实验三讲义 细菌的染色及形态观察
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实验三 细菌的染色及形态观察
精品jin
2 实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理)
2.1 观察微生物细胞时，为什么要对微生物进行染色?革兰氏染 色与细菌细胞壁的结构与成分有什么关系？芽胞染色的机理是 什么？ 2.2 显微镜油镜为什么能增加照明亮度?，为什么能增加分辨率？
革兰氏染色法 芽胞染色法
Thanks！
3.2.2 初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1－2min 后倾去染液，水洗。（教师示范）
3.2.3 媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液 覆盖1 min，水洗。
3.2.4 脱色。滴加95%乙醇脱色20－30s ,立即水洗。
3.2.5 复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色 2 min，水洗，吸干水迹。
3.1.3 仪器：显微镜（MODEL E100） 3.1.4 其它物品：载玻片，镜油，二甲苯，擦镜纸，接种环，
酒精灯等。
3.2 方法 A. 革ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ氏染色法
3.2.1 制片。涂片:取一洁净载片，用记号笔从中分成两个区域， 在两区中央各滴一小滴生理盐水，按无菌操作要求用接种环取平 板菌落边缘的菌体少许，置于生理盐水中涂抹成约1.5 cm均匀薄 膜；干燥:自然干燥(或电吹风干燥)；固定：将涂面朝上，通过 火焰2－3次。（教师示范）
3.2 方法 B. 芽胞染色法
3.2.1 制片：按革兰氏染色方法操作。 （取菌落中央和边缘的菌体）
3.2.2 染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液3－5滴于涂菌 部位，置酒精灯火焰上加热5－8 min ，加热过程要随时滴加染色 液，防止煮沸或干涸。 3.2.3 水洗：载片冷却后水洗。
3.2.4 复染。用番红染色液染色1 min 。水洗，干燥。
3.2 方法 C. 细菌形态观察
低倍镜观察 4×，10 ×
高倍镜观察 （40×，找到合适观察目标，移至视野中心）
油镜观察（100×） 将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴 镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明 度，调节细调节器，使物像清晰。
绘图 在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像， 右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排 列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方 应标明图的名称、放大倍数、染色结果。
3 材料与方法
3.1 实验器材
3.1.1 药品：革兰氏染色液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、 95%乙醇、番红染液，无菌生理盐水。 芽胞染色液：孔雀绿染色液，番红染色液
3.1.2 菌种： Escherichia coli（大肠杆菌）、 Staphylococcus aureus（金黄色葡萄球菌）培养18-24 h菌落平板， Bacillus thuringiensis（苏云金芽孢杆菌）培养24 h菌落平板。
精品jin
2 实验原理(通过了解下列问题来掌握实验原理)
2.1 观察微生物细胞时，为什么要对微生物进行染色?革兰氏染 色与细菌细胞壁的结构与成分有什么关系？芽胞染色的机理是 什么？ 2.2 显微镜油镜为什么能增加照明亮度?，为什么能增加分辨率？
革兰氏染色法 芽胞染色法
Thanks！
3.2.2 初染。滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1－2min 后倾去染液，水洗。（教师示范）
3.2.3 媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液 覆盖1 min，水洗。
3.2.4 脱色。滴加95%乙醇脱色20－30s ,立即水洗。
3.2.5 复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色 2 min，水洗，吸干水迹。
3.1.3 仪器：显微镜（MODEL E100） 3.1.4 其它物品：载玻片，镜油，二甲苯，擦镜纸，接种环，
酒精灯等。
3.2 方法 A. 革ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ氏染色法
3.2.1 制片。涂片:取一洁净载片，用记号笔从中分成两个区域， 在两区中央各滴一小滴生理盐水，按无菌操作要求用接种环取平 板菌落边缘的菌体少许，置于生理盐水中涂抹成约1.5 cm均匀薄 膜；干燥:自然干燥(或电吹风干燥)；固定：将涂面朝上，通过 火焰2－3次。（教师示范）
3.2 方法 B. 芽胞染色法
3.2.1 制片：按革兰氏染色方法操作。 （取菌落中央和边缘的菌体）
3.2.2 染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液3－5滴于涂菌 部位，置酒精灯火焰上加热5－8 min ，加热过程要随时滴加染色 液，防止煮沸或干涸。 3.2.3 水洗：载片冷却后水洗。
3.2.4 复染。用番红染色液染色1 min 。水洗，干燥。
3.2 方法 C. 细菌形态观察
低倍镜观察 4×，10 ×
高倍镜观察 （40×，找到合适观察目标，移至视野中心）
油镜观察（100×） 将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴 镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明 度，调节细调节器，使物像清晰。
绘图 在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像， 右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排 列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方 应标明图的名称、放大倍数、染色结果。
3 材料与方法
3.1 实验器材
3.1.1 药品：革兰氏染色液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、 95%乙醇、番红染液，无菌生理盐水。 芽胞染色液：孔雀绿染色液，番红染色液
3.1.2 菌种： Escherichia coli（大肠杆菌）、 Staphylococcus aureus（金黄色葡萄球菌）培养18-24 h菌落平板， Bacillus thuringiensis（苏云金芽孢杆菌）培养24 h菌落平板。