蛋白质电泳的方法及显色方法
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2:染色方法 2:染色方法
（2）荧光探针类 有机染料在水溶液中不发荧光，单在非极性溶液中或者SDS-蛋 白质复合物相连时,就会发处很强的荧光，通过荧光扫描仪检测。 1：SYPRO Ruby 荧光染色， SYPRO Ruby 是一种过度金属有机 复合物，直接通过静电作用与碱性氨基酸相互作用。 2：SYPRO Orange荧光染色。
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一维蛋白质电泳方法——Native——Native 1: 一维蛋白质电泳方法——Native-PAGE
（5）: Native PAGE ） 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入 SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行 聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。 未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳 过程中保持其天然的形状和电荷，它们的分离是依据其电泳迁 移率的不同和凝胶的分子筛作用，因而可以得到较高的分辨率， 尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物 活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上 进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于 活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所 有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。
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一维蛋白质电泳方法——CTAB——CTAB 1: 一维蛋白质电泳方法——CTAB-PAGE
简介： 简介： SDS属于阴离子去垢剂，在低温下会结晶，某些情况 下还会使蛋白质聚集或沉淀，而其有些蛋白质在SDS凝 胶中不能很好的溶解或者出现异常的迁移现象。 而CTAB属于阳离子去垢剂，可以很好的避免上述问 题，如果样品没有经过煮沸和外加还原剂，一些经CTAB 电泳系统分离的蛋白质仍然保持其酶活性。
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一维蛋白质电泳方法——Tricine-SDS——Tricine 1: 一维蛋白质电泳方法——Tricine-SDS-PAGE
简介： 简介： Tricine-SDS-PAGE Tricine-SDS-PAGE适用与肽类的电泳，用tricine代 替了甘氨酸可以分离小到500Da的肽类，适合SDS-PAGE 肽图谱以及制备氨基末端，羧基末端测序的样品。
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一维蛋白质电泳方法—— ——酸 尿素连续PAGE 1: 一维蛋白质电泳方法——酸-尿素连续PAGE
简介： 简介： 非常适合研究同一蛋白的微小结构变体（有细微的 电荷差别）或修饰后的 形式（例如磷酸化，乙酰化 等）。而SDS-PAGE难以将大小相似而电荷不同的两种蛋 白分开。
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2:染色方法 2:染色方法
（1）有机染料类： 有机染料类： 1: 传统考马斯亮蓝R250(Commassie Blue R-250, CBR-250)染色 CBR-250是一种有机染料，它通常能通过范德华力与NH3+的静电引力， 与蛋白质形成紧密而非共价结合的复合物。与精氨酸和赖氨酸残基结合紧 密，而与芳香族侧链亲和性稍低。 2：快速考马斯亮蓝染色 通过使用微波炉加速了CBR-250染色和脱色的过程，同时提高了灵敏 度。 3：InstaStain Blue凝胶纸染色 通过使用一种含有考马斯亮蓝染料的纸将染料加到凝胶上去，这样就 避免了操作液体染料时产生的问题，而且可以减少染色背景。
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2:染色方法 2:染色方法
（3）金属离子结合类 银染：基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合的原 理，主要实验步骤：固定，敏化，银液注入，显色，终止反映和图像 固定。 GelCode磷蛋白染色 这种方法依赖于在钙离子存在时，用0.5mol/L氢氧化钠水解磷酸 化蛋白质磷酸酯的连接。然后用钼酸铵在稀释的硝酸溶液中处理含有 新生成的不可溶磷酸钙的凝胶，最后用甲基氯染所形成不可溶的硝基 -钼酸盐复合物，脱色之后，磷蛋白被染成绿色。
简介： 简介： SDS 是一种阴离子表面活性剂.当 SDS 与蛋白质混 合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋 白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用.大多数 蛋白质和 SDS 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位), 而蛋白质结合固定比例之 SDS后,由于 SDS 带强负价, 使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量之蛋白 质带电价一致 (charge density),所以决定不同蛋白的 泳动速率就只剩下分子大小一项因素。
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2:染色方法 2:染色方法
通常用来与蛋白质非共价结合并使之显色的标记物大致分为几类： ）：有机燃料类 有机燃料类。 （1）：有机燃料类。如考马斯亮蓝，利用吸光度检测。 ）：荧光探针类 荧光探针类。 （2）：荧光探针类。如Sypro染料和尼罗河红，通过荧光检测。 ）：金属离子结合类 金属离子结合类。该类又可分为两类。 （3）：金属离子结合类 一类是通过与不同盐结合而显色（如使用锌-咪唑染料进行复染或反 响染色） 另一类是利用金属离子的还原反映而被检测到，如银染。
）：有机燃料类 （1）：有机燃料类 ）： ）：荧光探针类 （2）：荧光探针类 ）： ）：金属离子结合类 （3）：金属离子结合类 ）：
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一维蛋白质电泳方法——SDS——SDS 1: 一维蛋白质电泳方法——SDS-PAGE
一维蛋白质电泳的方法及显色方法
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一维蛋白质电泳的方法及显色方法
1: 一维蛋白质电泳方法的分类 SDS（1）: SDS-PAGE CTAB（2）: CTAB-PAGE 尿素连续PAGE （3）: 酸-尿素连续PAGE Tricine-SDS（4）: Tricine-SDS-PAGE （5）: Native PAGE 2：凝胶染色方法
2:染色方法 2:染色方法
（2）荧光探针类 有机染料在水溶液中不发荧光，单在非极性溶液中或者SDS-蛋 白质复合物相连时,就会发处很强的荧光，通过荧光扫描仪检测。 1：SYPRO Ruby 荧光染色， SYPRO Ruby 是一种过度金属有机 复合物，直接通过静电作用与碱性氨基酸相互作用。 2：SYPRO Orange荧光染色。
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一维蛋白质电泳方法——Native——Native 1: 一维蛋白质电泳方法——Native-PAGE
（5）: Native PAGE ） 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(Native-PAGE)是在不加入 SDS 和疏基乙醇等变性剂的条件下，对保持活性的蛋白质进行 聚丙烯酰胺凝胶电泳，常用于酶的鉴定、同工酶分析和提纯。 未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳 过程中保持其天然的形状和电荷，它们的分离是依据其电泳迁 移率的不同和凝胶的分子筛作用，因而可以得到较高的分辨率， 尤其是在电泳分离后仍能保持蛋白质和酶等生物大分子的生物 活性，对于生物大分子的鉴定有重要意义，其方法是在凝胶上 进行两份相同样品的电泳，电泳后将凝胶切成两半，一半用于 活性染色，对某个特定的生物大分子进行鉴定，另一半用于所 有样品的染色，以分析样品中各种生物大分子的种类和含量。
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一维蛋白质电泳方法——CTAB——CTAB 1: 一维蛋白质电泳方法——CTAB-PAGE
简介： 简介： SDS属于阴离子去垢剂，在低温下会结晶，某些情况 下还会使蛋白质聚集或沉淀，而其有些蛋白质在SDS凝 胶中不能很好的溶解或者出现异常的迁移现象。 而CTAB属于阳离子去垢剂，可以很好的避免上述问 题，如果样品没有经过煮沸和外加还原剂，一些经CTAB 电泳系统分离的蛋白质仍然保持其酶活性。
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一维蛋白质电泳方法——Tricine-SDS——Tricine 1: 一维蛋白质电泳方法——Tricine-SDS-PAGE
简介： 简介： Tricine-SDS-PAGE Tricine-SDS-PAGE适用与肽类的电泳，用tricine代 替了甘氨酸可以分离小到500Da的肽类，适合SDS-PAGE 肽图谱以及制备氨基末端，羧基末端测序的样品。
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一维蛋白质电泳方法—— ——酸 尿素连续PAGE 1: 一维蛋白质电泳方法——酸-尿素连续PAGE
简介： 简介： 非常适合研究同一蛋白的微小结构变体（有细微的 电荷差别）或修饰后的 形式（例如磷酸化，乙酰化 等）。而SDS-PAGE难以将大小相似而电荷不同的两种蛋 白分开。
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2:染色方法 2:染色方法
（1）有机染料类： 有机染料类： 1: 传统考马斯亮蓝R250(Commassie Blue R-250, CBR-250)染色 CBR-250是一种有机染料，它通常能通过范德华力与NH3+的静电引力， 与蛋白质形成紧密而非共价结合的复合物。与精氨酸和赖氨酸残基结合紧 密，而与芳香族侧链亲和性稍低。 2：快速考马斯亮蓝染色 通过使用微波炉加速了CBR-250染色和脱色的过程，同时提高了灵敏 度。 3：InstaStain Blue凝胶纸染色 通过使用一种含有考马斯亮蓝染料的纸将染料加到凝胶上去，这样就 避免了操作液体染料时产生的问题，而且可以减少染色背景。
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2:染色方法 2:染色方法
（3）金属离子结合类 银染：基于蛋白质中各种基团（如琉基、碳基等）与银的结合的原 理，主要实验步骤：固定，敏化，银液注入，显色，终止反映和图像 固定。 GelCode磷蛋白染色 这种方法依赖于在钙离子存在时，用0.5mol/L氢氧化钠水解磷酸 化蛋白质磷酸酯的连接。然后用钼酸铵在稀释的硝酸溶液中处理含有 新生成的不可溶磷酸钙的凝胶，最后用甲基氯染所形成不可溶的硝基 -钼酸盐复合物，脱色之后，磷蛋白被染成绿色。
简介： 简介： SDS 是一种阴离子表面活性剂.当 SDS 与蛋白质混 合时,它会以其碳链与蛋白质之疏水性胺基酸结合将蛋 白质包起来,而以硫酸根离子外露与水分子作用.大多数 蛋白质和 SDS 的平均结合量是 1:1.4 (以重量为单位), 而蛋白质结合固定比例之 SDS后,由于 SDS 带强负价, 使蛋白质原先的带电价微不足道,且每单位重量之蛋白 质带电价一致 (charge density),所以决定不同蛋白的 泳动速率就只剩下分子大小一项因素。
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2:染色方法 2:染色方法
通常用来与蛋白质非共价结合并使之显色的标记物大致分为几类： ）：有机燃料类 有机燃料类。 （1）：有机燃料类。如考马斯亮蓝，利用吸光度检测。 ）：荧光探针类 荧光探针类。 （2）：荧光探针类。如Sypro染料和尼罗河红，通过荧光检测。 ）：金属离子结合类 金属离子结合类。该类又可分为两类。 （3）：金属离子结合类 一类是通过与不同盐结合而显色（如使用锌-咪唑染料进行复染或反 响染色） 另一类是利用金属离子的还原反映而被检测到，如银染。
）：有机燃料类 （1）：有机燃料类 ）： ）：荧光探针类 （2）：荧光探针类 ）： ）：金属离子结合类 （3）：金属离子结合类 ）：
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一维蛋白质电泳方法——SDS——SDS 1: 一维蛋白质电泳方法——SDS-PAGE
一维蛋白质电泳的方法及显色方法
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一维蛋白质电泳的方法及显色方法
1: 一维蛋白质电泳方法的分类 SDS（1）: SDS-PAGE CTAB（2）: CTAB-PAGE 尿素连续PAGE （3）: 酸-尿素连续PAGE Tricine-SDS（4）: Tricine-SDS-PAGE （5）: Native PAGE 2：凝胶染色方法