琼脂糖凝胶电泳技术
琼脂糖凝胶电泳制胶
琼脂糖凝胶电泳制胶方法
1，制备1%琼脂糖凝胶(大胶用70ml,小胶用50ml)：称取0.7 g(0.5 g)琼脂糖置于锥形瓶中，加入70 ml(50ml)1×TAE，瓶口倒扣小烧杯。
微波炉加热煮沸3次至琼脂糖全部融化，摇匀，即成1.0%琼脂糖凝胶液。
2，胶板制备：取电泳槽内的有机玻璃内槽(制胶槽)洗干净，晾干，放入制胶玻璃板。
取透明胶带将玻璃板与内槽两端边缘封好，形成模子。
将内槽置于水平位置，并在固定位置放好梳子，将冷却到65℃左右的琼脂糖凝胶液混匀小心地倒入内槽玻璃板上，使胶液缓慢展开，直到整个玻璃板表面形成均匀胶层。
3，室温下静置直至凝胶完全凝固，垂直轻拔梳子，取下胶带，将凝胶及内槽放入电泳槽中.添加1×TAE电泳缓冲液至没过胶板为止。
琼脂糖凝胶电泳-完整整理
基因组分析
分子诊断
用于分离和鉴定基因组DNA片段，如限制 性片段长度多态性分析、基因突变检测等 。
用于检测和鉴定基因突变、病原微生物DNA 等，如聚合酶链式反应（PCR）产物电泳、 单链构象多态性分析等。
基因克隆
测序
用于分离和纯化目的基模板，如末端测 序、全基因组测序等。
达差异。
04 琼脂糖凝胶电泳实验问题 与解决
常见问题
条带弥散
由于点样量过多或电压过高，导致条带弥散。
条带过宽
由于凝胶浓度不合适或样品浓度过高，导致 条带过宽。
条带拖尾
样品中蛋白质降解或核酸酶污染，导致条带 拖尾。
条带不亮
由于染料浓度过低或曝光时间过短，导致条 带不亮。
问题分析
条带弥散
可能是由于点样量过多或电压过高， 导致DNA在凝胶中扩散。
琼脂糖凝胶电泳-完 整整理
目录
CONTENTS
• 琼脂糖凝胶电泳介绍 • 琼脂糖凝胶电泳实验操作 • 琼脂糖凝胶电泳结果分析 • 琼脂糖凝胶电泳实验问题与解决 •凝胶电泳的定义
01
琼脂糖凝胶电泳是指在琼脂糖凝 胶中进行的电泳技术，主要用于 分离、鉴定和纯化DNA片段。
浓度比较
通过条带亮度，比较不同 样品中目标DNA片段的浓 度。
纯度评估
根据条带的亮度与背景噪 音的比例，评估DNA片段 的纯度。
结果应用
基因克隆
01
通过琼脂糖凝胶电泳检测目的基因是否被正确克隆到载体中。
突变分析
02
利用电泳结果判断是否存在基因突变或点突变。
基因表达分析
03
通过比较不同组织或细胞系中目的基因的表达水平，分析其表
01
条带分析
琼脂糖凝胶电泳的理论技术和应用
琼脂糖凝胶电泳的理论技术和应用1 引言琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）主要是应用琼脂糖凝胶作为支持物的电泳法，借助琼脂凝胶的分子筛作用，核酸片段因其分子量或者分子形状不同，电泳移动速度有差异而分离，这种技术时基因操作中常用的一种方法。
下面简单介绍琼脂糖凝胶电泳的理论技术及其应用。
2 琼脂糖凝胶电泳技术及其原理(1)电泳主要是指混悬于溶液中的样品电荷颗粒，在电场影响下向着与自身相反电荷的电极移动的现象，电泳技术是一种非常先进的检测手段，电泳技术与其它先进的技术相配合能够创造出非常之高的成果，这种技术能够使人们以最小的代价获得最大的利益。
电泳技术现在主要用于纯化以及分离DNA片段的一种最常用的技术。
原理：电泳是现在用于纯化以及分离DNA片段的最常用的技术，如果装备一块“胶”包含电解质的多孔支持介质，并把这些介质放置在静电场中，DNA分子将会随着向阳极移动，这主要是因为DNA分子沿着双螺旋骨架两侧带有含有电荷的磷酸根残基，当DNA的长度增加后，来自电场的驱动力以及凝胶的阻力之间的比率就会降低，并且不同长度的DNA片段就会出现不同的迁移率，所以就可以根据DNA分子大小使其分离。
这个过程可能是通过把分子量标准参照物或者是示踪燃料以及样品一起进行电泳检测分子量标准参照物也可以提供一个用于确定DNA片段大小的标准。
(2)琼脂糖凝胶电泳主要是采用琼脂糖作为支持介质的电泳方法，琼脂糖凝胶电泳技术的分析原理与其他支持物电泳的最主要的区别是它具有“电泳”和“分子筛”双重作用。
琼脂糖凝胶是一种网络结构，物质分子通过时会受到阻力，其中较大的分子物质在涌动时受到的阻力比较大，所以在凝胶中，带电颗粒的分离不仅与静电荷的性质以及数量有关，而且与废纸的大小有很大的关系，这就可以大大的提高了粪便能力，但是由于其孔径相差比较大，对于大多数蛋白质来说其分子筛效应很小，目前琼脂糖凝胶技术主要用于核酸的研究中。
琼脂糖凝胶电泳技术
一、 实验目的
1. 2. 3. 掌握电泳的基本原理 ; 熟悉琼脂糖凝胶电泳技术； 了解凝胶成像电泳图谱。
二、实验原理
琼脂糖是一种天然聚合长链状分子，可以形成具 有刚性的滤孔，凝胶孔径的大小决定于琼脂糖的 浓度。 DNA分子在碱性缓冲液中带负电荷，在外加电场 作用下向正极泳动。 DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，有电荷效应与 分子筛效应。不同DNA的分子量大小及构型不同， 电泳时的泳动率就不同，从而分出不同的区带。
M
1
234P源自R产物的 琼脂糖凝胶电泳三、实验材料、器具及药品
核酸
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，
微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，溴化乙锭（EB），6×加样缓冲液
四、实验步骤
1 制胶：
60ml(0.5×TBE)+0.72g琼脂糖 胶 三角瓶(1/3) 煮
溶解，冷却至60℃(不烫手)，
Thank you！
琼脂糖凝胶电泳
甘肃中医药大学
电泳技术
带电颗粒在电场作用下，向着与其电性 相反的电极移动，称为电泳 (electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电 场中移动速度不同而达到分离的技术称 为电泳技术。1809年俄国物理学家Peнce 首先发现了电泳现象，但直到1937 年瑞 典学者 A.W.K.蒂塞利乌斯设计制造了移 动界面电泳仪 ，分离了马血清白蛋白的3 种球蛋白，创建了电泳技术。 2
加EB，倒板(4-6mm)，室温下充分凝固，竖直拔 下梳子
2 点样： 3 电泳：电压3-5V/cm，约80-90V，注意
电极方向
4 观察：紫外透射分析仪下观察，时间不
要太久
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶浓度与DNA分子的有效分离范围
胶浓度（％） 0.3 0.6 0.7 0.9 1.2 1.5 2.0 线性DNA分子大小（kb） 5～60 1～20 0.8～10 0.5～7 0.4～6 0.2～4 0.1～3
二、仪器设备及材料
1、电泳装置：包括电泳槽（多采用水平方式）、 胶床和梳子三部分组成。 2、稳压电泳仪：电压可变范围0～300～600V， 电流可变范围0～250～500mA。 3、紫外线检测仪：可产生254、302、366nm 3个 波段紫外线，并配备防护眼镜和5mm厚的黑色 有机玻璃防护板。 4、照相机： 5、微波炉： 6、其它：三角烧瓶、量筒、胶带纸、一次性手套等。
3、铺胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的胶
床内，凝胶厚度3～5mm。 4、室温下静置1小时左右，凝胶固化。撕去胶床 两端的胶带纸，将带凝胶的胶床置于电泳槽中， 并使样品孔位于电场负极。 5、向电泳槽中加入0.5×TBE电泳缓冲液，以越 过凝胶表面1～2mm为宜。 6、轻轻拔出固定在凝胶中的梳子。 原梳齿处 (样品孔) 即被缓冲液充满，如发现 有气泡，应设法去除。 7、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积 1/6的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。
8、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝 胶的样品孔中。加样量一般10～30μl。
9、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。 开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。 电泳条件：电压1～5v/cm；时间1小时左右。 10、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。
11、电泳结果分析： ①紫外检测仪直接观察电源条带； ②摄影记录； ③凝胶成像分析系统处理。
溴化乙锭缺点：
EB是一种强诱变剂，并有中度毒性。 注意：①操作中务必带上防护用手套。 ②如不慎皮肤与溶液接触，应立即用清水彻底冲洗。 ③含溴化乙锭的溶液使用后应进行净化处理，使其 致诱变活性下降为原来的1/200左右，方可丢弃。
DNA的琼脂糖凝胶电泳DNA实验技术方法
DNA的琼脂糖凝胶电泳DNA实验技术方法琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis）是一种常用的分离和分析DNA分子的技术方法。
本文将对DNA的琼脂糖凝胶电泳实验技术方法进行详细介绍。
1.原理琼脂糖凝胶电泳是一种基于DNA分子大小的分离方法。
DNA分子在电场的作用下，由于带负电荷，会向阳极移动。
由于琼脂糖凝胶的孔径不同，不同大小的DNA分子会被琼脂糖凝胶所阻碍，大分子相对较慢，小分子相对较快地通过凝胶孔隙。
通过电泳，可以将不同大小的DNA分子分离开来，形成一条条带状。
2.实验步骤（1）制备琼脂糖凝胶：将适量的琼脂糖加入1×TAE缓冲液中，加热溶解，冷却至约60℃时加入适量的乙溴酸溶液，振荡均匀后倒入电泳槽中，插入梳子形成孔洞。
（2）样品制备：将待测DNA溶解在缓冲液中（常用缓冲液为1×TBE或1×TAE），加入适量的显色剂（如溴化乙锭），混合均匀。
（3）装料和电泳：将样品倒入琼脂糖凝胶的样品槽中，注意避免气泡的产生。
将电泳槽连接电源，接通电源，设定适当的电压（通常为100-150V）进行电泳。
（4）分析结果：电泳结束后，关闭电源，取出凝胶，放入紫外光透射仪中观察凝胶上的DNA带状条带，并进行照相或记录。
3.实验注意事项（1）凝胶制备：凝胶溶液要充分均匀，避免不均匀分布造成的电泳结果不准确。
（2）样品制备：样品在加入缓冲液中时要充分混匀，避免DNA在样品中的不均匀性造成的电泳结果不准确。
（3）电泳条件：电泳条件包括电压、时间、缓冲液等。
较高的电压可以加快电泳速度，但会产生较多的带展平现象。
合适的电压应根据实验需要调整。
（4）结果分析：在紫外光透射仪下观察DNA带状条带时，要小心操作，避免DNA样品受到过长时间的紫外线照射。
4.应用领域琼脂糖凝胶电泳广泛应用于分离和分析DNA分子。
常见的应用领域包括：DNA片段的分子量测定、PCR产物分析、DNA测序结果的验证、突变检测等。
deae琼脂糖凝胶 电泳
deae琼脂糖凝胶电泳
DEAE琼脂糖凝胶电泳是一种常用的离子交换层析技术，用于分离和纯化带有不同电荷的生物大分子（如蛋白质和核酸）。
下面是该技术的基本原理和步骤：
1. DEAE琼脂糖：DEAE（二乙氨乙基）琼脂糖是一种具有阳离子交换性质的树脂。
它可以与带有负电荷的生物大分子发生静电相互作用。
2. 样品加载：首先将待分离的样品加载到经过预处理的DEAE琼脂糖凝胶柱中。
样品中带有负电荷的生物大分子会被DEAE树脂吸附。
3. 洗脱：通过以逐渐增加浓度或pH值的缓冲溶液，洗脱在DEAE琼脂糖上吸附的目标生物大分子。
这样，不同带电性质的生物大分子就可以被分离开来。
4. 收集分馏：根据样品中目标生物大分子的特点和需求，收集分离出的纯化目标物。
DEAE琼脂糖凝胶电泳是一种常见且有效的离子交换技术，广泛应用于生物化学、分子生物学和生物医学研究中。
它可以实
现对生物大分子的分离和纯化，有助于深入了解生物分子的结构和功能。
琼脂糖凝胶电泳
琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳是一种凝胶电泳方法，用于生物化学、分子生物学、遗传学和临床化学，以分离琼脂糖基质中的大分子混合群，例如DNA、RNA 或蛋白质。
琼脂糖是从海藻中提取的天然线性聚合物，当在缓冲液中加热并冷却时，通过氢键形成凝胶基质。
它们是分离中、大型核酸最常用的介质，分离范围广。
琼脂糖凝胶电泳实验常用以DNA 切胶回收，DNA 分离和用于佐证DNA 是否重组、质粒等是否切开。
今天我们就来聊聊琼脂糖凝胶电泳实验的一些小技巧小细节。
第一步：胶液的制备称取0.4g 琼脂糖，置于200ml 锥形瓶中，加入50ml 0.5×TBE 稀释缓冲液，放入微波炉里加热，直到琼脂糖全部熔化，取出摇匀，此为0.8%琼脂糖凝胶液。
总液体量不宜超过锥瓶的50%容量。
否则会溢出来的。
毛博就吃过这个亏。
还要擦洗微波炉。
加热过程中要不时摇动，使附于瓶壁上的琼脂糖颗粒进入溶液。
加热时应盖上封口膜，以减少水份蒸发。
第二步：胶板的制备倒胶时的温度不可太低，否则凝固不均匀。
东一块西一块的。
果冻做出来就不好看啦。
速度也不可太快，否则容易出现气泡。
果冻做出来里面都是气泡。
怎么吃呀？待胶完全凝固后拨出梳子，注意不要损伤梳底部的凝胶。
第三步：加样注意上样时要小心操作，避免损坏凝胶或将样品槽底部凝胶刺穿。
果冻下面被戳个窟窿，还怎么吃呀？第四步：电泳加完样后，合上电泳槽盖，立即接通电源。
控制电压保持在60-80V，电流在40mA 以上。
当溴酚蓝条带移动到距凝胶前沿约2cm 时，停止电泳。
第五步：染色未加EB 的胶板在电泳完毕后移入0.5μg/ml 的EB 溶液中，室温下染色20-25 分钟。
第六步：观察和拍照在波长为254nm 的长波长紫外灯下观察染色后的或已加有EB的电泳胶板。
DNA 存在处显示出肉眼可辨的桔红色荧光条带。
紫光灯下观察时应戴上防护眼镜或有机玻璃面罩，以免损伤眼睛。
除这些细节之外，还有一些注意事项：1. 酶切时所加的DNA 溶液体积不能太大，否则DNA 溶液中其他成分会干扰酶反应。
琼脂糖凝胶电泳详解
一、简介琼脂糖凝胶电泳是以琼脂糖凝胶作为支持介质、利用核酸分子在电场中时的电荷效应和琼脂凝胶的分子筛效应，达到分离核酸混合物的一种电泳技术。
1、琼脂糖的分子筛效应1）琼脂糖（Agarose）来源于海洋红藻细胞壁，是一种大分子线性聚合物，基本结构是由D-半乳糖和3,6-anhydro-α-L-半乳糖通过β-1,4糖苷键结合而成的双糖单位在α-1,3糖苷键的连接下形成的一个长链。
琼脂糖具有亲水性，并几乎完全不存在带电基团，对敏感的大分子极少引起变性和吸附，是理想的惰性载体。
常用作电泳、层析等技术中的半固体支持物，用于生物大分子或小分子物质的分离和分析。
琼脂糖在水中一般加热到90℃以上溶解，温度下降到40℃左右形成良好的半固体状凝胶。
琼脂糖加热溶解后分子呈随机线团状分布，当温度降低时链间糖分子上的羟基通过氢键作用相连接，形成直径从50nm-200nm不等的孔径结构，孔径的大小由凝胶浓度控制。
琼脂糖凝胶中孔径的大小，影响了通过的核酸分子的大小以及通过的速度。
通常来说，琼脂糖凝胶的浓度越高，孔径越小，能够通过的核酸分子越小，迁移速度也越慢。
DNA片段越小，所需的胶浓度越大；而DNA 片段越长，所需的胶浓度则越小。
选择合适的胶浓度才能更好的分离片段。
2）琼脂的质量评价琼脂糖通常通过其凝胶强度和电内渗情况判断质量好坏。
强度越高，凝胶性能越好。
质量较好的琼脂糖强度通常在1200g/cm2以上，硫酸根含量在0.2%以下，电内渗在0.13以下。
琼脂糖是从琼脂中分离而来的。
琼脂由琼脂糖和琼脂果胶组成的，琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物，和琼脂糖结构相似，但带硫酸根和羧基组分，凝胶能力差。
在琼脂糖制备过程中需要把琼脂果胶尽量去除，否则琼脂糖有可能存在极微量硫酸根和丙酮酸取代电离基团，附着到琼脂糖的多糖基质上，造成电内渗（EEO）。
电内渗会导致缓冲液中产生正电荷反向离子，它们向负极移动，从而造成与DNA反方向迁移的液流，使DNA的分离效果变差。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳介绍DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物技术实验方法，用于分离DNA分子并确定其大小。
它基于DNA分子的电荷和大小不同，通过应用电场使DNA分子在琼脂糖凝胶中迁移，从而实现分离。
原理DNA琼脂糖凝胶电泳的基本原理是：DNA分子带负电荷，当置于电场中后，电场将使DNA分子向正电极移动。
然而，DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度取决于它的大小。
较长的DNA分子由于受阻力较大，迁移速度较慢，而较短的DNA分子迁移速度较快。
因此，琼脂糖凝胶电泳可以将DNA分子根据大小进行分离。
实验步骤1. 样品处理将待测DNA样品与凝胶电泳缓冲溶液混合，并加入负荷样品的染料来增加样品的重量和使其可见。
一般使用表现著名的溴化乙锭（Ethidium Bromide）来染色DNA分子。
2. 准备琼脂糖凝胶制备琼脂糖凝胶液，并根据实验需要将其倒入电泳槽中，并形成一个凝胶。
此过程需要使用琼脂糖凝胶制备缓冲液，一般为Tris–醋酸–EDTA缓冲液，简称TAE缓冲液。
3. 样品加载使用微量吸管或特殊的样品加载微孔将样品加载到琼脂糖凝胶上。
每个微孔能够承载一定量的样品，因此要根据样品的数量进行安排。
通常还会在凝胶上加载一个DNA分子大小标记（Marker）作为参考，以便确定未知样品的大小。
4. 电泳将凝胶放入电泳槽中，并将正负电极接入电源。
通过给定的电流和时间来进行电泳实验。
电流的选择取决于琼脂糖凝胶的密度和样品的大小范围。
5. 可视化和分析凝胶电泳完成后，通过紫外线照射或荧光成像系统来观察结果。
DNA分子在凝胶上能够与染料结合产生发光，从而可在琼脂糖凝胶上看到DNA分子的大小分布。
通过与已知DNA分子大小标记的对比，可以确定未知样品DNA分子的大小。
应用领域1. 分子生物学在分子生物学研究中，DNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的手段。
它可以用于检测DNA分子的大小、评估PCR反应的效果、验证基因敲除和插入等分子操作的成功性等。
琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法
琼脂糖凝胶电泳技术的原理和方法一、原理：琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和分析生物大分子的方法。
其原理是利用琼脂糖凝胶作为固定相，通过电场作用将待分离物质在凝胶中进行分离。
琼脂糖凝胶是一种具有多孔结构的凝胶介质，可以根据待分离物质的尺寸和电荷特性进行分离。
二、方法：1. 准备琼脂糖凝胶：首先，按照所需的凝胶浓度和体积配制琼脂糖溶液。
然后，在琼脂糖溶液中加入缓冲液，并搅拌均匀。
将混合液倒入凝胶板中，待其凝固后，准备好使用的琼脂糖凝胶。
2. 样品制备：将待分离的样品进行处理，如蛋白质样品可以经过蛋白质提取和纯化步骤，DNA样品可以进行酶切等处理。
3. 样品加载：将处理好的样品加载到琼脂糖凝胶中。
可以使用样品井或样品孔进行加载，确保每个样品均匀地加载到凝胶中。
4. 电泳条件设置：根据待分离物质的特性和需求，设置适当的电泳条件。
包括电场强度、电泳时间和缓冲液pH值等。
5. 电泳分离：将凝胶板放入电泳槽中，连接电源，进行电泳分离。
在电场的作用下，待分离物质会在凝胶中进行迁移，根据其尺寸和电荷特性进行分离。
6. 结果分析：电泳结束后，可以通过染色等方法观察凝胶板上的带状图案。
根据不同的染色方法，可以观察到不同的待分离物质，如蛋白质带、DNA带等。
三、应用：琼脂糖凝胶电泳技术在生物科学研究中具有广泛的应用。
其中，常见的应用有以下几个方面：1. 蛋白质分离与鉴定：可以通过琼脂糖凝胶电泳技术对蛋白质进行分离和鉴定。
蛋白质在电泳过程中根据其分子量的不同而分离成多个带状条带，通过染色或Western blotting等方法可以对目标蛋白质进行定性或定量分析。
2. DNA分析：琼脂糖凝胶电泳技术在DNA分析中也有重要应用。
可以通过电泳分离来检测DNA片段的长度和纯度，如测序片段、PCR产物等。
3. RNA分析：琼脂糖凝胶电泳技术也可以用于RNA的分析。
通过电泳分离可以检测RNA的大小、纯度和相对含量等。
4. 蛋白质-核酸相互作用研究：通过琼脂糖凝胶电泳技术，可以研究蛋白质与核酸之间的相互作用。
walter schaffner 琼脂糖凝胶电泳
Walter Schaffner是一位瑞士的生物学家，他是琼脂糖凝胶电泳技术的发明者之一。
琼脂糖凝胶电泳是一种重要的分离和分析生物大分子的方法，广泛应用于生物化学、分子生物学等领域。
本文将介绍琼脂糖凝胶电泳的原理、方法和应用，并从Walter Schaffner的贡献出发，探讨琼脂糖凝胶电泳在科学研究和生物工程中的重要意义。
一、琼脂糖凝胶电泳的原理1.电泳原理电泳是利用物质在电场中运动的性质进行分离和分析的方法。
当一个带电粒子在电场中运动时，其受到电场力的作用，从而产生电泳迁移。
在琼脂糖凝胶电泳中，琼脂糖凝胶起到了障碍物质迁移的作用，使得分子按照大小和电荷进行分离。
2.琼脂糖凝胶电泳原理琼脂糖凝胶是由聚合物构成的三维网状结构，其孔隙大小可以根据需要调节。
在电场作用下，负电荷的分子沿电场方向向阳极迁移，同时受到凝胶孔隙的阻碍。
大分子受到的阻碍力较大，迁移速度慢，而小分子受到的阻碍力较小，迁移速度快。
在琼脂糖凝胶中，分子根据大小和电荷的不同被分离开来。
二、琼脂糖凝胶电泳的方法及步骤1.制备凝胶首先需要将琼脂糖加入缓冲液中，制备成琼脂糖凝胶。
在制备过程中，需要根据需要调节凝胶的浓度和孔隙大小。
2.样品预处理将待分离的样品进行预处理，通常需要进行蛋白质的变性、还原和煮沸处理，使之具有负电荷，并且保持在凝胶中的形态。
3.装样将样品加载在琼脂糖凝胶的孔隙中，通常使用专门的样品装载器进行操作，确保样品均匀地加载在凝胶中。
4.电泳将装有样品的琼脂糖凝胶板放入电泳槽中，施加电场，进行电泳分离。
根据不同的需求，可以选择垂直电泳或水平电泳。
5.染色及成像电泳结束后，将凝胶进行染色处理，使分离的分子可见。
然后进行成像和分析。
三、琼脂糖凝胶电泳的应用1.在蛋白质分离和分析中的应用琼脂糖凝胶电泳在蛋白质分离和分析中有着广泛的应用。
可以用于蛋白质组学的研究，如分离和鉴定蛋白质混合物中的各种蛋白质，分析蛋白质的分子量和异构体，检测蛋白质的含量等。
dna琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳1. 简介DNA琼脂糖凝胶电泳（DNA agarose gel electrophoresis）是一种常用的分离和分析DNA片段的技术。
它利用琼脂糖凝胶作为分离介质，通过电场作用，将DNA片段按照大小进行分离。
这种技术广泛应用于基因测序、基因突变检测、DNA片段扩增等领域。
2. 原理DNA琼脂糖凝胶电泳的原理基于DNA的带负电荷特性和凝胶电泳的原理。
DNA分子是由带负电荷的核苷酸单元组成，当施加电场时，DNA会向阳极迁移。
琼脂糖凝胶是一种由聚糖组成的网状结构，可以形成孔隙，使得不同大小的DNA片段能够在凝胶中移动。
在琼脂糖凝胶中进行电泳时，首先需要制备琼脂糖凝胶。
通常使用琼脂糖粉末溶解在缓冲液中，并加热至溶解。
将溶解的琼脂糖倒入电泳槽中，并插入电泳槽两端的电极。
待琼脂糖凝固后，形成凝胶。
凝胶制备完成后，将待分析的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，并加热至退变。
退变是为了使DNA样品中的双链DNA转变为单链DNA，便于在电泳过程中进行分离。
将退变后的DNA样品加载到琼脂糖凝胶孔上，并施加电场。
在电泳过程中，由于琼脂糖凝胶的孔隙结构不同大小，不同大小的DNA片段会以不同速率迁移。
较小的DNA片段会迁移得更快，而较大的DNA片段则迁移较慢。
通过控制电场强度和时间，可以使得不同大小的DNA片段达到预期的分离效果。
3. 实验步骤3.1 准备工作•准备琼脂糖粉末和缓冲液。
•准备电泳槽、电极和样品孔模具。
•配置DNA加载缓冲液。
3.2 制备琼脂糖凝胶•将适量的琼脂糖粉末加入缓冲液中，并加热搅拌至完全溶解。
•将溶解的琼脂糖倒入电泳槽中，插入电极，待凝固。
3.3 退变DNA样品•将待分析的DNA样品与DNA加载缓冲液混合，并加热至退变温度（通常为95°C）。
•快速冷却样品至4°C。
3.4 装载样品•在琼脂糖凝胶孔上注射适量的退变后的DNA样品。
•加载DNA分子量标记物到一侧孔隙作为参考。
琼脂糖凝胶电泳
DNA琼脂糖凝胶电泳一、基本原理当把一个带净电荷(q)的颗粒放入电场，便有一个电场力(F)作用于其上。
F的大小取决于颗粒静电荷量及其所处的电场强度(E)，它们之间的关系可以表示成：F=E×q。
由于F的作用，使带电颗粒在电场中向一定方向泳动。
此颗粒在泳动的过程中还受到一个相反方向的摩擦力(f*v)阻挡。
当这两种力相等时，颗粒则以速度(v)向前泳动：v=F/f,其中f为摩擦系数。
根据Stoke公式，阻力大小取决于带电颗粒的大小、形状以及所处介质的粘度，即f=6πγη, γ为颗粒半径，η为介质粘度。
该公式指球形颗粒所受的阻力。
代入F＝E×q得到: v=E×q/6πγη.从这个公式可以看出，带电颗粒在电场中泳动的速度与电场强度和带电颗粒的净电荷量成正比，与颗粒半径和介质粘度成反比。
带电颗粒在电场中泳动的速度常用泳动度(m)或者迁移率以下列公式表示：m＝μ/E=d*l/V*td为带电颗粒泳动的距离(cm)，l为支持物的有效长度(cm)，t为通电时间(s)，V为加在支持物两端的电压。
在一定条件下，任何带电颗粒都具有自己特定的泳动度。
它是胶体颗粒的一个物理常数，可用其鉴定蛋白质、核酸等物质的纯度，还可以用其来研究蛋白质、核酸等物质的一些理化性质。
影响泳动度的因子有颗粒的性质、电场强度、溶液的性质等。
二、琼脂糖凝胶电泳通常情况下，核酸类物质的分离、鉴定是采用琼脂糖凝胶(做支持物)电泳法进行的。
用琼脂糖分离线性DNA时，其迁移率与该物质分子质量的关系密切，而与结构和碱基组成无关。
这也是采用凝胶电泳法测定核酸分子质量的依据所在。
此方法除了可以分离线性DNA外，还可以分离、分析细菌质粒的闭环DNA和开环DNA，以及分子质量不等的RNA片段。
一般实验室采用的琼脂糖凝胶的浓度为0.3%——2%。
不同的凝胶浓度，可以分离不同长度的DNA片段。
具体见表格：琼脂糖凝胶 /% m/V 分离线性DNA片段的范围 /kb0.3 50---600.6 1----200.7 0.8---100.9 0.5---7.01.2 0.4----6.01.5 0.3---3.02.0 0.1---2.0琼脂糖凝胶电泳常用的缓冲液：缓冲液pH1.50mmol/L Tris-NaH2PO4-1--5mmol/L EDTA 7.5---8.02.50mmol/L NaH2PO4- Na2HPO4-1--5mmol/L EDTA 7.5---8.03.50mmol/L Tris-乙酸-1--5mmol/L EDTA 7.5---8.04.50mmol/L 乙酸钠-乙酸-1--5mmol/L EDTA 7.5---8.033琼脂糖凝胶电泳常用的样品缓冲液(示踪染料)：0.25%溴酚蓝-0.25%二甲苯青FF-30%甘油水溶液，并且这两种指示剂在琼脂糖凝胶中的迁移率不同，可以指示一定片段长度的DNA迁移率(具体见下表)。
琼脂糖凝胶电泳原理
琼脂糖凝胶电泳原理介绍琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis）是一种常用于分离和检测DNA和RNA分子的分析技术。
它基于琼脂糖凝胶作为分离介质，并利用电场驱动目标分子在凝胶中迁移的原理。
原理琼脂糖凝胶电泳的原理基于核酸分子（如DNA和RNA）在电场中的运动。
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖以及缓冲液制成的凝胶状水溶胶。
琼脂糖分子能够形成多孔的网状结构，其中较大的孔洞能够限制大分子的迁移速度，从而使分子根据大小在凝胶中分离。
琼脂糖凝胶电泳的过程主要包括以下步骤：1.准备凝胶：将琼脂糖加入缓冲液中加热溶解，然后将溶液倒入凝胶模具中，让其凝胶化。
2.加载样品：将待分离的DNA或RNA分子与染料混合，然后将混合物加载到凝胶上的孔洞中。
3.电泳：将凝胶浸泡在缓冲液中，然后在两端连接电极，施加电场。
电场会使带电的核酸分子在凝胶中由负极向正极迁移。
较小的分子会迁移得更快，较大的分子则会移动得更慢。
4.可视化和分析：电泳完成后，用染料染色或利用荧光探针等方法可视化凝胶中的DNA或RNA分子。
根据分子移动的距离和大小可以进行分析和定量。
优势和应用琼脂糖凝胶电泳具有以下优势：•简单易行：操作相对简单，不需要复杂的仪器设备。
•成本低廉：相比其他分析技术，琼脂糖凝胶电泳的成本较低。
•分离范围广：可以分离不同大小的核酸分子，从几十到几百万碱基对的DNA或RNA分子均可分离。
•分辨率高：琼脂糖凝胶电泳可以较好地分离大小相近的分子，提供较高的分辨率。
琼脂糖凝胶电泳主要应用于以下领域：•DNA和RNA分析：用于分析和鉴定DNA或RNA的长度、纯度和含量。
•分子克隆：可以检测和筛选DNA克隆或重组蛋白。
•PCR产物分析：用于检测PCR反应产物的纯度和大小。
•突变检测：用于检测基因突变或SNP。
结论琼脂糖凝胶电泳是一种常用而有效的核酸分离和分析方法。
它基于琼脂糖凝胶作为分离介质，通过电场驱动核酸分子在凝胶中迁移，根据分子大小分离分子。
琼脂糖凝胶电泳检测技术
琼脂糖凝胶电泳检测技术1 原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。
其中，凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点，使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法。
与蛋白质分子类似，核酸分子也是两性解离分子。
在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个磷酸基团中只有第一个磷酸解离，整个分子带正电荷，在电场中向负极泳动；在pH 值为8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。
不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时，各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。
所以采用适应浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使不同分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离的目的。
⑴影响泳动的四大因素：①影响泳动的首要因素是电泳样品的物理性质：包括电荷多少、分子大小、颗粒形状和空间结构。
一般来说颗粒带电荷的密度愈大，泳动速率愈快；颗粒物理形状愈大，与支持物的摩擦力越大，泳动速率越小。
即泳动率与颗粒的分子大小、介质粘度成反比；与颗粒所带电荷成正比。
②支持物介质：DNA的凝胶电泳常使用两种支持材料：琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。
通过这两种介质的浓度变化调整所形成凝胶的分子筛网孔大小，分离不同分子量的核酸片断。
琼脂糖的孔径大，可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断；聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片断（5-50bp）的核酸。
③电场强度：电泳场两极间单位支持物长度的电压降即为电场强度或电压梯度。
电场强度愈大，带电颗粒的泳动率愈快，但凝胶的有效分离范围随电压的增大而减小。
在低电压时，线性DNA分子的泳动率与电压成正比。
一般凝胶电泳的电场强度不超过5V/cm。
④缓冲液离子强度：缓冲液是电泳场中的导体，它的种类、pH值、离子浓度直接影响电泳的效率。
Tris·Cl缓冲体系中，由于Cl-的泳动速度比样品分子快得多，易引起带型不均一现象，所以常用TAE、TBE、TPE三种缓冲体系。
琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白质分析中的应用
琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白质分析中的应用近年来，随着分子生物学技术的发展和进步，人们对蛋白质, DNA, RNA的研究越来越深入，其中一项重要技术就是琼脂糖凝胶电泳技术。
琼脂糖凝胶电泳是一种分离蛋白质的方法，可用于研究蛋白质质量、酸化作用、信号转导等方面的问题。
本文将详细讨论琼脂糖凝胶电泳在蛋白质分析中的应用。
一、琼脂糖凝胶电泳技术的原理琼脂糖凝胶电泳技术是一种基于分子大小原理的分离技术，在实验时用琼脂糖制成凝胶（也可以是聚丙烯酰胺凝胶、聚丙烯酰胺胶粒子等），其中含有分子量（重量）标准品，通常是蛋白质混合物。
在直流电场中，通过样品移动的速度和带电分子的大小而得到不同大小蛋白质的分离效果，从而进行蛋白质定量。
二、琼脂糖凝胶电泳技术的分类琼脂糖凝胶电泳技术根据不同的用途和实验要求，可以分为不同的分类方式，其中主要包括非变性凝胶电泳、变性凝胶电泳和二元凝胶电泳。
1.非变性凝胶电泳：这种方法是将粗萃取物中的蛋白样品直接加入凝胶中，通过电泳的方式进行分离，不涉及变性和还原。
这种方法可以分离出天然结构的蛋白质样品，并且得到的蛋白样品活性较高。
2.变性凝胶电泳：这种方法是将蛋白质样品加入变性样品缓冲液中，通过变性处理使蛋白质样品处于线性化状态，并用电泳方式进行分离。
此外, 也可以进一步用索氏染色对蛋白进行可见检测，不仅可以准确分离样品，还可以测定蛋白质的质量。
3.二元凝胶电泳：这种方法是结合了变性凝胶电泳和非变性凝胶电泳的特点，先进行非变性的凝胶分离，再对每个小凝胶进行变性处理。
这种方法分离出的蛋白样品较为全面，但相对于前两种方法，复杂性较高。
三、琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白质分析中的应用1.蛋白特征鉴定琼脂糖凝胶电泳技术用于蛋白质分析的一个主要应用是蛋白质特征鉴定。
通过分离出的不同大小的蛋白样品，可以确定蛋白质的分子量大小，并得到蛋白质的“指纹图谱”，从而进行蛋白鉴定和分类。
2.蛋白质纯度鉴定蛋白质纯度鉴定是指确定萃取物中含有的特定蛋白质达到一定纯净度的程度。
了解琼脂糖凝胶电泳的不同类型与特点
了解琼脂糖凝胶电泳的不同类型与特点琼脂糖凝胶电泳是一种常用的分离和检测生物大分子（如蛋白质和核酸）的技术。
它基于琼脂糖在适当的缓冲溶液中形成凝胶的特性，通过电场作用使待测大分子在凝胶中进行迁移分离的过程。
琼脂糖凝胶电泳可以分为几种不同类型，每一种都有其特点和应用领域。
一、水平琼脂糖凝胶电泳水平琼脂糖凝胶电泳是最早应用于大分子分离的技术之一。
它通过在平板的琼脂糖凝胶上进行电泳，使待测样品在水平方向上进行迁移。
由于凝胶厚度有限，水平琼脂糖凝胶电泳适用于分离较小的生物大分子。
其优点是操作简单，分离速度较快，但由于凝胶曲线存在较大的热效应，会导致样品的横向扩散，限制了其分辨率。
二、垂直琼脂糖凝胶电泳垂直琼脂糖凝胶电泳是目前最常用的琼脂糖凝胶电泳技术。
它通过将琼脂糖溶解在缓冲液中，并在垂直的平板上形成等浓度的凝胶。
待测样品经过凝胶进行迁移分离时，受到凝胶微孔的筛选作用，使分离结果更为准确。
垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离和鉴定大小较为接近的蛋白质和核酸。
此外，可以根据需要选择不同浓度的琼脂糖凝胶，以实现对分子大小范围的调控。
三、双向琼脂糖凝胶电泳双向琼脂糖凝胶电泳是在垂直琼脂糖凝胶电泳的基础上发展而来的一种技术。
它通过改变缓冲液的电场方向以及凝胶孔道大小，使待测样品在垂直方向上进行双向迁移分离。
双向琼脂糖凝胶电泳具有更高的分离能力和分辨率，在分离和鉴定蛋白质和核酸复杂混合物时表现出优势。
然而，双向琼脂糖凝胶电泳的操作相对复杂，需要更多的实验条件和设备支持。
综上所述，琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的生物大分子分离和检测技术，具有多种类型和特点可供选择。
水平琼脂糖凝胶电泳操作简单，分离速度较快，适用于较小的大分子；垂直琼脂糖凝胶电泳分辨率高，适用于分离更接近大小的生物大分子；双向琼脂糖凝胶电泳具有更高的分离能力和分辨率，适用于复杂样品的分析。
根据实验需求和目标，合适的琼脂糖凝胶电泳技术可以有效提高分离和鉴定的准确性和可靠性，为生物研究提供有力的支持。
琼脂糖凝胶电泳细胞学研究的不可或缺的技术
琼脂糖凝胶电泳细胞学研究的不可或缺的技术电泳技术是生物学、生物化学和分子生物学研究中不可或缺的工具之一。
其中，琼脂糖凝胶电泳作为一种常用的电泳技术，被广泛应用于细胞学研究领域。
本文将着重探讨琼脂糖凝胶电泳技术在细胞学研究中的重要性以及其在DNA分析、蛋白质分离等方面的应用。
一、琼脂糖凝胶电泳技术的概述琼脂糖凝胶电泳技术是利用琼脂糖制备的凝胶作为电泳介质，通过电场的作用将生物大分子分离的一种方法。
琼脂糖凝胶电泳技术具有操作简便、成本低廉等特点，因此在细胞学研究中得到了广泛应用。
琼脂糖凝胶电泳技术可用于DNA分析、RNA分析、蛋白质分离等多个方面的研究，在细胞学研究中发挥了重要的作用。
二、琼脂糖凝胶电泳技术在DNA分析中的应用1. DNA电泳的原理DNA电泳是指将DNA样品通过琼脂糖凝胶电泳技术进行分离和检测。
DNA在电场作用下会向电场的负极移动，移动的速度与其分子大小成反比。
通过测量DNA迁移的距离，可以对DNA分子的大小进行初步的估算。
2. DNA片段的分离通过琼脂糖凝胶电泳技术，可以将DNA样品中的不同大小的片段分离出来，从而对DNA的组成和结构进行分析。
根据琼脂糖凝胶的孔径大小，可以选择合适的琼脂糖浓度来实现所需分离效果。
3. DNA分子量的测定通过与已知分子量的DNA标准品进行对比，可以通过琼脂糖凝胶电泳技术对未知DNA样品的分子量进行估算。
三、琼脂糖凝胶电泳技术在蛋白质分离中的应用1. 蛋白质电泳的原理蛋白质凝胶电泳是利用琼脂糖凝胶电泳技术对复杂的蛋白质混合物进行分离和检测的一种方法。
蛋白质在电场作用下会向电场的负极移动，移动的速度与其分子大小、形状和电荷性质有关。
2. 蛋白质的分离通过调整琼脂糖凝胶的孔径大小和pH值，可以将蛋白质样品中的不同分子量或电荷性质的蛋白质分离出来，从而实现对蛋白质的纯化和分析。
3. 蛋白质的定量和鉴定通过与已知浓度的蛋白质标准品进行对比，可以通过琼脂糖凝胶电泳技术对未知蛋白质样品的浓度进行定量分析。
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电泳检测技术是指利用带电颗粒在电场中能向异性电极泳动这一现象来分离、纯化或分析检测供试品的一种生物化学技术。
原理：许多生物分子都带有电荷，在电场作用下可发生移动，由于混合物中各组分所带电荷性质、数量以及相对分子质量各不相同，使在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速率也各有差异，所以在一定时间内，它们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，包括电荷效应和分子筛效应。
琼脂糖是由天然的琼脂加工制得，是一种直链杂聚多糖，溶于热水，形成溶胶，冷却后成为孔径范围从50nm到大于200nm的大网孔径凝胶。
由于孔径较大，对一般蛋白质不起分子筛作用，该电泳技术是目前分离、分析DNA片段的标准方法。
DNA琼脂糖凝胶电泳的原理
DNA 分子是两性电解质，在高于其等电点的溶液（pH8.0~pH8.3 DNA分子本身的大小和构型、凝胶浓度决定了DNA分子的迁移速度。
）中，碱基几乎不解离，磷酸基团全部解离，DNA 分子带负电荷，在电场中向正极移动。
DNA分子大小对迁移速率的影响：相对分子质量大，迁移慢；相对分子质量小，迁移快。
DNA分子构型对迁移速率的影响：迁移速度：闭环﹥直链DNA﹥开环DNA。
琼脂糖凝胶浓度的影响：同样大小的线性DNA片段，在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速度不同，浓度越大，迁移的越慢
常用的电泳上样缓冲液含溴酚蓝，有的还含有二甲苯青，这些指示剂可以指示电泳的速度。
溴化乙淀（EB）是核酸的染色剂，能插入DNA分子中形成荧光结合物，EB在紫外线照射下的发射荧光。
荧光的强度与DNA的含量成正比，从而可以确定DNA片段在凝胶中的位置及估计出待测样品的浓度。
EB是强致癌剂。
电泳操作步骤(整个过程要求带一次性手套
1、胶槽准备
①将凝胶托盘放入制胶盒中;
②将加样梳垂直插入到制胶盒的小凹槽内，梳齿底端和凝胶托盘有1mm的间隙;
③将制胶盒放在调整好的水平台上。
2、凝胶准备用1×TAE配制1％琼脂糖凝胶。
①称0.15g琼脂糖置三角瓶中，加15ml 1×TAE;
②微波炉加热大约1分钟，熔化琼脂糖;
③熔化的琼脂糖自然冷却到60～70℃时，加入DNA染料，并轻轻混匀。
3、倒胶：将冷却致60℃的凝胶倒入准备好的制胶盒内，凝胶厚度3～5mm,室温下静置半小时左右冷却，凝胶固化。
4、轻轻拔出固定在凝胶中的加样梳。
将带凝胶的凝胶托盘置于电泳槽中，并使样品孔位于电场负极，向电泳槽中加入1×TAE电泳缓冲液，越过凝胶表面即可,出去样品孔的气泡。
6、样品准备：向核酸样品中加入约为样品体积1/10的上样缓冲液，用加样器轻轻混匀。
7、上样：用加样器吸取样品，轻轻的加入到凝胶的样品孔中。
加样量一般5-7μl。
8、盖上电泳槽，接通电源，开始电泳。
开始电泳前，再次确认凝胶样品孔处于电场的负极。
电泳条件：5v/cm；时间20-30分钟左右
9、电泳结束后，切断电源，取出凝胶。
10、电泳结果分析：
①紫外检测仪直接观察电源条带
②摄影记录
有下列因素会影响DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率：
1、市售的琼脂糖的提纯等级。
提纯等级越高，电渗及静电相互作用越少，分离效果越好。
2、DNA的相对分子质量和空间结构。
3、琼脂糖浓度。
浓度越高，分离的DNA分子片段越小。
4、电场强度。
常用的5v/cm的分辨率不高。
在精确测定DNA分子大小时，应降低电压至1v/cm。
电压过高，电泳分离的线性范围越窄，同时也会由于电泳中产生的大量热量导致DNA片段的降解。
5、嵌入染料的存在。
EB嵌入到DNA碱基对间，会使线状双链DNA分子迁移率降低15%左右，而对其他构型DNA影响较小。
如果对实验结果的精度要求较高，可以在电泳后再染色，而不是把EB直接加入凝胶板中。
由于EB为致癌剂，操作时应戴手套，尽量减少台面污染。
6、电泳缓冲液。
电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果，建议经常更换电泳缓冲液。
RNA变性琼脂糖凝胶电泳
1、原理：
RNA和DNA是2种不同类型的核酸，但它们的结构和组成相似，琼脂糖凝胶电泳检测技术同样可以用于RNA的研究。
常用的RNA琼脂糖凝胶电泳有非变性电泳和变性电泳2种。
非变性电泳可以分离混合物中不同相对分子质量的RNA分子，但是无法确定相对分子质量。
因为RNA 是单链分子，局部区域会形成二级结构，在电场中泳动的距离不能反映RNA分子本身的大小。
只有在变性情况下，RNA分子完全伸展成线性，才能根据Marker推算相应谱带RNA的相对分子质量。
2、注意事项：
①RNA的变性处理如果选择甲醛为变性剂，则需要在通风橱中进行相关操作。
如果选用乙二醛-DSMO（二甲亚砜）做变性剂，在电泳时则需要电泳缓冲液的再循环装置，用来避免形成过高H+梯度。
②不同的变性剂，电泳缓冲液和加样缓冲液通常也要相应配制。
③如果选用乙二醛-DSMO体系作为变性剂，在制胶时，不能直接把染料EB加入凝胶中，乙二醛与EB发生化学反应，会干扰实验进行。
要等电泳完毕后把胶浸入EB溶液染色30～40min后紫外灯下观察。
④实验室用的普通玻璃器皿和塑料制品经常有RNA酶污染，使用前必须于180℃干烤8h或更长时间（玻璃器皿）或用DEPC水溶液浸泡（塑料制品）。
任何一个环节造成了RNAase 污染都可能会使电泳结果呈现为无明显谱带或谱带散乱，失去实验价值。
核酸分离纯化的原则:
保持核酸一级结构的完整性
尽可能提高核酸制品的纯度
（一）选择原则
1.尽量清除其它分子的污染，保证核酸纯度
2.保持核酸的完整性
尽量简化分离纯化步骤，缩短提取时间
尽量避免各种有害因素对核酸的破坏
（二）技术路线的设计
1核酸的释放：化学法、机械法、物理法
2分离与纯化：应该清除的杂质主要包括:
1.非核酸的大分子污染物
蛋白质、多糖及脂类物质等
2.非需要的核酸分子
分离某一核酸分子时，其它核酸皆为杂质
3.加入的有机溶剂和某些金属离子
3浓缩、沉淀于洗涤：沉淀是浓缩核酸最常用的方法
常用的盐类: 醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵、氯化钠、氯化钾及氯化镁
常用的有机溶剂:乙醇、异丙醇和聚乙二醇
核酸沉淀常常含有少量共沉淀的盐，需用70%～75%乙醇洗涤去除
原理：加入高浓度醋酸钠（0.3M）后，钠离子可以均匀的分散到DNA的表面，屏蔽掉DNA 链上磷酸根上的负电荷，有利于DNA链的压缩。
否则，磷酸根相互排斥，DNA不容易聚集。
4晾干与溶解：晾干DNA，让乙醇充分挥发（不要过分干燥）；若长期储存建议使用TE缓冲液溶解。