琼脂糖凝胶电泳原理 PPT
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实验六PCR产物的琼脂糖凝胶电泳检测PPT课件
实验目的
• 1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 • 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法
第1页/共12页
实验原理
琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子， 在沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径 的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分 辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效 应和分子筛效应。
第4页/共12页
2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例）
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分 子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从 负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌 入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的 荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。
感谢您的观看！
第12页/共12页
第2页/共12页
实验原理
（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在
电泳时向阳极移动。
第3页/共12页
（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决
于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环 DNA>线状DNA>开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子 质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可 以在琼脂糖凝胶电泳中分离。
第6页/共12页
实验步骤
琼脂糖凝胶的配制
1g琼脂糖
100mlTBE缓冲液
5µl GoldView
Hale Waihona Puke 冷却到60℃第7页/共12页
• 1.掌握琼脂糖凝胶电泳的原理 • 2.学会琼脂糖凝胶的制作和进行电泳的方法
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实验原理
琼脂糖是一种线性多糖聚合物，天然聚合长链状分子， 在沸水中溶解，45℃开始形成多孔性刚性滤孔，凝胶孔径 的大小取决于琼脂糖的浓度，浓度越高，孔隙越小，其分 辨能力就越强。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效 应和分子筛效应。
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2. DNA分子进行染色的原理（以溴化乙锭为例）
观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色。 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖凝胶中的DNA分 子。溴化乙锭在紫外光照射下能发射荧光，当DNA样品在琼脂糖凝胶中从 负极向正极泳动时，溴化乙锭从正极向负极移动，这样溴化乙锭分子就会嵌 入到DNA分子中的碱基对之间形成络合物，这种络合物在紫外光下发射的 荧光要比单纯的DNA分子要强的多，便于DNA的检测。
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实验原理
（1）电荷效应 DNA分子在PH值高于其等电点的溶液中带负电荷，在
电泳时向阳极移动。
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（2）分子筛效益 在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度主要取决
于分子筛效益，即DNA分子本身的大小和构象（共价闭环 DNA>线状DNA>开环DNA），而且其迁移速度与其相对分子 质量的对数值成反比，所以不用相对分子质量的DNA分子可 以在琼脂糖凝胶电泳中分离。
第6页/共12页
实验步骤
琼脂糖凝胶的配制
1g琼脂糖
100mlTBE缓冲液
5µl GoldView
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实验三琼脂糖凝胶电泳ppt课件
2、将溶解的琼脂糖（约50℃）倒入制胶模具中，直至厚度为4-6 mm，插 入适当的梳子，在室温下冷却凝固。
3、充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。将凝胶置入电 泳槽中，加0.5TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm。
（二）点样
用微量取液器（P20）吸取质粒DNA样品2 l于点样板小孔中，再加入8 l TE及1 l的载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉 入点样孔下部。同时点5 l MarkerⅢ作为分子量标准。
5、必须保证琼脂糖充分完全熔解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 6、电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，
一般用2-3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 7、为了节约成本，没有跑过DNA的凝胶部分可切下来重复利用，但反复
熔化会降低分辨效率，建议时向哪一极移动？ 2、什么是迁移率？影响迁移率的因素有哪些？什么是分辨率？
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？ 4、质粒DNA存在哪些构型？其迁移率有何差异？ 5、loading buffer成分是什么？各成分有何作用？
注意：如何判断单酶切是否完全？ 如何判断双酶切是否完全？
质粒DNA三种构型：环状超螺旋、开环和线性。 质粒电泳三条带：超螺旋、开环和复制中间体（即2个没有复制完全的质粒 连在了一起）。 同一种酶切后电泳谱带的规律：从高分子量到低分子量条带亮度逐渐减弱 由于DNA Marker与酶切产物所含成分不同，因此迁移率不一定相同！
不同波长的紫外光
短波紫外光：254nm 中波紫外光：302nm 长波紫外光：365nm
1、为什么分光光度计测定的浓度很高，但电泳检测浓度却很低？
GoldViewI GoldViewII
3、充分凝固后小心垂直向上拔出梳子，以保证点样孔完好。将凝胶置入电 泳槽中，加0.5TBE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶1-2 mm。
（二）点样
用微量取液器（P20）吸取质粒DNA样品2 l于点样板小孔中，再加入8 l TE及1 l的载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔，蓝色样品混合物将沉 入点样孔下部。同时点5 l MarkerⅢ作为分子量标准。
5、必须保证琼脂糖充分完全熔解，否则，会造成电泳图像模糊不清。 6、电泳槽中缓冲液使用次数过多，缓冲能力下降。特别是TAE缓冲液，
一般用2-3次就要更换，TBE缓冲液则可使用10次左右。 7、为了节约成本，没有跑过DNA的凝胶部分可切下来重复利用，但反复
熔化会降低分辨效率，建议时向哪一极移动？ 2、什么是迁移率？影响迁移率的因素有哪些？什么是分辨率？
分辨率与凝胶浓度的关系？ 3、DNA荧光染料的发光原理？ 4、质粒DNA存在哪些构型？其迁移率有何差异？ 5、loading buffer成分是什么？各成分有何作用？
注意：如何判断单酶切是否完全？ 如何判断双酶切是否完全？
质粒DNA三种构型：环状超螺旋、开环和线性。 质粒电泳三条带：超螺旋、开环和复制中间体（即2个没有复制完全的质粒 连在了一起）。 同一种酶切后电泳谱带的规律：从高分子量到低分子量条带亮度逐渐减弱 由于DNA Marker与酶切产物所含成分不同，因此迁移率不一定相同！
不同波长的紫外光
短波紫外光：254nm 中波紫外光：302nm 长波紫外光：365nm
1、为什么分光光度计测定的浓度很高，但电泳检测浓度却很低？
GoldViewI GoldViewII
质粒的酶切—琼脂糖凝胶电泳分离DNAppt课件
实验二 质粒的酶切、琼脂糖凝 胶电泳分离DNA
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论
实验目的
限制性内切酶切割出目的DNA
了解琼脂糖凝胶电泳的原理
掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法
实验原理
利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。
Tris 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝 铂纸包装保存。 4. 10×DN切体系
调制酶切体系如下: (共 20μL)
无菌水 6μL，
质粒
10 μL
Buffer K 2μL,
EcoR I 1μL,
BamH I 1 μL
37℃酶切1.5小时。
琼脂糖凝胶制备
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。 2. 插好挡板、梳子。 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶
的容器中（一般用三角瓶），然后加入40ml电 泳缓冲液（1×TAE）。 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解。 5. 溶液冷至约60℃时，加入溴化乙锭4 μL (终浓 度为0.1 g/l)，轻轻摇匀，倒入制胶槽上，检查 有无气泡。
纯度；DNA的甲基化程度；温度；缓冲液成分 （DDT，BSA）等。
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳孔中。
10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节 电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳 槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
1. 实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果及讨论
实验目的
限制性内切酶切割出目的DNA
了解琼脂糖凝胶电泳的原理
掌握琼脂糖凝胶的制作及进行电泳的方 法
实验原理
利用限制性内切酶具有特定的识别及切割位 点，定点切割环状质粒DNA。
Tris 242g 冰醋酸 57.1ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 100ml 3. 溴化乙锭溶液 10mg/ml水溶液，室温，棕色瓶或铝 铂纸包装保存。 4. 10×DN切体系
调制酶切体系如下: (共 20μL)
无菌水 6μL，
质粒
10 μL
Buffer K 2μL,
EcoR I 1μL,
BamH I 1 μL
37℃酶切1.5小时。
琼脂糖凝胶制备
1. 洗净电泳槽、制胶槽、梳子、挡板，晾干。 2. 插好挡板、梳子。 3. 根据实验所需称取0.4克琼脂糖，放入制胶
的容器中（一般用三角瓶），然后加入40ml电 泳缓冲液（1×TAE）。 4. 加热煮沸，使琼脂糖完全溶解。 5. 溶液冷至约60℃时，加入溴化乙锭4 μL (终浓 度为0.1 g/l)，轻轻摇匀，倒入制胶槽上，检查 有无气泡。
纯度；DNA的甲基化程度；温度；缓冲液成分 （DDT，BSA）等。
使用3 mg的DNA Marker DL 2,000（500 ng/条带）进行1% 的琼脂糖凝胶电泳后，各DNA条带自上至下分别为2kb，1Kb， 750bp，500bp，250bp，100bp。
9.用移液器吸起离心管中溶液，移入凝胶的梳孔中。
10.插上导线，打开电泳仪电源，按照需要调节 电压至120V，电泳开始，观察电流情况或电泳 槽中负极的铂金丝是否有气泡出现。
琼脂糖凝胶电泳 ppt课件
• 有热可逆性
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
• 与PAGE相比，分子筛作用小， 区带少。
9
ppt课件
琼脂糖凝胶的配置
1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶 缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相 同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电 泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂 糖粉。
注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电 泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加 热。微波炉中加热时间不宜过长。
2) 分子大小相近的DNA带不 增加电泳时间，核准正确的凝胶
易分辨
浓度
DNA带缺失 3) DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链，以 20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大，常规凝胶电泳 在脉冲凝胶电泳上分析 不合适
31
注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水 分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。
6. 在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置 于电泳槽中进行电泳。
注意： 凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃ 下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。
11
ppt课件
琼脂糖凝胶缓冲液
电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后 在冰上冷却5分钟
不规则DNA带迁移 2) 电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃； 经常更换电泳缓冲液
• 机械强度差，易破碎，浓度 不能太低。
• 易被细菌污染，不易保存， 临用前配制。
• 琼脂糖支持层上的区带易于 扩散，电泳后必须立即固定 染色。
• 与PAGE相比，分子筛作用小， 区带少。
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ppt课件
琼脂糖凝胶的配置
1. 根据电泳需要，配置合适浓度的电泳及制胶 缓冲液。一般为 1× TAE或0.5×TBE。
注意：用于电泳的缓冲液和用于制胶的缓冲液必须是相 同的。
2. 根据制胶量及凝胶浓度，在加有一定量的电 泳缓冲液的三角锥瓶中，加入准确称量的琼脂 糖粉。
注意：总液体量不宜超过三角锥瓶的50%容量。
3. 在微波炉中加热溶解琼脂糖
注意：必须保证琼脂糖充分完全溶解，否则，会造成电 泳图像模糊不清。加热时如胶液剧烈沸腾发泡，停止加 热。微波炉中加热时间不宜过长。
2) 分子大小相近的DNA带不 增加电泳时间，核准正确的凝胶
易分辨
浓度
DNA带缺失 3) DNA 变性
电泳前请勿高温加热DNA链，以 20mM NaCl Buffer稀释DNA
4) DNA链巨大，常规凝胶电泳 在脉冲凝胶电泳上分析 不合适
31
注意：不要产生气泡，溶液温度太高(>60℃)，会使得水 分过分蒸发，改变凝胶离子浓度，影响电泳效果。
6. 在室温下使胶凝固（大约30 分钟），然后放置 于电泳槽中进行电泳。
注意： 凝胶不立即使用时，用保鲜膜将凝胶包好在4℃ 下保存，或者放在制胶的缓冲液中，一般可保存2～5 天。
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ppt课件
琼脂糖凝胶缓冲液
电泳前于65℃加热DNA 5分钟，然后 在冰上冷却5分钟
不规则DNA带迁移 2) 电泳条件不合适
电泳电压不超过20V/cm；温度＜30℃； 经常更换电泳缓冲液
DNA的琼脂糖凝胶电泳分析ppt课件
❖ 上样量不宜过多，会造成条带的相互挤压；
❖ 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘 效应 ，中间电场比较均匀 ；
❖ 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；
❖ 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电 ห้องสมุดไป่ตู้孔内 ；
❖ 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调 高电压。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
琼脂糖凝胶 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 浓度（％）
可分辨的线
10~ 7~ 6~ 4~ 3~
性DNA大小 60~5 20~1 0.8 0.7 0.4 0.2 0.1 范围（kb）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
❖ 2、 50×TAE电泳缓冲液：称取242gTris碱 （即三羟甲基氨基甲烷， Tris为弱碱，在室 温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理 论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到 9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一 般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得 该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响 ）， ，加H2O800ml，待 完全溶解后，加57.1ml冰乙酸， 100ml0.5mol/LEDAT（pH8.0），用H2O定 容至1000ml。临用前用H2O稀释成1×TAE 电泳缓冲液。
❖ 如果点样孔多余，将样点到中间，尽量避免边缘 效应 ，中间电场比较均匀 ；
❖ 做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致；
❖ 加样时不要太快，让其自然沉底，均匀分布在电 ห้องสมุดไป่ตู้孔内 ；
❖ 电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后，再调 高电压。
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
琼脂糖凝胶 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 浓度（％）
可分辨的线
10~ 7~ 6~ 4~ 3~
性DNA大小 60~5 20~1 0.8 0.7 0.4 0.2 0.1 范围（kb）
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
采用PP管及配件：根据给水设计图配 置好PP管及配 件，用 管件在 管材垂 直角切 断管材 ，边剪 边旋转 ，以保 证切口 面的圆 度，保 持熔接 部位干 净无污 物
❖ 2、 50×TAE电泳缓冲液：称取242gTris碱 （即三羟甲基氨基甲烷， Tris为弱碱，在室 温（25℃）下，它的pKa为8.1；根据缓冲理 论，Tris缓冲液的有效缓冲范围在pH7.0到 9.2之间。Tris碱的水溶液pH在10.5左右，一 般加入盐酸以调节pH值至所需值，即可获得 该pH值的缓冲液。但同时应注意温度对于 Tris的pKa的影响 ）， ，加H2O800ml，待 完全溶解后，加57.1ml冰乙酸， 100ml0.5mol/LEDAT（pH8.0），用H2O定 容至1000ml。临用前用H2O稀释成1×TAE 电泳缓冲液。
实验琼脂糖凝胶电泳的原理与方法 PPT
六、血浆脂蛋白琼脂糖凝胶电泳
按电泳法分:
按超速离心法分:
乳糜微粒(CM)
乳糜微粒CM ( < 0、96 )
-脂蛋白 (-位) 极低密度脂蛋白VLDL(0、961、006)
前-脂蛋白(2-位) 低密度脂蛋白LDL (1、0191、063) -脂蛋白 (1-位) 高密度脂蛋白HDL(1、0631、21)
进行印迹转移电泳时,要注意缓冲液得离子强度要低,pH要远 离pI,使蛋白质带有较多电荷,一般用稳定性较好得Tris-缓冲体 系。还要注意凝胶与支持膜之间不能有气泡。适当提高电压或 电流可以提高转移速度,但亦会增加热效应,故电压或电流不可过 高。
五、交变脉冲电场凝胶电泳
一般琼脂糖凝胶电泳只能分离小于20kb得DNA。 这就是因为在琼脂糖凝胶中,DNA分子得有效直径超 过凝胶孔径时,在电场作用下,迫使DNA变形挤过筛孔, 而沿着泳动方向伸直,因而分子大小对迁移率影响不 大。如此时改变电场方向,则DNA分子必须改变其构 象,沿新得泳动方向伸直,而转向时间与DNA分子大小 关系极为密切。
D-半乳糖
3,6-脱水-L-半乳糖
琼脂糖链依分子内与分子间氢键及其它力得作 用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束,构成大网孔型凝 胶。
冷却
松散,随机地,盘绕地琼脂糖链
双螺旋结构区域与线性链相链接
淬火
溶胶状态
初级胶
最终得凝胶结构
琼脂糖为电泳支持物进行平板电泳,其优点如下: (1)琼脂糖凝胶电泳操作简单,电泳速度快,样品不需事
按支持物得装置形式不同,区带电泳可为: ➢平板式电泳,支持物水平放置,就是最常用得 电泳方式; ➢垂直板式电泳,聚丙烯酰胺凝胶常做成垂直 板式电泳; ➢垂直柱式电泳,聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳即 属于此类; ➢连续液动电泳,首先应用于纸电泳,将滤纸垂 直竖立,两边各放一电极,溶液自顶端向下流, 与电泳方向垂直。
琼脂糖凝胶电泳试验课件
0.3 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 5~60 ( kb) 0.8~10 0.5~7 0.4~6 0.2~4 0.1~3 100~2000 ( bp) 80~500 60~400 40~200 25~150 6~100
PAG
3.5 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0
不同（空间） 不同（空间）类型核酸的凝胶电泳：
缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。 传统最常用的是TAE，但其缓冲能力很低，长时间电泳需要正、负电极贮液槽之间 进行缓冲液循环，并经常更新TAE。
缓冲液的离子强度 离子强度与样品泳动速度成反比，电泳的最适离子强度一般 离子强度 在0.02~0.2之间。在高速离子强度下（如误加10×电泳缓冲液），溶液导 电性极高并明显产热，可能引起凝胶熔解及DNA变性。 缓冲液的pH值影响DNA迁移率，溶液的pH值远离样品等电点时，样 值 品荷电量越多，泳动越快，核酸电泳液常用偏碱性或中性条件，使核酸带 负电荷，向正极泳动。 在进行电泳时，荧光染料EB可插入到碱基中，从而增加线状和开环 DNA的长度，使其刚性更强，并会使线状DNA的迁移率降15%，另外温 度和碱基堆积也会影响DNA的迁移率。
2）凝胶孔径大小 ）
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel， PAG）是核酸凝胶电 泳常使用的支持材料，通过两种支持介质的浓度变化调整所形成凝胶的 分子筛网孔大小，能分离不同分子量的核酸片段。
凝胶
琼脂糖
胶浓度（ ） 线状DNA分子的有效分 胶浓度（%） 线状 分子的有效分 离范围
三、实验原理
概言之：DNA分子带负电荷，在电场中受到电荷效应、分子筛效应向
正极移动过程中，因DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异， 对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比，电泳 时加溴化乙锭，其与DNA结合形成一种荧光络合物，在254~365nm紫外照射 下可产生桔红色的荧光，可用于检测DNA。（此法可观察到凝胶中2ng左右 的DNA）。琼脂糖可制成不同孔径的凝胶，分离DNA的范围广，约 200bp~50kb。
PAG
3.5 5.0 8.0 12.0 15.0 20.0
不同（空间） 不同（空间）类型核酸的凝胶电泳：
缓冲液的组成和离子强度直接影响迁移率。 传统最常用的是TAE，但其缓冲能力很低，长时间电泳需要正、负电极贮液槽之间 进行缓冲液循环，并经常更新TAE。
缓冲液的离子强度 离子强度与样品泳动速度成反比，电泳的最适离子强度一般 离子强度 在0.02~0.2之间。在高速离子强度下（如误加10×电泳缓冲液），溶液导 电性极高并明显产热，可能引起凝胶熔解及DNA变性。 缓冲液的pH值影响DNA迁移率，溶液的pH值远离样品等电点时，样 值 品荷电量越多，泳动越快，核酸电泳液常用偏碱性或中性条件，使核酸带 负电荷，向正极泳动。 在进行电泳时，荧光染料EB可插入到碱基中，从而增加线状和开环 DNA的长度，使其刚性更强，并会使线状DNA的迁移率降15%，另外温 度和碱基堆积也会影响DNA的迁移率。
2）凝胶孔径大小 ）
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel， PAG）是核酸凝胶电 泳常使用的支持材料，通过两种支持介质的浓度变化调整所形成凝胶的 分子筛网孔大小，能分离不同分子量的核酸片段。
凝胶
琼脂糖
胶浓度（ ） 线状DNA分子的有效分 胶浓度（%） 线状 分子的有效分 离范围
三、实验原理
概言之：DNA分子带负电荷，在电场中受到电荷效应、分子筛效应向
正极移动过程中，因DNA分子的大小及构象差别而呈现迁移位置上的差异， 对于线形DNA分子，其电场中的迁移率与其分子量的对数值成反比，电泳 时加溴化乙锭，其与DNA结合形成一种荧光络合物，在254~365nm紫外照射 下可产生桔红色的荧光，可用于检测DNA。（此法可观察到凝胶中2ng左右 的DNA）。琼脂糖可制成不同孔径的凝胶，分离DNA的范围广，约 200bp~50kb。
细胞凋亡的DNA琼脂糖凝胶电泳PPT课件
与细胞坏死区别
细胞坏死是被动的过程，通常由外界因素如物理、化学损伤引起 ，而细胞凋亡是主动过程，由基因调控。
细胞凋亡的过程
起始阶段
细胞受到凋亡信号刺激，开始进入凋亡过程。
执行阶段
细胞内部发生一系列生化反应，如DNA断裂、蛋白 质降解等。
降解阶段
细胞被分解成小碎片，即所谓的“死亡小体”，随后 被周围的巨噬细胞或邻近细胞吞噬。
物种鉴定
通过DNA琼脂糖凝胶电泳对物种进行鉴定，如 PCR-RFLP、DNA指纹分析等。
细胞凋亡研究
通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡相关的 DNA片段，如梯状带等。
03
细胞凋亡的DNA琼脂糖凝胶电泳检测
细胞凋亡DNA的提取
细胞凋亡过程中，DNA会经历一系列的降解过程， 形成凋亡小体。
提取凋亡细胞中的DNA，是进行琼脂糖凝胶电泳检测 的重要步骤。
凋亡机制探讨
02
结合实验结果，可以探讨细胞凋亡的机制，如内源性途径和外
源性途径等。
影响因素分析
03
分析实验过程中可能影响结果的因素，如温度、pH值、DNA提
取方法等。
实验结论与讨论
01
02
03
实验结论
根据实验结果，可以得出 关于细胞凋亡的结论，如 凋亡诱导剂或抗凋亡剂的 作用效果、凋亡机制等。
实验意义
细胞凋亡的意义
80%
维持内环境稳定
细胞凋亡有助于清除不再需要的 或异常的细胞，维持内环境的稳 定。
100%
发育和组织成熟
在胚胎发育和组织成熟过程中， 细胞凋亡有助于塑造和修剪多余 或异常的细胞。
80%
防御和免疫
细胞凋亡有助于清除被感染或发 生癌变的细胞，从而维持机体的 健康。
细胞坏死是被动的过程，通常由外界因素如物理、化学损伤引起 ，而细胞凋亡是主动过程，由基因调控。
细胞凋亡的过程
起始阶段
细胞受到凋亡信号刺激，开始进入凋亡过程。
执行阶段
细胞内部发生一系列生化反应，如DNA断裂、蛋白 质降解等。
降解阶段
细胞被分解成小碎片，即所谓的“死亡小体”，随后 被周围的巨噬细胞或邻近细胞吞噬。
物种鉴定
通过DNA琼脂糖凝胶电泳对物种进行鉴定，如 PCR-RFLP、DNA指纹分析等。
细胞凋亡研究
通过DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡相关的 DNA片段，如梯状带等。
03
细胞凋亡的DNA琼脂糖凝胶电泳检测
细胞凋亡DNA的提取
细胞凋亡过程中，DNA会经历一系列的降解过程， 形成凋亡小体。
提取凋亡细胞中的DNA，是进行琼脂糖凝胶电泳检测 的重要步骤。
凋亡机制探讨
02
结合实验结果，可以探讨细胞凋亡的机制，如内源性途径和外
源性途径等。
影响因素分析
03
分析实验过程中可能影响结果的因素，如温度、pH值、DNA提
取方法等。
实验结论与讨论
01
02
03
实验结论
根据实验结果，可以得出 关于细胞凋亡的结论，如 凋亡诱导剂或抗凋亡剂的 作用效果、凋亡机制等。
实验意义
细胞凋亡的意义
80%
维持内环境稳定
细胞凋亡有助于清除不再需要的 或异常的细胞，维持内环境的稳 定。
100%
发育和组织成熟
在胚胎发育和组织成熟过程中， 细胞凋亡有助于塑造和修剪多余 或异常的细胞。
80%
防御和免疫
细胞凋亡有助于清除被感染或发 生癌变的细胞，从而维持机体的 健康。
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
凝胶准备
胶床准备
铺胶
静置
胶床置于电泳槽中 加电泳缓冲液 拔梳子 上样
电泳 取出凝胶 拍照
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳结果分析
结果初步分析 数量分析：条带的宽度，
荧光的亮度。 质量分析：纯度
分子量
影响因素： DNA分子的大小：实验证明，DNA片段迁移距离与其 分子量的对数成反比； 琼脂糖的浓度：一定大小的DNA片段在不同浓度的琼 脂凝胶中，电泳迁移率不相同； DNA分子的构型：不同构型的DNA在琼脂糖凝胶中的 电泳速度差别较大
⑵可提取大分子DNA 利用琼脂糖凝胶制成凝胶块提取基因组DNA能够获得足够大 胶上进行的电泳检测。
3、琼脂糖在其他方面的应用 ⑴ 、琼脂糖在免疫扩散法中的应用。 ⑵ 琼脂糖在双链DNA探针的合成方法中的作用琼脂糖凝胶电泳ຫໍສະໝຸດ 果分析及其应用口腔1402
琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
琼脂糖凝胶电泳是常用的用于分离、鉴定DNA、 RNA分子混合物的方法，主要是应用琼脂糖凝胶 作为支持物的电泳法，借助琼脂糖凝胶的分子筛 作用，核酸片段因其分子量或者分子形状的不同， 电泳速度有差异而分离，利用DNA、RNA分子在 泳动时的电荷效应和分子筛效应，达到分离混合 物的目的。 与其他支持物电泳最主要区别是：它兼有“分子 筛”和“电泳”的双重作用。
大家有疑问的，可以询问和交流
可以互相讨论下，但要小声点
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琼脂糖凝胶电泳结果分析及其应用
1、DNA的制备. ⑴ 适合分离大片段DNA. 琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段,其分辨率虽比聚 丙烯酰胺凝胶低,但它制备容易,分离范围广,尤其适于分离大 片段DNA.普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb,利用 脉冲电泳,可分离高达10^7bp的DNA片段.