实验一__显微镜的使用及细菌的简单染色法讲解
微生物学实验教程
微生物学实验内容实验一 . 显微镜的使用及细菌的简单染色实验二 . 细菌的革兰氏染色实验三 . 酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验四 . 酵母菌的数量测定实验五 . 酵母菌的大小测定实验六 . 微生物菌落的观察实验实验七 . 霉菌的形态观察实验八 . 培养基的制备与灭菌实验九 . 放线菌的形态及菌落特征的观察实验十 . 微生物的纯种分离培养实验一 . 普通光学显微镜的使用一、目的要求1. 学习并掌握油镜的原理和使用方法。
2. 复习普通台式显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。
二 . 显微镜的基本结构及油镜的工作原理现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像,故又常被称为复式显微镜。
它们由机械装置和光学系统两大部分组成。
在显微镜的光学系统中,物镜的性能最为关键,它直接影响着显微镜的分辨率。
而在普通光学显微镜通常配置的几种物镜中,油镜的放大倍数最大,对微生物学研究最为重要。
与其他物镜相比,油镜的使用比较特殊,需在载玻片与镜头之间加滴镜油,这主要有如下二方面的原因:1. 增加照明亮度油镜的放大倍数可达 100Χ,放大倍数这样大的镜头,焦距很短,直径很小,但所需要的光照强度却最大。
从承载标本的玻片透过来的光线,因介质密度不同(从玻片进入空气,再进入镜头),有些光线会因折射或全反射,不能进入镜头,致使在使用油镜时会因射入的光线较少,物像显现不清。
所以为了不使通过的光线有所损失,在使用油镜时须在油镜与玻片之间加入与玻璃的折射率(n=1.55)相仿的油镜(通常用香柏游,其折射率 n=1.52)。
2. 增加显微镜的分辨率显微镜的分辨率或分辨力 (resolution or resolving power) 是指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力。
从物理学角度看,光学显微镜的分辨率受光的干涉现象及所用物镜性能的限制,可表示为:(公式 P16 )式中λ= 光波波长;NA=物镜的数值孔径值。
光学显微镜的光源不可能超出可见光的波长范围( 0.4--0.7μm),而数值孔径值则取决于物镜的镜口角和玻片与镜头间介质的折射率,可表示为: NA=n × sin α式中α为光线最大入射角的半数。
实验1显微镜的使用细菌的简单染色
很多原来由于在透镜及载片表面的反射和折射而损失的 光线可以进入物镜,使照明亮度提高,改善观察效果。
㈢ 细菌的简单染色
利用单一染料对菌体进行染色的方法称为简单染色。
细菌个体微小,无色透明,不经过染色,常常不容易观 察。经过染色后,菌体与背景颜色形成鲜明的颜色对比,便 于在显微镜下观察细菌的形态、大小和排列方式。
利用同焦现象,在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作 距离短的物镜时,仅用微动螺旋即可对物像清晰聚焦,从而避 免由于使用粗动螺旋时可能的错误操作而损坏镜头。
4 油镜观察 注意不要因为在下降物镜镜头时用力过猛或者调焦时误
将粗动螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片。 不可以将高倍镜转动经过加油镜油的区域。
调节目镜间距和屈光度。
瞳距调节
屈光度调节:可以适应双眼视力有差异的观察者。
2 低倍镜观察
养成良好的调焦习惯,先从侧面注视,小心调节物镜靠近 标本,然后用目镜观察,以防操作失误而损坏镜头。
3 高倍镜观察
一般情况下,当物像在一种物镜中清晰聚焦后,转动转换 器将其它物镜转到工作位置,物像保持基本准焦状态,称为物 镜的同焦(parfocal)。
㈠ 普通光学显微镜
微生物个体微小,必须借助显微镜才能观察到,显微镜 是微生物学者不可缺少的基本工具。
普通光学显微镜利用目镜、物镜两组透镜系统来放大成 像,常称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组 成。
1 机械装置 镜座和镜臂:镜座支持整个显微镜,镜臂支持镜筒部分。
镜筒:上接目镜,下接转换器,分为单筒和双筒两种。
目镜:安装在镜筒上端,由两块透镜组成,将物镜成的像 再次放大,但是不增加分辨力,目镜放大倍数过大,反而影响 观察效果。
实验一 显微镜的使用及细菌的革兰氏染色
实验一显微镜的使用及细菌的革兰氏染色一、实验目的和内容(一)实验目的1. 复习显微镜低倍镜和高倍镜的使用技术,了解油浸系物镜的基本原理,掌握油镜的使用方法。
2. 初步掌握细菌涂片方法及革兰氏染色的步骤(二)实验内容1.学习油浸系物镜的使用方法。
2.制作细菌染色装片。
3.进行革兰氏染色法操作。
4.用油镜观察大肠杆菌和苏云金杆菌染色装片。
二、实验原理(一)油镜的基本原理普通光学显微镜包括低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜。
油镜是一种高倍放大的物镜,一般都刻有放大倍数,如95×、100×等。
油镜头上常刻有OI(Oil,Immersion)或HI(Homogeneous immersion)字样,有的还刻有一圈红线或黑线标记,而且油镜的镜身较高倍镜和低倍镜为长。
在低倍物镜、高倍物镜和油镜3种物镜中,油镜的放大倍数和数值孔径(numberal aperture)最大,而工作距离最短(图3-1)。
图1-1 显微镜物镜参数图显微镜的分辨率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离(D)的能力。
D值愈小表明分辨率愈高。
D值与光线的波长(λ)成正比,与物镜的数值孔径(NA)成反比.从上式可看出,缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。
数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角,α)的一半正弦与介质折射率(n)的乘积。
影响数值孔径大小的因数,一是镜口角,二是介质的折射率。
当镜与装片之间的介质为空气时,由于空气(n=1.0)与玻璃(n=1.52)的折射率不同,光线会发生折射,不仅使进入物镜的光线减少,降低了视野的照明度,而且会减少镜口角。
当以香柏油(n=1.515)为介质时,由于它的折射率与玻璃相近,光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,不仅增加了视野的照明废,更重要的是通过增加数值孔径提高分辨率,因而可以使物像明亮清晰。
(二)革兰氏染色革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gram创立的,是细菌学中最重要的鉴别染色法,其原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。
实验一 显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色
实验一显微镜油镜的使用和细菌的革兰氏染色陈宝莲2010级生态学040212010002一、实验目的1 学习显微镜油镜的使用方法2 学习微生物的无菌操作技术3 学习细菌的革兰氏染色法二、实验原理1 显微镜及油镜物镜的使用原理1) 油镜头的标志油镜头上常刻有OI(oil immersion)或HI(homogeous immersion)字样,有的还刻有一圈红线或黑线标记。
在低倍物镜、高被物镜和油镜3种物镜中,油镜的放大倍数和数值孔径(numerical aperture)最大,而工作距离最短。
2 ) 显微镜的分辨率显微镜性能的优劣不单是看它的总放大倍数,更重要的是看它的分辨率的大小。
分瓣率是指显微镜能分辨出物体两点间最小距离(D)的能力。
D值愈小表明分辨率愈高。
D值与光线的波长(λ)成正比,与物镜的数值孔径(NA)成反比:D=λ/2NA从上式可看出,缩短光波长和增大数值孔径都可提高分辨率。
数值孔径指光线投射到物镜上的最大角度(称镜口角,α)的一半正弦与介质折射率(n)的乘积:NA=n×Sinα/2影响数值孔径大小的因素-是镜口角,二倍介质的折射率。
当物镜与玻片之间的介质为空气时,由于空气(n=1.0)与玻璃(n=1.52)的折射率不同,光线会发生折射,不仅使进入物镜的光线减少,降低了视野的照明度,而且会减少镜口角。
当以香柏油(n=1.515)为介质时,由于它的折射率与玻璃的相近,光线经过玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射,不仅增加了视野的照明度,更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。
2 细菌的革兰氏染色原理革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram创立的。
作为细菌学上最常用最重要的鉴别染色法,革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌(G+)和革兰氏阴性菌(G-)两大类.G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质,而且肽聚糖层较薄、交联度低,故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质,增加了细胞壁的通透性,使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出,结果细菌就被脱色,再经番红复染后就成红色。
显微镜的使用和细菌简单染色
(二)光学显微镜的油镜原理
显微镜的分辨率D:是指显微镜能辨别两点之间 的最小距离的能力,即最小分辨距离。D越小,分 辨率越高。
D=λ/2NA λ为光源光波波长, NA为物镜的数值孔径值
数值孔径值 NA= η sinθ θ为物镜镜口角的半数, η为香柏油的折射率(1.52)
比如:水的折射率1.33, 空气的折射率为1.0 NA香柏油=1.2-1.4, D油镜=0.2μm>细菌直径0.5μm
光学显微镜的结构示意图
三、实验器材
1、菌种:蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌 2、染色液和试剂:美蓝染液、复红染液 3、器材:载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显微镜
四、方法和步骤
1.涂片:在载玻片中央滴一滴蒸馏水,无菌接种环 挑取少量菌体与水滴混合均匀,涂成薄的 菌膜。
6. 干燥:自然干燥或用吸水纸盖在涂片处吸取多余 水分。
7. 观察:先低倍观察,再高倍观察,并找出适当的 视野后,将高倍镜转出,在涂片上加香柏 油一滴,将油镜头浸入油滴中仔细调焦观 察细菌的形态。
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
五、结果观察
蜡状芽孢杆菌的简单染色
六、实验完毕后的处理
1.将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净, a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。
显微镜的使用和 细菌的简单染色
一、实验目的
1.熟悉光学显微镜使用方法 2.掌握细菌的涂片和简单染色法的 基本方法和步骤
二、基本原理
(一)简单染色基本原理 通常采用碱性染料进行简单染色: 这是因
为细菌在中性、碱性和弱酸性环境中通常带负 电荷,而碱性染料在电离时,其分子的染色部 分带正电荷,因此碱性染料(美蓝,结晶紫, 碱性复红等)很容易与细菌结合使其着色。
细菌的简单染色实验报告
细菌的简单染色实验报告
《细菌的简单染色实验报告》
在生物学实验室中,我们进行了一项关于细菌的简单染色实验。
通过这个实验,我们希望能够观察和了解细菌的形态特征,为进一步的研究和分析奠定基础。
首先,我们准备了一份细菌样本,并将其涂抹在玻片上。
接着,我们使用了一
种叫做墨汁的染色剂,将其滴在细菌样本上。
墨汁中的颜料分子能够与细菌细
胞壁中的化学物质发生作用,使细菌在显微镜下更加清晰可见。
在染色完成后,我们将玻片放置在显微镜下进行观察。
通过放大镜头,我们可
以清晰地看到细菌的形态和结构。
有些细菌呈现出圆形或椭圆形,而有些则呈
现出长条状或弯曲形态。
这些观察结果为我们提供了宝贵的信息,帮助我们更
好地了解细菌的特征和分类。
通过这个简单的染色实验,我们不仅能够观察到细菌的形态特征,还能够为后
续的细菌研究提供重要的参考。
细菌在自然界中起着重要的作用,它们不仅存
在于我们周围的环境中,还对人类健康和生态平衡产生着重要影响。
因此,对
细菌的研究和了解具有重要意义,而这个简单的染色实验为我们提供了一个很
好的起点。
通过这次实验,我们不仅增加了对细菌的认识,还学会了使用染色技术来观察
微生物。
这将为我们今后的学习和研究打下坚实的基础,也让我们更加深入地
了解微生物世界的奥秘。
希望通过我们的努力,能够为细菌研究领域的发展做
出一些贡献。
4普通光学显微镜的使用及微生物的简单染色解析
放大倍数: 4×:低倍 10×:低倍 40×:高倍 100×:油镜
油镜的使用原理
透镜
玻 片
光线
透镜
香柏油或液体石蜡 玻 片
光线
加油前
加油后
四、油镜的原理:
• 放大倍数可100倍之大,焦距很短,光强度最大。
• 介质折射率
油=1.52(香柏油)
水=1.33 空气=1
分辨率(最大可分辨距 离)= /2NA
玻璃=1.55
• 香柏油对光的折射率与玻璃相似,光线直接通过香柏油进 入物镜而不发生折射,不但增加了照明度,而且使油镜的 数值孔径增加,用NA表示,一般在1.2—1.4。低高倍镜 头等干镜NA都低于1.0。若以可见光的平均波长为 0.55μm来计算,数值孔径通常在0.65的高倍镜只能分辨 出距离不小于0.4μm的物体而油镜的分辨率却可达到 0.2μm左右。可见显微镜的放大效能是由数值孔径决定的 。
2、干燥
– 在空气中自然干燥或在 火焰快速通过干燥(与 热固定同步进行).
3、热固定
– 用镊子夹住涂片一端, 在火焰上连续通过几次; 以载玻片在手背上试感 觉不烫为宜.
4、染色
在固定好的菌膜上滴加美 兰染色剂,染色剂量以 刚好盖住菌膜为宜,染 色1min.
5、水洗
倒去染液,用自来水沿玻 片一端冲洗,直至流下的水 无色为止。
显微镜使用的主要步骤:
取镜→检查对光→夹片→低倍物镜→调光 、调焦→找目标,移中央→换高倍→找目 标→教师评分→清掉电源插头 下降载物台
取干净擦
镜纸拭去镜头上的香柏油
取干净擦镜纸蘸
少许二甲苯擦去镜头上的残留油迹
取干净
擦镜纸擦去残留的二甲苯
油镜使用实验报告范文
油镜使用实验报告范文微生物学实验报告微生物学实验报告实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察第一部分:显微镜的使用一、目的要求1.熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。
2.学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。
3.了解各种显微镜的主要特征。
二、实验原理(一)光学显微镜的构造微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜,它的构造可分为机械部分和光学部分。
1、机械部分普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分:目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。
2、光学部分:目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。
(二)放大倍数标本首先经物镜放大,在目镜的焦距平面上形成一个实像,再经过目镜放大成最终的虚像。
总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。
物镜的放大倍数愈大,其工作距离(物镜镜头到标本片之间的距离)愈短,这时光圈就要打开得愈大。
显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。
分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离,分辨距离愈小,透镜的分辨力愈高,物像也就愈清晰。
因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。
R=0.61λ/N.A式中:R-----分辨距离;λ------作用光的波长;N.A------数值口径。
一些介质的折射率介质空气水玻璃香柏油折射率1 13 55 1.56三、实验内容(一)材料:显微镜,香柏油,擦镜纸。
(二)方法:细菌很小,须使用油镜方可观察到。
油镜是显微镜上最重要的部件之一,观察时与玻片非常接近,稍不小心即可压碎玻片,更严重的是损坏镜头,故必须极其仔细地学习油镜的使用方法:1、为使低倍镜取得最适之光源,可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度,将聚光器提高,光圈完全打开,然后调节电压旋钮至视野最合适。
2、滴一滴香柏油,固定于载物台上,用推动器调节到载物台正中。
在双目侧视下,下旋粗调节器,使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。
01 油镜的使用和细菌的简单染色法
基础知识
显微镜的分辨率:
也称为分辨力,它是指显微镜工作时能分辨出两点间最小距离的能力。 分辨距离越大,则分辨率越低。所以,分辨率是以分辨距离来表示的。
其计算公式为:
D=0.61入/N· A N· A· =n· sina/2 式中D为分辨率,入为光波波长,N· A· 为物镜的数值孔径。
菌排列的观察。
常用作简单染色的染料有美蓝、结晶紫、石炭酸复红等。
实验材料
菌种 大肠杆菌营养琼脂斜面培养物; 金黄色葡萄球菌营养琼脂斜面培养物 试剂 结晶紫染液、石炭酸复红染液、香柏油、二甲苯、无菌 水
仪器及其它 显微镜、酒精灯,载玻片,接种环,擦镜纸等。
实 验
步
骤
1、 用简单染色法制备细菌染色装片
1、取送显微镜时,应右手握住镜臂, 左手 托住镜座,轻拿轻放。切勿用一只手斜 提,前后摆动,防止目镜滑出跌落。 2、揩试目镜、物镜和反光镜上的灰尘或污 物,必须使用专用的擦镜纸。切勿用手指、 手帕、纱布和普通纸擦。
3、镜头的切换一定要使用转换器,以免使光轴发生弯曲。
4、转动粗、细调节器时,不要用力过猛,以防止机件损 伤,调节失灵。
8、使用完毕,必须下降载物台,移开镜头后 再取出玻片标本,以免取玻片时擦损镜头。 9、绝对禁止随意取出目镜或拆下显微镜的其 他部件,以免灰尘掉入镜筒、部件失落或损坏。
实验完毕后,
清洁显微镜,并及时填写所使用设备的使用记录;(组长 负责检查) 所用物品按原来摆放方式摆放(组长负责检查)
实验结果
5、切忌一面从目镜进行观察,一面使载物台上升, 这样容易使物镜与玻片标本碰撞而损坏;
6、载物台要保持清洁干燥。如使用新鲜材
实验一 显微镜使用和简单染色1_PPT课件
• 细菌简单染色与显微镜的使用 • 细菌革兰氏染色法及细菌形态和特殊结构特征 • 观察酵母菌形态及放线菌的形态 • 食品中常见霉菌形态特征观察 • 培养基的配制与灭菌 • 稀释平板计数及酵母菌的分离与鉴定 • 酵母菌的纯培养与酒精发酵 • 血球计数板的使用及运用 • 明胶液化、淀粉水解等生化试验 • 糖代谢、氮代谢、渗透压等生化试验 • 微生物细胞大小的测量 • 独立实际操作考试
色
干燥
镜检..\视频\革兰氏染色[2].flv
水洗
阳性菌
(五)无菌操作
棉 塞
五、作业与思考题
1. 绘出所观察细菌的个体形态图及染色结 果。 2. 制片中火焰固定的目的是什么? 3. 显微镜油镜使用的注意事项有哪些? 4.革兰氏染色成败的关键在哪?为什么?
二、实际动手操作考试题( 单人独立操作,50分) :考试时间45min。 革兰氏制片染色、显微镜使用与保养:满分35分;考试时间:25min。 菌种移植:满分5分;考试时间10min; 显微镜观察微生物的个体形态:满分5分;考试时间5min;细菌1个、放线 菌1个、霉菌3个。 菌落识别:满分5分;考试时间5min。细菌1个、酵母1个、放线菌1个、霉 菌2个
三、平时成绩( 30分) 包含:实验报告的份数与质量(满分20分);实验课中操作动手的态度、力 度与到课率(满分10分)。
四、考核时间(3个学时) 最后一次实验课全班同学在实验室分组进行第一题和第二题考试, 由四 位老师监考,当场不进行重考。
三、器材
1. 器材:显微镜,香柏油,二甲苯,擦镜纸 ,载玻片,接种 环,酒精灯。
转换器14 物镜13 镜台12
聚光器11 光圈10 光源9
1目镜 2镜筒
3镜臂 4标本移动器 5粗调限位器 6粗调节器
实验1显微镜的使用和简单染色
实验一显微镜的使用和简单染色一、实验目的:1.了解并掌握细菌简单染色的机理及技术;2.学会用油镜观察细菌细胞的形态。
二、实验原理:细菌小且透明,当把细菌悬浮于水滴内,由于菌体和背景没有显著的明暗差,用光学显微镜难以看清它们的形态结构。
所以,先将细菌进行染色,借助于颜色的反衬作用能更清楚地观察到细菌的形状及其细胞结构。
简单染色是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。
常用碱性染料进行简单染色,这是因为碱性染料电离后带有正电荷,很容易与带负电荷的菌体结合并着色。
三、实验材料:1.菌种:枯草杆菌Ba cillu s subtil is、大肠杆菌Es cheri chiacoli、金黄色葡萄球菌Stap hyloccus aureus等培养好的细菌斜面;2.染料和试剂:美蓝、石碳酸复红、无菌水、甘油3.器材:显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、洗瓶、吸水纸。
四、实验步骤:1.涂片:在洁净无脂的载玻片中央滴一小滴蒸馏水,用接种环以无菌操作从枯草芽孢杆菌斜面上挑取少许菌苔于水滴中,混匀并涂成薄膜,涂布面积约1~1.5cm2。
2.干燥:室温自然干燥3.固定:手执载玻片一端,使涂菌一面向上,通过火焰2~3次。
此操作也称热固定,其目的是使细胞质凝固,以固定细胞形态,并使之牢固附着在玻片上。
4.染色:将涂片置于水平位置,滴加结晶紫染色液(以刚好覆盖涂片薄膜为宜),染色1min左右。
5.水洗:倾去染液,斜置载片,用自来水的细水流由载片上端流下,不得直接冲洗在涂菌处,直至载片上流下的水无色为止。
6.干燥:自然干燥,或用电吹风吹干,也可用滤纸吸干,注意不要檫掉菌体。
7.镜检:待标本片完全干燥后,先用低倍镜和高倍镜观察,将典型部位移至视野中央,再用油镜观察。
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法
实验一显微镜的使用、细菌形态和结构观察与革兰氏染色法一、显微镜的使用普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
以往最简单的显微镜仅由几块透镜组成,而当前使用的显微镜由一套透镜组成。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500—2000倍。
(一)显微镜的构造普通光学显微镜的构造可分为两大部分:一为机械装置,一为光学系统,这两部分很好的配合,才能发挥显微镜的作用。
1、显微镜的机械装置显微镜的机械装置包括镜座、镜筒、物镜转换器、载物台、推动器、粗动螺旋、微动螺旋等部件(1)镜座镜座是显微镜的基本支架,它由底座和镜臂两部分组成。
在它上面连接有载物台和镜筒,它是用来安装光学放大系统部件的基础。
(2)镜筒镜筒上接接目镜,下接转换器,形成接目镜与接物镜(装在转换器下)间的暗室。
从物镜的后缘到镜筒尾端的距离称为机械筒长。
因为物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的。
镜筒长度的变化,不仅放大倍率随之变化,而且成像质量也受到影响。
因此,使用显微镜时,不能任意改变镜筒长度。
国际上将显微镜的标准筒长定为160mm,此数字标在物镜的外壳上。
(3)物镜转换器物镜转换器上可安装3—4个接物镜,一般是三个接物镜(低倍、高倍、油镜)。
Nikon显微镜装有四个物镜。
转动转换器,可以按需要将其中的任何一个接物镜和镜筒接通,与镜筒上面的接目镜构成一个放大系统。
(4)载物台载物台中央有一孔,为光线通路。
在台上装有弹簧标本夹和推动器,其作用为固定或移动标本的位置,使得镜检对象恰好位于视野中心。
(5)推动器是移动标本的机械装置,它是由一横一纵两个推进齿轴的金属架构成的,好的显微镜在纵横架杆上刻有刻度标尺,构成很精密的平面座标系。
如果我们须重复观察已检查标本的某一部分,在第一次检查时,可记下纵横标尺的数值,以后按数值移动推动器,就可以找到原来标本的位置。
(6)粗动螺旋粗动螺旋是移动镜筒调节接物镜和标本间距离的机件,老式显微镜粗螺旋向前扭,镜头下降接近标本。
新近出产的显微镜(如Nikon显微镜)镜检时,右手向前扭载物台上升,让标本接近物镜,反之则下降,标本脱离物镜。
实验一显微镜的使用和细菌的简单染色
实验程序——细菌简单染色
每位学生一人一组,取大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,各做一块涂片。
蒸 馏 水
涂片
接 种 环
自然干燥
吕 式 美 兰
固定
擦拭
染色 1min
干
水
燥
洗
水洗时不要直接冲菌膜
染色注意事项
• 1.涂片过程中,去生理盐水和细菌不宜过多,
涂菌要均匀,不宜过厚。
• 2.固定时温度不可过高,以载玻片背面不烫
• 普通光学显微镜(NIKON) • 欧林巴斯(OLYMPUS)生物显微镜 • 麦克奥林生物显微镜
镜座 载物台
镜臂
机械装置 标本夹和标本移动尺
显 微
粗调螺旋和细调螺旋
镜 的
聚光镜升降螺旋
构 造
接目镜
接物镜及镜头转换器
光学系统 聚光镜
虹彩光圈
反光镜
显微镜的放大倍数和分辨率
• 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接 目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体(两端)两点之间距 离的能力,可用公式表示为: D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D:物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 :可见光的波长(平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 :镜口角(即入射角)。
• 镜检标本时,为什么先用低倍镜观察,而不是直接用 高倍镜或油镜观察?
下周实验
实验二 细菌的革兰氏染色 (书中实验十四)
杆菌
炭疽杆菌
破伤风杆菌
肉毒芽孢杆菌
大肠杆菌
杆菌
变形杆菌 绿脓杆菌
大肠杆菌
螺菌
幽门螺杆菌
霍乱弧菌
钩端螺旋体
Spirulina sp. - Filamentous Cyanobacte
显微镜的使用和细菌简单染色
显微镜的使用和细菌简单染色显微镜的使用和细菌简单染色是微生物学中最基础的技术和实验方法之一、显微镜的使用可以让我们观察到肉眼无法看清的微小物体,如细菌和其他微生物;而细菌的染色则能够使细菌更清晰地显示出来,以方便我们进行观察和研究。
首先,让我们先了解显微镜的基本结构和使用方法。
显微镜由以下几个关键部分组成:管柱,目镜,物镜,镜头,台面,光源和调焦机构。
管柱连接了目镜和物镜,它可以通过调节来确定两者之间的间距。
目镜位于管柱的上方,我们通过它来观察样本。
物镜位于目镜下方,它是负责放大被观察物体的主要部分。
镜头是位于物镜下方的几片放大镜片。
台面是放置样本的地方,通常有可移动的台面调节以控制位置。
光源位于显微镜的底部,它提供背景光源以照亮样本。
在使用显微镜之前,我们首先需要将样本准备好。
对于细菌的观察,我们可以通过简单染色方法来使细菌更加明显。
简单染色方法中,最常用的是利用染色剂龙格拉菲染液。
首先,取一片玻片,并在上面滴上一滴菌液。
然后用火钳或针头将玻片加热使其快速干燥。
接下来,将玻片持在火焰中,使其变热然后将龙格拉菲染液倒入滴在样本上。
染液滴在样本上后需静止2-3分钟,然后用水冲洗掉多余的染液即可。
准备好样本后,我们可以开始使用显微镜进行观察。
首先,将制备好的样本放在显微镜的台面上。
然后,将管柱与目镜对其,并逐渐调节管柱的高度,直到能够清晰地看到样本为止。
这一步需要耐心和细致的调节。
接下来,我们可以用目镜来初步观察样本的大致情况和形状。
然后,通过控制物镜的旋钮,使用不同倍率的物镜对样本进行进一步的放大观察。
一般来说,我们从低倍物镜开始,然后逐渐转到高倍物镜,以获得更细致的观察。
在观察的过程中,我们需要不断调节焦距,使样本的清晰度达到最佳状态。
这可以通过旋转调焦机构来实现。
在观察细菌时,我们可以看到细菌的形态、大小、排列以及其他特征,这对我们进一步研究和了解细菌是非常重要的。
细菌简单染色和显微镜的使用是微生物学研究中最基础的技术。
实验一__显微镜的使用及细菌的简单染色法
三 、实验材料
1、菌种: 大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌 2、染色液和试剂: 草酸铵结晶紫、二甲苯、香柏油。 3、器材: 载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显 微镜。
四、实验方法与步骤:
简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的染 色法,简单染色不能辨别细菌细胞的构造。
1、涂片:
在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水(或用接 种环挑1-2滴水),用无菌的接种环挑取少量菌种与水 滴充分混匀,涂成极薄的菌膜,涂布面积约1cm2 整个过程中要注意无菌操作。(示范无菌操作技术)
1.
实验报告的撰写要求
实验报告必须以实事求是、严肃认真的科学态度,按照指 导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、叙述准确、数 据完整、绘图清晰且写实,应有讨论、有分析,结论明确。一 般应包括以下一些内容:
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
实验项目名称; 实验目的; 实验原理; 实验材料; 实验步骤; 实验结果与讨论。 思考题
6、干燥:涂片放在空气中晾干或用吸水纸轻轻吸干,。 7、镜检:先低倍观察,再高倍观察,并找出适当的视野 后,将高倍镜转出,在涂片上加香柏油一滴,将 油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 8、绘图:
9、实验完毕后的处理:
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净: a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个 方向擦拭。 各部分还原,将电源灯亮度调至最低后关闭,将最低放大倍 数的物镜转到工作位置,同时将载物台降到最低位置 看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。
2、不可将高倍镜转动经过加油香柏油的区域. 3、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上 的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。
01显微镜的使用及简单染色法
实验一 显微镜的使用及细菌的简单染色法一、实验目的:1.了解显微镜的成像原理及油镜加香柏油的原理。
2.熟练掌握显微镜的使用方法。
3.掌握简单染色方法,并初步认识细菌的形态特征。
4.掌握油镜的使用方法和无菌操作技术。
二、原理:1.普通光学显微镜是一种精密的光学仪器。
当前使用的显微镜都是由一套透镜组成的。
普通光学显微镜通常能将物体放大1500-2000倍。
分辨率(可辨出两点间最小距离),公式如下:2sin 5.0λn D =λ为所用光源波长;α为物镜镜口角;n 为玻片与物镜间介质的折射率。
最短可见光450nm 。
空气n=1.0;水n=1.33;香柏油n=1.52。
光学显微镜在最短波长450nm ,用油镜其最大的分辨率为0.18μm 。
肉眼正常德分辨率为0.25mm 。
因此光学显微镜有效的最高总放大倍数能达到1000~1500倍。
根据上式,可通过:(1)减低波长;(2)增大折射率;(3)加大镜口角来提高分辨力。
紫外线作光源的显微镜和电子显微镜就是利用短光波来提高分辨力以检视较小的物体的。
数值孔径(numerical apeature 简写为NA )是物镜的主要参数,是决定物镜性能的最重要指标。
数值孔径可用下式表示:NA=2sin α⋅n镜口角α总是小于180°。
因为空气的折射率为1,所以干燥物镜的数值孔径总是小于1,一般为0.05-0.95;油浸物镜如用香柏油(折射率为1.515)浸没,则数值孔径最大可接近1.5。
虽然理论上数值孔径的极限等于所用浸没介质的折射率,但实际上从透镜的制造技术看,是不可能达到这一极限的。
通常在实用范围内,高级油浸物镜的最大数值孔径是1.4。
2. 细菌的涂片和染色是微生物学实验中的一项基本技术。
细菌的细胞小而透明,在普通的光学显微镜下不易识别,必须对它们进行染色,从而能更清楚地观察到其形态和结构。
常用碱性染料进行简单染色,因为在中性、碱性或弱酸性溶液中,细菌细胞常带负电荷,而碱性染料电离时,其分子的染色部分带正电荷,因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
显微镜的使用、细菌单染色及革兰氏染色
实验三显微镜的使用、细菌单染色及革兰氏染色姓名:贾晓霖学号:201000140032班级:生科10.1同组者:李江湲程子修洪钧烨一、实验目的1、学习显微镜(油镜)的使用方法。
2、学习微生物制片及染色技术。
3、认识细菌的形态特征。
4、了解革兰氏染色的原理,掌握革兰氏染色法。
二、实验原理原理一:单染色法单染色即用单纯的种染料进行染色,多数采用美蓝、结晶紫或石碳酸复红等碱性染料。
此法仅能显示细胞的外部形态,而不能辨别其内部结构。
染色前必须将细胞固定,其目的是杀死细菌,并使它粘附在载玻片上。
此外,还可以增加菌体对染料的亲和力。
常用的有加热和化学固定两种方法。
无论用哪种方法都应尽量使细菌维持原有的形态,防止细胞膨胀或收缩。
原理二:革兰氏染色法革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。
革兰氏染色法不仅能观察到细菌的形态,而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示:染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G-表示。
细菌对于革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。
革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的,在染色过程中,当用乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,通透性降低,使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,因此,呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低,而脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色,然后又被染上了复染液(番红)的颜色,因此呈现红色。
革兰氏染色需用四种不同的溶液:碱性染料初染液;媒染剂;脱色剂和复染液。
碱性染料初染液的作用像在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫。
媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘是常用的媒染剂。
脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95 %的酒精。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净。
五、实验结果记录
菌名 染色液名称
菌体颜色 高倍镜下菌体形态 油镜下菌体形态
六、思考题
1、油镜与普通物镜在使用方法上有何不同? 应注意些什么?
2、固定细胞的目的是什么?
实验报告必须以实事求是、严肃认真的科学态度,按照指 导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、叙述准确、数 据完整、绘图清晰且写实,应有讨论、有分析,结论明确。一 般应包括以下一些内容:
1. 实验项目名称; 2. 实验目的; 3. 实验原理; 4. 实验材料; 5. 实验步骤; 6. 实验结果与讨论。 7. 思考题
6、干燥:涂片放在空气中晾干或用吸水纸轻轻吸干,。
7、镜检:先低倍观察,再高倍观察,并找出适当的视野 后,将高倍镜转出,在涂片上加香柏油一滴,将 油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
8、绘图:
9、实验完毕后的处理:
将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净: a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦2—3次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦2—3次。注意擦镜头时向一个 方向擦拭。
整个过程中要注意无菌操作。(示范无菌操作技术)
2、干燥:让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方 温火烘干,切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯 而变形。
3、固定:手执玻片一端,让菌膜朝上, 通过火焰
2-3次固定(以不烫手为宜)。
4、染色:将固定过的涂片加适量草酸铵结晶紫染色1-2min。
5、水洗:斜置载玻片,在自来水龙头(或洗瓶)下用小股水 流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。
一、实验目的:
1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的使用技术; 2.学习微生物制片、染色的基本技术,掌握细菌的
简单染色法及无菌操作技术; 3.观察细菌的基本形态。
二、实验原理:
1、显微镜油镜工作原理:
油镜的透镜很小,从载玻片透过的光线通过空气时,因 介质折光率不同,光线将发生散射现象,使射入镜筒的 光线很少,物象不清。若在油镜与玻璃片之间加入与玻 璃折射率相近的香柏油,则使通过的光线不至因折射而 减弱,因此能清楚地看到物象。
2、 染色原理
由于细菌细胞机体小而透明,与周围背景没有明显 的反差,在普通光学显微镜下不易识别,必须对它 们进行染色,使经染色后的菌体与背景形成明显的 色差,从而能更清楚地观察到其形态和结构。
碱性染料的离子带正电荷,能和负电荷物质结合。 因细菌细胞等电点较低,当它在中性、碱性或偏酸 性培养基中时带负电荷,容易与带正电荷的碱性染 料结合,所以通常采用碱性染料使其着色(如美兰, 结晶紫,碱性复红或孔雀绿)。
七、注意事项
1、在粗调时,先从侧面注视小心调节物镜靠近标本,然后用 目镜观察,慢慢调节物镜离开标本,避免由于“调焦”不慎 而压碎标本片并使物镜受损。
2、不可将高倍镜转动经过加油香柏油的区域.
3、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上 的残水,以免染色液被稀释而影响染色效果。
微镜。 5. 本课程课件放在公共邮箱里,请同学们自行下载 。
公共邮箱:shianshiyan2011@ 密码:2011shianshiyan 6. 实验报告由学习委员收齐后送到食品学院B231 7. 考试成绩按以下公式计算:
平时(30%)+作业(30%)+操作考试(40%)
实验报告的撰写要求
2011级微生物实验课程要求
1. 上课要求:在上课时间必须穿好白大褂,不迟到,不吃东西,桌面无杂 物。实验结束后,每人将自己做实验的操作台整理干净。
2. 分组要求:根据学号分组,位置固定,不得私自调离。 3. 值日要求:根据学号分组。 4. 显微镜领取:实验1-5次,实验课开始前每人到二楼208室借 一台显
三 、实验材料
1、菌种: 大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌
2、染色液和试剂: 草酸铵结晶紫、二甲苯、香柏油。
3、器材: 载玻片、接种环、酒精灯、擦镜纸、显
微镜。
四、实验方法与步骤:
简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的染 色法,简单染色不能辨别细菌细胞的构造。
1、涂片:
在洁净无油腻的玻片中央放一小滴蒸馏水(或用接 种环挑1-2滴水),用无菌的接种环挑取少量菌种与水 滴充分混匀,涂成极薄的菌膜,涂布面积约1cm2
实验一 显微镜油镜的使用及 细菌的简单染色法
用无毒性的 染料
细菌染色
活菌染色
ห้องสมุดไป่ตู้
死菌染色
正染色
负染色
背景着色而细菌 本身不着色
普通染色
特殊染色
简单染色法 复杂染色法 芽孢染色法 荚膜染色法 细胞壁染色法
抗酸染色 革兰氏染色
实验内容
实验目的 实验原理 实验材料 实验方法和步骤 实验结果记录 思考题