选修一微生物的培养和利用

选修一微生物的培养和利用（一）

微生物实验基础知识

微生物所需要的营养物质

营养成分主要种类作用

碳源CO

2、NaHCO

3

糖类、脂肪酸等①构成微生物的细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的主要能源物质

氮源N

2、NH

3

、铵盐、硝酸盐

尿素、牛肉膏和蛋白胨构成微生物的细胞物质和一些代谢产物

生长因子维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等补充微生物生物必需的微量有机物

其他水

无机盐

培养基的种类及用途

划分依据种类用途

物理性质固体培养基微生物的分类和鉴定

半固体培养基观察微生物的运动、保存菌种

液体培养基工业生产

化学成分天然培养基工业生产

合成培养基微生物的分类和鉴定

用途选择培养基分离菌种

鉴别培养基鉴别不同种类的微生物

（如饮用水中大肠杆菌的鉴定）

实验室条件下的无菌技术

方法应用范围

灭

菌高压蒸气灭菌培养基、培养皿、移液管等

高温灼烧接种环、玻璃刮刀等接种器具

紫外或熏蒸灭菌接种室、接种箱、超净工作台

过滤法

消

毒酒精、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外植体）、工作台和器具、培养空间高温煮沸某些实验的器具

获得微生物纯种的方法之一—平板划线法

1）用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线的过程中菌液逐渐减少，菌体

数量也逐渐减少，菌间的距离增大。在培养10-20小时后，划线末处可观察到由一个菌产生的单菌

落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群

就是由一个菌产生的后代（或纯种）。

2）利用选择培养基进行分离

3）液体稀释涂布法

微生物相关实验

大肠杆菌的培养和分离

【实验原理】

【材料用具】略

【实验步骤】

注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。

【思考题】

⑴ 本实验所涉及的器材及操作需要无菌。培养基的灭菌方法是___________________,接种环的灭菌方

法是_____________，接种操作要在超净工作台酒精灯火焰旁边进行。

⑵ 倒平板操作时，待固体培养基冷却至____________℃时，在酒精灯火焰旁，将融化的固体培养基倒

在____________里，立即置于_________位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部。

⑶ 在固体培养基的平板上连续划线时，接种环蘸取菌液__________次。划线后将培养皿_____________

放于_____________℃的_____________中培养。

⑷ 液体培养基常用于菌种的活化和扩大培养，和大肠杆菌固体培养基相比，配制液体培养基时，不需

要加入_________。在无菌条件下，用接种环把大肠杆菌接种于液体培养基中，置于__________上，

在__________℃条件下________培养，一定时间后可观察到菌液由__________变___________。

【解析】

⑴ 高压蒸汽灭菌火焰灼烧灭菌⑵ 60 培养皿水平⑶ 一倒置 37 恒温培养箱⑷ 琼脂摇床 37 振荡澄清浑浊

【练习题】

1. 本实验中配置培养基加入的琼脂是为了

A．提供碳源 B．提供氮源

C．使培养基成凝胶状 D．给细菌提供生长因子

2．固体培养基配置完成并经过高温消毒后，要趁热倒平板，原因是

A．趁热倒平板可以对培养皿进行消毒和灭菌

B．培养基冷却后会凝固，不能再均匀倒平板

C．保证培养基中的营养成分不会流失

D．为微生物的培养提供适宜的温度条件

3．下列关于大肠杆菌的表述，不正确的是

A．细胞中有复杂的膜结构的细胞器

B．在有氧条件下进行有氧呼吸，无氧条件下进行无氧呼吸

C．除了拟核外，在细胞质中还有许多小的环状DNA分子

D．常作为基因工程目的基因的受体菌

4．若要较好地观察到单个细菌增殖后代的菌落，在本实验操作中最好的接种方法是

A．用接种环在培养基表面轻点若干点迹

B．用接种环在培养基表面轻划一条或几条S线

C．将接种环插入培养基浅层后轻轻移出

D．将接种环在培养基表面反复涂抹数次

5．

⑴ 在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。由于该细

菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的

实验材料。

⑵ 在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；

操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋

白质变性，还能__________。

⑶ 若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、

多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。

⑷ 通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。

⑸ 培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。对于固体培养基应采用的检测方法

是_________。

⑹ 若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养

物的扩散。

【练习题解析】

1.C

2.B

3.A

4.B

5.⑴温度，酸碱度，易培养，生活周期短；⑵灭菌，消毒，损伤DNA的结构。⑶比例合适⑷鉴定（或分类）；⑸将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。⑹灭菌。

分离以尿素为氮源的微生物