基因工程简答题word精品文档10页
基因工程试题及答案.doc
基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA 重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。
2.感受态细胞：受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA文库。
4.鸟枪法：指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组兑隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’)，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译。
6.包涵体：胞内高效表达时，工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子：是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。
用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5，端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵：即在连续发酵反应器中，细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定，前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
基因工程09生物技术参考
---------------精品文档---------------答案仅供参考一、名词解释：1、DNA 变性： DNA 份子由稳定的双螺旋结构松解为无规则线性结构的现象。
变性时维持双螺旋稳定性的氢键断裂，碱基间的堆积力遭到破坏，但不涉及到其一级结构的改变。
2、DNA 复性：变性DNA 在适当条件下,二条互补链全部或者部份恢复到天然双螺旋结构的现象,它是变性的一种逆转过程。
3、退火：指模板双链 DNA 经热变性，螺旋解开成单链后，通过缓慢冷却到55℃摆布，使引物(即具有互补碱基的 RNA 片段)与该模板 DNA 单链重新配对，形成新的双链份子的过程。
4、DNA 芯片：是指在固相支持物上原位合成寡核苷酸或者直接将大量的DNA探针以显微打印的方式有序地固化于支持物表面，然后与标记的样品杂交，通过对杂交信号的检测分析，即可获得样品的遗传信息。
由于常用计算机硅芯片作为固相支持物，所以称为 DNA 芯片。
仅供参考学习第 1 页---------------精品文档--------------- 5、基因诊断：又称 DNA 诊断或者份子诊断，通过份子生物学和份子遗传学的技术，直接检测出分子结构水平和表达水平是否异常，从而对疾病做出判断。
6、酶活性单位： 1 单位限制性内切酶(1 U)通常定义：在建议使用的 Buffer 及温度下，在 20ml (50ml)反应体系中反应 1 小时，使 1g 入DNA 彻底消化所需的酶量。
7、星活性：在非最适的反应条件下，酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种酶切特异性降低的现象，称为星活性。
8、平台效应：反应初期，靶序列 DNA 片段的增加呈指数形式，随着PCR 产物的逐渐积累，被扩增的 DNA 片段再也不呈指数增加，而进入线性增长期或者静止期，这种现象称为平台效应。
二、简答题1、影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？1)连接所用的目的片段的状态：¹效率：粘性末端>平端(100 倍)；¹ 5，突出>3，突出；¹平端： HaeIII>AluI>HinCII>SmaI2)连接温度仅供参考学习第 2 页¹连接效果最好在37 ℃，但形成的互补不稳定;¹最佳连接温度： 12-16 ℃，较好的连接效果，互补又较稳定;3)反应液中的成份：¹ ATP：反复冻熔， ATP 活性降低， ATP 溶解度不高，连接缓冲液宜分装；¹单价离子： 150-200mM NaCl，提高连接效果；¹ PEG：5%以下可以提高连接效率4)插入片段与载体的浓度比例¹载体 DNA 与外源 DNA 的份子摩尔比通常为 1 ﹕ 3 摆布，甚至 1 ﹕ 10 或者更高。
基因工程问答题
探针（probe）：核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。
16.Southern杂交：DNA片段经电泳分离后，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上，然后与探针杂交。
被检对象为DNA，探针为DNA或RNA。
17.Northern杂交：RNA片段经电泳后，从凝胶中转移到硝酸纤维素滤膜上或尼龙膜，然后用探针杂交。
被检对象为RNA,探针为DNA 或RNA。
18. Western杂交: Western杂交是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方20.基因文库：将所有的重组DNA分子都导入宿主细胞进行扩增，得到分子克隆的混合体，这样一个混合体称为基因文库。
21. cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA，然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA 文库。
36. 末端转移酶: 一种从小牛胸腺组织中分离得到的酶 可使dnTp添加剂加到DNA分子的3’—oH末端上 不要求模板 但需Co2+的存在基因克隆载体 通过不同途径能将外源DNA片段载入受体细胞 并在其中得以维持的DNA分子称为基因克隆载体或DNA克隆载体2.限制性核酸内切酶的活性受那些因素的影响？ 1样品的纯度 2 DNA样品的甲基化程度 5 酶的纯度 3 缓冲液性质 6 DNA分子的构型 4酶切反应的温度与时间 7 限制性核酸内切酶的星号活性说明使用切口位移法进行说明使用切口位移法进行DNA标记的原理及其步骤: 原理：在Mg2+存在时，用低浓度的DNA酶I（DNaseI）处理双链DNA，使之随机产生单链断裂，这时DNA聚合酶I的5′→3′外切酶活性盒聚合酶活性可以同时发生。
外切酶活性可以从断裂处的5′端除去一个核苷酸，而聚合酶则将一个单核苷酸添加到断裂处的3′端。
由于大肠杆菌DNA聚合酶I不能使断裂处的5′－P和3′—OH形成磷酸二酯键二连接，所以，随着反应的进行，即5′端核苷酸不断去除，而3′端核苷酸同时加入，导致断裂形成的切口沿着DNA链按合成的方向移动，这种现象就成为切口平移。
基因工程问答题整理
名解抗体：B细胞在抗原的刺激下分化为浆细胞，产生具有与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白，称为抗体。
Fab：用木瓜蛋白酶将IgG分子断裂的3个大小相似的片段中能与抗原结合的2个片段Fc：用木瓜蛋白酶将IgG分子断裂的3个大小相似的片段中不能与抗原结合的1个片段免疫球蛋白：具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白统称为免疫球蛋白。
超变区：重链和轻链的V区各有三个区域的氨基酸组成和排列顺序特别易变化，称为超变区可变区：重链和轻链靠近N端的约110个氨基酸的序列变化很大，称为可变区单克隆抗体：由一个克隆细胞产生、只作用于某一抗原决定基的均一抗体。
借助小鼠B细胞杂交瘤技术，所制备的高度均一（属同一类、亚类、型别）、单一特异性（仅针对特定抗定抗原表位）的抗体ADCC：抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用，表达Fc受体的细胞通过识别抗体的Fc段直接杀伤呗抗体包被的靶细胞。
调理作用：抗体，补体等调理素促进吞噬细胞吞噬细菌等颗粒性抗原的作用J链：一条由浆细胞合成的富含半胱氨酸的多肽链，可连接Ig单体形成的二聚体，五聚体或多聚体分泌片：分泌型IgA的一个辅助成分，由粘膜上皮合成，连接IgA二聚体上，使其成为分泌型，保护其铰链区免受蛋白水解酶作用，介导其转运到粘膜表面Ig功能区：Ig分子的每条肽链可折叠为几个功能不同，结构相似的球形功能区，或称结构域Ig折叠：由几股多肽链折叠形成的2个反向平行的β片层结构，2个片层结构中心的2个半胱氨酸残基由一个链内2硫键垂直连接，可稳定结构域，形成一个β桶状结构，这种折叠方式称为免疫球蛋白折叠。
CDR：互补性决定区，即高变区（超变区）Ig：免疫球蛋白同种型：同一种属内所有个体共有的Ig抗原特异性标记同种异型：同一种属不同个体间Ig分子所具有的不同抗原特异性标志。
由若干散在分布的氨基酸序列差异导致。
独特型：每一个Ig分子在CDR区氨基酸序列所显示出的免疫性，是每一个Ig分子所特有的抗原特异性标志。
基因工程总结,再也不怕考试大题
基因工程简答题与相应知识点总结1.某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因并提出解决的方案? （6分）答：（1）导致星号活性因素：a较高的甘油浓度b酶与底物DNA比例过高（不同酶情况不同，通常为＞100v/micHo.g）c 低盐浓度（<25mM）d 高PH值（>PH8.0）e 存在有机溶剂（如DMSO 、乙醇、乙烯乙二醇、二甲基乙酰胺、二甲基甲酰胺、sulphalane等）f用其他二价离子代替Mg2+(Mn2+.Cu2+.Co2+.Zn2+等)（2）抑制星号活性的方法：a尽量用较少酶进行完全消化反应，这样可避免过度消化及过度的甘油浓度.b尽量避免有机溶剂（如制备DNA时二乙醇）污染c 将离子浓度提高到100—150mM（若酶活性不受离子浓度影响）d将反应缓冲液PH值降到7.0 e 二价离子用Mg2+。
2、为了绘制长为3.0kb的DNA的BamH I限制性片段的限制性图谱，分别用EcoR I、Hpa II、EcoR I+Hpa II消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴乙锭染色后观察DNA带型（见图）。
请根据这些结果绘制一个限制性图谱，要标明EcoR I和Hpa II识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离（kb）5'-0.9-E-0.5-H-1.2-E-0.4-3'。
答：见课件第一章。
3、目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？（10分）答：A.目的基因的表达方式分：细胞内表达或者分泌产物至细胞外，如果蛋白为分泌性，那么细胞内检测不到表达，或者表达很少；B.分子量大小，分子量大小决定了蛋白半衰期，因而检测需要延长；C.目的基因的抗体特异性不好则很难以检测表达；D.许多表达宿主自身有自己的蛋白酶，会将所需产物降解，也可能因为修饰系统不同，使得产物的活性不高或者没有；E.如果宿主菌与蛋白来源菌不同也有可能由于密码子使用偏好性不同导致不表达。
基因工程考核试题标准答案及评分细则.doc
《基因工程技术》题库第一章概论一、名词解释题基因，基因工程技术，内含子，外显子%1.简答题1.基因具有什么功能？2.基因工程技术的主要操作内容是什么？3.用图示筒要说明基因工程技术的技术路线。
4 .简述基因工程技术的巨大意义有我国在该领域取得的成就?5.生物制药专业的学生为什么要学习基因工程技术？第二章DNA重组一、名词解释题遗传密码，变性，复性，复制子，翻译与转录，基因突变与突变基因，表达二、简答题1.DNA的组成单位是什么？组成元素有哪些？组成成分是什么？2.基因突变的生物学效应是什么？3.D NA的复制与转录有何异同点？如何利用基因突变为制药服务？4 .简述生物物种的遗传稳定性和进化原理与DNA的性质与功能的关系第三章植物基因工程技术一、名词解释题转基因植物，植物细胞反应器，抗逆性，叶盘法二、简答题1.从用途出发，转基因植物FI前可以分为儿类？2.图示植物遗传转化基本过程3.简述农杆菌介导法生产转基因植物的注意事项。
4.植物基因工程技术研究应用在医药上的优势是什么？5.什么是抗虫转基因植物？第四章动物基因工程技术一、名词解释题动物乳腺生物反应器，转基因动物，显微注射法，胚胎干细胞1.简述转基因动物技术路线2.显微注射法制备转基因动物的主要过程及注意事项是什么？3.简述动物基因工程技术与医药领域的应用。
一、名词解释题细胞因子，基风工程技术抗体，基风工程技术疫苗，基因治疗二、简答题1.举例说明细胞因子的种类、功能及其临床应用2.简述基因工程技术抗体种类及结构特点3.举例说明基因工程技术激素类药物及其临床应用4.简述基因诊断和治疗的原理第六章基因工程技术工具酶一、名词解释题限制性内切酶，平末端与粘性末端，酶活性单位，回文序列二、简答题1.限制性内切酶的特点与使用注意事项有哪些？2.影响限制性内切酶反应的因素有哪些？3.简述限制性内切核酸酣在基|大I工程技术中的作用。
4.举例说明不同类型DNA片段是如何连接的。
《基因工程》各章内容及参考答案(42页).docx
复习题1 （包括分子生物学基础知识）（请各位同学将所有题目翻译成英文后再做!）一、解释下列名词1.Gene manipulation2.Promotor3.Cloning:4.Subcloning二、填空题：将下列各题空缺部分的答案填在后面的方框内，两者用“；”隔开。
1.基因操作（Gene manipulation）的核心部分是基因克隆（gene cloning）, gene cloning的基本要点有（），（）和（）。
2.（）是遗传物质的基木单位，也是作为遗传物质的核酸分子上的一段片段。
它可以是连续的，也可以是（）；可以是（），也可以是RNA；可以存在于染色体上，也可以（）3.基因操作并不是一个法律概念，除了包括基因克隆外，还包括基因的（）、（）、（）和（）等与基因研究相关的内容。
4.启动子（Promo（or）是指（）。
通常一个Gene是否表达，（）是关键的一步，是起决定作用的。
在转录过程屮，Promoter还是（）的结合位点。
5.原核生物的RNApolymerase主要由两部分组成：（）和（），其屮。
■因子并不参与RNA 的合成，它的作用主要是（）。
6.从（）到（）的这一段距离称为一个转录单位，或者一个转录产物，其屮可包括一个或者多个Gene。
7.转录终止子主要有两种，一种是（），另一种是（）。
8.重叠基因（Overlapping gene）是指（）,间隔基因（Interrupted gene）是指（）三、选择题：从备选答案中选出正确的结果，正确答案是唯一的。
四、简答题：1.简述基因克隆的两个基本特征？参考答案：基因克隆的两个基本特征是一是强调外源核酸分子（一般情况下都是DNA）在不同宿主屮的繁殖，打破自然种的界限将来自于不相关物种的基因放入一个宿主中是基因操作的一个重要特征，基因操作的另一个重要特征是繁殖。
2.什么是gene cloning ?什么是亚克隆（subcloning） ?参考答案：基因克降：一定程度上等同于基因的分离，即从复杂的生物体基因组中，经过酶切，消化等步骤，分离带有目的基因的DNA片段。
基因工程简答题总结
基因工程原理复习题思考题5、简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
分完全同裂酶和不完全同裂酶（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。
）6、连接酶主要有哪些类型？有何异同点？影响连接酶连接效果的因素主要有哪些？类型：DNA连接酶和RNA连接酶异同点：相同点：都能以DNA为模板，从5'向3'进行核苷酸或脱氧核苷酸的聚合反应。
不同点：DNA聚合酶识别脱氧核糖核苷酸，在DNA复制中起作用；而RNA聚合酶聚合的是核糖核苷酸，在转录中起作用。
7、试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
（传说中的网上答案）1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。
这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感5、尽可能缩小连接反应的体积6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好8、基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？1）大肠杆菌DNA聚合酶2）Klenow fragment3）T7 DNA聚合酶4）T4 DNA聚合酶5）修饰过的T7 DNA聚合酶6）逆转录酶7）Taq DNA聚合酶第四章基因克隆的载体系统1、作为基因工程载体，其应具备哪些条件？具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；具有合适的筛选标记；具有较高的外源DNA的载装能力；具有多克隆位点（MCS）；具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。
3、载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？基因工程中常用的载体(vector)主要包括质粒(plasmid)、噬菌体(phage)和病毒(virus)三大类。
这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。
基因工程复习(含答案)
基因工程复习题一、名词解释: （10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交: 将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上, 然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术, 该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。
粘性末端: 双链DNA被限制性内切酶切割后, 形成得两条链错开几个碱基, 而不就是平齐得末端。
Northern印迹杂交: 将RNA进行变性电泳后, 再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术, 可用于检测目得基因得转录水平。
转位: 一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。
基因工程: 在体外, 用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA, 继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞, 最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程, 又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。
目得基因：基因工程中, 那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。
连接器: 人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段, 连接到目得基因得两端, 便于基因重组中得切割与连接。
转化: 受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。
停滞效应: PCR中后期, 随着目得DNA扩展产物逐渐积累, 酶得催化反应趋于饱与, DNA扩增产物得增加减慢, 进入相对稳定状态, 即为停滞效应, 又称平台期。
逆转录PCR: 以mRNA为原始模板进行得PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。
在模板, 引物, 4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下, 特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中, 插入了lac 启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽）, 该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。
基因工程试题及答案
《基因工程》一、选择题（每小题1.5分，共15分）1．基因工程的创始人是 ( )。
A A. KornbergB W. GilbertC P. BergD S. Cohen2．关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。
A 由作用于同一DNA序列的两种酶构成B 这一系统中的核酸酶都是Ⅱ类限制性内切核酸酶C 这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰D 不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统3．在DNA的3’-5’链上，基因的起始密码子是 ( )A ATG（或GTG）B AGTC TAGD TGA4．II限制性内切核酸酶可以特异性地识别 ( )。
A 双链DNA的特定碱基对B 双链DNA的特定碱基序列C 特定的三联密码D 以上都正确5．末端转移酶是合成酶类，具有( )活性。
A 3’→5’DNA聚合酶B 5’→3’DNA聚合酶C 5’→3’DNA内切酶D 5’→3’DNA外切酶6．下面关于松弛型质粒(relaxed plasmid)性质的描述中，( )是不正确的。
A 质粒的复制只受本身的遗传结构的控制，因而有较多的拷贝数。
B 可以在氯霉素作用下进行扩增。
C 通常带有抗药性标记。
D 同严紧型质粒融合后，杂合质粒优先使用松弛型质粒的复制子。
7．关于cDNA的最正确的说法是( )。
A 同mRNA互补的单链DNAB 同mRNA互补的双链DNAC 以mRNA为模板合成的双链DNAD 以上都正确8．关于T4 DNA Ligase，下列说法中哪一项不正确? ( )A 是最常用的DNA连接酶。
B 不但能连接粘性末端，还能连接齐平末端。
C 不但能连接粘性末端。
D 最适温度37 ℃。
9．下列关于建立cDNA文库的叙述中，( )是错误的?A 从特定组织或细胞中提取DNA或RNAB 用反转录酶合成mRNA的对应单链DNAC 以新合成的单链DNA为模板合成双链DNAD 新合成的双链DNA克隆到载体上，并导入受体细胞10．用下列方法进行重组体的筛选，只有( )说明外源基因进行了表达。
基因工程实验考试试题(答案)
1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器？答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？答：loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75）答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31）答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。
基因工程试题
基因工程试题作业一：一、名词解释：1、基因：是遗传的物质基础，是DNA（脱氧核糖核酸）分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列的总称，是具有遗传效应的DNA分子片段。
2、基因组该指单倍体细胞中包括编码序列和非编码序列在内的全部DNA分子3、操纵子:原核生物的几个功能相关的结构基因往往排列在一起，转录生成一个mRNA，然后分别翻译成几种不同的蛋白质。
这些蛋白可能是催化某一代谢过程的酶，或共同完成某种功能。
这些结构基因与其上游的启动子，操纵基因共同构成转录单位，称操纵子。
4、启动子:是RNA聚合酶结合位点周围的一组转录控制组件，包括至少一个转录起始点。
在真核基因中增强子和启动子常交错覆盖或连续。
有时，将结构密切联系而无法区分的启动子、增强子样结构统称启动子。
5、增强子:是一种能够提高转录效率的顺式调控元件，最早是在SV40病毒中发现的长约200bp的一段DNA，可使旁侧的基因转录提高100倍，其后在多种真核生物，甚至在原核生物中都发现了增强子。
增强子通常占100～200bp长度，也和启动子一样由若干组件构成，基本核心组件常为8～12bp，可以单拷贝或多拷贝串连形式存在。
6、基因表达：是指细胞在生命过程中，把储存在DNA顺序中遗传信息经过转录和翻译，转变成具有生物活性的蛋白质分子。
二、简答题1、说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
答：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则,即属名+种名+株名的各一个首字母,再加上序号. 基本原则: 3-4个字母组成,方式是:属名+种名+株名+序号; 首字母: 取属名的第一个字母,且斜体大写;第二字母: 取种名的第一个字母,斜体小写;第三字母: (1)取种名的第二个字母,斜体小写;(2)若种名有词头,且已命名过限制酶,则取词头后的第一字母代替.第四字母: 若有株名,株名则作为第四字母,是否大小写,根据原来的情况而定,但用正体. 顺序号: 若在同一菌株中分离了几种限制酶,则按先后顺序冠以I,Ⅱ,Ⅲ,… 等,用正体.2、什么是限制性内切核酸酶的星号活性？受哪些因素影向？答：Ⅱ类限制酶虽然识别和切割的序列都具有特异性，但是这种特异性受特定条件的限制，即在一定环境条件下表现出来的特异性。
基因工程习题及答案.doc
基因工程习题及答案.doc1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（B ） A ? I 类限制酶 B. II 类限制酶111类限制酶 D.核酸内切酶2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是（BA.是从不同菌种分离到的不同的酶,也称异源同工酶。
B. 它们的识别序列完全相同。
C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D. E. 两种同裂酶的切割产物连接后,可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
3.多数限制酶消化DNA 的最佳温度是37 °C B. 30 °C C. 25 °C D. 16 °C E. 33 °C4. 下列关于限制酶的叙述错误的是（5.A. B.C.D.E. ［类限制酶反应需要Mg2+、 II 类限制酶反应需要Mg2+、111类限制酶反应需要Mg2+、 ATP 和S-腺昔蛋氨酸。
ATP oATP ， S-腺昔蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
I 、III 类限制酶对DNA 有切割和甲基化活性，II 类限制酶对DNA 只有切割活性而无甲基化活性。
TT 类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
如果一个限制酶识别长度为6bp ,则其在DNA 上识别6bp 的切割概率为（D ）A. 1/44C. 1/64D. 1/46E. 1/1066.多数II 类限制酶反应最适PH 是（C ）A. PH:2-4B. PH:4-6C. PH:6-8D. PH:8-10E. PH:4T07.下列关于限制酶反应的说法错误的是（D ）A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嗜嚏、腺噂吟或尿嗜嚏被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B. 许多限制酶对线性DNA 和超螺旋DXA 底物的切割活性是有明显差异的。
8. C. D. E.有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
BSA 对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA oII 类限制酶反应中必须的阳离子是（C ）单选题E. RNAase有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
基因工程试题
基因工程试题A一、名词解释（每题2分，共20分）1、转染:2、质粒不亲和性:3、cDNA 文库:4、RACE:5、基因工程:6、RT-PCR7、插入失活:8、S-D 序列:9、穿梭质粒载体:10、多克隆位点:二、选择题（每题1分，共15分）1（）基因工程操作的三大基本元件是:(I 供体 II 受体 III 载体 IV 抗体 V 配体)Ａ I + II + IIIＢ I + III + IVＣ II + III + IVＤ II + IV + VＥ III + IV + V2（）基因工程的单元操作顺序是Ａ增，转，检，切，接Ｂ切，接，转，增，检Ｃ接，转，增，检，切Ｄ检，切，接，增，转Ｅ切，接，增，转，检3( )生物工程的上游技术是Ａ基因工程及分离工程Ｂ基因工程及发酵工程Ｃ基因工程及酶工程Ｄ基因工程及细胞工程Ｅ基因工程及蛋白质工程4( )下列对逆转录酶描述正确的是：A 依赖于RNA的DNA聚合酶或称为RNA指导的DNA聚合酶B 依赖于cDNA的DNA聚合酶或称为cDNA指导的DNA聚合酶C 依赖于DNA的DNA聚合酶或称为DNA指导的DNA聚合酶D 依赖于RNA的RNA聚合酶或称为rNA指导的RNA聚合酶5( )下列对限制性内切酶描述正确的是Ａ限制性内切酶可识别任一的DNA序列Ｂ使用限制性内切酶时，有时可出现星活性Ｃ限制性内切酶可识别碱基数不超过5个Ｄ限制性内切酶切割碱基序列产生都是黏性末端6 ( )T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段 DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是Ａ 2' -OH 和 5' -PＢ 2' -OH 和 3' -PＣ 3' -OH 和 2' -PＤ 3' -OH 和 5' -PＥ 5' -OH 和 3' -P7( )下列有关连接反应的叙述，错误的是Ａ连接反应的最佳温度为12—16℃Ｂ连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于 10%Ｃ连接反应缓冲体系的 ATP 浓度不能高于 1mMＤ连接酶通常应过量 2-5 倍Ｅ DTT 在反应中可加也可不加8（）下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大"A质粒B黏粒C酵母人工染色体(YAC)Dλ噬菌体9（）载体的功能是(I 运送外源基因高效进入受体细胞 II 为外源基因提供复制能力 III 为外源基因提供整合能力)Ａ IＢ I + IIＣ I + IIIＤ II + IIIＥ I + II + III10( )考斯质粒（cosmid）是一种Ａ天然质粒载体Ｂ由入-DNA 的 cos 区与一质粒重组而成的载体Ｃ能裂解受体细胞的烈性载体Ｄ具有溶原性质的载体Ｅ能在受体细胞内复制并包装的载体11( )下列有关基因的描述，错误的是Ａ蛋白质是基因表达唯一的产物Ｂ基因是DNA链上具有编码功能的片段Ｃ基因也可以是RNAＤ基因突变不一定导致其表达产物改变结构12（）关于cDNA的最正确的提法是：A 同mRNA互补的单链DNAB 同mRNA互补的双链DNAC 以mRNA为模板合成的双链DNA D以上都正确13（）*一重组 DNA （ 6.2 kb ）的载体部分有两个 SmaI 酶切位点。
基因工程复习题答案版
基因工程复习题答案版
1. 基因工程的定义是什么？
基因工程，又称基因拼接技术或DNA重组技术，是指在体外将不同来
源的DNA分子进行拼接，然后将其导入活细胞中，使其表达出新的遗
传特性。
2. 基因工程的基本操作步骤包括哪些？
基因工程的基本操作步骤包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。
3. 目的基因的获取方法有哪些？
目的基因的获取方法主要有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增、
人工合成。
4. 基因表达载体的组成包括哪些部分？
基因表达载体的组成包括启动子、目的基因、终止子、标记基因和复
制原点。
5. 常用的基因表达载体有哪些？
常用的基因表达载体包括原核生物载体、酵母载体、动物病毒载体和
植物病毒载体。
6. 目的基因导入受体细胞的方法有哪些？
目的基因导入受体细胞的方法主要有转化、转染和感染。
7. 目的基因的检测与鉴定方法有哪些？
目的基因的检测与鉴定方法包括分子水平上的检测和个体水平上的鉴定。
8. 基因工程在农业上的应用有哪些？
基因工程在农业上的应用包括抗虫转基因植物、抗病转基因植物、耐除草剂转基因植物、转基因动物和转基因食品。
9. 基因工程在医学上的应用有哪些？
基因工程在医学上的应用包括基因治疗、生产药物、基因诊断和基因疫苗。
10. 基因工程可能带来的伦理问题有哪些？
基因工程可能带来的伦理问题包括对生物多样性的影响、对人类健康的潜在风险、对环境的潜在影响以及对人类社会的伦理挑战。
简答题基因工程 部分
1、构建质粒载体答、1、分子量尽量小。
＞15kb•时转化效率低。
小质粒优点:①容易提取；②较为抵抗机械(超声波)切割；③多拷贝，给克隆基因提供了剂量效应；④对内切酶提供多切点的机会大为减少。
2、了解载体上基因位置/限制酶作用位点。
3、包含可供选择的标记性状(基因)4、最大限度地具有MCS的单切点5、改造或增加表达基因的调控序列6、安全性能改造2、电泳的原理与区别a琼脂糖凝胶电泳的原理琼脂糖是由琼脂分离制备的链状多糖。
其结构单元是D-半乳糖和3，6-脱水-L-半乳糖。
许多琼脂糖链依氢键及其它力的作用使其互相盘绕形成绳状琼脂糖束，构成大网孔型凝胶，即而形成琼脂糖凝胶。
琼脂糖凝胶电泳具有电荷效应和分子筛功能,使得大小和构象不同的带电粒子的迁移率出现较大差异,从而达到分离的目的。
b聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）丙烯酰胺（acr）和交联剂N, N’-甲叉双丙烯酰胺（bis）在催化剂N,N, N’, N’-四甲基乙二胺（TEMED）和引发剂过硫酸铵（AP）的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶作为支持介质的电泳称为PAGE。
PAGE具有电泳和分子筛的双重作用。
C、脉冲场凝胶电泳（PFGE）实际上是一种交替变化电场方向的电泳，以一定的角度并以一定的时间变化电场方向，使DNA分子在微观上按“z”字形向前泳动，从而达到分离大相对分子质量的DNA片段（如50kb、100kb以上）的目的。
3、核酸分子杂交原理：DNA的分子杂交是dsDNA的变性和带有互补序列的同源单链之间的配对过程，因此，分子杂交实质上是以DNA变性和复性为理论基础的4、引起变性的因素：热、酸、碱、化学试剂（如：尿素、甲酰胺、甲醛等）。
加热变性是最常用的方法，一般加热80-100℃数分钟即可使核酸分子氢键断裂，双链分开。
5、杂交分类杂交可分成：DNA与DNA、RNA与RNA、DNA与RNA之间的杂交。
6、核酸探针的类型：寡核苷酸探针、基因组DNA探针、cDNA探针、RNA探针、单链DNA 探针7、探针所携带的标记物应具备的条件（1）标记后的探针的分子结构要尽可能与原来的分子结构相同，绝不影响其碱基配对特异性，不影响探针分子的主要理化特性，尤其是杂交特性。
整理基因工程
精品文档一、名词解释1、感受态细胞：就是处于能吸收外源DNA分子的生理状态的细胞2、转化：是指以质粒为载体，将外源DNA分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种过程3、回文序列：从5,一3,端两条链中的核甘酸碱基排列顺序完全相同的序列4、粘性末端：是指DNA分子在限制性内切核酸酶的作用下形成的具有互补减记的单链延伸形成的末端结构，它们能够通过互补碱基间的配对而重新连接起来5、平齐末端：限制性核酸内切酶在识别序列的对称轴上切割，形成的片段末端为平末端6、Ti质粒：是根癌农杆菌中发现的可引发植物产生冠瘿瘤的质粒；7、质粒：是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。
8、cos位点：入DNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的双链区域称为cos位点。
9、lacZ'基因：大肠杆菌lacZ的a -肽链序列，是LacZ的氨基端片断。
10、克隆载体：以繁殖外源DNA片段为目的载体通称为克隆载体11、clone：含有目的DNA片段的重组DNA分子或含有该重组分子的无性繁殖12、同尾酶：它们的来源不同，识别的靶序列也不同，但切割后能产生相同的粘性末端的一类限制性核酸内切酶13、同切点酶：又称同裂酶，是一类来源不同而能识别相同靶序列的限制性内切核酸酶14、星号活性：当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性的现象15、转导：由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息的转移的过程16、转染：以噬菌体为载体，不经过蛋白包装成病毒颗粒，用DNA连接酶使噬菌体DNA环化，在通过质粒转化方式导入受体菌的过程17、感染：以入噬菌体DNA为载体的DNA重组分子包装成病毒颗粒，使其感染受体菌的过程18、基因枪法：又称微弹轰击法、粒子轰击法，是一种借助高速金属微粒将DNA分子引入活细胞的转化技术19、转化率：每微克载体DNA在最佳转化条件下进入受体细胞的分子数，是衡量转化效率的重要指标20、限制性内切核酸酶简称限制酶，是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核甘酸序列(4-8bp),并由此处切割DNA双链的核酸内切酶。
基因工程考试完整版试题
填空4．基因工程的两个基本特点是：(1) ，(2) 。
4．(1)分子水平上的操作；(2)细胞水平上的表达5．基因克隆中三个基本要点是：；和。
5．克隆基因的类型；受体的选择；载体的选择2. 由于不同构型的DNA 插入EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，SC DNA 的泳动速度，OC DNA 泳动速度，L DNA 居中，通过凝胶电泳和EB 染色的方法可将不同构型的DNA 分别开来。
2．最快；最慢4. 就克隆一个基因(DNA 片段) 来说，最简单的质粒载体也必需包括三个部分：、、。
另外，一个理想的质粒载体必须具有低分子量。
4．复制区：含有复制起点；选择标记：主要是抗性基因；克隆位点：便于外源DNA的插入6. 质粒拷贝数是指细胞中质粒的份数同染色体的比值，即质粒／染色体。
13. YAC 的最大容载能力是1000kb，BAC 载体的最大容载能力是300kb。
3．λ噬菌体的基因组DNA 为kb，有多个基因。
在体内，它有两种复制方式，扩增时(早期复制)按复制，成熟包装(晚期复制)则是按复制。
它有一个复制起点，进行向复制。
λ噬菌体的DNA 既可以以线性存在又可以环状形式存在，并且能够自然成环。
其原因主要是在λ噬菌体线性DNA 分子的两端各有一个个碱基组成的天然黏性末端。
这种黏性末端可以自然成环。
成环后的黏性末端部位就叫做位点。
48．5；60；凯恩斯模型；滚环；双；12；COS4．根据噬菌体的包装能力，将野生型λ噬菌体的基因组DNA 改造成插入型载体，该载体的最小分子大小约为kb，插入的外源片段最大不超过kb。
36；145．野生型的M13 不适合用作基因工程载体，主要原因是和。
没有合适的限制性内切核酸酶识别位点；选择标记6．黏粒(cosmid)是质粒—噬菌体杂合载体，它的复制子来自、COS 位点序列来自，最大的克隆片段达到kb。
质粒；丸噬菌体；457．有两类改造型的λ噬菌体载体，即插入型和取代型。
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1.某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因并提出解决的方案? （6分）答：(1)导致星号活性因素：a较高的甘油浓度b酶与底物DNA比例过高（不同酶情况不同，通常为＞100v/micHo.g）c 低盐浓度（<25mM）d 高PH值（>PH8.0）e 存在有机溶剂（如DMSO .乙醇（9）.乙烯乙二醇.二甲基乙酰胺.二甲基甲酰胺.sulphalane(12)等）f用其他二价离子代替Mg2+(Mn2+.Cu2+.Co2+.Zn2+等)（2）抑制星号活性的方法：a尽量用较少酶进行完全消化反应，这样可避免过度消化及过度的甘油浓度. B尽量避免有机溶剂（如制备DNA时二乙醇）污染c 将离子浓度提高到100—150mM（若酶活性不受离子浓度影响）d将反应缓冲液PH值降到7.0 e 二价离子用Mg2+3、目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？（10分）答：a.目的基因的表达方式，细胞内表达或者分泌细胞外，如果蛋白为分泌性，那么细胞内检测不到表达，或者表达很少B.分子量大小，分子量大小决定了蛋白半衰期，因而检测需要延长C.目的基因的抗体特异性不好则很难以检测表达D.许多表达宿主自身有自己的蛋白酶，会将你的产物降解，也可能因为修饰系统不同，使得产物的活性不高或者没有。
E.如果宿主菌与蛋白来源菌不同也有可能由于密码子使用偏好性不同导致不表达.4蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?答：蓝白斑筛选法出现假阳性的原因：β-半乳糖苷酶的N末端是非必须的，可以进行修饰，并不影响酶的活性或α肽的互补性。
如果插入的外源DNA引起α肽的可读框的改变或者插入片段在正确的可读框中含有终止密码的话，就形成白色噬菌斑。
如果插入DNA的碱基数正好是3的倍数，或者插入的DNA中不含有终止子的话，仍会形成蓝白菌落。
这种插入物的长度可达几百个碱基对（1）蓝白斑筛选法原理：某些质粒带有大肠杆菌的半乳糖甘酶基因片段，在半乳糖甘酶基因区外又另外引入了一段含有多种单一限制性酶切位点的dna序列，这些位点上如果没有克隆外源性dna片段，在质粒导入Lac的大肠杆菌后质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入底物X—gal和诱导剂IPTG后出来蓝色菌落；如果在多克隆位点上插入外源基因，则使LacZ’基因灭火，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落出现白色，由于这种颜色标志，重组与非重组体的区分一目了然。
(2)假阳性的原因：不一定就是目的基因5、当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施? 为什么? （8分）答：1.同步双酶切：选择能让两种酶同时作用的最佳缓冲液是非常重要的一步，因为在非最佳缓冲条件下时的切割速率会减缓2 .分步酶切：应从反应要求盐浓度低的酶开始，酶切完毕后再调整盐浓度直至满足第二种酶的要求，然后加入第二种酶完成双酶切3.使用配有特殊缓冲液的酶进行双酶切：在大多数情况下，采用标准缓冲液的酶也能在这些特殊缓冲液中进行酶切，这保证了对缓冲液有特殊要求的酶也能良好工作。
由于内切酶在非最佳缓冲液中进行酶切反应时，反应速度会减慢，因此需要增加酶量或延长反应时间6、用哪些方法可以检测转基因植物中的外源基因，如何检测？（8分）答：1、外源基因整合到植物基因组的检测SOUTHERN杂交、多聚酶链式反应、报告基因检测等2、外源基因在植物基因组中转录检测NORTHERN杂交是DNA-RNA杂交，它是检测特定组织或器官中外源基因是否转录出MRNA一种有用的方法3、外源基因在植物基因组中翻译的检测WESTERRN杂交则是蛋白质间的杂交，它是检测特定组织或器官中外源基因是否有翻译出特定蛋白质的方法4、筛选标记基因，如抗菌素抗性基因，抗除草剂基因等来进行，当受体细胞本身不含此类基因时，导入含有或构建有此类基因的供体后，只要起在受体中转化成功，便可用抗菌素或除草剂等进行筛选。
5利用导入外源基因所表达的特殊性状直接鉴定；7、请你自己设计一个抗除草剂X的转基因植物，并写出主要操作步骤。
（10分）答：1.目的基因的获得：找到抗除草剂x基因用限制性内切酶进行酶切，在进行pcr2.转化：可以采用介导转化法，基因枪介导转化法，花粉管通道法3.筛选并检测：利用含有重组基因的植株的抗性进行筛选。
已知某蛋白基因CDNA长度为1.8kb,两端的核酸序列如下：‘ATGAGTGCCAATAGCCCGACAGGAAACGATCCCCATGTATTTGGTATTCAA-------------GAGCGCAAGTAG CACGCCCTCTTCTACTACAATGTCATAA3‘经分析发现该基因内部有如下限制性内切酶位点：AflII CTTAAG，EcoRV GATATC，XmaI CCCGGG，EcoRI GAATTC，SmaI CCCGGG，SacI GAGCTC，SalI GTCGAC，HindII AAGCTT，NotI GCGGCCGC。
MCS：BamHI：G|GATCC；SmaI：CCC|GGG；SacI：G|AGCTC；SalI：G|TCGAC；SphI：G|CATGC；XbaI ：T|CTAGA ；PstI：C|TGCAG；HindIII：A|AGCTT；KpnI：G|GTACC。
现要把该基因克隆至表达载体pQE-30中，并转化到大肠杆菌中表达并规模化生产。
1）写出可用的酶切位点；2）设计出PCR引物；3）设计PCR扩增的程序；4）详述克隆、筛选、表达纯化及其规模化的过程。
（1）答：BamHI PstI XbaI KpnI SphI HindIII（2）答：PCR引物：设计PCR 引物上游引物：5’—3’GGG / GGATCC(BamHI)/ATGAGTGCCAATAGCCGACAGTm =4（G+C）+2(A+T)=68°下游引物: 5’—3’GGG/CTGCAG(PstI)/TTATGACATTGTAGTAGAAGAGTm=4(G+C)+2(A+T)=58°（3）答：PCR扩增程序：1 预变性：双链DNA在94度左右预变性5min2变性：94度下双链DNA变性30s3退火：55度退火30s4延伸：72度延伸90s5最后72度延伸10min 循环三十次（4）答：克隆：将载体用BamHI酶和Xbal酶进行双酶切，然后将目的基因在体外用DNA 连接酶与载体连接，导入事先做好的感受态细胞中，培养在含有氨苄青霉素的培养基上筛选：以为载体上带有抗氨苄青霉素标记基因，所以能在培养基上存活的即为转化子表达纯化：将筛选出来的菌株进行培养，得到的产物进行分离纯化，因为载体上含有6个组氨酸基因，所以可以用亲合层析的方法进行提纯规模化：将得到的单一菌株大规模培养，可以采用连续培养的方法进行，可以得到大量产物1、限制性内切酶分为几类？基因工程中常用的为哪一类？有何特点？（6分）答：1．分三类：为限制性内切酶I型.II型.III型.2．基因工程中常用的为II型。
特点：识别双链DNA分子中4~8对碱基德特定序列，大部分酶的切割位点在识别序列内部或两侧，识别切割序列呈典型的旋转对称型回文结构。
2、什么是cDNA文库(complementDNAlibrary)?同基因组文库有何差别?答：（1）cDNA文库是通过对一系列mRNA反转录并对特殊的克隆予以筛选得到的，cdna文库是以某一生物的总mRNA为模板，在无细胞系统中，在反转录酶作用下首先合成一条互补的DNA即第一链，破坏RNA模板后，在以第一链为模板合成第二链，得到双链的DNA即cDNA，选用适合的载体，将合成的cDNA重组导入寄主细胞，经筛选得到的cDNA克隆群为cDNA文库（2）差别：基因组文库含有全部基因，cDNA文库含有全部蛋白编码的结构基因，cDNA 文库小于基因组文库3、PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?答：（1）原理：DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性，复性和延伸。
首先是在dsDNA在高温下变性为ssDNA，然后DNA聚合酶以ssDNA为模板，利用聚合酶和dNTPs合成新生的DNA互补链，新合成的dsDNA经过变性，复性，延伸，如此反复循环，使目标DNA 以指数形式扩增（2）要已知待扩增目的基因或者DNA片段两侧的序列，据该序列化学合成聚合反应必须的双引物。
或者至少预先知道，足够合成一对引物的靶DNA序列。
4、目的基因与启动子拼接后，重组分子若不表达，应如何分析？（10分）答：a.目的基因的表达方式，细胞内表达或者分泌细胞外，如果蛋白为分泌性，那么细胞内检测不到表达，或者表达很少B.分子量大小，分子量大小决定了蛋白半衰期，因而检测需要延长C.目的基因的抗体特异性不好则很难以检测表达D.许多表达宿主自身有自己的蛋白酶，会将你的产物降解，也可能因为修饰系统不同，使得产物的活性不高或者没有。
E.如果宿主菌与蛋白来源菌不同也有可能由于密码子使用偏好性不同导致不表达.5、为什么pUC系列的载体与外源基因形成的重组体可以用蓝白斑实验进行筛选？答：pUC系列载体带有大肠杆菌的LacZ’基因片段，在该基因内部含有多种限制性内切酶位点，在这些位点上如果没有克隆外源DNA片段，在质粒导入Lac的大肠杆菌后质粒携带的半乳糖苷酶基因将正常表达，与大肠杆菌的半乳糖苷酶基因互补，产生有活性的半乳糖苷酶，加入底物X—gal和诱导剂IPTG后出来蓝色菌落；如果在多克隆位点上插入外源基因，则使LacZ’基因灭火，不能生成半乳糖苷酶，结果菌落出现白色，由于这种颜色标志，重组与非重组体的区分一目了然。
6、如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因?答：先从表达该蛋白质的细胞中提取总的mRNA，根据蛋白质的氨基酸序列推测其dna序列，该序列制成探针，然后与提取出的mRNA杂交，能够杂交的即可选出，利用反转录的方法合成cDNA，再用pcr技术克隆该基因。
7、欲将一真核生物的结构基因克隆后转移到原核生物(如E．coli)中进行表达，克隆时应注意哪些问题? （10分）答：真核生物的结构基因含有内含子，转移的的目的基因要去除内含子，原核生物与真核生物有密码子偏爱性。
1、某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一Bgl I的切点。
现用Bgl I切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插入片段的重组体?（6分）答：1．含Tet抗性的抗生素2.Tet(r)+Kan(r)+Tet(r) Tet(r)Kan(s)和Tet(r)Kan(r)3先将转化液涂皿在Tet平板，再将Tet平板上转化子影印在含Tet,Kan的平板上在Tet平板上生长，但在Tet,Kan平板上不生长的转化子即为含有插入片段的重组体2、简述差异杂交的原理及基本思路？答：原理：差异杂交是将基因组文库的重组噬菌体dna转移至硝酸纤维素摸上，用两种混合的不同cdna探针分别于滤膜上的dna杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。