：酶标板可特异性地结合Biotin标记的核酸探针，可⼴泛应⽤于DNA、 RNA的杂交检测实验。

3）DNA-蛋⽩质相互作⽤研究实验：酶标板可特异性地结合Biotin标记的靶点DNA⽚段，可⽤于分析基因表达调控中蛋⽩因⼦的作⽤位点，或者DNA结合蛋⽩的研究。

4.操作步骤：（参考实施例）（说明书提供夹⼼法化学发光免疫分析的操作步骤，仅供参考。

建议使⽤前每孔加⼊200ul PBST缓冲液或体系中使⽤到的其他洗涤缓冲液清洗1-2遍）1）试剂准备(试剂需客户⾃备)(1)PBS-T：10 mM NaH2PO4，1 mM KH2PO4，137 mM NaCI， 3 mM KCI，0.05% Tween-20，pH7.4；(2)⽣物素标记的抗体(捕获抗体) ；(3)酶标记或其他信号分⼦标记的抗体(检测抗体)；(4)⽜⾎清⽩蛋⽩(BSA)。

蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明

蓝色琼脂糖凝胶6FF使用说明1.简介：蓝色琼脂糖凝胶6FF是一种高亲和力树脂，可用于从复杂混合物中富集蓝色亲和结合的蛋白质。

它基于琼脂糖凝胶的基础上改性而来，通过染色剂与蛋白质之间的非共价相互作用实现蛋白质的富集。

蓝色琼脂糖凝胶6FF的独特之处在于其特定的电荷和碱基结构，可以与蛋白质中的亚甲蓝酸、负荷硫酸氨基糖苷酸或负荷正聚乳酸等带负电的结构相结合。

2.成分和特性：-孔隙率：低孔隙率（通道直径为30到40纳米）-细胞尺寸：45微米至165微米（平均值为90微米）- 动态吸附容量：2-5mg蛋白质/mL凝胶-pH稳定范围：从2至14（长时间操作适宜pH范围为3至13）-化学稳定性：抗生素、有机溶剂和洗涤剂不会影响其性能3.使用前的处理：-悬浮剂混匀：使用前需充分摇匀瓶中的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂，确保悬浮剂均匀分布。

-预处理：将凝胶悬浮剂转移到离心管中，离心5分钟以除去胶粒。

然后将上清转移到新离心管中，以准备使用。

-储存条件：凝胶悬浮剂应存放在4°C下，并避免光照。

4.工作条件：-缓冲液：通常使用PBS（磷酸盐缓冲液）或TRIS缓冲液。

缓冲液pH应调整到蓝色琼脂糖凝胶6FF最佳工作范围内。

-调节离心速度：在操作过程中，应根据蓝色琼脂糖凝胶6FF的体积来调整离心机的转速。

通常，在使用小尺寸离心管时以1000×g离心，使用大尺寸离心管时以500×g离心。

-使用管柱：建议使用适量的硅胶管柱来提高分离纯度和减少非特异性结合。

5.操作步骤：-第一步：根据需要的操作规模，将合适的量的蓝色琼脂糖凝胶6FF悬浮剂移入离心管中。

-第二步：离心，以去除胶粒。

将上清转移到新离心管中。

-第三步：将上清与样品混合，允许接触20至30分钟。

在混匀期间，染色剂和蛋白质发生非共价相互作用。

-第四步：离心混合物并收集上清液。

收集到的上清液中富集有蓝色亲和力的蛋白质。

-第五步：如需要，再次重复步骤三和步骤四，以提高纯度。

过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明

过氧化物酶标记链霉亲和素使用说明HRP-Streptavidin货号：SE068规格：0.1ml/1ml保存：-20℃保存至少一年，避免反复冻融。

2-8℃可保存1个月。

产品说明：链霉亲和素(streptavidin)是与亲和素(avidin)有相似生物学特性的一种蛋白质，是streptomycesavidinii菌的分泌物，其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似，等电点 6.0，非特异性结合远比亲和素低。

链霉亲和素是四聚体蛋白，大小为66KDa。

一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合，两者之间的亲和力极为强烈，链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级，这一性质常用于分子生物学用途。

其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基，分子量为16450。

HRP标记链霉亲和素是采用进口链霉亲和素和高活性过氧化物酶HRP制成复合物，可以用于生物素(Biotin)标记的抗体、蛋白或其它生物素标记分子的检测。

具体用途包括Western、ELISA、免疫组化或免疫细胞化学等。

保存体系：0.01M PBS(pH7.4)﹑1%BSA﹑0.03%Proclin300﹑50%甘油。

浓度：链霉亲和素浓度为1mg/ml。

工作效价：ELISA法：1：500～5000组织化学：1：50～500免疫印迹：1：500～5000。

具体效价以产品标签为准，最佳使用条件需根据实际情况而定。

相关试剂：SP034兔IgG免疫球蛋白抗原SPA131羊抗小鼠IgG(纯化) SA134羊抗兔IgG(免疫血清) SF134羊抗兔IgG-FITCSE237兔抗猪IgG-HRPA1800抗体稀释液。

链霉亲和素磁珠使用说明

链霉亲和素磁珠使用说明货号：S7210规格：1mL（10mg/mL）保存：2-8℃产品内容：Beads Mag SA磁珠是采用定向固定技术将重组中性链霉亲和素共价偶联到形态规整、粒径均一的磁性微球上，形成单分子固定层，可用于生物素化核酸、抗体或其他生物素化配体和靶分子的分离和检测。

由于具有单层的链霉亲和素，绝大多数生物素结合位点在空间上不仅可以结合游离生物素，而且还可以结合生物素化的配体/靶标，具有快速液相反应动力学特性。

形状确定的特异性表面便于进行高效捕获、分离和下游操作，链霉亲和素单层可确保没有明显泄漏，而通过避免吸附过量的链霉亲和素，批次一致性和结果的可重复性得到了保证。

Beads Mag SA以聚合物为基材的实心微球，主要用于免疫检测、免疫沉淀、细胞分选等。

产品特性：产品名称Beads Mag SA基质Polymer粒径2μm浓度10mg/ml保存条件PBST(pH7.4,0.01%Tween-20)，2-8℃结合量1000pmol free biotin/mg of beads20μg biotinylated antibody/mg of beads400pmol biotinylated oligonucleotides/mg of beads注意事项：1.请勿离心、干燥或者冷冻磁珠，这些操作可能导致磁珠的聚集从而降低结合活性；2.从磁珠保存管中移取磁珠前应充分震荡重悬均匀，操作过程中应避免产生气泡；3.生物素标记好蛋白或核酸后，用脱盐柱去掉多余的游离生物素；4.尽量减少蛋白降解，包括制备细胞裂解液中包含的蛋白酶抑制剂；5.生物素化分子的大小会影响磁珠的载量，用户需要根据实验确定磁珠对特定生物素化分子的载量。

手动操作步骤：以下操作过程需要准备的试剂：注：用户可根据需要调整缓冲液的盐浓度及pH1.固定化核酸1.1将磁珠瓶置于漩涡振荡器上20s，振荡重悬磁珠，取100μl 磁珠到新的离心管中，置于缓冲液名称成分Buffer I（适用于结合生物素化核酸）10mM Tris-HCl（pH7.5），1mM EDTA，1M NaCl ，0.01%~0.1%Tween-20Buffer II （适用于结合生物素化抗体/蛋白）PBS，pH7.4，含0.05%Tween-20，可根据需要添加0.01%~0.1%BSA磁力架上，1min后移除上清液；注意：用户可根据生物素化分子的多少，参考磁珠的载量，计算需要取用的磁珠量，建议生物素化分子的加入量为磁珠载量的1~2倍，使磁珠饱和。

Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明

Ni-琼脂糖凝胶6FF使用说明货号：P2010规格：5mL/10mL（凝胶体积）保存：4°C保存，有效期至少一年。

产品说明：Ni NTA Beads6FF是以高度交联的6%琼脂糖凝胶为基质，配体与Ni NTA Beads相同，蛋白的载量可以大于40mg6×His-taggedprotein/ml介质；微球粒径为45–165μm。

Ni NTA Beads6FF除了可以耐受苛刻的试剂条件（多种还原剂、去污剂、高浓度变性剂等）外，因其耐压的基质，可以耐受最高0.3MPa的压力，更稳定，因此该产品更适合用于工业大规模蛋白的纯化，可以在相对较高的流速下，实现对目的蛋白的纯化。

Ni-琼脂糖凝胶6FF悬浮液为含20%乙醇的1×PBS，已螯合Ni2+。

操作方法：1、样品制备（1）细菌或酵母表达的蛋白1）挑取单菌落到LB培养基中，根据载体使用说明加入相应浓度的诱导剂诱导相应的时间。

2）表达结束后，将培养液转移到离心杯中，7,000rpm，离心15min收集菌体，然后加入1/10体积的Lysis Buffer和PMSF，PMSF在破碎前加入，最终浓度为1mM。

加入溶菌酶（工作浓度为0.2-0.4mg/ml，如果表达的宿主细胞内含pLysS或pLysE，可以不加溶菌酶），（同时也可加入其他蛋白酶抑制剂，但不能影响目的蛋白与树脂的结合）。

3）将菌体沉淀悬浮起来，（如果菌液浓度高，也可考虑加入10μg/ml RNase A和5μg/ml DNase I），混匀，放置于冰上，然后冰上超声破碎细胞，至菌液基本保持澄清。

4）将澄清的破碎液转移至离心管中，10,000rpm下，4度离心20-30分钟。

取上清，置于冰上备用或-20℃保存。

（2）酵母、昆虫和哺乳细胞分泌表达可溶性蛋白1）将细胞培养液转移至离心杯，5000rpm下，离心10min，收集菌体得上清，如上清中不含EDTA、组氨酸和还原剂等物质，即可直接加入柱子使用；如含有EDTA、组氨酸和还原剂等物质，需用1×PBS4℃下透析才能加入柱子。

链霉菌基因实验操作

LALB中加入终浓度为1.5-2%的琼脂粉(不同的琼脂加的量不同，如青岛琼脂大概需1.5%，而华美的需要2%)。

＊做蓝白斑筛选时不加葡萄糖基本培养基（MM）溶液：L-天冬酰胺0.5g，K2HPO4 0.5g,MgSO4·7H2O 0.2g,FeSO4·7H2O 0.01g,蒸馏水至1000ml将每250ml溶液分装到装有2.5g琼脂的500ml三角瓶中，灭菌，使用时每瓶加入50％葡萄糖（8磅灭菌）5ml，调pH7.0。

配置MM的琼脂有lab agar、Ice agar(IA)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用蔗糖103gK2SO4 0.25gMgCl2·6H2O 10.12g葡萄糖10gDifco酪蛋白氨基酸0.1g微量元素溶液2mlOxoid酵母提取物5gTES 5.73g加蒸馏水至1000ml称取5.5g Difco琼脂放入500ml三角瓶中，倒入250ml上述溶液，然后塞上塞子后8磅灭菌（114度15分种）。

使用时，将培养基融化，每瓶中加入：KH2PO4(0.5%) 2.5mlCaCl2·2H2O(5M) 1mlL-脯氨酸(20%) 3.75mlNaOH(1M)调pH至7.3对营养缺陷型菌株加入适当的营养因子（请参考《手册》）YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌）Oxoid酵母提取物3gOxoid蛋白胨Tryptone 5g麦芽提取物（BD公司原Difco公司218630）3g葡萄糖10g蔗糖＊340g蒸馏水至1000ml高压灭菌后加入：（8磅灭菌，113－114゜C，15min，自动灭菌锅一次不能灭过多东西，否则会灭不彻底。

）MgCl2·6H2O(2.5M) 2ml/L制备原生质体时，还要加入：甘氨酸（20%）＊25ml/L＊蔗糖的主要作用是维持链霉菌生长时的渗透压。

＊甘氨酸被认为能干扰链霉菌细胞壁的形成，使菌丝体片段更短，利于溶菌，有利于外源DNA的导入。

链霉亲和素磁珠使用说明

链霉亲和素磁珠，亲水性链霉亲和素磁珠概述链霉亲和素磁珠由 1 μm 超顺磁微粒与高纯度链霉亲和素共价结合而成。

磁珠可用于捕获生物素标记的底物，包括生物素标记的抗原、抗体和核酸（1，2）。

由于生物素-链霉亲和素的相互作用很强，其结合常值（Ka）为1015 M-1，并且链霉亲和素的非特异性结合率很低，使得被捕获的底物可满足后续实验要求，包括mRNA 的分离和一抗、二抗的获得（3，4）。

亲水性链霉素亲和磁珠由 2 μm 超顺磁颗粒与高纯度链霉亲和素共价结合形成。

由于这种磁珠有50－60％的磁性成分，因而使得它非常适用于自动化高通量实验操作。

它们也可用来捕捉生物素标记的底物，比如像抗原、抗体和核酸（1，2）。

对蛋白质和核酸的非特异结合非常低。

支持基质1 μm 无孔超顺磁微粒（#S1420）或2 μm 无孔超顺磁微粒（#S1241）。

结合能力1 mg S1420 可结合1000 pmol 以上的游离生物素，或500 pmol 以上的生物素标记的20 bp 单链寡核苷酸。

1 mg S1421 可结合800 pmol 以上的游离生物素，或400 pmol 以上的生物素标记的20 bp单链寡核苷酸。

磁珠以下列形式提供：4 mg/ml 磁珠悬浮在磷酸缓冲液（pH 7.4），0.1% BSA 和0.02%NaN3 组成的体系中。

参考文献(1) Chung, S. et al. (2005) J. Biol. Chem ., 280, 4578.(2) Tang, B. et al. (2003) Genome , 46, 833–840.(3) Zhang, X. et al. (2006) J. Clin. Invest ., 116, 3050–3059.(4) Fernandez-Cabezudo, M.J. et al. (2004) Internat.Immunol ., 16,1215–1223.。

链霉亲和素-R-藻红蛋白说明书

化学品安全技术说明书页 1/6根据 GB/T 16483-2008, GB/T 17519-2013发行日期 2019.12.20在 2019.11.08 审核(在 2 页继续)化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 1 页继续)化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 2 页继续)· 混合危险性等安全储存条件· 储存:· 储存库和容器须要达到的要求:没有特别的要求.· 有关使用一个普通的储存设施来储存的资料:不需要.· 有关储存条件的更多资料:没有.· 具体的最终用户无相关详细资料。

化学品中文(英文)名称, 化学品俗名或商品名：链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，0.25 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，1 mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，10mg; 链霉亲和素-R-藻红蛋白 (版本 7)，50 mg(在 3 页继续)· 爆炸的危险性:该产品并没有爆炸的危险· 爆炸极限:较低:未决定.较高:未决定.· 蒸气压在 20 °C:23 hPa· 密度:未决定的· 相対密度未决定.· 蒸气密度未决定.· 蒸发速率未决定.· 溶解性水:不能拌和的或难以拌和· n-辛醇/水分配系数:未决定.· 黏性:动态在 20 °C:0.952 mPas运动学的:未决定.· 溶剂成份:水:98.8 %固体成份: 1.0 %· 其他信息无相关详细资料。

链霉菌操作手册讲解

链霉菌室实验操作手册（2003年）第一章培养基抗生素生长因子 (3)常用抗生素及其使用浓度 (3)LB（Luria-Bertani）培养基 (3)LA (3)基本培养基（MM） (3)R5（1L）链霉菌原生质体转化时用 (4)YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L（液体培养链霉菌） (4)TSBY （1L）（液体培养链霉菌） (4)MS培养基 (5)2CMY培养基（用于井岗的接合转移） (5)YMS培养基（阿维，井岗产孢） (5)YD培养基 (5)生长因子补充物的使用浓度 (6)第二章DNA基本操作 (7)大肠杆菌质粒的抽提 (7)酶连反应 (7)DNA片段凝胶回收 (8)DNA纯化 (9)E.coil总DNA的提取 (9)链霉菌质粒DNA的小量提取（还需改进） (10)去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara的CIAP使用说明） (10)AT克隆（详见说明书） (10)Southern Blot (11)第三章PCR及相关技术 (13)PCR (13)PCR重组（详见《PCR技术实验指南》p429 重叠延伸技术） (14)PCR定点诱变（DpnI法） (14)第四章基因片段转移技术 (15)大肠杆菌CaCl2法制备感受态细胞及DNA转化 (15)DNA转化 (15)大肠杆菌质粒的快速检测 (15)接合转移（详见英文《手册》249页） (16)链霉菌原生质体的制备 (16)链霉菌原生质体的转化 (17)PCR-Targeting技术中E.coli电转化感受态的制备及电转化 (17)第五章RNA操作技术 (19)链霉菌总RNA的抽提 (19)链霉菌的RT-PCR（promega RT kit） (19)第六章蛋白质基本操作技术 (21)SDS-PAGE，考马斯亮蓝染色 (21)大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG诱导的表达体系）： (21)链霉菌总蛋白抽提： (22)大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7表达系统如BL21菌株中的pET系列表达体系）： (22)Western Blot (23)第七章遗传作图相关技术 (25)链霉菌孢子悬液的制备 (25)链霉菌中NF的证明 (25)孢子杂交 (25)在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因 (25)第八章其他技术 (27)链霉菌菌种保藏 (27)检测链霉菌淀粉酶的活性 (27)第一章培养基抗生素生长因子常用抗生素及其使用浓度抗生素英文名称及缩写抗性基因贮藏液浓度(mg/ml)使用终浓度（μg/ml）链霉菌大肠杆菌M M2CM Y E M E L A或L B氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素Ampicillin, AmpChloramphenicol, CmlHygromycin, HygKanamycin, KmSpectinomycin, SpcStreptomycin, StrThiostrepton, ThioErythomycin, EryApramycin, Amblacathygaac或aphaadAstrtsrerm Eaac(3)IV10025(无水乙醇配)5025505025(DMSO配)10050R10102?5010510010R－2550502510－50R－－－50－2.5－5050-1002550505025不敏感2030-50*–表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制*此表仅供参考！！！*R表示不敏感*Km 和Am有交叉抗性，所以同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并作好对照。

琼脂糖凝胶电泳的操作步骤

琼脂糖凝胶电泳的操作步骤琼脂糖凝胶电泳的操作步骤如下:1. 制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml):称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中,加入70 ml(50ml)1×TAE,瓶口倒扣小烧杯.微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化,摇匀,即成1.0%琼脂糖凝胶液.2. 胶板制备:取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净,晾干,放入制胶玻璃板.取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好,形成模子.将内槽置于水平位置,并在固定位置放好梳子.将冷却到65?左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上,使胶液缓慢展开,直到整个玻璃板表面形成均匀胶层.室温下静置直至凝胶完全凝固,垂直轻拔梳子,取下胶带,将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止 .3. 加样:在点样板或parafilm上混合DNA样品和上样缓冲液,上样缓冲液的最终稀释倍数应不小于1X.用10 ul微量移液器分别将样品加入胶板的样品小槽内,每加完一个样品,应更换一个加样头,以防污染,加样时勿碰坏样品孔周围的凝胶面.(注意:加样前要先记下加样的顺序).4. 电泳:加样后的凝胶板立即通电进行电泳,电压60-100V,样品由负极(黑色)向正极(红色)方向移动.电压升高,琼脂糖凝胶的有效分离范围降低.当溴酚蓝移动到距离胶板下沿约1cm处时,停止电泳.(5)电泳完毕后,取出凝胶,用含有0.5 ug/ml的溴化乙锭1×TAE溶液染色约20 min,再用清水漂洗10 min.(6)观察照相:在紫外灯下观察,DNA存在则显示出红色荧光条带,采用凝胶成像系统拍照保存实验原理闭合环状质粒、线性质粒和开环质粒DNA由于构形不同，在加溴化乙锭的琼脂糖凝胶电泳上呈现不同的迁移率，因而在紫外灯下观察，能区别闭合环状质粒DNA(cccDNA)、线性质粒DNA(L-DNA)和开环质粒DNA(ocDNA)。

实验材料和试剂(一)实验样品质粒pUC118(二)试剂1(l DNA/HindIII分子量标准2(溴酚蓝指示剂点样缓冲液0.2% 溴酚蓝50% 蔗糖3(1mg/ml溴化乙锭溶液4(电泳缓冲液(TAE)40 mmol/L Tris-乙酸1 mol/L EDTA(配制方法:24.2克Tris碱，5.71ml冰乙酸，10ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)，定容至5000ml)5(0.7% 琼脂糖凝胶(配制方法:称取琼脂糖0.35克，加入50ml TAE电泳缓冲液)(三)仪器微量移液器电泳仪水平电泳槽透射紫外观察仪实验步骤1(选择合适的水平式电泳槽，调节电泳槽平面至水平。