酵母扩培工作流程

酵母扩培工作流程

1，菌种选购

首先购买具备国家权威机构认可（或注册）的单位提供的菌种，并与提供菌种的科研单位沟通，让其将此菌种制成二十支冻干管（便于常温下长期保存不会变异），以后每年拿出一支冻干管进行转移、保藏（使用至当年年底）、扩培。这种方式培养菌种可以确保生产上使用的酵母不会变异、退变。

2，菌种移植

将菌种移植在斜面培养基上（4-7支斜面管），25°培养2-3天，挑选出边缘整齐、呈乳白色无污染长势良好的菌株两只管，放入4°冰箱内保存（注明移种日期、操作人、菌株特性等信息，同时做好笔记）。另选出一支长势良好的菌株移至斜面培养基上（活化）培养2-3天，此次最好移植3-5支斜面培养基。最后从此斜面上挑选出1支长势最好的菌种（待用），用于下一步扩培。

3，实验室扩培

取上述一支活化过的待用菌种，挑一菌耳接种至含有10ml液体培养基试管内，最好接种3-5管以防失败），25°培养1—2天，培养期间每隔半小时用手震荡一次充氧（或放在恒温振荡器内培养）。选出发酵旺盛的液体试管（掌握好移种时间非常重要），分别全量移至装有100ml麦汁的300ml三角烧瓶内（4个300ml的三角烧瓶），22°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或放在恒温振荡器内培养）。然后全量分别移至装有1500ml麦汁的3000ml烧瓶内（三个3000烧瓶），19°培养1-2天，培养期间每隔半小时摇动一次（或在恒温振荡器内培养）。将已培养好的（掌握移种时间非常重要）3000ml烧瓶内的麦汁分别全量移入15L麦汁的卡氏罐内（卡氏罐内的麦汁事先杀好菌，冷却至接种温度后再接种），16°培养1-2天，培养期间应定期充氧（每隔3小时用无菌压缩空气充氧5分钟）。

4，生产车间扩培

卡氏罐内培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml，将卡氏罐内的麦汁最大按1:10的比列全量移至培养罐（培养罐内的麦汁要二次杀菌冷却后才能接种），14°C下培养1-2天（酵母数达到：5-8x107个/ml）后，按1:5的比列转接至下一扩大罐（可直接取沉淀槽冷却的麦汁），培养期间每隔2小时充氧10分钟，转接之前镜检酵母数、死亡率、杂菌。酵母数达到：5-8x107个/ml；死亡率小于2％；镜检下未见杂菌时可用于大罐接种。