液相色谱法测定香蕉中赤霉素残留

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赤霉素标准储备液: 准确称取适量(精确至 0.1 mg) 赤 霉 素 标 准 品(已 知 含 量 , 纯 度≥95%)于 10 mL 容 量 瓶 中, 以甲醇作为溶剂溶解并定容至刻度并存放于冰 箱(-18℃), 使用时依所需浓度准确吸取适量体积的 注入容量瓶中以甲醇定容, 配制工作液。 1.2 方法 1.2.1 提取
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香蕉样品中含有大量蛋白质和糖类成分, 其一 方面在液相色谱柱中不能很好的洗脱, 容易堵塞和 污染色谱柱, 使柱效降低, 影响色谱柱的寿命; 另 一方面, 蛋白质和糖类成分将影响组分的分离测
定, 对检测目标赤霉素形成干扰。 因此, 本实验选 用 C18 固 相 萃 取 柱 对 香 蕉 样 品 中 的 杂 质 进 行 去 除 , 并选择甲醇溶液作为洗脱液, 净化效果良好, 可很 好的去除杂质, 同时不影响赤霉素的测定效果, 回 收率满意。 2.2 样品测定条件的选择
摘 要 建立香蕉中赤霉素残留量的测定方法。 样品经甲醇提取, 使用石油醚进行脱色, 经 C18 固相 萃 取 小柱 净 化后, 使 用 高 效液 相 色 谱法(紫 外 检测 器)进 行测 定 。 方 法检 出 限 为 0.1 mg/kg, 在 0.50~10.0 mg/kg 添 加水 平 , 回收率为 86% ~105%, 相对标准偏差为 2.0%~4.8%。 关键词 高效液相色谱法 ; 赤霉素 ; 香蕉 分类号 S668.1
色谱柱: C18, 3.9 mm×150 mm; 紫 外检测器检 测波长: 254.0 nm; 流 动 相 : A 相 为 乙 腈 , B 相 为 0.05%磷酸水, 比例为 2∶8(V∶V); 柱温: 室温; 流量: 1.0 mL/min; 进样量 10 μL。
2 结果与分析 2.1 样品净化条件的选择
Abstracts A method for the determination of gibberellin residue in banana sample was established with high performance liquid chromatogram coupled ultraviolet detector (HPLC-UVD). Residues of gibberellin were extracted from sample with methanol. After been cleaned up, the final extract was injected into HPLC-UVD. The detection limit was 0.1 mg/kg, Precision and recovery tests were made at the spike level of 0.50~10.0 mg/kg, and the results were as follows: recoveries in the range of 86% ~105% , relative standard deviation 2.0%~4.8%. Keywords high performance liquid chromatogram ; gibberellin ; banana
Waters 公司; AB204/01 型电子分析天平(感量 0.1 mg) 和 PL2002/01 型电子顶载天平(感量 10 mg), 梅特勒- 托利多仪器(上海)有限公司; 超声萃取仪, 上海比 朗仪器有限公司。 1.1.2 试剂和材料
甲醇、 石油醚Ⅰ、 磷酸, 均为分析纯。 乙腈: 色谱纯。 超纯水, Milli-Q 净化系统 0.22 μm 过滤 膜过滤制备。
表 1 香蕉样品中添加赤霉素标准溶液的回收率 及 相 对 标 准 偏 差 (n=6)
添加浓度 /(mg·kg-1)
0.50 1.00 5.00 10.00
测定浓度 /(mg·kg-1)
0.43 1.05 4.75 9.82
回收率 相对标准偏差
/%
/%
86
4.1
105
3.6
95
2.0
98
4.8
2.5 方法的检出限 在实验条件下, 以 3 倍信噪比计算检出限, 当
析[J]. 现代农业科技, 2013, 34(7): 328-330, 335. [2] 郭 丹, 韩英群, 郝 义. 冷藏及货架期晚香蕉李品质
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分 别 称 取 香 蕉 空 白 样 品 ( 赤 霉 素 含 量 为 未 检 出 )6 - 65 -
2013 年 5 月
热带农业科学
第 33 卷第 5 期
份, 分别加入不同浓度的赤霉素标准溶液, 使用本方 法进行测定, 并计算加标回收率及相对标准偏差, 实 验结果见表 1。 从表 1 可以看出, 0.50~10.00 mg/kg 添 加 水 平 回 收 率 为 86%~105% , 相 对 标 准 偏 差 为 2.0%~4.8%, 方法的重复性较好。
赤霉素样品本身属于弱酸性, 在甲醇和水的流 动相进行分离时, 通常不能得到很好的峰形。 因 此 , 本实验中, 加 入 0.05%磷酸作为 离 子 抑 制 剂 , 使弱酸性的赤霉素以单纯的未解离形式存在, 既能 增大其在反相柱上的保留又能得到更完美的峰形。 同 时 , 赤 霉 素 在 弱 酸 性(pH 3~4)条 件 下 比 较 稳 定 , 这有利于得到更好的回收率。 本实验的谱图见图 1。 从图 1 可以看出, 赤霉素在实验条件下可以得 到良好的分离效果, 并具有良好的峰形, 其保留时 间为 7.244 min。
1 材料与方法 1.1 材料
① 收稿日期: 2013-04-26; 责任编辑/兰 莹; 编辑部 E-mail: rdnk@163.com。 ② 张学强(1961~), 男, 实验师, 主要从事食品中农药登记残留试验相关的工作。 ③ 通讯作者。
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张学强 等 液相色谱法测定香蕉中赤霉素残留
1.1.1 仪器和设备 Waters 高 效 液 相 色 谱 仪 (带 紫 外 检 测 器 ), 美 国
赤霉素是广泛存在的一类植物激素, 在高等植 物的各个生长发育阶段都具有重要的调控作用, 近 年来也被应用于香蕉的生长过程中, 并取得较好的 效果[6]。 关于赤霉素检测的报道较多, 主要使用分光 光度法测定、 高效液相色谱-紫外检测器/质谱法[7], 检测的样品包括黄瓜[8]、 小麦[9]、 猕猴桃[10]、 香蕉根 [11]等, 但是, 目前尚未有香蕉果实中赤霉素含量的 检测报道。 本文使用高效液相色谱法测定香蕉中赤 霉素的含量, 为香蕉质量安全提供一定的技术支撑。
赤霉素
5.00 6.00 7.00 8.00 9.00 10.00 图 1 液相色谱测定香蕉中赤霉素含量色谱图
说明: A 为赤霉素标准样品, B 为香蕉空白样品, C 为香蕉加标样品
2.3 线性范围 分别取一定量的赤霉素标准样品储备液, 配制
1、 5、 10、 20、 50 μg/mL 的 赤 霉 素 标 准 使 用 溶 液 , 使用本方法进行测定。 以赤霉素浓度 X(μg/mL)为 横坐标, 以相应的峰面积 Y 为纵坐标, 绘制标准曲 线 , 得 回 归 方 程 : Y=1.738 4×106X-3.446 2× 105, 相 关 系 数 R2=0.9991。 实 验 表 明 样 品 在 1~ 50 μg/mL 范围内具有良好的线性关系。 2.4 回收率及方法的精密度
称样量为 20.00 g, 定容体积为 2.00 mL, 进样量为 10 μL 时, 本方法的检出限为 0.1 mg/kg。
3 结论 本文利用高效液相色谱法(紫外检测器)测定香蕉
样品中的赤霉素残留量, 并对样品前处理条件及色 谱条件进行了优化。 结果表明, 本方法的线性关系、 回收率良好, 检出限较低, 具有定量准确、 快速的 特点, 可用于香蕉中赤霉素残留量的检测分析。
准确称取香蕉样品 20.0 g, 加入 80%的甲醇溶 液 40 mL 超声波震荡法提取 10 min, 于 5 000 r/min 的转速离心 5 min, 取上清液 10 mL, 加入 10 mL 石 油醚, 剧烈振荡脱色, 重复 3 次, 取甲醇相减压蒸 干后待净化。 1.2.2 净化
取 C18 固 相 萃 取 柱(SPE2PAK C18, 美 国 Waters 公 司), 分别用 5 mL 的水和 5 mL 甲醇溶液预淋洗, 用 1 mL 的 5%甲 醇 溶 解 样 品 后 加 入 , 用 10 mL 甲 醇 分 两 次 淋洗。 收集洗脱液, 减压蒸干, 用甲醇定容至 2 mL, 过膜(0.22 μm), 待色谱检测。 1.2.3 测定
Determination of Gibberellin Residue in Banana by High Performance Liquid Chromatography
ZHANG Xueqiang1) CHEN Xin2) HE Xiufeng1) (1 Analysis and Testing Center, CATAS, Haikou, Hainan 571101, China; 2 Environment and Plant Protection Institution, CATAS, Haikou, Hainan 571101, China)
2013 年 5 月 May. 2013
热带农业科学 CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE
第 33 卷第 5 期 Vol.33, No.5
液相色谱法测定香蕉中赤霉素残留①
张学强 1)② 陈 歆 2) 何秀芬 1)③ (1 中国热带农业科学院分析测试中心 海南海口 571101; 2 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 海南儋州 571737)
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香蕉是重要的热带水果, 目前已成为南亚热带 地区的最大宗水果, 产量仅次于苹果、 柑橘、 梨, 名列水果第 4 位[1], 其产品的质量与人们的食品安 全和广大蕉农的收入密切相关。 香蕉是典型的呼吸 跃变型水果之一。 在香蕉的生长过程中, 各种植物 激素对于香蕉果实保鲜、 调控香蕉成熟具有重要的 意 义 。 [2-3] 但 是 , 近 年 香 蕉 产 业 却 由 于 植 物 激 素 等 原因, 以及各种质量问题的谣言遭到巨大的损失, 如 2007 年 海 南 的 “ 蕉 癌 ” 事 件 、 2009 年 广 西 的 “卖蕉难” 问题[4-5]。 这其中一方面是由于部分谣言 的传播, 另一方面, 关于香蕉果实中植物激素的检 测也是迫在眉睫。
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