应用高效液相色谱-二极管阵列检测器-蒸发光散射检测器联用技术同时测定清开灵注射液中的五类有效

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第!期
严诗楷等： 应用高效液相色谱 ! 二极管阵列检测器 ! 蒸发光散射检测器 联用技术同时测定清开灵注射液中的五类有效成分
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" " 清开灵注射液是由古方安宫牛黄丸经拆方改制 而成， 具有清热解毒、 醒神开窍、 镇静安神等作用， 临 床上广泛用于治 疗 呼 吸 道 感 染、 急 慢 性 肝 炎、 高 烧、 脑出血等症， 是中 医 临 床 急 症 的 必 备 药
［#］
1.23!%,,, 型 $%&’ 检 测 器； 4,00,!5 超 纯 水 系 统 （ 4,00,6-7. 公司， 法国） 。 " " 对照品： 栀子苷、 黄芩苷、 腺苷、 尿苷、 绿原酸、 咖 啡酸购于中国药品生物制品检定所， 牛胆酸、 猪去氧 胆酸、 熊去氧胆酸购于 &894+ 公 司。样 品： #) 批 清 开灵注射液 （ 记为样品 # + #) ， 其 中 # + #, ， ## + #! ， #( + #) 分别由 + ， :， * & 家 中 药 生 产 企 业 提 供） ， 胆 酸类阴性样品按清 开 灵 制 备 工 艺 自 行 配 制 （ 中间品 由 * 厂提供） 。 试 剂： 甲醇 （ 色 谱 纯， ;,<3.7 公 司 ） ， 4.72= 公司） ， 其余试剂为分析纯。 乙腈 （ 色谱纯， ! ! #" 样品制备 " " 对照品溶液： 精 密 称 取 各 对 照 品， 用 甲 醇 溶 解， 并定容于 %! #% 量 瓶， 得 到 混 合 对 照 品 溶 液， 其中 各对 照 品 的 质 量 浓 度 依 次 为 尿 苷 , > ,* ? @ % 、 腺苷 , > ,$ ? @ % 、 绿原 酸 , > ,( ? @ % 、 咖 啡 酸 和 栀 子 苷 , > ,’ ? @ %、 黄芩苷 # ? @ % 、 胆酸和猪去氧胆 酸 % ? @ % 。 混合 对照品溶液按不同 比 例 稀 释， 得到一系列不同浓度 水平 的 对 照 品 溶 液， 用 , > ’! ! # 微 孔 滤 膜 过 滤， 密 封后于低温下保存， 备用。 " " 样品溶液： 精 密 吸 取 各 清 开 灵 注 射 液 % #% 置 于 #, #% 量 瓶 中， 用 超 纯 水 稀 释 至 刻 度， 用 ,- ’! 取续滤液即得。 ! # 微孔滤膜过滤， ! ! $" 实验条件 " " 液 相 色 谱 条 件： 色 谱 柱 为 )3."-#."./ %A"B C) *#$ 柱 （ %!, ## . ’- ( ## ,> D> ， ! !#） ； 保护柱 为 +001.23 *#$ 柱 （ *- ! ## . ’- ( ## ,> D> ， ! !#） ； 柱温： &! E ； 流动相 + 液 为 含 ,- # F 甲 酸 的 水 溶 液， （ 体积比为 ’/ # ） ； 梯 度洗脱 流动相 : 液为甲醇 ! 乙腈 程序为 #,, F + , 流动 , ,$ ’, F + , , ,$ #% F + ； 进样量为 %, ! % 。 相流速为 #- , #% @ #," ； " " 二极管阵列 检 测 器 检 测 条 件： %,, + !), "# 全 波长扫 描， 设 定 %’, ， %!’ ， %$, 和 &&, "# ’ 个 检 测 波长。 " " $%&’ 检 测 器 条 件： 漂 移 管 温 度 ##, E ， 载气 流速 %- , % @ #," ， 不分流模式。 （ G% ） " " 上 述 条 件 下 测 定 的 清 开 灵 样 品 色 谱 图 如 图 #。 图 # 中 # + ( 号色 谱 峰 的 归 属 通 过 与 相 应 对 照 品 色 * 谱峰的保留时间及其紫外光谱图的对照加以确认， + ) 号色谱峰归属通过与对照 品及 阴 性 样 品 色 谱 图 对照予以确认 （ 图 % 为 ) 种对照品的色谱图， 图& 为 胆酸类成分阴性样品的 ()%*!$%&’ 色谱图） 。
"#$%&’()*+%, -*’*.$#)(’#+) +/ 0#1* 2.+%3, +/ 4+$3+)*)’, #) 5#)67(#&#)6 8)9*:’#+) ;< =#6> ?*./+.$():* @#A%#B 4>.+$(’+6.(3>< C#’> ?>+’+ -#+B* D..(< -*’*:’+. ()B E1(3+.(’#1* @#6>’ ":(’’*.#)6 -*’*:’+.
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谨以此文庆贺卢佩章院士 ." 华诞！
应用高效液相色谱 !二极管阵列检测器 !蒸发光散射检测器 联用技术同时测定清开灵注射液中的五类有效成分
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。清开灵
注射液 由 板 蓝 根、 栀 子、 金 银 花、 黄 芩 苷、 水 牛 角、 珍 珠母、 牛胆酸、 猪胆酸等 $ 味药材或提取物配制而 具 有 清 热 解 毒、 凉血利 成［ % ］。其中板 蓝 根 性 苦 寒， 咽的功效， 腺 苷 和 尿 苷 是 其 中 的 药 效 成 分［ & ］； 栀子 性苦寒， 具有清热 泻 火、 利 便 止 血 的 功 效， 其中的栀 子苷被认为是复方 中 最 重 要 的 药 效 成 分［ % ］； 金银花 性甘寒， 抗菌解毒， 绿原酸和咖啡酸是其重要指标性 成分［ ’ ］； 黄芩 苷、 牛胆酸和猪胆酸均以提取物入药 （ 其中猪胆酸往往还混有 少 量 熊 去 氧 胆 酸 ） ， 化学成 分和药效物质明确， 可 清 热 泻 火， 镇 心 开 窍［ ! ］； 水牛 角和珍珠母具有定惊、 凉血的功能， 水解后在复方中 主要以氨基酸和 结 合 钙 的 形 式 存 在［ ( ］。 可 见， 除了 水牛角和珍珠母外， 其他 ( 味药材都有明确的指标 性成分或有效成分可用于定量质量控制， 因此， 对上 述 ) 种成分进行定量， 明确其含量范围， 是控制复 方 制剂质量的关键步骤。上述成分根 据 化 学结 构 可以 分为 ! 类， 即腺苷、 尿 苷 属 于 核 苷 类， 绿原酸和咖啡 酸属于有机酸类， 栀子苷和黄芩苷分别是环烯醚萜 苷和黄酮类成分， 牛胆酸、 猪胆酸和熊去氧胆酸属于 甾体类。各成分的化学结构及其紫外特征吸收有较 大的差异， 使得它们 很 难 在 常 规 的 色 谱 条 件 下 同 时 得到分离和检测， 因而往往需要在不同色谱条件和 检测波长下逐一进 行 测 定， 特别是像胆酸类成分仅 在紫 外 末 端 （ #)% "# 附 近 ） 有 微 弱 吸 收， 常规的紫 需要另行使用 外检测方法 灵 敏 度 低、 准 确 度 差［ * ］， 蒸发光散 射 检 测 器 （ $%&’ ） 等 通 用 型 检 测 器［ $ + #, ］， 导致分析过程十分繁琐。近年来有文献报道使用多 波长高效液相色谱法同时测定清开灵注射液中黄芩 苷、 绿原酸和栀子苷等 & 种药效成分
收稿日期： !""# 1"0 1", 作者简介： 严诗楷， 男， 博士研究生， 主要从事药物分析和中药质量控制的研究 2 通讯联系人： 罗国安， 男， 教授， 博士生导师， 3&4 ： （ "5" ） 0!6.50.. ， 71)894 ： 4:;<8= )8942 (>9?<@:82 &A:2 B?2 基金项目： 国家重点基础研究发展规划项目 （国家 “ $6, ” 研究项目） （ C;2 D5$$$"#--"- ） 及科技部重大专项基金 （ C;2 !""! EF$"0 F!$1 资助项目 2 ,）
! , ! 严诗楷 5 ， ， G 辛文峰 5 ， ，Hale Waihona Puke BaiduG 罗国安 5 ， G 王义明 5 ， ， G 程翼宇 !
（ 5 $ 清华大学化学系，北京 5""".- ；! $ 浙江大学药学院中药科学与工程学系，浙江 杭州 ,5""!6 ； , $ 江西中医学院，江西 南昌 ,,"""0 ） 摘要： 建立了复方清开灵注射液中 # 类主要有效成分 的 定 量 测 定 方 法。 应 用 高 效 液 相 色 谱 & 二 极 管 阵 列 检 测 器 & 蒸 ， 根 据 各 类 成 分 紫 外 吸 收 光 谱 的 差 异， 分 别 在 !-" ， !#- ， !." 和 ,," 发光散射检测器联用技术 （ ’()*&+,+&-).+ ） /0 波长下检测栀子苷、 核苷 （ 包括尿苷 和 腺 苷 ） 、 黄芩苷和有机酸 （ 包括绿原酸和咖啡酸） 等 - 类 成 分， 同时使用 -).+ 测定胆酸、 熊去氧胆酸和猪去氧胆酸等 , 种甾体化合 物， 从而实现了清开灵注射液中 # 类有效成分 （共 $ 个 化合物） 的同时分离和定量测定。用该法测定了 , 个 不 同 厂 家 的 5$ 批 清 开 灵 注 射 液 成 品。 该 法 快 速、 准 确， 操作 相对简单， 为中药复方复杂体系的多组分定量测定和质量控制提供了一种可靠、 合理且简便、 易行的方法模式。 关键词： 高效液相色谱法； 二极管阵列检测器； 蒸发光散射检测器； 有效成分； 清开灵注射液 中图分类号： 10#.G G G 文献标识码： , G G G 文章编号： 5""" &.65, （ !""# ） "# &"-.! &"#
! , ! 2,% .34564 5 ， ，78% 9:/;:/< 5 ， ，)=1 >?"6/ 5 ，9,%> 2404/< 5 ， ，*’-%> 24@? !
（ ! ! "#$%&’(#)’ *+ ,-#(./’&0 ，1/.)2-3% 4).5#&/.’0 ，6#.7.)2 !"""#$ ，,-.)% ；% ! "#$%&’(#)’ *+ ,-.)#/# 8#9.:.)# ;:.#):# < & =)2.)##&.)2 ，,*>>#2# *+ ?-%&(%:#3’.:%> ;:.#):#/ ，@-#7.%)2 4).5#&/.’0 ，A%)2B-*3 ’!""%( ，,-.)% ； ’ ! C.%)2D. ,*>>#2# *+ 1&%9.’.*)%> ,-.)#/# 8#9.:.)# ，E%):-%)2 ’’""") ，,-.)% ）