实验二+细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察

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细菌的简单染色和革兰染色实验报告

实验二：细菌的简单染色和革兰染色一、实验目的1.掌握细菌涂片的制备方法。

2.掌握细菌简单染色和革兰染色法的原理及操作步骤，识别细菌的革兰染色结果。

3.巩固显微镜油镜的使用方法。

4.学习无菌操作技术。

二、实验原理1、染色原理：细菌生长于酸性、中性和碱性溶液时常带负电荷，所以通常采用带正电荷的碱性染料（如美蓝、甲紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。

当细菌分解糖类产酸时，细菌所带正电荷增加易被带负电的酸性染料（如伊红、酸性复红或刚果红）着色。

2、革兰染色法原理：革兰染色法可根据细菌细胞壁结构和成分的不同，将其分为革兰阳性菌和革兰阴性菌。

革兰阳性细菌的肽聚糖层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后部份细胞壁可能被溶解并改变其组织状态，细胞壁孔径大，不能阻止溶剂透入，因而将结晶紫与碘的复合物洗去而被脱色。

另外，革兰染色的差异并不能完全认为是化学的差别，也有物理结构不同的结果。

如酵母菌细胞壁的成份完全与细菌不同，但具有革兰染色阳性反应。

三、实验仪器，材料和用具1、仪器及用具：显微镜、酒精灯、火柴、接种环、载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、镜油、无菌牙签2、菌种：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、葡萄球菌、牙垢、未知菌S1和S33、试剂：结晶紫染液、革氏碘液、洗脱液（95%乙醇溶液）、番红染液四、实验步骤（1）简单染色1、载玻片的处理：用纱布将取出的载玻片擦干，把要涂菌的部位在火焰上烤一下，冷却待用。

2、涂片：左手持菌液试管，右手持接种环在火焰上烧灼灭菌，待接种环冷却后在火焰旁从试管中取一环菌液，在洁净无脂的载玻片上涂一直径约2mm的均匀薄膜。

3、干燥：涂片后待其自然干燥。

4、固定：将以干燥好的涂片标本朝上，在酒精灯火焰上通过2~3次，要求载玻片温度不能超过60度，以手背触载片不烫为宜。

5、染色：滴加一滴结晶紫染液，染色1min。

实验二细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察

实验二细菌的简单染色和革兰氏染色及其形态观察1.目的要求（1）学习细菌涂片、染色的基本技术及无菌操作技术。

（2）掌握细菌的简单染色法，初步认识细菌的形态特征。

（3）了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。

2.基本原理（1）简单染色法用单一染料进行细菌染色，操作简便，适于菌体一般形状和细菌排列的观察。

常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱碱性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷（酸性染料电离时，其分子的染色部分带正电荷），因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色，经染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下易于识别。

常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。

（2）革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

它是1884年由丹麦医师Gram创立的。

革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料初染液；媒染剂；脱色剂和复染液。

碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。

媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘是常用的媒染剂。

微生物学实验教程

微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。

2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。

二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。

它们由机械装置和光学系统两大部分组成。

在显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。

而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。

与其他物镜相比，油镜的使用比较特殊，需在载玻片与镜头之间加滴镜油，这主要有如下二方面的原因：1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ，放大倍数这样大的镜头，焦距很短，直径很小，但所需要的光照强度却最大。

从承载标本的玻片透过来的光线，因介质密度不同（从玻片进入空气，再进入镜头），有些光线会因折射或全反射，不能进入镜头，致使在使用油镜时会因射入的光线较少，物像显现不清。

所以为了不使通过的光线有所损失，在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率（n=1.55）相仿的油镜（通常用香柏游，其折射率 n=1.52）。

2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。

从物理学角度看，光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制，可表示为：（公式 P16 ）式中λ= 光波波长；NA=物镜的数值孔径值。

光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围（ 0.4--0.7μm），而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率，可表示为： NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。

实验二细菌单染与复染

革兰氏染色

丹麦C.Gram创立，用于细菌分类学研究细菌细胞壁的结构

G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多脂质，故用乙醇等有机溶剂脱色时融解了类脂质，增加了细胞的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，经沙黄复染呈红色。 G＋细胞壁结构致密，用脱色剂处理后，肽聚糖层孔径缩小，通透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。
实验二细菌简单染色法革兰氏染色法
一、目的要求

ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ

1．巩固油镜的使用方法； 2．学习微生物涂片、染色基本技术，掌握细菌的简单染色法； 3．学习、掌握细菌的革兰氏染色法； 4．建立“无菌操作”的概念，学习其技术。
二、实验原理
简单染色法：是利用单一染料对细菌进行染色的方法，常用碱性染料。只能观察微生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别微生物以及它的特殊构造等。复染色法：用两种或两种以上染色液进行染色，有协助鉴别微生物的作用，故也称鉴别染色法。常用的有：革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染色法等。

革兰氏染色结果及细菌分类
细菌细胞结构
革兰氏染色阴性
Left: 单菌染色结果 (G+或 G-)
Right: 混合菌染色结果 (G+和 G-)
五、实验结果
文字记录所观察到的革兰氏染色结果的差别，判断是G－/ G＋。绘图描述各菌形态（可在一个视野中）。

六、问题与讨论
1革兰氏染色涂片为何不宜太浓厚？实验关键步骤？ 2对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样才能确证你的结论正确？

三、实验材料

变形杆菌、表皮葡萄球菌
载玻片、接种环、酒精灯、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。革兰氏染色液一套

实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）

实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）实验二细菌的形态观察（简单染色法和革兰氏染色法）一目的要求1．了解简单染色法和革兰氏染色法的基本原理，熟练掌握细菌的涂片与革兰氏染色技术。

2．初步学习细菌细胞特殊结构的染色方法，并观察细菌的特殊结构。

3．观察细菌的菌落平板，学会识别大肠杆菌、枯草杆菌和金黄色葡萄球菌的菌落特征，学会初步鉴别微生物的种类的方法。

二实验内容与原理1．简单染色法原理简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法，一般用于观察个体形态与细菌排列。

由于细菌在中性、碱性或弱酸性环境中带负电荷，所以通常采用一种碱性染料如美蓝、碱性复红、结晶紫对细菌进行染色。

美蓝是美蓝的盐酸盐，可解离为带正电荷的美蓝，很容易与细菌结合使菌体着色。

染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。

简单染色过程：涂片→固定→染色→水洗→干燥→镜检涂片→ 固定→ 干燥→ 水洗、吸干→镜检→染色 1mim2．革兰氏染色法原理革兰氏染色法是由丹麦医生 Hans Christian Gram于 1884 年创立。

它是细菌学中很重要的鉴别染色法，因为通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G + ）和革兰氏阴性菌（G －）两大类。

革兰氏染色过程：涂片→固定→结晶紫初染（1min）→碘液媒染（1min）→乙醇脱色（95% 酒精,30s）→番红复染（30 秒）→干燥→镜检阳性菌：紫色阴性菌：红色革兰氏染色要点：（1）初染：用结晶紫，染色 1 分钟，水洗。

（2）媒染：加碘液覆盖 1 分钟后水洗。

（3）脱色：连续滴加 95％乙醇，约 30 秒，直到滴下的乙醇无色为止，水洗。

（4）复染：加番红染色 1 分钟，水洗。

（5）干燥。

（6）镜检：先低倍镜，后油镜观察。

注意：涂片要薄而均匀，脱色程度要控制得当。

学生做大肠杆菌，金黄色葡萄球菌，枯草杆菌的革兰氏染色。

观察细菌个体形态与排列，绘图。

3．芽孢染色原理细菌的芽孢壁比营养细胞壁厚，致密，透性差，着色和脱色都比营养细胞困难，故一般采用一种碱性染料并在微火上加热，或延长染色时间，使菌体和芽孢都染上颜色以后水洗或稀酸冲去菌体的染料，芽孢仍保留颜色，再用另一种对比鲜明的染料使菌体着色，如此可明显区分芽孢和营养体结构。

实验二细菌的单染色及革兰氏染色

掌握染色步骤
选择适当的染料，对细菌进行固定、染色、脱色、复染等步骤，确保染色效果良好。
掌握革兰氏染色技术
了解革兰氏染色的原理
革兰氏染色是一种用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的染色技术。
掌握染色步骤
在涂片上涂抹细菌，然后使用结晶紫、碘液和酒精等染料进行染色和脱色
，最后用番红和石炭酸复染。
识别染色结果
革兰氏染色结果分析
染色反应
革兰氏染色可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类，通过染色反应可以初步判断细菌的致病性。
颜色变化
革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色，通过颜色变化可以判断细菌类型。
染色准确性
革兰氏染色准确性较高，对于初步鉴别细菌种类具有重要意义。
实验结果在细菌鉴别中的应用
初步鉴别
通过单染色和革兰氏染色实验结果，可以对细菌进行初步鉴别，确定可能的致病菌种类。
辅助诊断
在临床诊断中，细菌鉴别对于确定感染源、选择合适的治疗方案具有重要意义。
科研应用
在科研领域，细菌鉴别可以为研究不同类型细菌的生物学特性、致病机制等提供基础数据。
06
CATALOGUE
注意事项与实验改进
实验注意事项
实验前需确保实验室环境清洁，避免污染。
使用显微镜时，应确保镜头清洁，以免影响观察效果。
在操作过程中，应避免细菌污染，尤其是避免交叉污染。
实验结束后，应按照实验室规定正确处理废弃物。
实验操作技巧与难点解析
01 涂片时，应保证涂片均匀，避免产生气泡。
02 染色时，应控制染色时间，避免染色过度或不足。
情况。
02
CATALOGUE
实验原理

实验二细菌的简单染色及革兰氏染色

实验原理--实验原理---革兰氏染色主要由于两类细菌的细胞壁
成分和结构不同。成分和结构不同。
大肠杆菌革兰氏染色
炭疽芽胞杆菌
实验器材
1、材料大肠杆菌；枯草芽孢杆菌 2、试剂或染液草酸铵结晶紫；碘液；95%乙醇；复红溶液；蒸馏水 3、其他载玻片；接种环；酒精灯；打火机；卫生纸；酒精棉球
实验步骤---实验步骤简单染色：
（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无涂片：取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌液。再取干净载玻片一块将刚制成的苏云金杆菌浓菌液挑2 菌液。再取干净载玻片一块将刚制成的苏云金杆菌浓菌液挑2-3环涂在左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取2 环涂在右边制成薄涂面。左边制成薄的涂面，将大肠杆菌的浓菌液取2-3环涂在右边制成薄涂面。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。亦可直接在载玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2 次固定（（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）为宜）
实验步骤— 实验步骤革兰氏染色
制片→初染（结晶紫1min）→水洗→媒染（碘液1min）→ 水洗→脱色（乙醇20-30s）→水洗→复染（番红2min）→ → 20-30s → → 2min → 水洗→干燥→观察
枯草芽孢杆菌
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ大肠杆菌杆菌
实验作业
绘出枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的结果，判断期阴阳性。

细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告

细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌的简单染色和革兰氏染色实验报告细菌是微生物中最常见的一类生物，它们广泛存在于自然界的各个角落，包括土壤、水体、空气等。

为了更好地了解细菌的形态和结构，科学家们开展了许多实验，其中包括细菌的简单染色和革兰氏染色。

一、细菌的简单染色实验细菌的简单染色是一种常用的染色方法，通过给细菌染色，可以使其在显微镜下更加清晰可见。

这种染色方法主要使用了一种叫做甲基蓝的染料。

在实验中，首先需要制备好细菌的涂片。

将一根无菌的钢丝棒蘸取一小滴细菌悬液，然后将其均匀地涂抹在玻璃片上。

待涂片干燥后，将其固定在火焰上加热的玻璃柱上，以使细菌附着在玻璃片上。

接下来，将制备好的涂片放入染色盒中，加入适量的甲基蓝染料，浸泡片刻。

然后，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。

最后，用纸巾轻轻吸干涂片上的水分，将其放入显微镜下观察。

在显微镜下观察，我们可以清楚地看到细菌的形态和结构。

不同种类的细菌可能会呈现出不同的形状，例如球状、杆状、螺旋状等。

通过简单染色，我们可以更好地观察和研究细菌的特征。

二、革兰氏染色实验革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

这种染色方法主要使用了紫晶染料和碘酒。

在实验中，首先需要制备好细菌的涂片，方法与简单染色相同。

然后，将涂片放入染色盒中，加入适量的紫晶染料，浸泡片刻。

接着，用蒸馏水轻轻冲洗涂片，直至水洗液不再有颜色流出。

接下来，将碘酒滴在涂片上，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。

随后，滴入乙醇或酒精醛溶液，使其浸润全片，然后用蒸馏水轻轻冲洗涂片。

最后，滴入蓝色染料，浸泡片刻后用蒸馏水冲洗涂片。

在显微镜下观察，我们可以看到细菌的染色效果。

革兰氏阳性菌会呈现紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌则呈现红色或粉色。

这是因为革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胆固醇，可以吸附紫晶染料和碘酒，而革兰氏阴性菌的细胞壁则较薄，无法吸附这些染料。

实验2 细菌的染色和形态观察

微生物学实验二
细菌的染色和形态观察
（验证性实验）
微生物学教研室郭棵棵
实验内容
上节课实验结果观察
显微镜油镜头的使用与保护
示教：细菌的基本形态与特殊结构的观察
操作：单染色、革兰染色材料：葡萄球菌、大肠杆菌肉汤培养物载玻片 2张 /人 1支/6人
教学目标
了解：
1.显微镜油镜镜头的使用与保护
革兰染色的原理：
等电点学说
化学学说通透性学说
等电点学说：
革兰阳性菌的等电点（PI 2-3)比革兰阴性菌的等电点(PI 4-5)低，在pH=7 的染液中，革兰阳性菌所带的负电荷比阴性菌多，因而摄取碱性染料比较多且牢固，不易被酒精脱色。
化学学说：
革兰阳性菌的细胞内含有某些特殊化学物质，一般认为是核糖核酸镁盐，能与染料和碘液结合成为稳定的化学物，不易被酒精溶解脱色。
思考题
1. 革兰染色的过程如何？
2. 有时候革兰阳性菌被染成革兰阴性菌的色调，
这是为什么？
革兰染色的步骤
1：制片 3：固定 2：干燥 4：染色：初染：结晶紫 1分钟
媒染：碘液
脱色：95%酒精
1分钟
半分钟
复染：稀释复红
半分钟
革兰染色结果判断
紫
球
碘
阳
酒
杆
红,
阴,
一
阳
一
紫
半
阴半Leabharlann 红脑淋卡，白抗胞除外
革兰氏染色的意义：

将细菌分为革兰阳性、阴性两大类。
分析细菌的致病性。指导临床用药。
革兰染色法过程
1、涂片：先在玻片上放一滴生理盐水，然后刮取菌苔在盐水中乳化，涂成直径约为0.5cm 的膜。 2、干燥：在远离火焰上方微微烘干。 3、固定：火焰固定。 4、革兰染色过程：初染：结晶紫 1分钟媒染：碘液 1分钟脱色： 95%酒精半分钟复染：稀释复红半分钟 5、镜检：阳紫阴红球阳杆阴

微生物学实验-简单染色与革兰氏染色

水，按无菌操作法取菌涂片，做成浓菌液。再取干净载玻片一块将刚制成的浓菌液挑2-3环涂在玻片上。每个玻片可以涂样2-4个。注意取菌不要太多。（2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
（3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3 次固定（以不烫手为宜）。
1 简单染色：
实验方法
2 革兰氏染色：（7）水洗：用水洗去碘液。（8）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色30 s
左右至流出液无色，立即水洗。
（9）复染：滴加蕃红复染2 min。（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃红染色液。（11）晾干：将染好的涂片放空气中晾干或者用吸水
纸吸干。
（12）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色反应性。
实验器材
菌种：苏云金芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌液体培养12-16h的枯草芽胞杆菌和培养24h的大肠杆菌
染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、蕃红、美蓝、醇醚、香柏油
器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸（脱脂棉）、显微镜
实验方法
1 简单染色：（1）涂片：取干净载玻片一块，在载玻片上滴2滴蒸馏
实验完毕后的处理
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净：（1）先用脱脂棉将油镜头上的油擦去。（2）用脱脂棉沾少许醇醚将镜头擦2—3次。（3）再用干净的脱脂棉将镜头擦2—3次。（4）注意擦镜头时向一个方向擦拭。
注意事项
1.革兰氏染色成败的关键是酒精脱色。如脱色过度，革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌；如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响，难以严格规定。
2 革兰氏染色：（1）涂片：涂片方法与简单染色涂片相同。（2）晾干：与简单染色法相同。（3）固定，与简单染色法相同（4）结晶紫色染色：将玻片置于废液缸玻片搁架上，

实验细菌的简单染色与革兰氏染色

染色原理主要基于不同物质对染料的结合能力差异，使细菌着色，从而在显微镜下呈现出不同的颜色和形态。
掌握简单染色和革兰氏染色的操作方法
简单染色
将细菌涂片或培养物直接与染料混合，然后进行观察。操作简单，适用于初步观察细菌形态。
革兰氏染色
一种特殊的染色方法，通过结晶紫初染、碘液媒染、酒精脱色和沙黄复染等步骤，将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
出版年份：XXXX年
THANK YOU
简单染色方法简便，操作相对容易，但只能显示细菌的形态和结构，不能提供细菌的种类信息。
革兰氏染色原理
01
02
03
04
05
革兰氏染色是一种常用的细菌鉴别染色法，通过使用结晶紫、碘液和酒精等染料对细菌进行染色，能够将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类。
革兰氏染色的原理主要是基于细菌细胞壁的成分和结构不同，导致对染料的吸附和着色能力。
复染
将涂片浸入稀释后的伊红或沙黄染色液中，染
色一定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除染色液。
观察
在显微镜下观察染色结果，判断细菌是革兰氏
阳性还是阴性。
05
实验结果与分析
简单染色结果与分析
染色结果
通过简单染色法，细菌被染上了不同的颜色，如红色或紫色。
03
04
涂片制备
将细菌均匀涂在载玻片上，晾干。
染色
将涂片浸入染色液中，染色一定时间后取出。
冲洗
用清水冲洗涂片，去除染色液。
观察
在显微镜下观察染色结果，判断细菌类型。
革兰氏染色步骤
01
02
03
涂片制备

实验细菌的简单染色和革兰氏染色详解演示文稿

一目的要求
1 学习制染色片技术，学习简单染色\革兰氏染色原理，理解着色机理。
2 学习并掌握无菌操作的技术。 3 掌握简单染色\革兰氏染色的方法，并能正确染色 4 巩固显微镜油镜的使用方法。
二基本原理
（一）细菌的简单染色原理（二）革兰氏染色基本原理
（一）细菌的简单染色原理
细菌细胞微小，且含水量较多，在普通光镜下表现为无色透明，不易观察，所以必须进行染色处理，使细胞着色，便于观察。简单染色是使用单一染料染色，可用于观察细菌形态、大小、及排列方式. 染色前一般要将细胞固定，其目的是杀死菌体并使之粘附于玻片上，还可以增强菌体的着色能力。固定有加热法和化学法两种，无论采用何种方法均应维持细胞原有形态。
❖革兰氏染色原理：
第一步：结晶紫使菌体着上紫色第二步：碘和结晶紫形成大分子复合物，分子大，能被细胞壁阻留在细胞内。第三步：酒精脱色，细胞壁成分和构造不同，出现不同的反应。 G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，蕃红复染后呈红色。
◆用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色
实验三细菌的简单染色和革兰氏染色
细菌的简单染色和革兰氏染色
一目的要求二基本原理三实验材料四无菌操作过程五操作步骤六实验报告七思考题
占细胞壁的90%
占细胞壁的10%

实验二细菌的简单染色与革兰氏染色

了解染色结果
通过显微镜观察，判断细菌是否着色，从而初步判断细菌的种类。
了解革兰氏染色的原理和操作方法
了解革兰氏染色的原理
了解染色结果
通过使用两种不同的染料，使细菌呈现不同的颜色，从而区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
通过显微镜观察，判断细菌是否被染色以及呈现的颜色，从而确定细菌的革兰氏类型。
革兰氏染色的目的是区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，因为这两种类型的细菌在染色结果上存在明显的差异。
03 实验材料
菌种察。
金黄色葡萄球菌
另一种常见的细菌样本，具有不同的染色特性。
染色液
结晶紫染色液
用于细菌的简单染色。
革兰氏染色液
用于区分革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
简单染色的原理是利用染料对细菌的亲和力不同，将细菌染成不同的颜色，从而区分不同类型的细菌。
简单染色方法简便、快速，但染色效果不如革兰氏染色。
革兰氏染色原理
革兰氏染色是一种常用的细菌染色方法，通过使用结晶紫、碘液和酒精等染料对细菌进行染色。
革兰氏染色的原理是利用结晶紫和碘液对细菌的亲和力不同，将细菌染成紫色或红色，再通过脱色剂酒精将细菌脱色，最后用番红和碘液复染。
其他试剂和器材
显微镜
用于观察染色后的细菌。
酒精灯和接种环
用于加热染色液和接种细菌样本。
无菌水
用于清洗玻片和细菌样本。
载玻片和盖玻片
用于放置和观察细菌样本。
吸管和滴管
用于吸取染色液和其他试剂。
04 实验步骤
细菌的简单染色
01
02
03
涂片制作
将细菌均匀涂在载玻片上，晾干后进行染色。
染色
出细菌的细胞壁结构特点。

精华资料实验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色

精华资料实验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色实验二普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色和革兰氏染色普通光学显微镜的使用一、实验目的以染色玻片及活菌为例，熟练掌握显微镜油镜的使用方法。

二、显微镜油镜使用的原理1 普通光学显微镜的基本构造(1)光学部分: 接目镜、接物镜、照明装置(聚光镜、虹彩光圈、反光镜等)。

它使检视物放大, 造成物象。

(2)机械部分: 镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件。

它起着支持、调节、固定等作用。

2 显微镜的放大倍数和分辨率(1)放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数(2)显微镜的分辨率:表示显微镜辨析物体(两端)两点之间距离的能力，可用公式表示为:D=λ/2n?sin(α/2 )式中D:物镜分辨出物体两点间的最短距离。

λ:可见光的波长(平均0.55μm)n: 物镜和被检标本间介质的折射率。

a:镜口角(即入射角)。

3 油镜使用的原理油镜，即油浸接物镜。

当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。

若中间的介质是一层油(其折射率与玻片的相近)，则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。

三、实验材料1 显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸、盖玻片、接种环、酒精灯等。

2 细菌三种形态的玻片染色标本。

3 培养12-18h的枯草芽孢杆菌。

四、实验方法与步骤1 染色细菌玻片的油镜观查(1)用前检查:零件是否齐全，镜头是否清洁。

(2)调节光亮度。

(3)低倍镜观察:先粗调再微调至物象清晰。

(4)转入中倍、高倍观察，每一不只需调微调旋纽即可看到清晰的物象。

(5)油镜观察:高倍镜下找到清晰的物象后，旋转转换器，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。

6)绘出所观察到的细菌形态图像。

((7)、换片:另换新片观察，必须从(3)步开始操作。

实验二细菌的染色及形态观察

实验二细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。

2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。

3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。

二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。

由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。

用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。

发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。

染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。

酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。

三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。

2、酒精灯、接种环、载玻片。

3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。

四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。

1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。

2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。

3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。

4、染色玻片置于水平位置。

加石炭酸复红液于菌膜部位。

染1-2min。

5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。

6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。

7、镜检。

（二）革兰氏染色法步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗干燥镜检。