细菌的革兰氏染色法及形态观察
细菌的形态构造和观察--项目实训：革兰氏染色法
脱色：95%乙醇脱色20-30s, 至乙醇液不呈紫色
复染：番红复染1min,用水冲 洗
干燥后镜检
八、项目实训：革兰氏染色法
３ 染色结果
八、项目实训：革兰氏染色法
４ 染色影响因素
➢ 掌握好乙醇脱色程度，若脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时， 阴性菌被误染为阳性菌；
➢ 菌龄也影响染色结果，若细菌培养时间太长，已死亡或自溶，导致细胞壁通透性 的改变而呈现假阴性反应。
Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂 量高，乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁， 酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
项目一 细菌的构造和形态观察
八、项目实训：革兰氏染色法
１ 基本原理
八、项目实训：革兰氏染色法
２ 操作步骤
涂片、干燥、固定
初染：草酸铵结晶紫染色 1min,用水冲洗
微生物学基础
原核微生物的构造和形态观察
项目一 细菌菌鉴定的重要方法，可将全部细菌分成革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两大类； ➢ 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁化学组成和结构不同： G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因 脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能 被酒精脱色，仍呈紫色。
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查染色方法
细菌形态学检查是微生物学中非常重要的一部分，它可以帮助
我们了解细菌的形态特征，有助于诊断和治疗疾病。
在细菌形态学
检查中，染色方法是一项关键的技术，它可以使细菌在显微镜下更
容易观察和分辨。
以下是几种常用的细菌染色方法：
1. 革兰氏染色法，革兰氏染色法是最常用的细菌染色方法之一。
它可以将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
在这种染色方法中，先用紫普鲁士蓝染色，然后用碘液固定，再用酒精脱色，最后
用洋红染色。
革兰氏阳性细菌会呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性细菌
则会呈粉红色。
2. 厌氧染色法，厌氧染色法是专门用于观察厌氧菌的染色方法。
它与革兰氏染色法类似，但在脱色步骤中使用氢氟酸而不是酒精，
这样可以更好地保留厌氧菌的形态特征。
3. 阳性染色法，阳性染色法用于观察细菌的细胞壁结构和形态
特征。
在这种染色方法中，通常使用甲基蓝或结晶紫等染料，可以
使细菌呈现出蓝色或紫色。
4. 阴性染色法，阴性染色法也是用于观察细菌细胞壁结构和形态特征的一种方法。
与阳性染色法不同的是，阴性染色法使用印度墨染料，可以使细菌呈现出浅红色或粉红色。
除了上述列举的染色方法外，还有许多其他特殊的染色方法，如荧光染色、折射染色等，它们都可以根据需要来选择使用。
细菌形态学检查染色方法的选择取决于所研究的细菌种类、研究的目的以及实验室的设备和条件等因素。
希望这些信息可以帮助你更好地了解细菌形态学检查染色方法。
实验三讲义 细菌的染色及形态观察
3.2.3 媒染。先用卢戈氏碘液冲去载片上残留水迹，再用碘液 覆盖1 min，水洗。
3.2.4 脱色。滴加95%乙醇脱色20－30s ,立即水洗。
3.2.5 复染。用吸水纸吸去载片上残留水，用番红复染液染色 2 min，水洗，吸干水迹。
3.2 方法 C. 细菌形态观察
低倍镜观察 4×，10 ×
高倍镜观察 （40×，找到合适观察目标，移至视野中心）
油镜观察（100×） 将高倍镜转离工作位置，在要观察的涂菌部位滴加一滴 镜油，将油镜转至工作位置，聚光器升至最高，调节照明 度，调节细调节器，使物像清晰。
绘图 在所观察的图像中选取典型部位绘图，要求左眼观察图像， 右眼观察绘图；球菌应注意长度与直径之比，球菌应注意排 列状况；有芽胞的细菌应标记芽胞和营养体的位置；图下方 应标明图的名称、放大倍数、染色结果。
3 材料与方法
3.1 实验器材
3.1.1 药品：革兰氏染色液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、 95%乙醇、番红染液，无菌生理盐水。 芽胞染色液：孔雀绿染色液，番红染色液
3.1.2 菌种： Escherichia coli（大肠杆菌）、 Staphylococcus aureus（金黄色葡萄球菌）培养18-24 h菌落平板， Bacillus thuringiensis（苏云金芽孢杆菌）培养24 h菌落平板。
3.2 方法 B. 芽胞染色法
3.2.1 制片：按革兰氏染色方法操作。 （取菌落中央和边缘的菌体）
3.2.2 染色。用试管夹夹住载片，滴加孔雀绿染液3－5滴于涂菌 部位，置酒精灯火焰上加热5－8 min ，加热过程要随时滴加染色 液，防止煮沸或干涸。 3.2.3 水洗：载片冷却后水洗。
细菌形态结构观察——简单染色革兰氏染色
（1） 为什么必须用培养24 h以内的菌体进行革兰氏 染色？
（2） 要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些 操作？哪一步是关键步骤？为什么？
（3） 当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操 作正确，结果可靠？
） “和而不同”，多元发展。近年来 ，中医 药在防 治非典 、禽流 感和艾 滋病方 面发挥 的独特 作用也 证实了 二者的 有机结 合，具 有肯定 的临床 疗效。 编辑本段东西方医学交融（df高血压958心脏 病983u6糖尿 病87fr）
1、简单染色法原理 这是最基本的染色方法，由于细性燃料如美蓝、碱性 复红、结晶紫、孔雀绿、蕃红等进行染色。这类染料解 离后，染料离子带正电荷，故使细菌着色。
2、革兰氏染色法原理 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的重要鉴别染色
法，通过此法染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+） 和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染色过程所用四种不同溶液的作用：
（5） 复染 蕃红染液复染1 min，水洗。 （6） 吸干并镜检 若研究工作中要确证未知菌的革兰氏反应 时，则需同时用已知菌进行染色作为对照。
五、实验结果
（1） 绘图：画出大肠杆菌、金黄色葡萄球菌的细胞形 态图。 （2） 记录革兰氏染色结果；分辨出革兰氏阳性菌或革 兰氏阴性菌。如果染色结果不理想，请分析原因。
（1） 碱性染料 草酸铵结晶紫液。 （2） 媒染剂 碘液，其作用是增强染料与菌体的亲和力， 加强染料与细胞的结合。
（3） 脱色剂 乙醇将染料溶解，使被染色的细胞脱色。 利用不同细菌对染料脱色的难易程度不同，而加以区分。
（4） 复染液 蕃红溶液，目的是使经脱色的细菌重新染 上另一种颜色，以便与未脱色菌进行比较。
（2） 染色 用草酸铵结晶紫染液染色1 min，用水冲洗。 （3） 媒染 滴加革兰氏碘液冲去残水，并用碘液覆盖1 min， 用水冲去碘液。
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
印片法：取一洁净载玻片置于火焰上微热后，盖在菌苔
上，轻轻按压，使培养物（气丝、孢子丝或孢固定。
上：孢子丝
右上、右下：基内菌丝 和气生菌丝
2. 结果 革蓝氏染色阳性：深紫色 革蓝氏染色阴性：浅红色
3. 放线菌的观察
基内菌丝（substrate mycelium）：也称营养菌丝，生长于培养基内，主
要功能是吸收营养物质和排泄代谢废物，营养菌丝一般无隔膜，内含有许多核质体， 直径约为0.2-0.8μm，但长度差别很大。色浅、较细。
气生菌丝（aerial mycelium）：营养菌丝发育到一定时期，长出培养基外伸
实验二、细菌革蓝氏染色、放线菌形态观察
基本概念： 革蓝氏染色（Gram staining） 革蓝氏染色阳性（Gram Positive） 革蓝氏染色阴性（Gram Negative） 基内菌丝（substrate mycelium） 气生菌丝（aerial mycelium） 孢子丝（sporophore）
放线菌的基本特点
¾分枝丝状体，原核微生物 ¾革蓝氏染色阳性反应 ¾不运动 ¾大部分腐生菌，少数寄生菌，也有致病菌 ¾ 抗生素的主要产生菌 ¾ 许多酶和维生素的产生菌 ¾甾体转化、石油脱蜡、污水处理 ¾某些与植物共生固氮
放线菌的菌丝
1、营养菌丝 匍匐生长于培养基内，吸收营养，也称基内菌丝。一般无
隔膜，直径0.2-0.8 μm，长度差别很大，有的可产生色素。
[实验目的]
1. 学习细菌革兰氏染色原理和方法 2. 学习放线菌培养观察方法 3. 观察细菌形态及运动（活体观察）
[实验材料] 1. 菌种
细菌的革兰氏染色法实验报告
细菌的革兰氏染色法实验报告摘要：革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法。
通过本实验，我们成功地利用革兰氏染色法对不同类型的细菌进行了染色，并观察到了细菌在显微镜下的形态特征。
实验结果表明，革兰氏染色法能够有效地将细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类，为细菌的鉴定提供了重要的依据。
引言：细菌是一类微生物，广泛存在于我们周围的环境中。
了解细菌的分类和鉴定对于研究细菌的生理特性、病原性以及药物敏感性具有重要意义。
革兰氏染色法是一种常用的细菌分类和鉴定方法，通过染色后细菌在显微镜下的形态特征，可以将其分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两类。
材料与方法：1. 细菌培养物：本实验选择了两种细菌培养物，分别是革兰氏阳性菌A和革兰氏阴性菌B。
2. 革兰氏染色试剂：结晶紫、碘液、酒精、脱色剂、苏木精。
3. 显微镜：用于观察染色后的细菌样品。
实验步骤：1. 取两株细菌培养物，分别进行涂片制备。
2. 将制备好的涂片用结晶紫染色液浸泡5分钟，然后用蒸馏水冲洗。
3. 加入碘液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
4. 用酒精滴加在涂片上，使其脱色，然后用蒸馏水冲洗。
5. 加入脱色剂浸泡30秒至1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
6. 将涂片用苏木精染色液浸泡1分钟，然后用蒸馏水冲洗。
7. 涂片晾干后，放入显微镜下观察。
结果与讨论：经过革兰氏染色法染色后，我们观察到了明显的差异。
革兰氏阳性菌A呈紫色，而革兰氏阴性菌B呈红色。
根据革兰氏染色法的原理，我们可以解释这种差异。
革兰氏染色法中，结晶紫染色液首先染色细菌细胞的细胞壁。
革兰氏阳性菌的细胞壁含有较多的胞外多糖和胞外蛋白质，能够吸附结晶紫，形成紫色。
而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，胞外多糖和胞外蛋白质含量较少，无法吸附结晶紫，因此在后续的染色步骤中无法保留紫色，最终呈现红色。
革兰氏染色法的原理是通过染色后细菌在显微镜下的形态特征来进行分类和鉴定。
革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，呈紫色，在显微镜下观察到细胞形态较大、圆润。
实验二细菌革兰氏染色
（一）革兰氏染色 涂片—风干—固定—初染—水洗—媒染—水洗—
脱色—水洗—复染—水洗—干燥—镜检
菌悬液
涂片
干燥
滴加无 菌水
取菌苔
涂片
固定
Smear preparation
Heat fixing
Staining
crystal violet stain
wash with water
Counterstain with Safranin
3、用乙醇或丙酮冲洗进行脱色。在经历脱色后 仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细 菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细 胞呈无色。
4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对 涂片进行复染。例如沙黄，它使原来无色的 革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革 兰氏阳性细菌继续保持深紫色
成分
肽聚糖 磷壁酸 类脂质 蛋白质源自占细胞壁干重的%革兰氏阳性细菌
革兰氏阴性细菌
含量很高（50~90）
含量很低（~10）
含量较高（＜50）
无
一般无（＜2）
含量较高（~20）
无
含量较高
三、实验材料
1、菌种：大肠杆菌（E.C）、枯草杆菌（B.S） 2、染料：结晶紫、复红、碘液等 3、材料：95%酒精等 4、标本片：芽孢、荚膜、孢子丝
四、实验方法
注意事项：
（1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀， 固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
（2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色 时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革 兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。
（3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。 （4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。
细菌染色和涂片观察的方法
细菌染色和涂片观察的方法细菌的染色和涂片观察是微生物学中非常重要的实验方法，可以帮助我们识别和研究细菌的形态、结构和特征。
下面将详细介绍细菌染色和涂片观察的方法。
一、细菌染色方法：1.革兰氏染色法：革兰氏染色法是细菌染色中最常用的方法之一、通过该方法，细菌可以被分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。
步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火炬预热玻璃片，使玻璃片夹持菌液返燃。
(3)在火焰中反复将菌液加热，使其彻底干燥。
(4)将干燥的玻片放在青霉素醛固定液中，固定细菌片。
(5)用生理盐水将玻璃片在微生物操作台上反复冲洗，去除青霉素醛固定液。
(6)将玻璃片放在碘酒液中浸泡3-5分钟，使菌液变成深度蓝黑色。
(7)洗净玻片，以去除碘酒液。
(8)将玻片放入95%乙醇中，进行除膜操作，1-2秒钟后取出。
(9)玻片反复在试管中加乙醇，直至洗涤液基本为无色，然后将玻片放入流动水中漂洗。
(10)用草绿素溶液染色，将玻片浸泡5分钟。
(11)用水漂洗片面，直至玻片颜色基本不变。
(12)用纤维纸轻轻拍去多余的水分，放在显微镜载物玻片上中间，覆盖一层玻璃标本纸，压平，尽量避免产生气泡。
(13)利用显微镜观察染色结果，革兰氏阳性菌为紫色或紫蓝色，革兰氏阴性菌为粉红色。
2.肥湖水染色法：肥湖水染色法也是常用的细菌染色法之一，可以用来观察鞭毛、纤毛等细菌结构。
步骤：(1)取一块玻璃片，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰热熔玻璃片，使其保持与菌液接触状态，避免菌液干燥。
(3)将玻璃片放在肥湖水溶液中浸泡2-3分钟。
(4)用生理盐水将玻璃片反复冲洗，去除肥湖水溶液。
(5)用希森润湿法将玻璃片上覆盖一层希森润湿剂。
(6)利用显微镜观察染色结果，鞭毛呈现鲜绿色，纤毛呈现暗蓝色。
二、涂片观察方法：1.涂片制备：涂片制备是观察细菌形态和结构最常用的方法之一、涂片制备的步骤如下：(1)在无菌条件下，将细菌涂布于玻璃片上。
(2)用火焰或紫外线灭菌，使其迅速晾干。
实验4-革兰氏染色
实验四细菌的革兰氏染色形态观察，平板及斜面菌落观察一、目的要求学习并初步掌握细菌的革兰氏染色方法；巩固革兰氏染色的原理及G-及G+细菌细胞壁结构的特点；了解革兰氏染色在细菌分类鉴定上的重要性；掌握细菌菌落与菌苔的主要特征。
二、实验原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色法的主要步骤是先用结晶紫初染；再加媒染剂--碘液，以增加染料与细胞间的亲和力，使结晶紫和碘在细胞膜上形成分子量较大的复合物；然后用脱色剂(乙醇或丙酮)脱色；最后用蕃红复染。
凡细菌不被脱色而保留初染剂的颜色(紫色)者为革兰氏阳性菌，如被脱色后又染上复染剂的颜色(红色)者为革兰氏阴性菌。
该染色法所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
三、实验器材1、菌种牛肉膏琼脂斜面28℃培养24h的大肠杆菌(Escherichia coli)斜面菌种，牛肉膏琼脂斜面28℃培养16h的枯草杆菌(Bacillus subtilis)斜面菌种；2、仪器显微镜；3、材料载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。
4、染料草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液。
四、操作步骤1、涂片在一张载玻片上加两滴蒸馏水后，分别涂布枯草芽孢杆菌和大肠杆菌(注意涂片切不可过于浓厚)。
2、固定将制成的涂片干燥固定，固定时通过火焰1-2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。
简述菌株革兰氏染色后的观察结果
简述菌株革兰氏染色后的观察结果
在微生物学领域中，革兰氏染色是一种常用的染色技术，通过染色可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。
革兰氏染色的原理是利用细菌细胞壁的不同结构特点来区分不同类型的细菌。
在进行革兰氏染色后，观察结果通常可以分为以下几个方面：
1. 革兰氏阳性菌的观察结果：
革兰氏阳性菌在染色后呈紫色或紫蓝色，这是因为它们细胞壁含有较多的革兰氏染色阳性物质，如壁多糖和蛋白多糖。
在显微镜下观察，可以看到这些菌细胞呈现出紫色或紫蓝色的颜色，通常形态较为规则，细胞壁较厚，且在细胞壁内外均有革兰氏阳性物质分布。
2. 革兰氏阴性菌的观察结果：
革兰氏阴性菌在染色后呈粉红色或粉红红色，这是因为它们细胞壁中的革兰氏染色阴性物质较多，如脂多糖。
在显微镜下观察，可以看到这些菌细胞呈现出粉红色或粉红红色的颜色，通常形态较为不规则，细胞壁较薄，且在细胞壁内外只有少量的革兰氏阴性物质分布。
3. 其他观察结果：
除了革兰氏阳性和阴性菌外，有时在染色后还会观察到一些特殊的细菌。
比如，有些细菌在革兰氏染色中呈现出不规则的颜色，可能是由于其细胞壁结构与传统的革兰氏阳性或阴性菌有所不同。
此时
需要进一步进行细菌鉴定，以确定其真实的细菌类型。
总的来说，革兰氏染色是一种简单而有效的细菌分类方法，通过观察染色后的细菌颜色和形态特征，可以初步判断细菌的类型。
然而，在实际操作中，还需要结合其他鉴定方法和技术，如生化试验、分子生物学方法等，来对细菌进行更准确的鉴定和分类。
革兰氏染色的观察结果只是鉴定细菌的第一步，只有综合多种方法才能准确判断细菌的种类和特性。
实验细菌的革兰氏染色
结果判断的注意事项
观察时需注意染色结果是否清晰、准确，避免因操作不当或染色时间过长导致颜色 过深或过浅。
对于某些特殊细菌，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌等，革兰氏染色结果可能与其他 细菌不同，需结合其他实验结果进行鉴别。
学习革兰氏染色的操作步骤
结晶紫染色
涂片上滴加结晶紫染液，染色 1-2分钟，水洗去多余染液。
复染
涂片上滴加复染液，染色30秒 左右，水洗去多余复染液。
涂片
将待测细菌均匀涂布在载玻片 上。
脱色
涂片上滴加脱色液，脱色30秒 左右，水洗去多余脱色液。
干燥
将涂片自然干燥或用吸水纸吸 干。
掌握革兰氏染色的结果判断
据。
实验中遇到的问题及解决方案
问题
染色过程中出现颜色不均 的现象。
问题
部分细菌在染色后形态不 清晰。
问题
部分细菌在染色过程中脱 落。
解决方案
调整染色时间或染色液的 浓度，确保染色均匀。
解决方案
优化制片步骤，确保细菌 均匀分布在载玻片上，以
便观察。
解决方案
增加固定步骤，使用更好 的固定剂，以保持细菌在
在观察革兰氏染色结果时，需注意区分污染菌和实验菌，避免误判。
06
实验结论
实验总结
实验过程顺利，染色效果明显， 成功地进行了细菌的革兰氏染色。
通过实验，我们掌握了革兰氏染 色的基本原理和操作方法，了解 了不同细菌在染色后的形态特征。
实验中，我们观察到了革兰氏阳 性菌和阴性菌在染色后的明显差 异，为后续的细菌鉴定提供了依
革兰氏染色的重要性
细菌的革兰氏染色法及形态观察
细菌的革兰氏染色法及形态观察一、实验目的1．了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
2．学习掌握革兰氏染色技术，巩固学习光学显微镜油镜的使用方法。
二、基本原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色属于最重要的鉴别染色。
一般认为革兰氏染色结果的主要原因是由于这两类细菌的细胞壁的结构和化学组成不同。
革兰氏阳性菌细胞壁较厚（20-80nm)，主要成分为肽聚糖，网状结构紧密。
而革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄（2-3nm)，主要成分是脂蛋白和脂多糖。
细菌经过初染和媒染，在细胞内形成深紫色的结晶紫-碘复合物，当用酒精脱色时细胞壁脱水，阳性细菌细胞壁的肽聚糖层网状结构孔径收缩以至关闭，阻止不溶性复合物结晶紫-碘的逸出，这样使菌体呈蓝紫色。
阴性菌脂类物质溶解，结晶紫－碘复合物随之被洗脱出，用复染剂复染后菌体呈复染后的红色。
三、实验器材1．菌种大肠杆菌、藤黄八叠球菌约24小时营养琼脂斜面培养物。
2．仪器普通生物显微镜显微镜3．材料载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、滤纸、酒精灯、接种环等4．染料草酸钱结晶紫染色液、路哥氏（Lugol）碘液、95％乙醇、0.5 %番红染色液四、实验流程涂片→干燥→固定→初染1min→水洗→媒染1min→水洗→脱色10-30s→水洗→复染1min→水洗→滤纸吸干→镜检。
五、操作步骤1．涂片取洁净的载片一张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位滴加一小滴生理盐水，用接种环在火焰旁从斜面上挑取少量菌体与水混合。
烧去环上多余的菌体后，再用接种环将菌体涂成直径1cm 的均匀薄层，以淡淡的乳白色为宜。
制片是染色的关键，载片要洁净，不得玷污油脂，菌体才能徐布均匀。
注意初次涂片，取菌量不应过大，以免造成菌体重叠。
2．干燥涂布后，待其自然干燥或在酒精灯上方稍微加热，切勿靠近火焰。
实验三 细菌形态观察和革兰氏染色技术
⑥ 复染：
已经脱色处理的细胞或其结构常以复染液作复染 以便于观察。 复染液与初染液的颜色不同而成鲜明对比，所以 复染也称为对比染色。 复染液不宜太强，以免掩盖初染的颜色而失去对 比作用。
用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力，
即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。
不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不
能，脱色剂常用95％的酒精。
复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染 的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未 被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。
三、结果:
② 固定：
染色前必须先行固定。其目的在于凝固细胞质和 其它细胞结构成分而杀死细菌；使菌体粘附于玻 片上以及改变细菌对染料的通透性（因活菌通常 不易使染料透入细胞内）。
固定的方法一般采用火焰加热法，在特殊目的时 也可用冷冻干燥法或化学法如醇、酸、氯化高汞 、重金属盐或氧化剂等进行固定。
③ 媒染：
① 涂片制备：
随标本的种类而略有不同。
• 若为液体培养液，亦可直接涂于载玻片上；
• 若为固体培养基上的细菌，则先取一接种环生理盐水于载玻片中 央，然后从培养基上取菌少许，在盐水中研磨均匀，使呈轻度乳 浊，以接种环扩成1cm2或2份硬币大小的涂面。
在室温下自然干燥或放在火焰上方的热空气中慢 慢烘干。但切忌紧靠火焰烤干。
⑤ 脱色：
脱色：是使被染物脱去已染上的颜色。脱色的目 的是观察细菌与染料结合的稳定程度，故可作为 鉴别染色之用。
凡具有脱色作用的化学试剂称脱色剂。脱色剂或 呈溶媒作用，如醇类、丙酮等；或能影响蛋白质 的电离程度，改变其电荷性质或数量，因而影响 细菌与染料的结合程度，如酸类能减少细菌的负 电荷，故可作碱性染料的脱色剂。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的形态特征，了解其细胞壁的结构差异。
实验材料和方法：材料，革兰氏阳性菌（如葡萄球菌）、革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）、墨汁、碘酒、95%乙醇、碘液、革兰染色试剂盒、显微镜等。
方法：1. 取一片清洁的玻璃片，用酒精棉球擦拭干净，标记好样本编号。
2. 取一根无菌的接种环，在无菌条件下取一部分革兰氏阳性菌涂抹于玻璃片的一侧，用另一根无菌接种环取一部分革兰氏阴性菌涂抹于玻璃片的另一侧。
3. 将玻璃片放在通风处晾干，然后用火烧消毒。
4. 将墨汁涂抹在细菌上，静置1分钟后用水冲洗干净。
5. 用碘酒浸渍1分钟，倒去碘酒，用95%乙醇洗涤10秒钟，然后用水冲洗干净。
6. 最后用碘液浸染30秒钟，然后用水冲洗干净，晾干后即可进行观察。
实验结果：观察革兰氏阳性菌在显微镜下呈紫色，球状或椭圆形，细胞壁较厚，没有外膜；而革兰氏阴性菌在显微镜下呈红色，细胞形态多样，细胞壁较薄，有外膜。
两者在染色后呈现出明显的形态差异。
实验讨论：革兰氏染色是细菌学中的一种重要染色方法，通过染色后的观察可以初步判断细菌的分类，对于细菌的形态特征有着重要的参考价值。
革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后呈现出不同的颜色和形态特征，这与其细胞壁的结构有关。
革兰氏阳性菌的细胞壁主要由大量的肽聚糖组成，而革兰氏阴性菌的细胞壁中含有较多的脂多糖，这也是它们在染色后呈现不同颜色的原因。
结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色实验，并观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。
革兰氏染色是一种简单而有效的细菌分类方法，可以帮助我们初步了解细菌的结构和分类。
对于进一步的细菌鉴定和分类有着重要的意义。
实验注意事项：1. 在进行实验前要做好无菌操作，避免细菌的外源污染。
2. 实验中的染色试剂要注意保存，避免受到光照和高温影响。
3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的放大倍数，以便更清晰地观察细菌的形态特征。
细菌的革兰氏染色实验报告
细菌的革兰氏染色实验报告实验名称：细菌的革兰氏染色实验
实验目的：通过细胞壁结构的不同，观察细菌的革兰氏反应，了解细菌的形态特征及分类情况。
实验原理：细菌细胞壁的结构不同，根据革兰氏染色方法可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，其中革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，通过观察染色后的细菌颜色能够大致了解细菌的分类情况。
实验材料：
1. 革兰氏染色试剂（含靛派液、碘酒、脱色剂、碱性洗涤液）
2. 外部消毒液、无菌采样棒、无菌平板
3. 革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）
4. 革兰氏阴性菌（如大肠杆菌）
实验步骤：
1. 将需要实验的细菌分别接种于无菌平板上。
2. 用外部消毒液将无菌采样棒消毒并晾干。
3 .取一个无菌采样棒分别在革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的菌落上轻轻刮取，避免沾到无关菌种。
4. 将采样棒沾有菌落的一端放入一滴靛派液中浸润，再在菌液上加2-3滴碘酒，静置1分钟，使靛派液和碘酒渗透到其内部。
5. 倒掉靛派液和碘酒，用脱色剂加水洗涤液一一洗去染色剂，每次洗涤2-3秒，规定洗4次，每次可以轻轻甩去液体。
6. 最后观察染色后的细菌颜色，革兰氏阳性菌为紫色，革兰氏阴性菌为红色。
实验结果：本次实验观察到革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）染后呈紫色，革兰氏阴性菌（大肠杆菌）染后呈红色。
实验结论：通过细菌的革兰氏染色实验，发现革兰氏阳性菌在染色后呈紫色，革兰氏阴性菌在染色后呈红色，这种染色方法为快速鉴别大肠杆菌等革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌提供了简单、快捷的方法。
实验二细菌的染色及形态观察
实验二细菌的染色及形态观察一、目的要求1、了解细菌染色的基本原理。
2、掌握细菌的简单染、革兰氏染色及其他染色方法。
3、观察和识别细菌的形态及细菌细胞的特殊结构。
二、实验说明细菌菌体微小、而且折光率低，在显微镜下特别是在油浸物镜下几乎与背景无反差，很难看清楚，如将其染色，使折光率增大，便容易观察。
由于菌体的性质及各部分对某些染料的着色性不同，因此可以利用不同的染色方法来区别不同的细菌及其结构。
用于细菌染色的染色剂是苯环上含有发色基团和助色基团的化合物。
发色基团使化合物本身具有染色之能力，助色基团有电离特性，可以于被染物结合，使被染物着色。
染色剂有三种：酸性染色剂（电离后分子带负电荷）；碱性染色剂（电离后分子带电荷）；复合染色剂（在电离后分子不带电荷，故也称为中性染色剂）。
酸性染色剂主要用于染细胞质；碱性染色剂主要用于染核和异染颗粒等细胞结构；复合染色剂主要用来染螺旋体和立克次氏体。
三、实验材料1、显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸。
2、酒精灯、接种环、载玻片。
3、石炭酸复红染色液、革兰氏染色液、荚膜染色液、鞭毛染色液（配方见附录）。
四、方法步骤（一）简单染色法步骤：涂片干燥固定染色水洗干燥镜检。
1、涂片在干净的载玻片中央加一滴蒸馏水，以无菌操作法，从斜面上挑取少量菌种，在载玻片上和水混合后，涂成一均匀薄层。
2、干燥固定涂片让其在空气中自然干燥，有时为使其干燥得快点，也可在酒精灯上加温，但勿贤紧靠火焰。
3、固定待涂片干燥徨，手持载玻片一端，有菌膜的一面向上，在酒精灯火焰上通过几次（用手背触载玻片背面，以不烫手为宜），待冷却后，再加染料。
4、染色玻片置于水平位置。
加石炭酸复红液于菌膜部位。
染1-2min。
5、水洗倾去染液，斜置玻片，用很细水流的自来水冲洗（切勿使水流直接冲刷在菌膜处），直至洗下水呈无色为止。
6、干燥自然干燥或用吸水纸吸干。
7、镜检。
（二）革兰氏染色法步骤：涂片干燥固定结晶紫染色水洗吸干 95%酒精脱色水洗吸干蕃红复染水洗干燥镜检。
实验三 微生物形态观察及格兰仕染色
七、思考题
1．简述平板上你分离得到的微生物的菌落特征，包括菌落的大小、颜色、隆起程度等，并据此初步区别出大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两类微生物。
2.简述曲霉、青霉、根霉和毛霉的菌落颜色及特征。
3.绘制曲霉、青霉、根霉和毛霉的个体形态图，并注明各部位名称。
一般新培养酵母的死亡率应在1%以下，生产上使用的酵母死亡率在3%以下。
2.显微形态检查
载玻片上放一小滴蒸馏水，挑酵母培养物少许，盖上盖玻片，在高倍镜下观察。优良健壮的酵母菌，应形态整齐均匀，表面平滑，细胞质透明均一。年幼健壮的酵母细胞内部充满细胞质；老熟的细胞出现液泡，呈灰色，折光性较强；衰老的细胞中液泡多，颗粒性贮藏物多，折光性强。
3. 死亡率检查
方法同上，可用水浸片法，也可用血球计数板法。酵母细胞用0.025%美兰水溶液染色后，由于活细胞具有脱氢酶活力，可将兰色的美兰还原成无色的美白，因此染不上颜色，而死细胞则被染上兰色。
(1) 菌丝有隔或无隔；
(2) 无性繁殖的方式；
(3) 有性繁殖的方式。
8.你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌?
9.你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？
10.进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题？
参考文献
1.周德庆. 微生物学实验教程-(第2版).北京：高等教育出版社，2006
2.张玲. 微生物学实验指导. 北京：清华大学出版社，2007
3.夏立梨. 微生物学实验指导. 北京：高等教育出版社，1999
一、实验目的
三、实验材料
酵母培养物。
四、仪器设备及用具
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细菌的革兰氏染色法及形态观察
一、实验目的
1．了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。
2．学习掌握革兰氏染色技术，巩固学习光学显微镜油镜的使用方法。
二、基本原理
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C．Gram所创立的。
革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别性染色法。
革兰氏染色属于最重要的鉴别染色。
一般认为革兰氏染色结果的主要原因是由于这两类细菌的细胞壁的结构和化学组成不同。
革兰氏阳性菌细胞壁较厚（20-80nm)，主要成分为肽聚糖，网状结构紧密。
而革兰氏阴性菌细胞壁肽聚糖层较薄（2-3nm)，主要成分是脂蛋白和脂多糖。
细菌经过初染和媒染，在细胞内形成深紫色的结晶紫-碘复合物，当用酒精脱色时细胞壁脱水，阳性细菌细胞壁的肽聚糖层网状结构孔径收缩以至关闭，阻止不溶性复合物结晶紫-碘的逸出，这样使菌体呈蓝紫色。
阴性菌脂类物质溶解，结晶紫－碘复合物随之被洗脱出，用复染剂复染后菌体呈复染后的红色。
三、实验器材
1．菌种大肠杆菌、藤黄八叠球菌约24小时营养琼脂斜面培养物。
2．仪器普通生物显微镜显微镜
3．材料载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、滤纸、酒精灯、接种环等
4．染料草酸钱结晶紫染色液、路哥氏（Lugol）碘液、95％乙醇、0.5 %番红染色液
四、实验流程
涂片→干燥→固定→初染1min→水洗→媒染1min→水洗→脱色10-30s→水洗→复染1min→水洗→滤纸吸干→镜检。
五、操作步骤
1．涂片
取洁净的载片一张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位滴加一小滴生理盐水，用接种环在火焰旁从斜面上挑取少量菌体与水混合。
烧去环上多余的菌体后，再用接种环将菌体涂成直径1cm 的均匀薄层，以淡淡的乳白色为宜。
制片是染色的关键，载片要洁净，不得玷污油脂，菌体才能徐布均匀。
注意初次涂片，取菌量不应过大，以免造成菌体重叠。
2．干燥
涂布后，待其自然干燥或在酒精灯上方稍微加热，切勿靠近火焰。
3．固定
将已干燥好的涂片标本向上，在微火上以钟摆速度通过3-4次进行固定。
固定的作用为：a.杀死细菌；b.使菌体蛋白质凝固，菌体牢固粘附于载片上，染色时不被染液或水冲掉；c.增加菌体对染料的结合力，使涂片易着色。
4．染色
a．初染在涂片处加草酸按结晶紫染色液（加量以盖满菌膜为度），染色1min。
倾去染色液，用自来水细水小心地冲洗至洗出液为无色，水洗时水流不要直接冲洗涂面，以免水流过大将菌体冲掉。
b．媒染滴加（Lugol）碘液，染lmin，水洗。
c．脱色用滤纸吸去残水，滴加95％乙醇，轻轻摆动玻片脱色10-30s立即水洗，以终止脱色。
d．复染滴加番红，染色1min，水洗后晾干，也可以用吸水纸轻轻吸干。
e．镜检干燥后，置油镜下观察。
被染成紫色者即为（G+)；被染成红色者是革兰氏阴性菌（G-）。
六、注意事项
1.涂片不宜过厚，否则宜脱色不完全造成假阳性。
2.火焰固定不宜过热，以玻片不烫手为宜，否则菌体细胞容易变形。
3.滴加染色液和酒精时一定要覆盖整个菌膜，否则部分菌膜未受处理，亦可造成假象。
4.乙醇脱色是关键，如脱色过度，则G+菌被误染成G-菌；脱色不足，G-菌被误染成G+菌。
5.染色要用处于活跃生长期的幼龄培养物，如菌龄过长，死亡或细胞壁受损的G+菌也会成阴性反应。
七、实验结果
根据观察结果，绘出两种细菌的形态图。
八、混合方式的革兰氏染色（了解）
对于初学染色的同学，用于经验不足，特别是脱色掌握不好，往往容易将革兰氏阳性菌误认为革兰氏阴性菌，为了避免出现差错，可以将菌体与典型的革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌混合后染色，再观察结果，就可以避免错误。
在进行这个实验中，选用的用来混合的菌种应该在形态上与未知菌株有较大差异，而且实验者对选用的对照菌种的形态比较熟悉。
九、思考题
1. 为什么必须用培养24h以内的菌进行革兰氏染色？
2. 要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？哪一步是关键？为什么？。