蛋白质电泳

学生毕业论文

学院名称0000000 论文题目：蛋白质电泳实验探究

学生姓名：000000专业： 0000000

班级： 00000000 学号： 0000000

学校指导教师： 00000职称：000000

实习单位指导教师：陈金锋职称：讲师

起止时间： 2012-3

2012年5 月 3 日

目录

目录 (2)

内容摘要 (3)

第一章前言 (4)

（一）抗氧化酶概述 (4)

（1）抗氧化酶在生活与生产中的应用 (4)

（2）人体代谢中的抗氧化酶作用 (4)

（二）过氧化氢酶概述 (5)

（1）过氧化氢酶简介 (5)

（2）过氧化氢酶历史 (5)

（3）过氧化氢酶来源 (5)

（4）过氧化氢酶结构 (5)

（5）过氧化氢酶应用 (5)

（三）本实验的目地和意义 (6)

第二章实验部分 (7)

（一）仪器与试剂 (7)

（1）仪器 (7)

（2）药品与试剂 (7)

（二）实验原理 (7)

（1）目地基因的载入与诱导表达 (7)

（2）蛋白质电泳 (7)

（三）实验方法 (8)

（1）目的基因的载入与诱导表达 (8)

（2）SDS-PAG电泳 (8)

（四）结果与讨论 (10)

参考文献 (12)

致谢 (12)

内容摘要

过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2，使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH。抗氧化酶可以以延缓人体衰老，减缓食品因氧化作用而腐败，对人们的生活和生产有很大的利用价值。本实验以过氧化氢酶为例子，探究过氧化氢酶大量生产途径，降低生产成本，对于人们生活以及生产有重要意义。

关键词抗氧化酶过氧化氢酶大肠杆菌 SDS-PAGE 电泳吸光度

蛋白质电泳实验探究

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第一章前言

一、抗氧化酶概述

（1）抗氧化酶在生活与生产中的应用：有些东西暴露在空气中很容易和空气中的氧气发生作用，氧气的氧化作用很强，一旦发生氧化作用物质原本的作用就会流失衰老。

削好皮的苹果摆一会就会变黄就是和氧气发生了氧化作用，抗氧化就是隔绝掉物体与氧气接触，减缓氧化的速度，氧化是肌肤衰老的最大威胁，日晒、压力、环境污染等都能让肌肤自由基泛滥，从而产生面色黯淡、缺水等氧化现象。都是身体产生氧化的“罪魁祸首”。所以无论从健康层面还是从护肤层面，我们都需要在日常生活中注意抗氧化。而酶是生物体内活细胞产生的一种生物催化剂，所以抗氧化酶就是能够起到减缓氧化的速度的生物体内活细胞产生的一种生物催化剂

（2）人体代谢中的抗氧化酶作用：人体代谢自身会生成抗氧化剂：谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、超氧化歧化酶(SOD)等内源性酶系或非酶系。在成长期，这些抗氧化物质在体内合成旺盛，GSH-PX和SOD等抗氧化剂含量很高，能抑制氧自由基产生，平衡人体的代谢，预防眼疾病及各种慢性病。人超过25岁之后，体自生的抗氧化物质——谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、超氧化歧化酶(SOD)等抗氧化物质合成的速度逐渐减缓。其中GSH和SOD是人体内主要的抗氧化物，也是人体内增强免疫力、预防疾病的主要元素，而人类自然的老化会造成GSH和SOD 含量的降低，进而影响到体内器官的正常运作，例如老年人的眼睛水晶体组织内的GSH含量便较年轻人偏低许多。

现代科技社会中种植环境技术的改善和饮食习惯的改变，使人类从食物中摄入维生素等天然抗氧化剂数量明显减少，不能满足人体正常的需要，同时外界环

境的污染和生活工作节奏的加快，都导致了自由基的成倍产生。而体内的GSH、SOD受外界刺激或细胞老化影响其含量会大幅降低，进而导致器官功能衰退的现象，普遍发生在人体的所有器官中。在自由基堆积的老化过程中，血液的GSH、SOD值也会一起下降，而且自由基对于人体的影响还包括：还原氧化的能力减少、蛋白质的合成能力衰退、免疫功能降低、脂质过氧化物的堆积及体内解毒能力也会减弱等等现象。也就是说，当体内GSH、SOD含量下降时，体内受外界刺激或细胞老化产生的过量自由基的氧化损伤作用就不能被有效抑制，常见眼疾病及各种老化性疾病由此产生。虽然自由基堆积造成的老化是一种正常的代谢现象，但若能充分的补充外源性抗氧化剂，就能提升体内谷胱甘肽过氧化酶（GSH-PX）、超氧化歧化酶(SOD)的含量，有效抑制自由基氧化损伤，进而实现预防因氧化伤害所造成的眼疾病及各种老化性疾病。

二、过氧化氢酶概述

（1）过氧化氢酶简介：过氧化氢酶是抗氧化酶的一种，目前应用比较广泛，我们通过研究过氧化氢酶来初步了解抗氧化酶的实际应用。过氧化氢酶存在于红细胞及某些组织内的过氧化体中，它的主要作用就是催化H2O2分解为H2O与O2，使得H2O2不至于与O2在铁螯合物作用下反应生成非常有害的-OH，过氧化氢酶的作用是使过氧化氢还原成水： 2H2O2 → O2 + 2H2O

（2）过氧化氢酶历史：作为一种物质，过氧化氢酶是在1811年被过氧化氢（H2O2）的发现者泰纳尔（Louis Jacques Thénard）首次发现。1900年，Oscar Loew将这种能够降解过氧化氢的酶命名为“catalase”，即过氧化氢酶，并发现这种酶存在于许多植物和动物中。1937年，詹姆斯·B·萨姆纳将来自牛肝中的过氧化氢酶结晶，并在次年获得了该酶的分子量。1969年，牛的过氧化氢酶的氨基酸序列得以解出。而后，1981年，其三维结构得以解析。

（3）过氧化氢酶来源：几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能呼吸的生物体内，主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、动物的肝和红细胞中，其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机理。CAT是红血素酶，不同的来源有不同的结构。在不同的组织中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心脏等器官快，就是因为肝中的CAT含量水平高。

（4）过氧化氢酶结构：过氧化氢酶（CAT）是一种酶类清除剂，又称为触酶，是以铁卟啉为辅基的结合酶。它可促使H2O2分解为分子氧和水，清除体内的过