蛋白质检测方法汇总
简述几种测定蛋白质方法及原理
简述几种测定蛋白质方法及原理蛋白质是生物体内最重要的分子之一，其功能多种多样，涉及到生命的方方面面。
了解蛋白质的性质、结构和功能非常重要。
为了实现这一目标，科学家们开发了多种方法来测定蛋白质的存在和浓度，以及研究其结构和功能。
在本文中，我们将简要介绍几种常见的测定蛋白质方法及其原理。
一、低丰度蛋白质检测方法在复杂样品中，许多蛋白质的浓度很低，因此需要采用高灵敏度的方法进行检测。
以下是两种常见的低丰度蛋白质检测方法。
1. Western blotting方法Western blotting方法是一种常用的蛋白质检测方法，通过将蛋白质转移到固体支持体上，然后使用特异性抗体来探测目标蛋白质的存在。
这个方法的原理是在电泳分离后，将蛋白质转移到聚丙烯腈膜或硝酸纤维素膜上。
样品经过特异性抗体结合，最后通过酶标记二抗或荧光二抗来使目标蛋白质可见。
2. 质谱法质谱法是一种利用质谱仪测定蛋白质质量的方法。
这种方法的原理是将蛋白质分解成肽段，然后通过质谱仪测定这些肽段的物质质量。
质谱法可以提供非常准确和高灵敏度的蛋白质测定结果，适用于分析复杂样本中的低丰度蛋白质。
二、蛋白质浓度测定方法蛋白质的浓度是研究蛋白质的基础，因此准确测定蛋白质浓度非常重要。
以下是两种常见的蛋白质浓度测定方法。
1. 比色法比色法是一种通过测量某种化学试剂与蛋白质之间的化学反应来测定蛋白质浓度的方法。
布拉德福德比色法使用染料染色蛋白质产生吸光度，再根据标准曲线定量测定蛋白质浓度。
这种方法简单、快速且灵敏度较高，适用于大多数蛋白质样品。
2. BCA法BCA法是一种利用受体配合反应来测定蛋白质浓度的方法。
在这种方法中，受体配体（biotin-avidin 或biotin-streptavidin）与蛋白质中的特定残基（如组氨酸等）结合生成复合物，然后通过比色反应测定复合物的吸光度。
BCA法具有高灵敏度和较低的非特异性反应。
三、蛋白质结构分析方法蛋白质的结构直接影响其功能和性质，因此了解蛋白质的结构是非常重要的。
蛋白质检测方法
蛋白质检测方法
蛋白质是生物体中最基本的组成部分之一，它在细胞的结构和功能中起着至关重要的作用。
因此，对蛋白质的检测方法显得尤为重要。
在本文中，我们将介绍几种常见的蛋白质检测方法，以便帮助大家更好地了解和掌握这一领域的知识。
首先，免疫印迹（Western blot）是一种常用的蛋白质检测方法。
该方法利用抗体与目标蛋白质特异性结合的原理，通过电泳分离蛋白质，然后转移到膜上进行检测。
免疫印迹具有高灵敏度和特异性，能够准确地检测目标蛋白质的表达水平。
其次，酶联免疫吸附试验（ELISA）也是一种常见的蛋白质检测方法。
该方法利用酶标记的抗体与待测蛋白质特异性结合，然后通过底物的反应产生可测量的信号。
ELISA方法操作简单、灵敏度高，常用于临床诊断和实验室研究中。
另外，质谱法（Mass spectrometry）也是一种重要的蛋白质检测方法。
该方法通过将蛋白质进行离子化，然后通过质谱仪进行分析，能够准确地测定蛋白质的分子量和氨基酸序列。
质谱法具有高分辨率和高灵敏度，适用于复杂混合物中蛋白质的检测和鉴定。
除了以上介绍的方法外，还有许多其他蛋白质检测方法，如蛋白质芯片技术、蛋白质结晶学等。
这些方法各有特点，可以根据实际需要选择合适的方法进行蛋白质的检测和分析。
总的来说，蛋白质检测方法在生物医学领域具有重要意义，能够帮助科研人员和临床医生准确地了解蛋白质的表达水平和功能特性。
随着科学技术的不断发展，相信在不久的将来会有更多更先进的蛋白质检测方法出现，为人类健康事业做出更大的贡献。
蛋白质的测定方法
蛋白质的测定方法
蛋白质的测定方法有多种，以下是其中几种常见的方法：
1. 比色法：常用的比色法是利用布拉德福试剂（Bradford reagent）或伯胺蓝法（Coomassie Brilliant Blue G-250），将蛋白质与染色剂结合后，根据染色的吸光度与蛋白质浓度的关系进行测定。
2. 琼脂糖凝胶电泳：根据蛋白质的电荷、分子量、形状等特性，通过琼脂糖凝胶电泳，将蛋白质分离开来，然后根据分离出的蛋白质特定区域的强度或与已知浓度的标准品进行比较，确定蛋白质的浓度。
3. BCA法：BCA（bicinchoninic acid）法利用蛋白质与BCA试剂反应，生成可发生紫外吸收的络合物，通过测量光吸光度，与已知浓度的标准品比较，确定蛋白质的浓度。
4. Lowry法：Lowry法结合了蛋白质的碱性和芳香性氨基酸的特性，通过在碱性条件下与酸性重铜盐和费林试剂反应，生成光吸光度可测的复合物，根据复合物的光吸光度与标准品对比，确定蛋白质的浓度。
5. 生物素标记法：使用生物素标记的抗体或受体结合蛋白质，然后用生物素酶标记的探针或底物测定，通过测量反应产物的发光强度或颜色变化来确定蛋白质浓度。
需要注意的是，不同的测定方法对样品的适用性、灵敏度、特异性等方面有所差异，选择适合的方法需要根据实验目的和样品的特点来决定。
六种方法测定蛋白质含量
常用紫外分光光度法测定蛋白质含量。
以下引用：6种方法测定蛋白质含量一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：nh2ch2cooh+3h2so4——2co2+3so2+4h2o+nh3 (1)2nh3+h2so4——(nh4)2so4 (2)(nh4)2so4+2naoh——2h2o+na2so4+2nh3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入cuso4作催化剂，k2so4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
二、双缩脲法（biuret法）（一）实验原理双缩脲（nh3conhconh3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与cuso4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1-10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（bsa）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml的标准蛋白溶液，可用bsa浓度1mg/ml的a280为0.66来校正其纯度。
蛋白质的测定方法有哪些
蛋白质的测定方法有哪些蛋白质测定是一个重要的生物化学实验，用于确定样品中蛋白质的含量和纯度。
目前常用的蛋白质测定方法主要有生物化学方法、光谱法、免疫学方法和质谱法等。
下面将详细介绍这些方法。
1. 生物化学方法：生物化学方法是一种常用的蛋白质测定方法，主要包括低里氏法、比色法和滴定法等。
低里氏法基于酵素反应测定蛋白质含量，其中最常用的是双维小麦胚芽过氧化物酶法。
比色法是通过染色剂和蛋白质的反应来测定蛋白质浓度，常用的比色剂有考马斯亮蓝G-250和布拉德福棕色R-250等。
滴定法是通过滴加蛋白质溶液的滴定剂，如硝酸银溶液和碘溶液等，来测定蛋白质的含量。
2. 光谱法：光谱法是利用蛋白质在特定波长下吸收光线的特性来测定蛋白质的含量和纯度。
UV-Vis吸收光谱法是最常用的光谱法之一，根据蛋白质在280 nm处吸收的特性来测定蛋白质浓度。
近红外光谱法也可以用于蛋白质浓度的测定，因为蛋白质的结构可以在近红外区域引起光的散射和吸收。
3. 免疫学方法：免疫学方法是利用抗体与特定蛋白质发生特异性反应来测定蛋白质的含量和纯度。
常用的免疫学方法包括酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫印迹法（Western blotting）和免疫沉淀法等。
ELISA是一种高灵敏度的蛋白质测定方法，通过抗原与特异性抗体在单克隆板上的特异性结合来测定蛋白质的含量。
Western blotting是一种常用于检测特定蛋白质的方法，通过电泳分离蛋白质，然后用特异性抗体检测目标蛋白质。
免疫沉淀法利用特异性抗体与目标蛋白质结合，然后通过共沉淀或差速离心的方式将目标蛋白质从混合物中分离出来。
4. 质谱法：质谱法是一种高分辨率的蛋白质测定方法，主要有质谱光查法（MS）和质谱对比法（MS/MS）两种。
质谱光查法通过蛋白质在质谱仪中的分子离子质量和电荷比来确定蛋白质的分子量和浓度。
质谱对比法则是将待测蛋白质与已知质量的蛋白质进行比较，从而确定样品中蛋白质的含量和纯度。
蛋白质测定方法
蛋白质测定方法蛋白质是生物体内一种重要的有机物质，对于生物体的生长、发育和代谢具有重要作用。
因此，蛋白质的测定方法显得尤为重要。
本文将介绍常见的蛋白质测定方法，希望能够为相关研究和实验提供帮助。
一、Lowry法。
Lowry法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理是利用蛋白质与铜离子和碱性试剂在碱性条件下发生的还原反应，生成紫色络合物，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、线性范围广、稳定性好的特点，适用于多种类型的蛋白质样品。
二、BCA法。
BCA法是一种基于铜离子的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与试剂中的碱性铜离子在碱性条件下发生蓝色产物，通过比色测定蛋白质含量。
相比于Lowry法，BCA法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
三、Bradford法。
Bradford法是一种基于染料结合的蛋白质测定方法，原理是蛋白质与染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法具有操作简便、快速、灵敏度高的特点，对于一些含有胶体物质或其他干扰物质的样品，Bradford法的选择性更好。
四、UV吸收法。
UV吸收法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质特有的氨基酸在紫外光区域的吸收特性，通过测定蛋白质在280nm处的吸光度来定量测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于纯化后的蛋白质样品的测定。
五、荧光法。
荧光法是一种基于蛋白质荧光特性的测定方法，原理是蛋白质在特定激发波长下产生荧光信号，通过测定荧光强度来定量测定蛋白质含量。
该方法具有灵敏度高、选择性好的特点，适用于高通量的蛋白质测定。
六、总蛋白法。
总蛋白法是一种常用的蛋白质测定方法，原理是利用蛋白质与试剂中的染料结合后产生颜色变化，通过比色测定蛋白质含量。
该方法操作简便、快速，适用于多种类型的蛋白质样品。
总结。
蛋白质的测定方法多种多样，选择合适的方法需要根据样品的特性、实验的目的和仪器设备的条件来综合考虑。
希望本文介绍的蛋白质测定方法能够为相关研究和实验提供参考，促进科研工作的开展。
鉴别蛋白质的方法
鉴别蛋白质的方法
鉴别蛋白质的方法主要有以下几种：
1. SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）：通过对蛋白质进行电泳分离，根据蛋白质分子量的差异在凝胶中形成不同的条带，可以确定蛋白质的存在与否以及其分子量大小。
2. Western blotting（免疫印迹）：通过将蛋白质从电泳凝胶转移到膜上，然后用特定的抗体与目标蛋白发生特异性结合，通过检测抗体与目标蛋白的结合情况来确定蛋白质的存在与否及其相对数量。
3. 质谱：使用质谱仪对蛋白质进行分析，通过解析蛋白质的质荷比特征峰，可以确定蛋白质的分子量、序列和修饰（如糖基化、磷酸化等）等信息。
4. 免疫染色：利用特异性抗体标记蛋白质，通过显色检测方法（如免疫组化染色、免疫荧光染色等），可以直观地观察蛋白质的位置和表达情况。
5. X射线衍射：通过将蛋白质晶体暴露在X射线下，通过测量晶体中X射线的衍射模式，可以解析出蛋白质的结晶结构，从而确定其原子级别的构造。
以上方法的选择取决于研究的目的和所需的信息深度，常常结合使用，来确保对蛋白质进行全面的鉴别分析。
检验蛋白质的方法
检验蛋白质的方法
首先，常用的蛋白质检测方法之一是比色法。
比色法是通过蛋
白质与某些特定试剂发生反应，产生颜色变化来检测蛋白质的含量。
其中，最常用的试剂是布拉德福试剂和洛斯试剂。
布拉德福试剂主
要用于定性和定量测定蛋白质，而洛斯试剂则主要用于定性检测蛋
白质。
其次，电泳法也是一种常用的蛋白质检测方法。
电泳法是利用
蛋白质在电场中的迁移速度差异来分离和检测蛋白质的方法。
其中，凝胶电泳是最常用的电泳方法之一，可以根据蛋白质的分子量和电
荷来进行分离和检测。
另外，二维凝胶电泳则可以更加精细地分离
和检测蛋白质。
此外，质谱法也是一种常用的蛋白质检测方法。
质谱法是通过
将蛋白质离子化并加速后使其进入质谱仪，根据蛋白质的质荷比来
进行检测和分析。
质谱法可以准确地确定蛋白质的分子量和氨基酸
序列，对于蛋白质的结构和功能研究具有重要意义。
最后，免疫学方法也是一种常用的蛋白质检测方法。
免疫学方
法是利用抗体与特定蛋白质发生特异性结合来进行检测和分析。
常
见的免疫学方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹法（Western blot）等，这些方法可以对蛋白质进行高灵敏度和高特异性的检测。
总之，检验蛋白质的方法有很多种，每种方法都有其特点和适用范围。
在实际应用中，可以根据需要选择合适的方法来进行蛋白质的检测和分析，以满足具体研究或临床诊断的需要。
希望本文介绍的蛋白质检测方法对您有所帮助。
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蛋白质检测方法汇总2010-04-26 12:00:38| 分类：蛋白电泳| 标签：|字号大中小订阅本文引用自啸月天狼《蛋白质检测方法汇总》更多相关资料请查看蛋白质检测方法汇总本实验的目的是学会各种蛋白质含量的测定方法。
了解各种测定方法的基本原理和优缺点。
蛋白质含量测定法，是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。
目前常用的有四种古老的经典方法，即定氮法，双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法。
另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法，即考马斯亮蓝法（Bradford 法）。
其中Bradford法和Lowry法灵敏度最高，比紫外吸收法灵敏10～20倍，比Biuret法灵敏100倍以上。
定氮法虽然比较复杂，但较准确，往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。
值得注意的是，这后四种方法并不能在任何条件下适用于任何形式的蛋白质，因为一种蛋白质溶液用这四种方法测定，有可能得出四种不同的结果。
每种测定法都不是完美无缺的，都有其优缺点。
在选择方法时应考虑：①实验对测定所要求的灵敏度和精确度；②蛋白质的性质；③溶液中存在的干扰物质；④测定所要花费的时间。
考马斯亮蓝法（Bradford法），由于其突出的优点，正得到越来越广泛的应用。
一、微量凯氏（Kjeldahl）定氮法样品与浓硫酸共热。
含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。
经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。
若以甘氨酸为例，其反应式如下：CH2COOH| + 3H2SO4--------- 2CO2 + 3SO2 +4H2O +NH3 (1)NH22NH3 + H2SO4 -------- ---(NH4)2SO4 (2)(NH4)2SO4 + 2NaOH ----------- 2H2O +Na2SO4 + 2NH3 (3)反应（1）、(2)在凯氏瓶内完成，反应（3）在凯氏蒸馏装置中进行。
为了加速消化，可以加入CuSO4作催化剂，K2SO4以提高溶液的沸点。
收集氨可用硼酸溶液，滴定则用强酸。
实验和计算方法这里从略。
计算所得结果为样品总氮量，如欲求得样品中蛋白含量，应将总氮量减去非蛋白氮即得。
如欲进一步求得样品中蛋白质的含量，即用样品中蛋白氮乘以6．25即得。
五种蛋白质测定方法比较如下：方法灵敏度时间原理干扰物质说明凯氏定氮法（Kjedahl法）灵敏度低，适用于0.2~ 1.0mg氮，误差为±2％费时8～10小时将蛋白氮转化为氨，用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法（Biuret法）灵敏度低1～20mg 中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定，但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法较为灵敏50～100mg 快速5～10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；各种核苷酸用于层析柱流出液的检测；核酸的吸收可以校正Folin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高～5mg 慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高1～5mg 快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时，其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；TritonX-100;SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化二、双缩脲法（Biuret法）（一）实验原理双缩脲（NH3CONHCONH3）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。
在强碱性溶液中，双缩脲与CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲反应。
凡具有两个酰胺基或两个直接连接的肽键，或能过一个中间碳原子相连的肽键，这类化合物都有双缩脲反应。
H2OO=C C=OHN NHR-CH CH-RO=C Cu C=OHN NHR-CH CH-RH2O紫色络合物紫色络合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，而与蛋白质分子量及氨基酸成分无关，故可用来测定蛋白质含量。
测定范围为1~10mg蛋白质。
干扰这一测定的物质主要有：硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
此法的优点是较快速，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，以及干扰物质少。
主要的缺点是灵敏度差。
因此双缩脲法常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。
（二）试剂与器材1. 试剂：（1）标准蛋白质溶液：用标准的结晶牛血清清蛋白（BSA）或标准酪蛋白，配制成10mg/ml 的标准蛋白溶液，可用BSA浓度1mg/ml的A280为0.66来校正其纯度。
如有需要，标准蛋白质还可预先用微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，计算出其纯度，再根据其纯度，称量配制成标准蛋白质溶液。
牛血清清蛋白用H2O 或0.9%NaCl配制，酪蛋白用0．05N NaOH配制。
（2）双缩脲试剂：称以 1.50克硫酸铜（CuSO4·5H2O）和 6.0克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O），用500毫升水溶解，在搅拌下加入300毫升10% NaOH溶液，用水稀释到1升，贮存于塑料瓶中（或内壁涂以石蜡的瓶中）。
此试剂可长期保存。
若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制。
2. 器材：可见光分光光度计、大试管15支、旋涡混合器等。
（三）操作方法1. 标准曲线的测定：取12支试管分两组，分别加入0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升的标准蛋白质溶液，用水补足到1毫升，然后加入4毫升双缩脲试剂。
充分摇匀后，在室温（20~25℃）下放置30分钟，于540nm处进行比色测定。
用未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照液。
取两组测定的平均值，以蛋白质的含量为横座标，光吸收值为纵座标绘制标准曲线。
2、样品的测定：取2~3个试管，用上述同样的方法，测定未知样品的蛋白质浓度。
注意样品浓度不要超过10mg/ml。
三、Folin—酚试剂法（Lowry法）（一）实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。
过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。
此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。
这两种显色反应产生深兰色的原因是：?在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。
Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。
在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。
Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。
以后在生物化学领域得到广泛的应用。
这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。
对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应。
而且对后者的影响还要大得多。
酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。
浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1%），硝酸纳（1%），三氯乙酸（0.5%），乙醇（5%），乙醚（5%），丙酮（0.5%）等溶液对显色无影响，但这些物质浓度高时，必须作校正曲线。
含硫酸铵的溶液，只须加浓碳酸钠—氢氧化钠溶液，即可显色测定。
若样品酸度较高，显色后会色浅，则必须提高碳酸钠—氢氧化钠溶液的浓度1~2倍。
进行测定时，加F olin—酚试剂时要特别小心，因为该试剂仅在酸性pH条件下稳定，但上述还原反应只在pH=10的情况下发生，故当Folin一酚试剂加到碱性的铜—蛋白质溶液中时，必须立即混匀，以便在磷钼酸—磷钨酸试剂被破坏之前，还原反应即能发生。
此法也适用于酪氨酸和色氨酸的定量测定。
此法可检测的最低蛋白质量达5mg。
通常测定范围是20~250mg。
（二）试剂与器材1.试剂（1）试剂甲：（A）（A）10克Na2CO3，2克NaOH和0.25克酒石酸钾钠（KNaC4H4O6·4H2O）。
溶解于500毫升蒸馏水中。
（B）（B）0.5克硫酸铜（CuSO4·5H2O）溶解于100毫升蒸馏水中，每次使用前，将50份（A）与1份（B）混合，即为试剂甲。
（2）试剂乙：在2升磨口回流瓶中，加入100克钨酸钠（Na2WO4·2H2O）,25克钼酸钠（Na2MoO4·2H2O）及700毫升蒸馏水，再加50毫升85%磷酸，100毫升浓盐酸，充分混合，接上回流管，以小火回流10小时，回流结束时，加入150克硫酸锂（Li2SO4），50毫升蒸馏水及数滴液体溴，开口继续沸腾15分钟，以便驱除过量的溴。
冷却后溶液呈黄色（如仍呈绿色，须再重复滴加液体溴的步骤）。
稀释至1升，过滤，滤液置于棕色试剂瓶中保存。
使用时用标准NaOH滴定，酚酞作指示剂，然后适当稀释，约加水1倍，使最终的酸浓度为1N左右。
（3）标准蛋白质溶液:精确称取结晶牛血清清蛋白或g—球蛋白，溶于蒸馏水，浓度为250 mg/ml左右。
牛血清清蛋白溶于水若混浊，可改用0.9 % NaCl溶液。
2. 器材（1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器（3）秒表（4）试管16支（三）操作方法1. 标准曲线的测定：取16支大试管，1支作空白，3支留作未知样品，其余试管分成两组，分别加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升标准蛋白质溶液（浓度为250mg/ml）。
用水补足到1.0毫升，然后每支试管加入5毫升试剂甲，在旋涡混合器上迅速混合，于室温（20～25℃）放置10分钟。
再逐管加入0.5毫升试剂乙（Folin—酚试剂），同样立即混匀。
这一步混合速度要快，否则会使显色程度减弱。
然后在室温下放置30分钟，以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照，于700nm处测定各管中溶液的吸光度值。
以蛋白质的量为横座标，吸光度值为纵座标，绘制出标准曲线。
注意：因Lowry反应的显色随时间不断加深，因此各项操作必须精确控制时间，即第1支试管加入5毫升试剂甲后，开始计时，1分钟后，第2支试管加入5毫升试剂甲，2分钟后加第3支试管，余此类推。
全部试管加完试剂甲后若已超过10分钟，则第1支试管可立即加入0.5毫升试剂乙，1分钟后第2支试管加入0.5毫升试剂乙，2分钟后加第3支试管，余此类推。
待最后一支试管加完试剂后，再放置30分钟，然后开始测定光吸收。
每分钟测一个样品。
进行多试管操作时，为了防止出错，每位学生都必须在实验记录本上预先画好下面的表格。