实验二细菌的简单染色和革兰氏染色

基本原理
细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表 现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理， 使细胞着色，便于观察。 简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌 形态、大小、及排列方式。 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并 使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。 固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均 应维持细胞原有形态。
二 细菌的革兰氏染色
（一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）操作步骤
（一）
目的要求
1 学习革兰氏染色原理，理解着色机理。 2 掌握革兰氏染色的方法，并能正确染色。 3 学习并掌握无菌操作技术 4 巩固显微镜油镜的使用方法
（二）
基本原理
革兰氏染色是用于细菌鉴别的一种重要染色方法。它是 根据革兰氏阳性细菌、阴性细菌细胞壁结构、组成的不同而 使用一系列的染色处理使之差别显色。其染色方法是先将细 菌分别用结晶紫和碘液初染媒染后，乙醇脱色，再经复染剂 复染。最终被染成红色的是革兰氏阴性细菌；被染成紫色的 是革兰氏阳性细菌。
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革兰氏染色原理：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色 第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁 阻留在细胞内。 第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时， 肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞 内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩， 因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶 出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。
下次实验内容：
放线菌、真菌形态观察及各类微生物菌落特征观察
（三）实验材料
大肠杆菌（24h培养）斜面菌种 枯草杆菌（16h培养）斜面菌种
（四）操作步骤
1 涂片：方法同单染色，然后干燥、固定。 2 初染：滴加结晶紫染色1min，后用水冲洗。 3 媒染：滴加碘液染色1---2min，后用水冲洗，甩尽残余水 4 脱色：用95%乙醇冲洗30秒（需要严格控制时间和浓度）， 然后立即用水冲洗。 5 复染：用蕃红或石炭酸复红覆盖涂片进行复染，蕃红染 2---3min，如果石炭酸复红染1min。水洗，晾干。 6 镜检：先用低倍镜观察，后用油镜观察
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阳性菌
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阴性菌
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三 实验报告
1 写出简单染色、革兰氏染色的实验目的 2 写出简单染色、革兰氏染色的基本原理 3 根据实验结果绘出简单染色和革兰氏染色的结果图。
菌名： 放大倍数： 细菌简单染色结果图
放大倍数： 细菌革兰氏染色结果图 要求： 标出菌名、颜色、阳性或阴性菌
四 思考题
1 细菌简单染色操作过程中应注意哪些事项？ 2 如果对一未知菌进行革兰氏染色，如何能确证染色 结果正确可靠？ 3 为什么说95%酒精脱色是革兰氏染色的关键步骤？
（三） 实验材料
大肠杆菌（24 h 培养）斜面菌种 枯草杆菌（16 h 培养）斜面菌种
（四）无菌操作过程
无菌操作：不让除我们接种的微生物以外
其它微生物侵入的技术。
（五）
简单染色操作步骤
1 涂片： 载玻片、无菌水、斜面菌种、无菌操作、均匀的薄层 2 干燥： 3 固定：加热固定 4 染色： 结晶紫染1min或蕃红染2-3min或石炭酸复红染1min。 5 水洗： 6 干燥： 7 镜检： 低倍镜观察以确定目标和范围，再换用油镜观察绘图。
实验二 细菌的简单染色和 革兰氏染色
一 细源自文库的简单染色
（一）目的要求 （二）基本原理 （三）实验材料 （四）无菌操作过程 （五）简单染色操作步骤
（一）目的要求 1 2 3 4 学习制染色片技术，学习简单染色的原理。 学习并掌握无菌操作的技术。 掌握简单染色方法、。 巩固显微镜油镜的使用方法。
（二）